You are on page 1of 29

UNIVERSIDADE FEDERAL DE PERNAMBUCO (UFPE)

IMUNOLOGIA E SOROLOGIA

Anticorpos Monoclonais – Caracterização,


obtenção, purificação e aplicações

Prof. Paulo José Cunha Miranda


Rômulo Pessoa e Silva

Setembro, 2018
• Anticorpos monoclonais

O que são?
 Anticorpos específicos a um único epítopo de um antígeno,
produzidos a partir de um mesmo clone de linfócito B.

Como são obtidos?


 A partir de técnicas laboratoriais, envolvendo fusão a uma linhagem
de células de mieloma (imortais), cultivo celular (seleção dos
hibridomas) e clonagem da célula de interesse (anti-X).

Para que servem?


 Diagnóstico, pesquisas, terapia, etc...
• Anticorpos monoclonais

Por que precisam ser monoclonais?


 Anticorpos gerados a partir de uma resposta imune natural?
 Anticorpos gerados a partir de uma imunização??

Mesmo os anticorpos direcionados contra um único


determinante antigênico, como o hapteno, podem ser muito
heterogêneos.

Focalização isoelétrica demonstra essa heterogeneidade.

pH
• Anticorpos monoclonais

Por que precisam ser monoclonais?

 Cada antissoro é diferente de todos os outros antissoros, mesmo


quando desenvolvidos em um animal geneticamente idêntico com o
uso da mesma preparação de antígeno e o mesmo protocolo de
imunização.

 Os antissoros podem ser produzidos em volumes limitados.

 Reações cruzadas inesperadas.


• Anticorpos monoclonais - produção

Estudos demonstraram que os anticorpos monoclonais


poderiam ser obtidos de células plasmáticas
imortalizadas – mieloma múltiplo.

Entretanto, a especificidade antigênica da maioria das


proteínas do mieloma era desconhecida, o que limitava
sua utilidade como objeto de estudo ou como
ferramenta imunológica.

Georges Köhler e Cesar Milstein – 1975:


desenvolveram uma técnica para produzir uma
população homogênea de anticorpos com uma
especificidade antigênica conhecida.
news.doccheck.com
• Anticorpos monoclonais - produção

Abbas, 2015.
• Anticorpos monoclonais - produção

Abbas, 2015.
Fusão com uma linhagem celular de mieloma
deficiente em certas enzimas, utilizando o
polietileno glicol (PEG).

Formação dos hibridomas contra epítopos


distintos.

Meio HAT (hipoxantina, aminopterina e


timidina): seleciona apenas os hibridomas. As
células do mieloma utilizadas não possuem a
enzima hipoxantina-guanina
fosforribosiltransferase (HGPRT-), necessária
para a síntese da purina.

Diluições, seleção do hibridoma de interesse


(utilizando anticorpo anti-X), clonagem e
manutenção da linhagem.
Janeway, 2010.
eu.wikipedia.org
• Anticorpos policlonais x monoclonais

ImmuSmol
• Purificação de anticorpos monoclonais
 Cromatografia de afinidade

kisspng.com
Beads (suporte Lavagens para Eluição e coleta
Adição do
sólido) + antígeno remoção de dos anticorpos
sobrenadante da
conjugado substâncias não purificados
cultura dos hibridomas
ligadas
• Purificação de anticorpos monoclonais
 Aqueous two-phase systems (ATPS)
 Sistemas bifásicos aquosos

VTT Technical Research Centre of Finland


HFB: Hidrofobina
Proteína A: liga-se na região Fc do anticorpo.
• Purificação de anticorpos monoclonais
 Beads magnéticas

www.labonabead.se/
 Beads recobertas por proteína A; anticorpos se ligam ao conjugado bead-proteína
A; força magnética externa atrai as beads, enquanto ocorre a lavagem; eluição e
recuperação dos anticorpos.
• Aplicações dos anticorpos monoclonais

