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Revista Facultad de Ingeniería Biotecnología industrial y ambiental

Castrillón, M.𝐶 𝑎 .,Chaverra, A.𝑀𝑏 .


a. Ingeniería Bioquímica, Universidad de Antioquia, Urabá, Colombia.
b. Ingeniería Bioquímica, Universidad de Antioquia, Urabá, Colombia.

PRACTICA NO. 1. CRECIMIENTO CELULAR Y MODELADO EMPÍRICO

RESUMEN
En esta práctica se puede reconocer las fases de crecimiento microbiano durante un tiempo determinado
observando, desde su fase de latencia hasta su fase de muerte. Para esto, se comienza con la preparación
de 4 medios de los cuales 3 son de diferentes concentraciones de glucosa. Para evidenciar el crecimiento
se inocula el medio con E. Coli. teniendo en cuenta factores de crecimiento como agitación para asociarlo
con su incremento, finalmente se realizan 10 muestras durante dos días y con base a los datos se utiliza la
ecuación de Monod para evidenciar su rendimiento y productividad.

ABSTRACT
In this practice, the microbial growth phases can be recognized during a specific time, from its latency phase
to the death phase. For this, we start with the preparation of 4 media, 3 of which are of different
concentrations of glucose. To evidence the growth, the medium is inoculated with E. Coli. taking into
account growth factors such as agitation to associate it with its increase, finally 10 samples are made during
two days and, according to the data, the Monod equation is used to demonstrate its performance and
productivity.
PACS. Exponencial, factor de crecimiento, ecuación de Monod, inoculo

