Metodos - Analiticos I245

Guia de Métodos Analíticos
Sumário
Página
Introdução ........................................................................................................................... ...........................3
Normas de amostragem.......................................................................................................................5
I - MÉTODOS FÍSICO-QUÍMICOS
Método
01 Índice de Acidez I - Acidez Alcoólica......................................................................................................17
02 Índice de Acidez II - Óleos e Gorduras............................................................................................21
03 Índice de Acidez III - Melaço de Cana..............................................................................................25
04 Índice de Acidez em Leite...............................................................................................................28
05 Determinação de Ácidos Graxos Totais ( AGT).....................................................................................31
06 Atividade Ureática........................................................................................................................34
07 Determinação de Cálcio EDTA............................................................................................................37
08 Cálcio - Oxidimetria...........................................................................................................................41
09 Carotenos e Xantofilas........................................................................................................................45
10 Determinação de Cloretos Solúveis...............................................................................................48
11 Cobalto (VIA ÚMIDA) - Complexometria de EDTA....................................................................................................52
12 Determinação de Cobre - Via Úmida.............................................................................................55
13 Enxofre Total por Oxidação e Turbidimetria..........................................................................................58
14 Determinação de Extrato Etéreo - Método SOXHLET......................................................................62
15 Determinação de Extrato Etéreo - Hidrólise Ácida..........................................................................65
16 Determinação de Extrato Etéreo - Hidrólise Alcalina.......................................................................68
17 Ferro - Via Úmida.........................................................................................................................71
18 Ferro - Método Volumétrico...........................................................................................................74
19 Fibra Bruta...................................................................................................................................78
20 Fibra Detergente Ácido ( F.D.A.).....................................................................................................81
21 Fibra Detergente Neutro ( F.D.N )..........................................................................................................84
22 Flúor - Método Potenciométrico I..................................................................................................87
23 Flúor - Método Potenciométrico II..................................................................................................91
24 Fósforo Solúvel em Ácido Cítrico 2%............................................................................................95
25 Determinação de Fósforo Total - Colorimétrico I..............................................................................98
26 Determinação de Fósforo Total - Colorimétrico II.............................................................................102
27 Glicídios (Açúcares Redutores em Glicose, não Redutores em Sacarose, Amido e Lactose)..............106
28 Granulometria .............................................................................................................................111
29 Hidrólise Ácida - Método Direto...................................................................................................113
30 Índice de Dispersibilidade Proteica..............................................................................................116
31 Índice de Iodo............................................................................................................................120
32 Determinação de Iodo - Via Úmida................................................................................................124
1
33 Lignina......................................................................................................................................127
34 Manganês - Colorimetria.............................................................................................................130
35 Matéria Insaponificável................................................................................................................133
36 Cinzas ou Matéria Mineral...........................................................................................................137
37 Matéria Pré-Seca.......................................................................................................................139
38 Determinação de Materiais por Espectofotometria de Absorção Atômica (EAA) ou Plasma de Argônio
Indutivamente Acoplado (ICP)...........................................................................................................141
39 Micotoxinas (Aflatoxinas B1, B2, G1 e G2, Ocratoxina, Zearalenona e Esterigmatocistina).......145
40 Espectofotometria de Reflectância no Infra Vermelho Próximo (NIR).............................................152
41 Nitrogênio não Proteico..............................................................................................................155
42 Nitrogênio Insolúvel em Detergente Ácido (NIDA)............................................................................157
43 Nitrogênio Insolúvel em Detergente Neutro (NIDIN)........................................................................160
44 Índice de Peróxido - Método a Frio.............................................................................................163
45 Índice de Peróxido - Método a Quente...............................................................................................167
46 Digestibilidade Protéica em Pepsina no Sobrenadante.................................................................171
47 Proteína - Método Dumas.................................................................................................................176
48 Proteína Bruta - Método KJELDAHL.................................................................................................179
49 Resíduo Insolúvel em HCI...........................................................................................................187
50 Determinação de Selênio por Via Úmida - Volumetria Iodométrica......................................................190
51 Solubilidade Protéica em KOH....................................................................................................194
52 Tanino.......................................................................................................................................197
53 Teste de Rancidez - Reação de Kreiss.........................................................................................200
54 Umidade - Método Direto..............................................................................................................203
55 Umidade e Voláteis em Grãos.........................................................................................................205
56 Umidade e Voláteis.......................................................................................................................208
57 Uréia.........................................................................................................................................210
58 Determinação de Zinco - Via Úmida............................................................................................214
II - MÉTODOS MICROBIOLÓGICOS
Método
01 Contagem de Bacillus cereus.....................................................................................................221
02 Bolores e Leveduras.................................................................................................................226
03 Contagem de Clostridium Sulfito Redutores e Clostridium perfringens..............................................229
04 Coliformes Totais e Termotolerantes em Alimentos..............................................................................234
05 Contagem de Enterobactérias..........................................................................................................238
06 Pesquisa de Salmonella............................................................................................................241
07 Contagem E. coli - Método I.......................................................................................................248
08 Contagem E. coli - Método II..........................................................................................................252
Instruções Normativas
IN 62 - Anexo II - Diluições e Soluções...............................................................................................257
IN 62 - Anexo IV - Procedimento para Contagem de Colônias.............................................................266
IN 62 - Anexo V - Preparo, Pesagem e Descarte de Amostras...........................................................274
IN 62 - Anexo VII - Procedimentos de Coloração...............................................................................279
IN 62 - Anexo IX - Meios de Cultura..................................................................................................286
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III - MICROSCOPIA
01 - Detecção de Subprodutos de Origem Animal em Misturas de Ingredientes para Alimentação de

Ruminantes.........................................................................................................................333
IV - VITAMINAS
Vitaminas ............................................................................................................................................339
Fórmulas Estruturais............................................................................................................................340
Fatores de Conversão de Vitaminas...................................................................................................343
Abreviações....................................................................................................................................346
HPLC Column Selection by USP Listing..............................................................................................349
Estabilidade das Vitaminas.................................................................................................................351
Exemplos de Cromatogramas................................................................................................................352
Método
01 Vitamina E Acetato.......................................................................................................................357
V - DESVIOS ANALÍTICOS.............................................................................................................361
VI - SISTEMA DE GESTÃO DA QUALIDADE E A COMPETÊNCIA DO LABORATÓRIO.......................367
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Guia de Métodos Analíticos
Introdução
H
á mais de duas décadas, objetivando a melhor qualidade e a uniformização das matérias-primas
empregadas na fabricação de alimentos para animais, a Comissão de Métodos Analíticos formada
por técnicos que atuam nos laboratórios das indústrias de alimentação animal e de serviços
especializados, técnicos dos laboratórios do Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento dos
Laboratórios de Referência Animal e da CATI e ADAESP, vem trabalhando continuamente na discussão e
validação de métodos analíticos e controles interlaboratoriais e questões técnicas sobre qualidade e
segurança de alimentos, inclusão, modificação e eliminação de metodologias de análise.
A publicação deste Guia de Métodos Analíticos é um dos méritos de todo esse investimento de tempo e
mão-de-obra em torno da qualidade das matérias-primas para alimentação animal. Seguramente, esse
material refletirá nos padrões dos ingredientes e dos produtos acabados, além de constituir valioso subsídio
para os profissionais que atuam nos institutos de pesquisas e universidades.
O anexo de Desvios Analíticos, a partir dos controles interlaboratoriais – cujos resultados possibilitaram a
escolha das metodologias mais adequadas às condições brasileiras – também poderão constituir a base
para estabelecimento dos desvios analíticos e serão continuamente revisados e atualizados.
Contamos nesta edição com uma nova formatação, com base em referências técnicas e conceitos sobre
Boas Práticas de Laboratório, indispensáveis para a garantia da SEGURANÇA DE ALIMENTOS.
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Guia deMétodos Analíticos
Normas de Amostragem
Considerações gerais
Fatores importantes que determinam o esquema e implementação de um programa

de amostragem envolvem o tamanho da embalagem final, a variedade de ingredientes,
acurácia do laboratório, o custo da análise e o valor do produto. Entretanto, quando se define
o procedimento de amostragem, deve ser considerado o seu propósito, as análises de
laboratório a que a amostra será submetida e as características dos ingredientes e produtos
finais.
Procedimentos de amostragem dependem da natureza dos lotes de matéria-prima, produto em
processo ou acabado, transporte e equipamento de amostragem. O conhecimento prévio dos dados do
produto e recursos de amostragem permite estabelecer procedimentos adequados.
O uso de métodos de amostragem reconhecidos internacionalmente garante uma abordagem
técnica e administrativa padronizada e facilita a interpretação dos resultados de análises relativos aos lotes
ou embarques de produtos destinados à alimentação animal.
ORIENTAÇÕES PARA AMOSTRAGEM
Definição de objetivos, propósitos e condições de amostragem
Os objetivos e propósitos de amostragem a serem alcançados devem estar claros quando do

