PREPARACION DE MEDIOS PARA CULTIVOS DE AZOTOBACTER

YEIKOT STEVEN ESCOBAR AGUILAR 164003442

INTRODUCCION

Por fijación de nitrógeno se entiende la combinación de nitrógeno molecular o

dinitrógeno con oxígeno o hidrógeno para dar óxidos o amonio que pueden
incorporarse a la biosfera. El nitrógeno molecular, que es el componente
mayoritario de la atmósfera, es inerte y no aprovechable directamente por la
mayoría de los seres vivos. La fijación de nitrógeno puede ocurrir de manera
abiótica (sin intervención de los seres vivos) o por acción de microorganismos
(fijación biológica de nitrógeno)(Madiganet al., 2004). La fijación en general
supone la incorporación a la biosfera de una importante cantidad de nitrógeno, que
a nivel global puede alcanzar unos 250 millones de toneladas al año, de las que
150 corresponden a la fijación biológica.
La atmósfera contiene enormes cantidades de nitrógeno libre)en estado gaseoso:
el nitrógeno molecular o (N2), que procede de microorganismos desnitrificantes.
Sin embargo, esta gran reserva sólo puede servir de fuente de nitrógeno a ciertos
procariotas, las llamadas bacterias fijadoras de nitrógeno o diazotrofos. Algunos
microorganismos con capacidad para fijar nitrógeno atmosférico como:
Azospirillum sp., y Azotobacter sp. han sido empleados como biofertilizantes en
varios cultivos . La conversión biológica del gas nitrógeno a amonio es catalizado
por el complejometalo-enzimático nitrogenasa. Esta notable capacidad bioquímica
no ha evolucionado en eucariotas, incluyendo las plantas.La familia
Azotobacteriaceae comprende a las bacterias del género Azotobacter. Se
reproducen por fisión binaria, viven en suelos y en aguas frescas.
Azotobacter es un microorganismo habitante regular del suelo, fijador de nitrógeno
y productor de sustancias de crecimiento vegetal. Se encuentra asociado a la
rizósfera (zona de raíces) y a las hojas (filósfera) de muchas plantas, donde forma
unas estructuras especiales llamadas ‘quistes’. Azotobacter se puede aislar
(extraer) del suelo cercano a las raíces de las plantas con técnicas y medios de
cultivos ya mencionados; en los medios de cultivo se caracteriza por presentar
gránulos con pigmentos de color marrones.
 OBJETIVOS

 Conocer los beneficios de la especie de bacterias Azotobacter para el

desarrollo de las plantas.
 Identificar colonias bacterianas correspondientes a Azotobacter.
 Observar la Morfologia de las colonias presentes de Azotobacter.
 Conocer sobre los microorganismos fijadores de nitrógeno

METODOLOGIA

Preparar sobre el agar Ashby con el asa caliente, pozos adecuados para
cada gránulo de suelo.

Sobre cada pozo armado

Aproximadamente 20 pozos Colocar un gránulo de suelo
Haciendo una leve presión
Hacia el fondo.

Realizar una siembra por

Aislamiento sobre una Observar alrededor de los
Caja de petri de Agar Ashby Gránulos colonias translúcidas
Benzoato. Y mucilaginosas

Observar crecimiento, morfología

Macro y microscópica (realizar
Tinción de Gram) y observación
De producción de pigmentos (en el
Medio Ashby--‐benzoato)
 RESULTADOS
Medios de cultivo antes de la siembra y una semana despues .

Observaciones microscopicas

4.1 OBSERVACIÓN DIRECTA MICROSCOPIO

OBJETIVO: 100X
OBJETIVO: 100X
A.T: 1000X A.T: 1000X
MUESTRA: PLACA 1 MUESTRA: PLACA -2
MEDIO CULTIVO: # 1 MEDIO CULTIVO: #1
OBJETIVO: 100X OBJETIVO: 100X
A.T: 1000X A.T: 1000X
MUESTRA: PLACA -1 MUESTRA: PLACA- 2
MEDIO CULTIVO: NUM -2 MEDIO CULTIVO #2