celular es útil para el diseño de métodos de control


INTRODUCCIÓN
para el crecimiento microbiano.
En cualquier sistema biológico, el crecimiento se
Adquiere relevancia en el aumento de la biomasa
lo define como el incremento ordenado de todos
y en los productos que se pueden llegar a obtener,
los componentes químicos. El incremento de
este crecimiento depende de varios factores y
masa no refleja realmente crecimiento debido a
presentan carias fases: Fase Lag, Fase
que las células podrían estar simplemente
exponencial, Fase estacionaria y Fase de muerte.
incrementando su contenido de productos
(López L. 2016).
almacenados tales como glicógeno. En un medio
adecuado, para el cual tienen que estar La Escherichia coli (E. coli) es una bacteria que
completamente adaptadas, las bacterias están en se encuentra normalmente en el intestino del ser
un estado de crecimiento balanceado. El humano y de otros animales. Aunque no parece
conocimiento de cómo se expande la población que su presencia tenga una función especialmente
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relevante, se ha descrito que la bacteria E. coli relación lineal entre el logaritmo del
favorece la absorción de algunas vitaminas, número de células (o cualquier otra
especialmente la vitamina K. (EFE: salud, 2014). propiedad medible de la población) y el
tiempo .los microorganismos se dividen y
duplican en número en intervalos regulares .como
MARCO TEÓRICO cada célula se divide en un momento ligeramente
diferente del resto, la curva de crecimiento
aumenta suavemente, en lugar de realizar
La curva del crecimiento microbiano representa la discretos saltos.
evolución de las cantidades de números de células
viables presente en un cultivo microbiano a lo Fase estacionaria:
largo del tiempo de estudio. Se estudia el número La fase estacionaria es resultado del agotamiento
de células viables que se encuentran en un cultivo de los nutrientes disponibles o del efecto de
de volumen limitado y con una cantidad de acumulación de productos tóxicos de
nutrientes limitada. (Madigan MT, Martinko JM metabolismo que tienen como consecuencia la
& Parker J. Brock.- 2004) disminución de la velocidad del crecimiento .la
En general se presentan varias fases en el transición entre la fase exponencial y la fase
crecimiento celular: estacionaria se caracteriza por un crecimiento
desequilibrado, durante el cual los diversos
• Fase Lag componentes celulares son sintetizados a
• Fase exponencial diferentes velocidades (Buchanan y Solberg,
1972).
• Fase estacionaria
Fase de muerte:
• Fase de muerte
La fase de muerte es consecuencia de diversos
Fase de latencia (fase lag):
factores: uno importante es el agotamiento de las
La fase de latencia, es el periodo de ajuste que las reservas celulares de energía. Al igual que el
células experimentan al ser transferidas de un crecimiento, la muerte también asume una fusión
medio al otro antes de iniciar su crecimiento. En exponencial que puede ser representada por una
esta fase se producen las enzimas necesarias para disminución lineal del número de lacélulas
que ellos puedan crecer en un nuevo medio viables a loa largo del tiempo (Madigan y col,
ambiente. En esta fase no hay incremento en el 1997)
número de células, pero hay gran actividad
Existen métodos que permiten establecer el
metabólica, aumento en el tamaño individual de
número de microorganismos en una muestra
las células, en el contenido proteico, ADN y peso
dada. Hay métodos que cuantifican el número de
seco de las células. (Penfold ,1914).
células, y existen otros que cuantifican la masa
Fase exponencial o fase logarítmica: total de la población (Recuento y cuantificación
la fase exponencial o logarítmica es aquella de microorganismos- Adelheint Bernstein)
durante la cual los microorganismos crecen y se
dividen hasta el nivel máximo posible, en función
de su potencial genético ,tipo de medio y
condiciones en que crece .en este periodo hay una
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ajusta el pH entre 6-7 para estelarizar
junto con el resto de materiales en el
autoclave.
Después de esterilizar todo, se toma una colonia
de microorganismos con el asa metálica la cual se
adiciona al medio para proceder a su agitación,
solo un medio se queda sin agitar que es el medio
de 20 ml.
Se toman muestras de 2ml por triplicado cada
hora para los cultivos en agitación y para los
Imagen #1. Métodos de cuantificación. medios sin agitar tomar muestras las primeras dos
horas (1 medida cada hora), luego otras dos
Los microorganismos como seres vivos que son
medidas cada dos horas y volver a tomar medida
necesitan condiciones adecuadas de temperatura,
cada hora hasta ajustar 10 medidas, se miden en
humedad y presencia de nutrientes para
el espectrofotómetro a 620 nm.
desarrollarse. Los factores que influyen en el
crecimiento bacteriano son los siguientes: Una vez obtenidos estos datos, se grafican las
medidas de absorbancia contra tiempo.
 Temperatura.
SA: Sin agitar
 Humedad.
 Acidez (PH). ANÁLISIS Y RESULTADOS
 Nutrientes.  Tabla de datos Absorbancia
 Tiempo.
Medio 50 40 20 20
 Oxígeno.
(g/L) (SA)
Glucosa
Horas
MONTAJE Y DETALLE EXPERIMENTAL
0 0,144 0,108 0,097 0,102
Para realizar la práctica son necesarios materiales
como Una colonia de E. coli, Erlenmeyer, balanza 1 0,142 0,114 0,114 0,102
digital, mecheros, autoclave, cintas parara medir 2 0,143 0,110 0,103 0,099
el pH, asas metálicas, pipetas, puntas de
3 0,157 0,112 0,103 0,105
micropipetas y compuestos como: glucosa 20g/l,
Peptona 5g/l, extracto de levadura 3 g/l, Sulfato 4 0,143 0,115 0,110 0,128
de amonio 3g/l, sulfato de magnesio 1g/l y fosfato 5 0,155 0,206 0,182 0,331
de potasio monobásico 2g/l.
6 0,278 0,572 0,363 0,695
Una vez pesados los reactivos, estos se mezclan 16 0,713 0,825 0,669 0,869
para obtener 1.2 litros de medio y repartirlos en 4
17 0,698 0,814 0,681 0,866
Erlenmeyers (50,40, 20 y 20ml), también se hace
lo mismo para preparar el blanco que se usará en 18 0,707 0,828 0,692 0,883
el espectrofotómetro (sellar los Erlenmeyers), se 19 0,720 0,847 0,700 0,891
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 Grafica de absorbancia contra tiempo con


medio de 50 ml.

 Grafica de absorbancia contra tiempo con


medio de 20 ml.

 Grafica de absorbancia contra tiempo con


medio de 40 ml.

 Grafica de absorbancia contra tiempo con


los medios de 20 ml con agitación y SA.

 Grafica de absorbancia contra tiempo con


medio de 20 ml sin agitar.

La grafica anterior muestra el mayor crecimiento


en el medio con agitación la cual, se encuentra de
color anaranjado a diferencia del otro medio que
se encuentra de color azul.
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 Grafica concentración contra velocidades  La agitación es un factor que
de crecimiento de los medios 20 y 40. contribuye al aumento del
crecimiento de los medios.

REFERENCIAS
 López L., Curva de crecimiento
bacteriano en la población de proteínas,
2016.
Umax: 1,40528387  Madigan MT, Martinko JM & Parker J.
Brock.- 2004)
Ks: 0,100585775
 Penfold ,1914
CONCLUSIONES  López L. 2016
 Bajo condiciones estériles se observa  Buchanan y Solberg, 1972
mejor crecimiento celular.  EFE: salud., ¿Qué es la E. coli? 2014).
 La cantidad de medio utilizado junto con  Recuento y cuantificación de
la cantidad de colonias de E.coli microorganismos- Adelheint Bernstein)
agregadas no era suficientemente 
proporcional para un crecimiento más
exponencial.
 La toma de muestra continua, genera una
mayor probabilidad de análisis de la
cinética de crecimiento.
 Los medios que tenían más glucosa
obtuvieron un mayor crecimiento.

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