desenvolvimento do procedimento de amostragem. Exemplos de objetivos que devem ser levados em
consideração são:
• Aceitação de cargas embarcadas ou desembarcadas;
• Teste para liberação de lote;
• Controle de matérias-primas;
• Controle de produtos em processo;
• Controle de produtos acabados;
• Liberação de produtos não conformes;
• Obtenção de amostras de retenção;
• Disputas legais;
• Ensaios inter-laboratoriais;
• Validação de métodos analíticos;
• Validação de medidas de controle.
A amostragem deve ser feita em área definida para evitar dificuldades na execução dos
procedimentos, reduzir riscos de contaminação e contaminação cruzada, permitir a correta execução das
análises laboratoriais e incluir todas as precauções de segurança e de saúde necessárias para a amostrador
e o ambiente.
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O pessoal responsável pela amostragem deve ser treinado nos procedimentos aplicáveis e ter o
conhecimento necessário do produto a ser amostrado, das ferramentas usadas na amostragem, de
adequação e limpeza do ambiente e do recipiente de contenção da amostra para não permitir a sua
contaminação ou deterioração.
Procedimento de amostragem e equipamentos
Para a execução do procedimento de amostragem, ferramentas e materiais apropriados devem

estar disponíveis para permitir:
• A abertura de bags, embalagens, barris, tambores, containers, caminhões, etc.;
• O fechamento de embalagens;
• A rotulagem indicativa de que uma amostra foi removida;
• A estocagem, retenção e preservação da amostra;
• A rotulagem do recipiente de estocagem e retenção;
• As precauções de amostragem requeridas para os métodos de análise químicos e
microbiológicos.
Todas as ferramentas e materiais auxiliares devem ser inertes e estar em condições de limpeza
antes e depois do uso. Da mesma maneira, a limpeza da embalagem a ser amostrada deve ser considerada
antes da amostragem.
A indústria de alimentação animal usa uma combinação de ferramentas para a coleta de amostras.
Caminhões e vagões graneleiros ou de farelo de soja são frequentemente amostrados usando uma
sonda de mão (calador). Cargas a granel podem ser estratificadas e múltiplas amostras coletadas se
houver diferentes porções de grãos a serem amostradas.
Sondas perfuradas podem ser usadas para coletar uma amostra representativa de grãos, farelo
de soja ou ração final. A sonda deve ser longa o suficiente para penetrar ao menos ¾ da profundidade do
material. Amostras oficiais de grãos são coletadas usando uma sonda de 4,13 cm de diâmetro que consiste
em dois tubos, um dentro do outro. O tubo interno é dividido em compartimentos e permite a coleta
individual da amostra para detecção de inconsistência na qualidade dos grãos ao longo da carga. Este
procedimento é mais trabalhoso, pois o conteúdo da sonda deve ser esvaziado e inspecionado antes do
grão ser transferido para um recipiente. Sondas manuais abertas, nas quais o tubo interno não é dividido
em compartimentos, são usadas para amostragem de matérias-primas incluindo grãos. O conteúdo da
sonda é esvaziado e ocorre mistura, tornando difícil proceder a uma inspeção visual para checar
inconsistências da carga em sua extensão. Uma sonda manual em espiral foi projetada de forma que as
aberturas no tubo interno girem e abram primeiro na parte inferior e então em passos graduais até o topo.
Isto assegura que uma porção adequada de amostra seja coletada em todo o perfil do material. Entretanto,
o uso incorreto desta sonda pode resultar num efeito oposto se o tubo interno girar na direção oposta,
acarretando numa quantidade desproporcional de amostra coletada a partir do topo. A sonda deve ser
inserida no grão ou ração num ângulo de 10° da vertical, com a face das aberturas voltada para cima e
completamente fechada. Um ângulo de 10° é usado para obter uma seção transversal do material, inserindo
a extremidade da sonda o mais perto possível do fundo da carga. As fendas devem ser mantidas fechadas
até que a sonda seja inserida o mais fundo possível. Se as fendas da sonda forem abertas enquanto ela
penetra nos grãos, uma quantidade desproporcional de material do topo encherá a sonda. Após a sonda
ser totalmente inserida, as fendas devem ser abertas e a sonda movida para cima e para baixo rapidamente
em dois movimentos. As fendas são, então, fechadas completamente, a sonda é removida pelo tubo
externo e retirada da carga amostrada.
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O amostrador de grãos tipo Pelicano é usado para amostragem do grão em linha. A sonda é uma
bolsa de couro de aproximadamente 0,46 m de comprimento, com uma haste de ferro inserida ao longo
da borda para manter a bolsa aberta. A bolsa é presa a uma longa vara. A soda Pelicano foi desenhada
para colher amostras enquanto a bolsa é colocada e puxada ao longo de uma cascata de grãos. O
amostrador Pelicano é útil na amostragem de grãos, farelo de soja ou produto acabado que está sendo
descarregado de caminhões.
Sacarias de premixes e produtos com medicamentos devem ser amostrados com uma sonda
para bags.Sondas afuniladas são usadas para amostrar bags fechados de pós e granulados.
Sondas duplas para sacarias são construídas de aço inoxidável ou latão cromado. Estas sondas estão
disponíveis em vários comprimentos e diâmetros, em modelos com extremidade aberta ou fechada e
podem ser usados para amostrar sacos abertos ou fechados de ingredientes pós e granulados.
Sondas de tubo único e extremidade aberta são construídas de aço inoxidável e usadas para amostrar
sacos abertos de materiais secos e em pó, quando é necessário remover uma amostra do meio do
material.
Gorduras, melaço e outros ingredientes líquidos armazenados em tambores ou barris podem ser
amostrados com um tubo de vidro ou aço inoxidável. Recipientes de líquidos podem requerer uma bomba
de amostragem. Em todos os casos, o líquido deve ser agitado antes da retirada da amostra para garantir
a homogeneização do material.
Amostras de forragem devem conter quantidade substancial do material. O procedimento de amostragem
e a preparação da amostra vão variar conforme o material seja forragem seca, silagem, pastagem, forragem
verde picada ou forragem no campo. A amostra deve ser coletada em vinte diferentes pontos usando um
amostrador de profundidade. Se a ferramenta não estiver disponível, pode ser usada amostragem manual.
Tomar cuidado para evitar perda de folhas quando utilizar este último procedimento.
A coleta de amostras de silagem deve ser feita pela remoção de uma coluna de 0,15m de
profundidade por 0,30 m de largura na face aberta. A silagem deve ser misturada, colocada em um saco
plástico, fechada e acondicionada hermeticamente para remover o ar.
A amostragem de pastagem está sujeita a variações da fertilidade do solo e teor de umidade,

portanto deve ser feita com cuidado. De oito a dez pontos devem ser selecionados para amostragem,
removendo aproximadamente 0,1 m2 na altura da forragem de cada local. A composição de sub-amostras
deve ser misturada e o material reduzido a 1 kg como a amostra de trabalho. Amostras de pastagem verde
devem ser imediatamente secas para evitar alterações químicas.
Amostras de água devem ser coletadas diretamente em um recipiente limpo, de lagoas, lagos,
tanques ou outras fontes. O recipiente deve ser imerso, segurando-o de boca para baixo a 0,30 m da
superfície. Então, virado de boca para cima para ser preenchido com a amostra. A água de tubulações
extensas deve ser amostrada após escoamento de dois a quatro minutos, para garantir que não ficou
parada na tubulação. Quando for executada análise microbiológica, deve ser utilizado recipiente estéril na
amostragem da água.
O produto acabado pode ser amostrado enquanto é transferido para o veículo de transporte, se
estiver na forma granel.
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Qualquer sinal de material não uniforme, que inclui diferenças em formato, tamanho ou cor das
partículas em material cristalino, granular ou pó, crosta de umidade em substâncias higroscópicas, depósito
de material sólido ou estratificado em produtos líquidos, deve ser detectado durante o procedimento de
amostragem. Porções de material de área não homogênea devem ser amostradas separadamente e não
devem ser misturadas para que não mascarem problemas de qualidade.
Redução de amostras
Reduções de amostras podem ser feitas através do quarteamento da amostra para uma quantidade
conveniente para a análise. A amostra composta deve ser espalhada em um plástico ou papel limpo,
formando uma camada uniforme. O papel é marcado em quadrantes e dois quadrantes opostos são
misturados. Esta etapa deve ser repetida por três vezes. O material é, então, novamente dividido em
quatro partes e uma diagonal é eliminada. O processo completo deve ser repetido até que dois quadrantes
selecionados resultem no tamanho desejado de amostra. O resultado final deste processo deve gerar
uma amostra de trabalho de 0,5 a 1 Kg.
A quantidade de material deve ser suficiente para a realização de toda a rotina analítica, bem
como armazenamento de amostra de retenção, destinada à revisão e perícia. Para esta última, adotar, no
mínimo, amostras de 1 kg. Para produtos cuja homogeneidade possa comprometer o resultado analítico
(rações e concentrados que contenham uréia, farelo de algodão, etc.), a amostra deve conter no mínimo
2 kg ou, em casos especiais (análises microbiológicas, micotoxinas, etc.), conforme especificação do
laboratório.
Figura1 – Quarteamento manual
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Quando necessário, moer a amostra em moinho específico, passando-a integralmente em peneira
com malha de 1 mm (16 mesh). Homogeneizar e acondicionar em recipiente adequado. Sacos de plástico
duro, sacos com fechamento (tipo zip lock), sacos plásticos ou recipientes plásticos são excelentes
embalagens para amostras ingredientes ou produtos acabados secos. O recipiente deve proteger a
amostra da luz, ar, umidade como requerido pelas condições de estocagem.
Freqüência de amostragem e retenção
Com poucas exceções, todos os ingredientes recebidos devem ser amostrados no recebimento
e inspecionados quanto à identidade, pureza e comparado com uma amostra de referência e especificações
padrão. O procedimento de amostragem deve incluir inspeção da documentação do transportador para
garantir que o material correto e a documentação, que pode incluir um certificado de análise, foram
entregues.
Quando do recebimento de ingredientes a granel, os documentos de transporte devem ser
analisados para identificação da origem da carga. Um relatório de recebimento de matérias-primas irá
complementar o programa de amostragem. Este relatório deve incluir a data, identificação da matéria-
prima, fornecedor, transportador, declaração de mercadorias embarcadas, ordem de compra, número da
nota fiscal, tempo de recebimento, peso, estoque onde o material foi colocado, número do certificado de
análises do fornecedor, propriedades físicas e sensoriais verificadas no recebimento dos materiais e
assinatura da pessoa responsável pelo recebimento.
Amostras devem ser retidas até que todo o produto tenha sido consumido pelo animal ou até que
a responsabilidade sobre o produto exista. Amostragem e avaliação de produtos medicamentosos devem
estar conformes com os requisitos regulatórios.
Planos de amostragem para matérias-primas e produtos acabados
Métodos internacionais de amostragem devem ser usados para garantir que procedimentos válidos
de amostragem são aplicados quando a ração é testada quanto à conformidade com padrões ou objetivos
particulares. O Codex General Guidelines on Sampling – CAC/GL 50-2004 (FAO/WHO, 2004) dá informações
para facilitar a implementação destes objetivos.
Tabela 1 – Recomendações para a seleção de planos de amostragem
Os seguintes itens são pontos essenciais que o usuário deve seguir para a seleção de planos apropriados
de amostragem.
1. Existência (ou não) de documentos nacionais ou internacionais de referência na amostragem dos