ANALISIS DE RESULTADOS

Las bacterias nitrificantes constituyen un conjunto muy diverso de bacterias. La

segunda edición del manual de Bergey sitúa los géneros nitrificantes en tres
clases y varias familias: Nitrobacter en Bradyrhizobyaceae, alfa-proteo
bacteria: Nitrosomonas y Nitrosospira en Nitrosomonadaceae, Aunque todos
los organismos Gram negativos aerobios sin endoesporas, capaces de oxidar
amoniaco o nitriro se diferencian de forma considerable. Las bacterias
encontradas en el microscopio no presentan endoesporas, son gram
negativas, ahora bien las bacterias del genero Azotobacter no requirieron
nitrógeno para desarrollarse (Prescott, M).
El género Azotobacter también puede clasificarse en la familia
Pseudomonadaceae. Este género contienen bacterias grandes y ovoides, de
1.5 a 2.0 micras de diámetro, que pueden ser móviles por la presencia de
flagelos peritricos. A menudo son células pleomorfas, cuyas formas varían
entre bacilos y cocos, y forman cistos a medida que el cultivo madura.
(Prescott, M)
En el microscopio se pudo observar bacterias ovoides, no se pudo establecer
si había presencia de flagelos peritricos. Las bacterias vistas en el microscopio
del laboratorio son bacilos gram negativos rectos, del genero Azotobacter,
porque las muestras para este laboratorio fueron tomadas de suelos
principalmente al lado de las raíces de las plantas, también porque estas
bacterias contribuyen al crecimiento de las plantas, facilitándoles el nitrógeno
atmosférico. Características del genero Azotobacter
 Azotobacter es un género de bacterias de vida libre y que fijan
nitrógeno atmosférico, que pertenece a la clase Gamma proteobacteria. Este
género ha sido estudiado por más de cien años, por científicos de todo el
mundo (Setubal 2009), Porque son bacterias o microorganismos procariotas
tienen una estructura morfológica más simple que las bacterias eucariotas,
también son de las pocas bacterias con la capacidad de fijar el nitrógeno
atmosférico y llevárselo a la biomasa vegetal para su beneficio. Estas son
bacterias de vida libre que crecen adecuadamente en medios sin nitrógeno.
Utilizan el nitrógeno atmosférico para la síntesis de sus proteínas celulares.
La proteína celular se mineraliza después de la muerte de la célula, por
tanto, contribuye a la disponibilidad de nitrógeno para las plantas silvestres y
los cultivos agrícolas (Agronet Sofware Pvt, 2004).

CONCLUSIONES
Se pudo observar que la formación de halos transparentes es la principal
característica de bacterias en agar Ashby, es decir se presencia el crecimiento
de colonias mucoides. Después del ciclo del carbono, el 4 ciclo del nitrógeno
es la segunda ruta metabólica más importante para que halla vida en la tierra,
ahora bien la fijación del nitrógeno es hecho por pocos microorganismos que
son procariotas.
El agar Ashby-sacarosa y Ashby-benzoato son claves en el desarrollo de
Azotobacter, porque tienen componentes claves en su estructura química que
brinda el nitrógeno suficiente para que la cepa se desarrolle exitosamente. El
recuento de microorganismos del suelo en cada uno de los cultivos, evidenció
un comportamiento dinámico y transitorio.La reducción de nitrógeno a amonio
llevada a cabo por bacterias de vida libre o en simbiosis con algunas especies
vegetales (leguminosas y algunas leñosas no leguminosas), se conoce como
fijación biológica de nitrógeno (FBN) (Campbell., 1987)...

BIBLIOGRAFIA

 Prescott M, Microbiología. 5ed. Madrid, McGraw Hill, 540 -545p.

 CAMPBELL, R. 1987. Ecologia Microbiana. Ed.Limusa. México.

 Egas, J. (2010)Efecto de la inoculación de Azotobacter sp. En el

Crecimiento De Plantas Injertadas De Cacao (Theobroma caco),
Genotipo Nacional, En La Provincia De Esmeraldas, Escuela Politécnica
Nacional, Quito, Pag 16 – 20
 Borda, D., Pardo, J., Martínez, M., Montaña J.(2009) Producción de un
biofertilizante a partir de un aislamiento de Azotobacter nigricans
Obtenido de un cultivo de Stevia rebaudiana. Pontificia Universidad
Javeriana, Bogota Pag 72 – 73