Identificação de marcadores fenotípicos


 Marcadores únicos que caracterizem determinadas linhagens
celulares. Ex: anti-CD4 e anti-CD8.
Imunodiagnóstico
 Detecção de determinados antígenos ou anticorpos produzidos em
resposta a processos infecciosos ou sistêmicos (imunoensaios).
Detecção de tumores
 Diagnóstico por imagem e coloração de tecidos (imuno-
histoquímica).
Terapia
 Inativação de moléculas associadas com a patogênese de várias
doenças. Ex: anti-TNF na artrite reumatoide.
Análise funcional de moléculas
 De superfície ou secretadas. Ex: Bloqueio de CD4 em cultura de
linfócitos infectados com determinado patógeno.
• Aplicações dos anticorpos monoclonais

Imunodiagnóstico
Exemplos
Testes rápidos imunocromatográficos

Anticorpos monoclonais são


adsorvidos em
determinadas regiões da
membrana de nitrocelulose

fabp.jp
• Aplicações dos anticorpos monoclonais

Imunodiagnóstico
Exemplos
Enzimaimunoensaios

Anticorpos monoclonais são


utilizados para detectar
antígenos ou anticorpos no
soro do paciente.
• Aplicações dos anticorpos monoclonais

Imunodiagnóstico
Exemplos Células tumorais

Imunofluorescência

Tira o Jaleco
• Aplicações dos anticorpos monoclonais

Imunodiagnóstico
Exemplos
Técnicas de aglutinação – detecção de antígenos

Anticorpos monoclonais são


conjugados a partículas de
látex, com o intuito de
verificar a existência do
antígeno na amostra do
paciente.
ResearchGate
• Aplicações dos anticorpos monoclonais

Detecção de tumores
Exemplo vetmol.com.br

Imunohistoquímica

Câncer de mama - Receptor de


progesterona em glândula mamária.
• Aplicações dos anticorpos monoclonais

Detecção de tumores
Exemplo arquivo.sbcd.org.br/

Imunohistoquímica

Metástases cutâneas de tumor


carcinoide brônquico – marcação
positiva para AE1/AE3
• Aplicações dos anticorpos monoclonais

Terapia
Exemplos
Diminuição da rejeição de aloenxertos
 Anticorpos monoclonais anti-Linfócitos T são administrados
no momento do transplante.

Anticorpos monoclonais contra receptores de células


tumorais
 Ex: receptores de estrógeno e progesterona superexpressos
no câncer de mama.
• Produção dos anticorpos monoclonais: limitação
para a terapia

Produção dos anticorpos a partir de células de


camundongo.

Pacientes tratados com tais anticorpos podem


desenvolver anticorpos contra a imunoglobulina
administrada (o organismo pode entender como corpo
estranho).

Os anticorpos anti-Ig eliminam o efeito terapêutico e


ainda podem causar a doença do soro.
• Produção dos anticorpos monoclonais: limitação
para a terapia

Estratégias de engenharia genética são utilizadas para


driblar essa limitação.

Quora
• Produção dos anticorpos monoclonais:
anticorpos humanizados
Manipulação do cDNA proveniente do hibridoma.

SlideShare
• Produção dos anticorpos monoclonais:
anticorpos humanizados

Menor probabilidade de serem


vistos como “estranhos” ao
corpo humano e estimularem
respostas antianticorpo.
Clinical Microbiology Reviews - American Society for Microbiology
• Produção dos anticorpos monoclonais
biespecíficos

WhatIsBiotechnology.org

CHROMacademy
• Bibliografia

• Imunobiologia de Janeway [recurso eletrônico] / KennethMurphy,


Paul Travers, Mark Walport ; tradução Ana Paula Franco Lambert
... [et al.]. – 7.ed. – Porto Alegre : Artmed, 2010.

• Imunologia celular e molecular / Abul K. Abbas, Andrew H.


Lichtman, Shiv Pillai; ilustrações de David L. Baker, Alexandra
Baker ; [tradução de Tatiana Ferreira Robaina …et al]. - 8. ed. -
Rio de Janeiro : Elsevier, 2015.
Obrigado!!!

romulops12@gmail.com

You might also like