produtos considerados.
2. Natureza do controle
• Características aplicáveis de cada item individual do lote.
• Características aplicáveis ao lote todo (tratamento estatístico).
3. Natureza da característica de controle

• Característica qualitativa (característica medida por aprovado/reprovado ou base similar, por exemplo,
presença de micro-organismos patogênicos).
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• Característica quantitativa (característica medida numa escala contínua, por exemplo de composição).
• Escolha do nível de qualidade (NQA)De acordo com os princípios descritos no Manual de Procedimentos
do Codex e com o tipo de risco: não conformidades críticas/não-críticas.
4. Natureza do lote
• Granel ou pré-embalados.
• Tamanho, homogeneidade e distribuição relacionados ao controle de características.
5. Composição da amostra
• Amostra composta de uma única unidade.
• Amostra composta de mais de uma unidade.
6. Escolha do tipo de plano de amostragem

• Planos de amostragem de aceitação para controle estatístico da qualidade.
• Para o controle da média da característica;
• Para o controle do percentual de itens não conformes no lote;
• Definição e enumeração de itens não conformes na amostra (planos de atributos);
• Comparação do valor médio dos itens que formam a amostra com relação a uma fórmula algébrica
(planos de variáveis).
Fonte: The Codex General Guidelines on Sampling – CAC/GL 50-2004 (FAO/WHO, 2004).
Numerosos planos de amostragem estão disponíveis e nenhum pode garantir que todo item de
um lote esteja conforme com os parâmetros estudados. Eles são, todavia, úteis para garantir um nível de
qualidade aceitável acordado entre as partes para controles especificados.
Um procedimento de amostragem deve estipular as condições com base nas quais um lote deve
ser inspecionado e classificado. Estas condições incluem procedimentos de inspeção (inspeção normal,
aumentada ou reduzida), troca de procedimentos (de inspeção normal para aumentada, de aumentada
para normal e de normal para reduzida), níveis de inspeção (I, II e III, S-1, S-2, S-3, S-4), Níveis de
Qualidade Aceitáveis – NQAs, números de itens a serem randomicamente selecionados do lote e que
irão compor a amostra, números de aceitação e rejeição.
Várias normas ISO estão disponíveis no caso de situações de controle não tratadas no The Codex
General Guidelines on Sampling – CAC/GL 50-2004 (FAO/WHO, 2004).
ISO 2859-1:1999: Procedimentos de amostragem para inspeção por atributos – Parte 1: Esquemas de
amostragem indexados pelo nível de qualidade aceitável (NQA) para inspeção lote a lote.
ISO 2859-2:1985: Procedimentos de amostragem para inspeção por atributos – Parte 2: Planos de
amostragem indexados pelo limite de qualidade para inspeção em lote isolado.
ISO 2859-3:2005: Procedimentos de amostragem para inspeção por atributos – Parte 3: Procedimentos
de amostragem para skip-lot.
ISO 2859-4:2002: Procedimentos de amostragem para inspeção por atributos – Parte 4: Procedimentos
para avaliação de níveis de qualidade declarados.
ISO 2859-5:2005: Procedimentos de amostragem para inspeção por atributos – Parte 5: Sistema de planos
de amostragem seqüenciais indexados pelo nível de qualidade aceitável (NQA) para inspeção lote a lote.
12
ISO 2859-10:2006: Procedimentos de amostragem para inspeção por atributos – Parte 10: Introdução à
série de normas ISO 2859 para amostragem para inspeção por atributos.
ISO 3951-1:2005: Procedimentos de amostragem para inspeção por variáveis – Parte 1: Especificação
para planos de amostragem simples indexados pelo nível de qualidade aceitável (NQA) para inspeção
lote a lote para característica única de qualidade e único NQA.
ISO 3951-2:2006: Procedimentos de amostragem para inspeção por variáveis – Parte 2: Especificação
geral para planos de amostragem únicos indexados pelo nível de qualidade aceitável (NQA) para inspeção
lote a lote de características de qualidade independentes.
ISO 3951-3:2007: Procedimentos de amostragem para inspeção por variáveis – Parte 3: Esquemas duplos
de amostragem indexados pelo nível de qualidade aceitável (NQA) para inspeção lote a lote.
ISO/WD 3951-4: Procedimentos de amostragem para inspeção por variáveis – Parte 4: Procedimentos
para avaliação de níveis declarados de qualidade.
ISO 3951-5:2006: Procedimentos de amostragem para inspeção por variáveis – Parte 5: Planos de
amostragem seqüencial indexados pelo nível de qualidade aceitável (NQA) para inspeção por variáveis
(desvio padrão conhecido).
ISO 5555:2001: Gorduras e óleos vegetais e animais – Amostragem.
ISO 6497:2002: Alimentos para animais – Amostragem.
ISO 7002:1986: Produtos agrícolas– Layout para método padrão de amostragem de um lote.
ISO 8422:2006: Planos de amostragem seqüenciais para inspeção por atributos.
ISO 8423:1991: Planos de amostragem seqüenciais para inspeção por variáveis para percentual de não
conformidades (desvio padrão conhecido).
ISO/TR 8550-1:2007: Guia para seleção e uso de sistemas de amostragem de aceitação para inspeção
de discretos itens em lotes – Parte 1: Amostragem de aceitação.
de discretos itens em lotes – Parte 2: Amostragem por atributos.
de discretos itens em lotes – Parte 3: Amostragem por variáveis.
ISO 10576-1:2003: Métodos estatísticos – Guias para avaliação de conformidade com os requisitos
especificados – Parte 1 – Princípios gerais.
ISO 10725:2000: Planos de amostragem por aceitação e procedimentos para a inspeção de materiais a
granel.
ISO 11648-1:2003: Aspectos estatísticos de amostragem de materiais a granel – Parte 1: Princípios gerais.
ISO 11648-2:2001: Aspectos estatísticos de amostragem de materiais a granel – Parte 1: Amostragem de
materiais particulados.
ISO 14560:2004: Procedimentos de amostragem de aceitação por atributos – Níveis de qualidade
especificados em itens não conformes por milhão.
BIBLIOGRAFIA
FAMI-QS, EU Guide to Good Practice for Feed Additives and Premixtures Operators, 2007, Version 2.
FAO/WHO, The Codex General Guidelines on Sampling – CAC/GL 50-2004, 2004.
FAO/WHO, Guidelines for Food Import Control Systems, 2006.
FAO/WHO, Assessing Quality and Safety of Animal Feeds, 2004.
Garfield, F.M., Quality Assurance Principles for Analytical Laboratories, 1991.
ISO/IEC 17025:2005. General Requirements for the Competence of Testing and Calibration Equipment,
2005.
13
I
Métodos Físico-Químicos
15
MÉTODO Nº 1
Métodos Analíticos Índice de Acidez I - Revisão: 2009

Acidez Alcoólica
4 páginas
1. Introdução
Os ácidos graxos livres (AGL) presentes em óleos e gorduras (ou produtos que os contenha) são resultantes
da hidrólise de alguns triglicerídios (TAG), na ligação éster entre o glicerol e o ácido graxo. A acidez está
associada à caracterização do estado de conservação de grãos e da deterioração de óleos e gorduras,
por conseguinte a ocorrência de ácidos graxos livres indica a perda da integridade da molécula, antes
neutra e totalmente apolar (1). A hidrólise dos lipídios pode ocorrer por diversos fatores como: condições
impróprias de armazenamento (temperatura e umidade elevadas), ataque enzimático de microrganismos
ou de lipases naturais existentes no material.
Como os ácidos graxos são ácidos fracos, é necessário usar uma base forte como o hidróxido de sódio
para titulá-los. Pelo mesmo motivo, o ponto de equivalência estequiométrica, quando titulados com uma
base forte, está no lado alcalino (pH=7) (2). Por isso a acidez causada pelos ácidos graxos livres é
estimada pela titulação com hidróxido de sódio em solução alcoólica, usando fenolftaleína como indicador.
2. Recomendações
Antes da aplicação do método é imprescindível observar as condições de segurança e manuseio dos

produtos químicos.
3. Escopo
Aplicável a produtos e subprodutos de origem animal e vegetal, rações e concentrados.
4. Referências Normativas
Não aplicável.
5. Definições
Não aplicável.
6. Reações
6.1. Hidrólise de uma molécula de triglicerídio (formação dos AGL):
17
6.2. Reação de neutralização do biftalato de Sódio com hidróxido de potássio:
6.3. Reação de neutralização dos ácidos graxos livres (AGL) com hidróxido de sódio
7. Reagentes e Materiais
7.1. Álcool Etílico Absoluto p.a.

7.2. Biftalato de Potássio p.a.
7.3. Fenolftaleína p.a.
7.4. Hidróxido de Sódio p.a.
7.5. Álcool Etílico Absoluto neutralizado
O álcool etílico absoluto neutralizado deve ser preparado momentos antes do uso.
Manter o frasco de álcool absoluto bem fechado para evitar a formação de ácido carbônico.
7.5.1. Preparo: Adicionar 4 gotas de solução indicadora de fenolftaleína 1% e com agitação constante,
gotejar a solução de NaOH 0,1 M até coloração levemente rósea;
7.6. Solução alcoólica indicadora de Fenolftaleína 1%
7.6.1. Preparo: Dissolver 1,0g de fenolftaleína p.a. em 60 mL de álcool etílico p.a. Transferir para balão
volumétrico de 100 mL, completar o volume e homogeneizar.
7.7. Solução volumétrica padronizada de NaOH 0,1M
7.7.1. Preparo: Pesar aproximadamente 4,1 g de NaOH, em béquer de 250 mL e dissolver em água
destilada. Transferir quantitativamente para balão volumétrico de 1000 mL, completar o volume e
homogeneizar.
7.7.2. Padronização: Pesar aproximadamente 0,400 g de biftalato de potássio p.a., previamente seco em
estufa a 105°C por 3 horas. Transferir para um erlenmeyer de 250 mL , dissolver com 75 mL de água
destilada quente, esfriar e adicionar 4 gotas de solução indicadora de fenolftaleina a 1% e titular com a
solução de hidróxido de sódio 0,1 M.
Cálculo da molaridade real:
18
Onde:
MR Molaridade real
P Peso do Biftalato de Potássio, em mg
Mol Unidade molar do Biftalato de Potássio (204,2 g/mol)
V Volume de NaOH gasto na titulação, em mL
7.8. Carvão ativado

7.9. Papel de filtro qualitativo
7.10. Balão volumétrico de 100 e 1000 mL
7.11. Béquer de 250 ou 300 mL
7.12. Bureta de 25 mL (divisão 0,1 mL)
7.13. Erlenmeyer de 250 ou 300 mL
7.14. Funil analítico
8. Equipamentos
8.1. Balança analítica (resolução de 0,0001 g)
9. Amostragem
Para a retirada de amostras na Produção, vide capítulo Amostragem.

A amostra não deve ser previamente moída, usar matéria original.
10. Procedimento
10.1. Pesar 5 g de amostra em erlenmeyer ou béquer de 250 mL;

10.2. Adicionar 150 mL de álcool etílico absoluto neutralizado e deixar em repouso por 30 minutos, agitando
ocasionalmente (5 em 5 minutos);
10.3. Filtrar o sobrenadante sobre papel de filtro para erlenmeyer de 300 mL. Caso o sobrenadante se
apresente turvo ou colorido, adicionar carvão ativado no papel de filtro antes da filtragem;
10.4. Adicionar ao resíduo mais 100 mL de álcool etílico absoluto neutralizado e deixar em repouso por 15
minutos, agitando ocasionalmente;
10.5. Filtrar sobre o mesmo papel de filtro, juntando ao filtrado obtido no item 3;
10.6. Adicionar 4 a 5 gotas de solução indicadora de fenolftaleína e titular com solução de NaOH 0,1 M até
coloração rósea persistente por 30 segundos;
10.7. Conduzir prova em branco para testar os reagentes empregados.
11. Cálculo
Onde:
VA Volume de NaOH 0,1 M gasto na titulação da amostra, em mL
VB Volume de NaOH 0,1 M gasto na titulação da prova em branco, em mL
19
MR Molaridade real da solução de NaOH
P Peso da amostra, em grama
40 Unidade molar do NaOH (g/mol)
12. Bibliografia
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Normas Analíticas do Instituto Adolfo Lutz: Métodos químicos e físicos para
análise de alimentos. 4. ed. São Paulo: PROL, 2005. v. 1. p. 809-810.
(1) MEHLENBACHER, V. C. The analysis of fats and oils. Champaign: Garrard Press, 1960. Stability, c. 4. p.
188-235
(2) BACCAN, N.; ANDRADE, J.C.; GODINHO, O. E. S.; BARONE, J. S. Química analítica quantitativa
elementar. São Paulo: Edgard Blücher, 2001. Práticas de laboratório, c. 8. p. 191-270.
20
MÉTODO Nº 2
Índice de Acidez II -
Métodos Analíticos Revisão: 2009
Óleos e Gorduras
4 páginas
1. Introdução
Os ácidos graxos livres (AGL) presentes em óleos e gorduras (ou produtos que os contenha) são resultantes
da hidrólise de alguns triglicerídios (TAG), na ligação éster entre o glicerol e o ácido graxo. A acidez está
associada à caracterização do estado de conservação de grãos e da deterioração de óleos e gorduras,
por conseguinte a ocorrência de ácidos graxos livres indica a perda da integridade da molécula, antes
neutra e totalmente apolar (1). A hidrólise dos lipídios pode ocorrer por diversos fatores como: condições
impróprias de armazenamento (temperatura e umidade elevadas), ataque enzimático de microrganismos
ou de lipases naturais existentes no material.
Como os ácidos graxos são ácidos fracos, é necessário usar uma base forte como o hidróxido de sódio
para titulá-los. Pelo mesmo motivo, o ponto de equivalência estequiométrica, quando titulados com uma
base forte, está no lado alcalino (pH=7) (2). Por isso a acidez causada pelos ácidos graxos livres é
estimada pela titulação com hidróxido de sódio em solução alcoólica, usando fenolftaleína como indicador.
2. Recomendações

produtos químicos.
3. Escopo
Aplicável a óleos brutos e refinados, vegetais e animais e gorduras animais.
Não aplicável.
5. Definições
Não aplicável.
6. Reações
21
6.2. Reação de neutralização do biftalato de Sódio com hidróxido de potássio:
6.3. Reação de neutralização dos ácidos graxos livres (AGL) com hidróxido de sódio

7.2. Éter Etílico p.a.
7.6. Solução reagente éter-álcool (2+1) neutralizada
A solução reagente éter-álcool (2+1) neutralizada deve ser preparada momentos antes do uso.
Importante manter o frasco da solução reagente éter- álcool neutralizada bem fechado para evitar a formação
de ácido carbônico.
7.6.1. Preparo: Misturar 2 partes de éter etílico p.a. com 1 parte de álcool etílico absoluto. Adicionar 4
gotas de solução indicadora de fenolftaleína 1% e com agitação constante, gotejar a solução de NaOH 0,1
M até coloração levemente rósea;
7.7.1. Preparo: Dissolver 1,0g de fenolftaleína p.a. em 60 mL de álcool etílico p.a.. Transferir para balão
7.8.1. Preparo: Pesar aproximadamente 4,1 g de NaOH p.a., em béquer de 250 mL e dissolver em água
homogeneizar.
22
Onde:
MR Molaridade real
Mol Unidade molar do Biftalato de Potássio (204,2 g/mol)

7.10. Bastão de vidro
7.14. Proveta de 100 e 250 mL
8. Equipamentos
9. Amostragem

Importante agitar bem o frasco contendo amostra, para obter uma amostra bem homogênea e líquida,
antes de realizar a pesagem.
10. Procedimento
10.1. Pesar 5 g de amostra em erlenmeyer ou béquer de 250 mL; Para amostras de coloração escura,
pesar apenas 1 g;
10.2. Adicionar 100 mL da solução éter-álcool 2+1 neutralizada e agitar até completa dissolução. Para
amostras de difícil dissolução, levar ao banho-maria, evitando excesso de aquecimento que pode provocar
elevação do valor de ácidos graxos livres;
11. Cálculo
23
Onde:
0,282 1 mL de NaOH 0,1M equivale a 0,282 g de ácido oléico
12. Bibliografia
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Normas Analíticas do Instituto Adolfo Lutz. Métodos químicos e físicos para
análise de alimentos, V.1. 4. ed. São Paulo: PROL, 2005. p. 591-593
AMERICAN OIL CHEMISTS SOCIETY (AOCS). Official and recommended practices. 5. ed. Champaign,1997.
2v. Ca 5a – 40
KRISHNAMURTY, R. G. Cooking oils, salad oils and salad dressings. In: SWERN, D. Bailey’s industrial oil
and fat products. 4 ed. New York: Wiley-Interscience, 1982. v. 2. p. 320-326
(1) MEHLENBACHER, V. C. The analysis of fats and oils. Champaign: Garrard Press, 1960. Stability, c. 4. p.
188-235
(2) BACCAN, N.; ANDRADE, J.C.; GODINHO, O. E. S.; BARONE, J. S. Química analítica quantitativa
elementar. São Paulo: Edgard Blücher, 2001. Práticas de laboratório, c. 8. p. 191-270
24
MÉTODO Nº 3
Índice de Acidez III -
Melaço de Cana
3 páginas
1. Introdução
O melaço é um subproduto da fabricação do açúcar de cana que se apresenta na forma líquida viscosa e
não cristalizável de açúcares, tais como glicose e frutose. Ele é utilizado na pecuária como elemento
energético e palatabilizante de alto valor na alimentação animal. O melaço apresenta-se naturalmente
contaminado com microrganismos, principalmente dos gêneros Saccharomyces cerevisiae, Acetobacter
ou Gluconobacter, possíveis de transformar os açúcares em álcool e conseguinte em ácido acético, por
isso a importância do controle de acidez, que se fundamenta na neutralização com solução alcalina padrão
dos ácidos extraídos por solvente.
2. Recomendações

produtos químicos.
3. Escopo
Aplicável a melaço de cana e seus semelhantes.
Não aplicável.
5. Definições
Não aplicável.
6. Reações
25
6.2. Reação de neutralização dos ácidos orgânicos com hidróxido de sódio:

7.5. Solução reagente água-álcool (1+1) neutralizada
A solução reagente água-álcool (1+1) neutralizada deve ser preparada momentos antes do uso.
Manter o frasco de solução reagente água-álcool (1+1) neutralizada bem fechado para evitar a formação
de ácido carbônico.
7.5.1. Preparo: Misturar 1 parte de água destilada com 1 parte de álcool etílico absoluto. Adicionar 4 gotas
de solução indicadora de fenolftaleína 1% e com agitação constante, gotejar a solução de NaOH 0,1 M até
coloração levemente rósea;
7.6.1. Preparo: Dissolver 1,0g de fenolftaleína p.a. em 60 mL de álcool etílico p.a. Transferir para balão
homogeneizar.
destilada quente, esfriar e adicionar 4 gotas de solução indicadora de fenolftaleína a 1% e titular com a
Onde:
MR Molaridade real
Mol Unidade molar do Biftalato de Potássio (204,2)

26
8. Equipamentos
9. Amostragem

10. Procedimento
10.1. Pesar 2 g de amostra em erlenmeyer ou béquer de 250 mL;

10.2. Adicionar 100 a 150 mL de solução água-álcool (1+1) neutralizada e agitar até completa dissolução;
11. Cálculo
Onde:

P Peso da amostra em grama
0,06 1 mL de solução de NaOH 0,1M equivale a 0,06 g de Ácido Acético
12. Bibliografia
PORTARIA nº 108, de 04 de setembro de 1991. Métodos analíticos para controle de alimentos para uso
animal. Diário Oficial da União, Seção 1, 17 set 1991. p. 19813
27
MÉTODO Nº 4
Métodos Analíticos Índice de Acidez Revisão: 2009

em Leite
3 páginas
1. Introdução
Este método consiste na determinação da acidez do leite utilizando-se indicador e solução alcalina, onde
os resultados são expressos em % de ácido lático.
2. Recomendações

produtos químicos.
3. Escopo
Aplicável em leite em pó integral, desnatado e soro de leite.
Não aplicável.
5. Definições
Não aplicável.
6. Reações
Não aplicável.

7.1.1. Preparo: Dissolver 1,0g de fenolftaleína p.a. em 60 mL de álcool etílico p.a.. Transferir para balão
homogeneizar.
28
Onde:
MR Molaridade real
7.3. Erlenmeyer de 250 mL

7.5. Proveta de 50 mL
8. Equipamentos
9. Amostragem

10. Procedimento
10.1. Pesar de 5 g de amostra em erlenmeyer de 250 mL.

10.2. Dissolver em 35 ml de água destilada, adicionar 10 gotas da solução de fenolftaleína 1%.
10.3. Titular com NaOH 0,1 M até coloração rósea persistente por 30 segundos.
11. Cálculo
Onde:
V Volume de NaOH 0,1 M gasto na titulação da amostra, em mL

90 Unidade molar do Ácido Láctico
29
12. Bibliografia
INSTRUÇÃO NORMATIVA nº 68, de 12 de dezembro de 2006. Diário Oficial da União nº 239, Seção 1, 14/
12/06, p.15
30
MÉTODO Nº 5
Determinação de Ácidos
Graxos Totais (AGT)
3 páginas
1. Introdução
Os ácidos graxos, unidades fundamentais da maioria dos lipídios, são ácidos orgânicos, possuindo de
4 átomos a 24 átomos de carbono. Eles podem ser de cadeias curtas (4 a 6 átomos de carbono), de
cadeias médias (8 a 12 átomos) e de cadeias longas (mais do que 12). Além do tamanho da cadeia de
carbono, os ácidos graxos se diferenciam pelo número e pela posição das duplas ligações. Quase todos
possuem número par de átomos de carbono. Os mais abundantes são os com 16 carbonos ou 18 carbonos,
o palmítico e esteárico, respectivamente. Os de cadeias curtas são mais abundantes na manteiga e na
gordura de coco.
2. Recomendações

produtos químicos.
3. Escopo
Aplicável a óleos e gorduras de origem vegetal e animal.
Não aplicável.
5. Definições
Não aplicável.
6. Reações
São várias as reações que ocorrem no processo e não serão descritas neste método.
7.1. Ácido clorídrico (HCl) p.a.

7.2. Álcool etílico (C2H5OH) absoluto.
7.3. Éter de petróleo p.a.
7.4. Hidróxido de potássio (KOH) p.a.
7.5. Solução reagente de ácido clorídrico 1+1
31
7.5.1. Preparo: Diluir uma parte de HCl p.a. em uma parte de água destilada.
7.6. Solução indicadora de alaranjado de metila 0,1% (p/v)
7.6.1. Preparo: Dissolver 0,1 g de alaranjado de metila p.a. em aproximadamente 60 mL de água destilada.
Transferir para balão volumétrico de 100 mL, completar o volume e homogeneizar.
7.7. Solução reagente de hidróxido de potássio 50% (p/v)
7.7.1. Preparo: Dissolver 100 g de KOH p.a em água destilada, esfriar e completar o volume para 200 mL.
7.8. Alaranjado de metila p.a.
7.9. Balão de Soxhlet 250 mL
7.10. Béquer de 250 mL
7.11. Condensador de refluxo
7.12. Funil de separação de 500 mL
7.13. Funil de vidro haste curta
7.14. Pipeta graduada de 25 mL
7.17. Vidro de relógio
8. Equipamentos

8.2. Estufa de secagem a 100°C (precisão ± 5°C)
8.3. Banho termostático 80oC – 90oC
9. Amostragem

Se usar mais de 1 g de amostra, manter a proporção de no mínimo 1,4g de KOH para cada grama de
amostra.
10. Procedimento
10.1. Pesar 1 g de amostra em béquer de 250 mL.

10.2. Adicionar 50 mL de álcool etílico p.a. e 5 mL de solução de KOH 50%.
10.3. Tampar com vidro de relógio e aquecer em banho termostático em ebulição por 30 minutos ou até
completa saponificação (pastoso), agitando freqüentemente. A completa saponificação é determinante,
devendo-se tomar cuidados para que não ocorra a queima da amostra.
10.4. Adicionar 100 mL de água destilada e aquecer em banho termostático até completa dissolução da
amostra saponificada.
10.5. Adicionar 3 a 5 gotas de solução indicadora de alaranjado de metila 0,1% e neutralizar com solução
de HCl 1+1 até permanência da coloração vermelha.
10.6. Homogeneizar agitando lentamente e acrescentar 1 mL de solução de HCl 1+1 em excesso.
10.7. Esfriar a temperatura ambiente e transferir para funil de separação, lavando o béquer com porções
de éter de petróleo para retirada de toda a amostra.
10.8. Adicionar 50 mL de éter de petróleo, agitar lentamente o funil de separação aberto para a liberação
dos gases e depois agitar vigorosamente durante 1 minuto. Deixar em repouso até a separação das
fases.
32
10.9. Recolher a camada inferior (vermelha) em béquer para nova extração e transferir a camada superior
(amarela) para um segundo funil de separação.
10.10. Repetir os itens 7 e 8 por mais quatro vezes ou até que a fase etérea esteja límpida.
10.11. Filtrar os extratos combinados da fase etérea (superior) sobre papel de filtro qualitativo, para balão
de Soxhlet previamente tarado. Lavar com éter de petróleo o funil de separação e o papel de filtro até a
completa transferência dos ácidos graxos retidos.
10.12. Recuperar o éter de petróleo em conjunto Soxhlet e evaporar o solvente remanescente em banho
termostático ou rotaevaporador.
10.13. Transferir o balão para estufa à 100°C por 1 hora.
10.14. Esfriar em dessecador até equilíbrio com a temperatura ambiente. Pesar e repetir a operação de
secagem durante 30 minutos, até peso constante.
11. Cálculos
Onde:
A Peso do balão de Soxhlet + resíduo, em grama.

B Peso do balão de Soxhlet, em grama.
C Peso da amostra, em grama.
12. Bibliografia
AMERICAN OIL CHEMISTS SOCIETY. Official methods and recommended practices of the American Oil
Chemists Society. AOCS, 1997. AOCS Official method, Ca 5b-71.
ASSOCIATION OF OFICIAL ANALYTICAL CHEMISTS. Official methods of analysis of the Association of

Analytical Chemists Arlington: A.O.A.C., 1995. method 972.28.
33
MÉTODO Nº 6
Métodos Analíticos Atividade Ureática Revisão: 2009
3 páginas
1. Introdução
Determina-se atividade ureática em sementes leguminosas. No farelo de soja a atividade ureática é utilizada
para indicar o grau de tostagem do farelo. A alta atividade de uréase indica a falta de tostagem.
A analise se baseia na variação de pH em função da amônia liberada pela ação enzimática da uréase.
2. Recomendações

produtos químicos.
3. Escopo
Aplicável a grão de soja e outros feijões e seus subprodutos.
Não aplicável.
5. Definições
Solução tampão: soluções que possuem a capacidade de resistir a variações de pH, pela adição a ela de
ácidos ou de bases. Elas são constituídas geralmente por sistemas de doadores e receptores de prótons,
dissolvidos no mesmo solvente.
6. Reações
7.1. Fosfato Monobásico de Potássio p.a. (KH2PO4)

7.2. Fosfato Di-básico de Potássio p.a. (K2HPO4)
7.3. Ácido Fosfórico p.a. (H3PO4)
34
7.5. Uréia
7.6. Solução Tampão de Fosfato pH=7 / 0,05 M
7.6.1. Preparo: Pesar exatamente 3,4022g de Fosfato Monobásico de Potássio p.a. (KH2PO4) e 4,3545g
de Fosfato Dibásico de Potássio (K2HPO4) e dissolver a 1000 mL em balão volumétrico. Ajustar o pH a 7,0,
com uma solução concentrada de ácido fosfórico ou hidróxido de potássio antes de utilizá-la.
7.7. Solução Tampão de Uréia pH 7,0
7.7.1. Preparo: dissolver 1,5 g de Uréia p.a. em 50mL de Solução Tampão de Fosfato pH 7,0. Ajustar o pH
a 7,0, com uma solução concentrada de ácido fosfórico ou hidróxido de potássio antes de utilizá-la.
Preparar esta solução momentos antes do uso.
7.8. Pincel de Pelo
7.9. Espátula
7.10. Canoa para pesar
7.11. Tubo de ensaio com tampa de rosca
7.12. Pipeta volumétrica de 10mL e 50ml
7.13. Copo de Béquer 600ml
8. Equipamentos
8.1. Balança analítica (resolução de 0,0001g)

8.2. Banho termostático
8.3. Potenciômetro
9. Amostragem

Moer a amostra, evitando aquecimento, de modo que pelo menos 60% passe em peneira de 0,420mm
(35 tyler - mesh)
10. Procedimento
Recomenda-se que o eletrodo fique imerso em solução de pepsina 1% v/v.

O pH das soluções, tempo e reações enzimáticas e a temperatura da prova devem ser observadas
rigorosamente, pois são fatores críticos na precisão da análise.
10.1. Pesar 0,2 g de amostra moída e homogênea para uma prova real e para uma prova em branco.
10.2. Transferir a amostra para um tubo de ensaio e adicionar 10 mL de Solução Tampão de Fosfato de
pH=7. Esta será a prova em branco.
10.3. Transferir a amostra para o outro tubo de ensaio e adicionar 10mL de Solução Tampão de Uréia
pH=7. Esta será a prova real.
10.4. Tampar os tubos e colocá-los em banho termostatizado durante 30 minutos, à temperatura de 30°C.
Os tubos devem ser agitados de 5 em 5 minutos sem invertê-los.
10.5. Decorrido este tempo deve-se retirar os tubos do banho termostatizado, esperar mais 5 minutos e
medir o pH no potenciômetro.
35
11. Cálculos
Atividade Ureática é igual à variação do pH
12. Bibliografia
Chemists Society. 40. ed. AOCS, 1993. Official method Ba9-58.
AMERICAN ASSOCIATION OF CEREAL CHEMISTS. Aproved Methods of Analysis of AACC. 9. ed. 1999.
Official Method 22-90
NOGUEIRA, A. R. de A. et. al. Manual de Laboratórios: Solo, Água, Nutrição Vegetal, Nutrição Animal e
Alimentos. 1. ed. São Carlos: Embrapa Pecuária Sudeste, 2005. 313 p.
36
MÉTODO Nº 7
Métodos Analíticos Determinação de Cálcio Revisão: 2009

EDTA
4 páginas
1. Introdução
Fundamenta-se no ataque químico fortemente ácido e a quente da amostra, visando extrair todo o seu
conteúdo de Cálcio.
A concentração se dá através da complexometria, utilizando o E.D.T.A. (ácido etilenodiamino tetra-ácético)
como agente complexante, na presença do indicador Calcon.
2. Recomendações

produtos químicos.
3. Escopo
Aplica-se a calcário e fontes de cálcio puro.

Este método é mais indicado para a avaliação de produtos com o teor de cálcio de ordem de grandeza
de 5% ou acima. Não indicado para amostras com altos teores de fósforo ou magnésio menor que 2%.
(AOAC).
Não aplicável
5. Definições
Não aplicável
6. Reações (representando EDTA por H2Y 2-)

7.2. Ácido nítrico (HNO3) p.a.
37
7.4. Cianeto de potássio (KCN) p.a.
7.5. Sulfato de Ferro III e Amônio (FeNH4(SO4)2.12H2O) p.a.
7.6. Trietanolamina ( N(CH2CH2OH)3 ) p.a.
7.7. Calcon (C20H13N2NaO5S) p.a.
7.8. EDTA (ácido etilenodiamino tetra-ácético)
7.9. Solução de KOH 200 g/L (20%)
7.9.1. Preparo: Transferir 100 g de KOH para béquer de 500 mL. Adicionar aproximadamente 300 mL de
água destilada. Esfriar. Transferir para balão volumétrico de 500 mL. Completar o volume com água destilada
e homogeneizar.
7.10. Solução de HCl 0,5M
7.10.1. Preparo: Transferir 42,5 mL de ácido clorídrico para balão volumétrico de 1000 mL. Completar o
volume com água destilada e homogeneizar.
7.11. Solução de Sulfato de Ferro III e Amônio 136 g/L
7.11.1. Preparo: Transferir 136 g de FeNH4(SO4)2.12H2O para béquer de 500 mL. Adicionar aproximadamente
300 mL de água destilada e 5 mL de ácido sulfúrico p.a.. Aquecer para dissolver o FeNH4(SO4)2.12H2O.
Esfriar. Transferir para balão volumétrico de 1000 mL. Filtrar em papel filtro Whatman nº 40 ou equivalente.
Armazenar esta solução em frasco âmbar.
7.12. Solução de KOH (280 g/L) + KCN (66 g/L)
7.12.1. Preparo: Transferir 70 g de KOH e 16,5 g de KCN para béquer de 500 mL. Adicionar aproximadamente
200 mL de água destilada. Esfriar. Transferir para balão volumétrico de 250 mL. Completar o volume com
água destilada e homogeneizar.
7.13. Solução de Trietanolamina 1:1 v/v (N(CH2CH2OH)3)
7.13.1. Preparo: Transferir 100 mL de trietanolamina para béquer de 300 mL. Adicionar 100 mL de água
destilada. Homogeneizar com o auxílio de uma baqueta.
7.14. Solução de Calcon 5 g/L
7.14.1. Preparo: Transferir 0,1g de Calcon para béquer de 300 mL. Adicionar 10 mL de trietanolamina.
Utilizar uma baqueta para ajudar a dissolver. Adicionar 10 mL de alcool etílico.
7.15. Solução de CaCO3 0,01 M
7.15.1. Preparo: Transferir 0,5005 g para béquer de 300 mL. Adicionar aproximadamente 150 mL de água
destilada e 10 mL de HCl p.a. Aquecer sem deixar entrar em ebulição até solubilizar todo o sal. Esfriar.
Transferir para balão volumétrico de 500 mL. Completar o volume com água destilada e homogeneizar.
7.16. Solução volumétrica padronizada de EDTA 0,01 M
7.16.1. Preparo: Transferir 3,7224 g de EDTA para béquer de 1000 mL. Adicionar aproximadamente 500 mL
de água destilada. Agitar para dissolver com o auxilio de um agitador magnético. Transferir para balão
volumétrico de 1000 mL. Completar o volume com água destilada e homogeneizar.
7.16.2. Padronização: Transferir 10 mL de solução de CaCO3 0,01 M para béquer de 250 mL. Adicionar 100
mL de água destilada, 10 mL de KOH+KCN, 10 gotas de trietanolamina e 12 gotas de calcon. Titular com
EDTA 0,01 M até mudança de cor, vinho para azul puro.
Cálculo
38
Onde
F¹ Fator de correção da solução de EDTA 0,01 M

M¹ Molaridade da solução de EDTA 0,01 M
V¹ Volume gasto de EDTA 0,01 M na titulação da solução de CaCO3 0,01 M, em mL.
F² Fator de correção da solução de CaCO3 0,01 M
M² Molaridade da solução de CaCO3 0,01 M
V² Volume gasto de CaCO3 0,01 M na titulação, em mL.
7.17. Balões volumétricos

7.19. Béquer
7.20. Cadinho de porcelana ou quartzo
7.23. Pipetas graduadas ou pipetador automático
7.24. Pipetas volumétricas para vários volumes
7.25. Provetas
8. Equipamentos

8.2. Forno mufla
8.3. Placa aquecedora
8.4. pHmetro
9. Amostragem
10. Procedimento
O fósforo atua como mascarador do indicador, impedindo a reação deste com o íon do elemento a ser
determinado. Portanto, adiciona-se sulfato de ferro amoniacal, que reage com o fósforo, formando
Fe(OH)3.PO4 . Com esta reação, o fósforo é precipitado e extraído por filtração.
Os íons Al+3, Mn+2 e Fe+3 reagem com E.D.T.A., por este motivo devem ser complexados com trietanolamina.
10.1. Para ingredientes e misturas minerais

10.1.1. De acordo com a concentração estimada do Cálcio na amostra, pesar de 2,0 a 3,0 g com aproximação
de 0,1 mg.
10.1.2. Transferir para béquer de 300 mL.
10.1.3. Adicionar 30 mL de ácido nítrico p.a., 10 mL de HCl p.a. e 10 mL de água destilada e/ou deionizada.
10.1.4. Fazer digestão por 30 minutos em placa aquecedora.
10.1.5. Esfriar.
10.1.6. Transferir para balão volumétrico de capacidade para 250 mL ou mais adequado. Completar o
volume e homogeneizar.
39
10.1.7. Filtrar em papel de filtro qualitativo.
10.1.8. Transferir alíquota de volume adequado para béquer de 300 mL.
10.1.9. Ajustar o pH em 4,0 ± 0,1 usando hidróxido de Potássio 20% ou ácido clorídrico 0,5 M.
10.1.10. Adicionar sulfato de ferro III e amônio de acordo com o teor de fósforo na amostra (5 mL para
materiais com teor menor que 3% de fósforo, 10 mL para teores de 3 a 7% de fósforo, 15 mL para teores
de 7 a 13% e quantidades proporcionais para amostras com mais de 13% de fósforo).
10.1.11. Ajustar o pH em 5,0 ± 0,1 usando hidróxido de Potássio 20% ou ácido clorídrico 0,5 M.
10.1.12. Transferir para balão volumétrico de capacidade adequada. Completar o volume e homogeneizar.
10.1.13. Filtrar em papel de filtro qualitativo.
10.1.14. Transferir uma alíquota de volume adequado para béquer de 300 mL, acrescentar água destilada
e/ou deionizada até o volume de 100 mL.
10.1.15. Adicionar 10 mL de hidróxido de potássio + cianeto de potássio, 10 gotas de solução de
trietanolamina e 12 gotas solução de calcon.
10.1.16. Titular com EDTA 0,01M até viragem de vinho para azul puro.
10.2. Para produtos e subprodutos de origem animal e vegetal, rações e concentrados:
10.2.1. Proceder conforme o item 10.1, porém, realizar a pesagem da amostra em cadinho de porcelana
ou quartzo e calcinar por quatro horas a 550°C.
11. Cálculos
Onde
V Volume da solução de EDTA 0,01M gasto na titulação da amostra, em mL
M Molaridade real do EDTA 0,01 M
mol mol do Ca (40)
V¹ Volume do primeiro balão de diluição, em mL
V² Volume do segundo balão de diluição, em mL
p Peso da amostra, em grama
A¹ Volume da pipeta utilizada na primeira alíquota, em mL
A² Volume da pipeta utilizada na segunda alíquota, em mL
12. Bibliografia
ASSOCIATIONS OF OFFICIAL ANALYTICAL CHEMISTS, Official Methods of Analyses. 14. ed. Airlington:
A.O.A.C., 1984.
INSTRUÇÃO NORMATIVA SDA nº. 28, de 27 de julho de 2007. Manual de Métodos Analíticos Oficiais para
Fertilizantes Minerais, Orgânicos, Organominerais e Corretivos. p. 40-43.
40
MÉTODO Nº 8
Métodos Analíticos Cálcio - Oxidimetria Revisão: 2009
4 páginas
1. Introdução
O cálcio é precipitado sob a forma de oxalato a pH 4,0 para impedir interferências dos íons fosfatos e o
precipitado é lavado e dissolvido em ácido sulfúrico diluído. O ácido oxálico gerado é, então, titulado
com a solução padrão de permanganato de potássio.
2. Recomendações
Vide precauções de segurança dos reagentes: ácido clorídrico, ácido sulfúrico e hidróxido de amônio.
Realizar o preparo das soluções em capela de exaustão.
3. Escopo
Método aplicável a produtos ou subprodutos de origem animal, vegetal, mineral, rações e concentrados.
Não aplicável.
5. Definições
Não aplicável.
6. Reações
7.2. Ácido sulfúrico (H2SO4) p.a.
41
7.3. Hidróxido de amônio (NH4OH) p.a.
7.4. Oxalato de amônio ((NH4)2C2O4.H2O) p.a.
7.5. Oxalato de sódio (Na2C2O4) p.a.
7.6. Permanganato de potássio (KMnO4) p.a.
7.7.1. Preparo: Diluir uma parte de HCl p.a. em uma parte de água destilada.
7.8.1. Preparo: Diluir uma parte de HCl p.a. em três partes de água destilada.
7.9. Solução reagente de ácido sulfúrico 1+1
7.9.1. Preparo: Diluir uma parte de H2SO4 p.a. em uma parte de água destilada.
7.10. Solução reagente de hidróxido de amônio 1+1
7.10.1. Preparo: Diluir uma parte de NH4OH p.a. em uma parte de água destilada.
7.11. Solução reagente de oxalato de amônio saturada
7.11.1. Preparo: Pesar 70g de oxalato de amônio p.a. e transferir para béquer de 2000ml, completar o
volume com água destilada para 1000ml, aquecer até a completa dissolução, esfriar à temperatura ambiente.
7.12. Solução reagente de hidróxido de amônio 1+50
7.12.1. Preparo: Diluir uma parte de NH4OH p.a. em 50 partes de água destilada.
7.13. Solução volumétrica padronizada de permanganato de potássio 0,01 M.
7.13.1. Preparo: Dissolver 1,6g de KMnO4 p.a. em béquer contendo aproximadamente 300/400ml de água
destilada e aquecer a 60/700C por duas horas. Esfriar, transferir quantitativamente para balão volumétrico
de 1000ml, completar o volume e homogeneizar. Deixar em repouso por no mínimo 12 horas ao abrigo
da luz. Filtrar sobre o cadinho de vidro sinterizado, amianto ou lã de vidro e estocar em frasco âmbar.
7.13.2. Padronização: Pesar exatamente 3,35g de oxalato de sódio (Na2C2O4) p.a. previamente seco em
estufa a 105°C por 2 horas. Dissolver em béquer com aproximadamente 100ml de água destilada, transferir
para balão volumétrico de 1000ml, homogeneizar e completar o volume. Pipetar 20ml de solução de
oxalato de sódio, transferir para erlenmeyer de 250ml, adicionar 10ml de ácido sulfúrico 1+1, aquecer a
70-80°C e titular nessa temperatura gotejando a solução de permanganato de potássio 0,01M, numa
velocidade de 2 a 3 gotas por segundo até coloração levemente rósea persistente por 30 segundos.
Onde:
V Volume de KMnO4, em mL
P Peso do oxalato de sódio na alíquota, em mg
M Mol do oxalato de sódio (grama/mol)
MR Molaridade real (mol/L)
7.14. Solução alcoólica indicadora de vermelho de metila 0,1%

7.14.1. Preparo: Dissolver 0,1g de vermelho de metila p.a., em aproximadamente 40ml de água destilada.
Transferir para balão volumétrico de 100ml, completar o volume com etanol e homogeneizar.
7.15. Vermelho de metila p.a.
42
7.19. Béquer de 250ml ou 300ml
7.20. Bureta âmbar de 50ml (div. 0,05ml)
7.22. Cadinho de vidro borossilicato com placa porosa (10 a 16 micra) ou cadinho de Gooch (capacidade
40ml-50ml) com fibras de silicato de alumínio ou fibras de óxido de alumínio
7.24. Pipetas graduadas (ou pipetador automático)
7.25. Pipetas volumétricas
7.26. Proveta de 50ml
8. Equipamentos

8.2. Forno Mufla
8.3. Placa Aquecedora
8.4. Estufa
9. Amostragem

Não calcinar amostras inorgânicas, alterações na estrutura molecular elevam o resultado esperado.
10. Procedimento
A presença de sulfatos eleva o resultado em uma única precipitação.

Metais que formem oxalatos pouco solúveis (Cu, Pb e Zn) devem estar ausentes.
Na presença de grandes quantidades de sódio e magnésio é aconselhável fazer-se uma segunda
precipitação.
A pós-precipitação do oxalato de magnésio pode introduzir erros apreciáveis, quanto mais tempo ficar o
precipitado em contato com a solução.
A solução de permanganato de potássio deve ser armazenada ao abrigo da luz.
As soluções de oxalato atacam o vidro.
O manganês é reduzido pelo oxalato em meio ácido, de +7 para +2, tornando a solução de permanganato
incolor. A primeira gota que não for reduzida dará a mesma uma tonalidade rosa.
10.1. Pesar de 1 a 3g da amostra em cadinho. Levar à mufla e gradualmente aumentar a temperatura (550-
600°C) até obtenção de cinzas claras (3 horas no mínimo). Retirar a 250-300°C e esfriar em dessecador.
Opcionalmente poderá ser efetuada pré-queima em placa aquecedora ou bico de Bunsen, transferindo
em seguida para o forno mufla (500-600°C).
10.2. Com o auxílio de bastão de vidro, transferir as cinzas obtidas para béquer de 250 ou 300ml. Lavar o
cadinho com pequenas porções de solução de HCl 1+1 totalizando 40ml, em seguida lavar com água
destilada, cobrir com vidro de relógio e levar à placa aquecedora até que haja redução de 1/3 do volume.
Esfriar.
10.3. Transferir para balão volumétrico adequado. Completar o volume com água destilada e homogeneizar.
Esse material constituirá a “Solução Estoque”, será utilizado para a determinação de cálcio por oxidimetria
e de fósforo por colorimetria.
43
10.4. Filtrar e pipetar volumetricamente uma alíquota adequada, para béquer de 250 ou 300ml. Adicionar 2
a 3 gotas de vermelho de metila 0,1% e diluir com água destilada até aproximadamente 50ml.
10.5. Aquecer brandamente em placa aquecedora até próximo à fervura. Acrescentar sob agitação constante
25ml de solução saturada de oxalato de amônio quente. Adicionar NH4OH 1+1, gota a gota sob agitação
constante, até que a coloração mude de vermelho para rosa. Se houver mudança da coloração para
amarelo, gotejar HCl 1+3 até retorno para rosa. Deixar em repouso no mínimo 1 hora e no máximo 3 horas.
10.6. Filtrar sob vácuo em cadinho de vidro borossilicato com placa porosa. Lavar o béquer e o precipitado
3 vezes com NH4OH 1+50 ou até que algumas gotas do filtrado não reajam com solução de nitrato de prata
acidulado com ácido nítrico.
10.7. Transferir o cadinho de vidro borossilicato com o precipitado para o béquer original. Adicionar água
destilada até cobrir o cadinho e 10ml de solução de ácido sulfúrico 1+1. Opcionalmente, poderá ser
realizada a dissolução do precipitado contido no cadinho com sucessivas lavagens de ácido sulfúrico
1+1 a quente, até 150 ml.
10.8. Aquecer até completa dissolução do precipitado (próximo à ebulição) e titular com permanganato de
potássio 0,01M sob constante agitação até coloração rósea clara, persistente por 30 segundos. Cuidar
para que durante a titulação a temperatura fique abaixo de 60°C.
11. Cálculos
Onde:
V Volume de KMnO4 0,01M, em mL

M Molaridade real da solução KMnO4 0,01M
S Volume da solução estoque, em mL
A Volume da alíquota utilizado, em mL
0,02004 1 mL de permanganato de potássio 0,01M equivale a 0,02004 g de cálcio.
12. Bibliografia
análise de alimentos. 3. ed. São Paulo, 1985. Determinações Gerais, c.4. p.37
ASSOCIATION OF OFFICIAL ANALYTICAL CHEMISTS; HELRICH, Kenneth; AOAC INTERNATIONAL. Official

methods of analysis. 14. ed. Ed. Arlington, 1984
AMERICAN SOCIETY FOR TESTING AND MATERIALS. Philadelphia. ASTM. 1990 annual book of ASTM
standards,1990.
VOGEL, Arthur Israel. Análise química quantitativa. Rio de Janeiro: LTC, 1992.
INSTRUÇÃO NORMATIVA nº 28, de 27 de julho de 2007, Método 4.3.
44
MÉTODO Nº 9
Métodos Analíticos Carotenos e Revisão: 2009

Xantofilas
3 páginas
1. Introdução
O método apresentado baseia-se na extração com solventes orgânicos, saponificação e separação dos
carotenóides por cromatografia em coluna e lidos por espectros na região UV/VIS.
2. Recomendações

produtos químicos.
3. Escopo
Aplicável a forrageiras, milho e subprodutos, alfafa e produtos que contenham alguns desses ingredientes
combinados.
Não aplicável.
5. Definições
Xantofila é o nome genérico dos agentes pigmentantes da família dos carotenóides, naturalmente
encontrados em alguns vegetais como milho, alfafa, etc.
Os agentes pigmentantes são utilizados em rações para conferir uma pigmentação adequada à pele de
frangos de corte e à gema de ovos comerciais.
Os pigmentos carotenóides são facilmente destruídos pelo calor, luz, umidade e oxidação causada pelo
oxigênio do ar, daí a necessidade de manter esses produtos protegidos através do uso de embalagens.
O caroteno é a maior fração obtida de beta caroteno e a xantofila corresponde a todos os hidrocarotenóides.
6. Reações
7.1. Hexano p.a.

7.2. Acetona p.a.
45
7.4. Metanol p.a.
7.5. Sulfato de sódio anidro p.a.
7.6. Óxido de alumínio (ref: 1097 Merck)
7.7. Hidróxido de potássio p.a.
7.8. Solução de hexano : acetona (7:3)
7.8.1. Preparo: Misturar 70 mL de hexano e 30 mL de acetona.
7.9. Solução metanólica de KOH 40%
7.9.1. Preparo: Misturar 40 g de hidróxido de potássio em 100 mL de metanol.
7.10. Óxido de alumínio
7.10.1. Preparo: Calcinar por 8 horas a 750°C, resfriar em dessecador e guardar em vidro fechado. Para
cada 91 g de óxido de alumínio misturar 9 mL de água destilada, agitar manualmente com todo vigor e
conservar em frasco de vidro por 12 horas.
7.11. Coluna de vidro
7.11.1. Preparo: Colocar pequena porção de lã de vidro, 25 gramas de óxido de alumínio, 2 gramas de
sulfato de sódio anidro. (preparar a coluna com vácuo não permitir formação de bolhas de ar).
7.12. Lã de vidro
7.13. Balão volumétrico de 100 mL (âmbar)Bastão de vidro
7.14. Coluna de vidro com torneira
7.15. Pipeta volumétrica de 2mL
8. Equipamentos

8.2. Agitador magnético
8.3. Espectrofotômetro UV/VIS
8.4. Evaporador rotativo ou banho-maria
9. Amostragem

A amostra deve estar moída finamente.
10. Procedimento
10.1. Extração
10.1.1. Pesar amostra previamente moída (finamente): 2 gramas para alimentos, 2 gramas para milho, 1
grama para glúten 60.
10.1.2. Transferir para balão volumétrico de 100 mL. Adicionar 30 mL da mistura de hexano-acetona (7:3).
10.1.3. Agitar por 2 minutos em agitador magnético em velocidade máxima. Repousar por 16 horas ao
abrigo da luz.
10.1.4. Adicionar 2 mL de KOH 40%. Agitar vigorosamente por 2 minutos. Repousar por 30 minutos.
10.1.5. Adicionar 2 mL de água e agitar vigorosamente por 2 minutos. Completar o volume com hexano
p.a. Guardar ao abrigo da luz por uma hora.
10.1.6. Pipetar 25 mL do sobrenadante e transferir para balão de fundo redondo e evaporar em evaporador
rotativo ou banho-maria.
10.2. Cromatografia
10.2.1. Passar 30 mL de éter de petróleo pela coluna, controlar a vazão (2 a 3 gotas) por segundo.
46
10.2.2. Transferir o resíduo dissolvido em éter de petróleo para o topo da coluna, eluir os carotenos com
100 mL de éter de petróleo.
10.2.3. Recolher o eluido em balão volumétrico de 100 mL (não deixar a coluna secar). Da mesma forma,
eluir as xantofilas com álcool etílico a 96%, recuperando 100 mL em balão volumétrico.
Nota: A absorbância da solução é medida em espectrofotômetro a 450nm, adotando o éter de petróleo
como branco para o caroteno e álcool etílico 96% para as xantofilas.
11. Cálculos
Onde
m Massa da amostra, em grama

1d Primeira diluição
al Alíquota
2d Segunda diluição
ABSA Absorbância da amostra
250 e 260 Densidade óptica
12. Bibliografia
Método France-Luzerne – proposto pol Melle Valdeouze para C.E.E. - Método original fornecido pela:
Anfar
47
MÉTODO Nº 10
Determinação de
Cloretos Solúveis
4 páginas
1. Introdução
A análise de cloretos é realizada pelo Método de Mohr, cujo princípio fundamenta-se na precipitação dos
cloretos sob a forma de cloreto de prata, em pH 8,3, em presença de cromato de potássio como indicador.
O final desta reação é dado pela formação do precipitado vermelho tijolo de cromato de potássio.
2. Recomendações

produtos químicos.
Realizar o preparo das soluções em capela de exaustão.
3. Escopo
Aplicável a produtos ou subprodutos de origem animal, vegetal, mineral, rações e concentrados. O método
é aplicável somente para cloretos solúveis em água.
Não aplicável.
5. Definições
Não aplicável.
6. Reações

7.2. Nitrato de prata (AgNO3) p.a.
7.3. Carbonato de cálcio (CaCO3) p.a
7.4. Cloreto de sódio (NaCl) p.a.
48
7.5. Cromato de potássio (K2CrO4) p.a.
7.6. Solução reagente de ácido nítrico 20 mL/L
7.6.1. Preparo: Medir 20 mL de HNO3 p.a. e transferir para balão volumétrico de 1000 mL, contendo
aproximadamente 500 mL de água destilada. Esfriar e completar o volume.
7.7. Solução reagente de cromato de potássio 5 g/L
7.7.1. Preparo: Pesar exatamente 50g de K2CrO4 p.a. em béquer e adicionar aproximadamente 500 mL de
água destilada. Dissolver e transferir quantitativamente para balão volumétrico de 1000 mL, completando o
volume com água destilada. Armazenar em frasco âmbar ao abrigo da luz, no máximo por 30 dias.
7.8. Solução volumétrica padronizada de nitrato de prata 0,05 M
7.8.1. Preparo: Pesar exatamente 4,2469 g de AgNO3 e transferir para balão volumétrico de 500 mL âmbar
ou envolto com folha de alumínio. Dissolver com água destilada, completar o volume e homogeneizar.
7.8.2. Padronização: Pesar exatamente 0,700 g de NaCl p.a., previamente seco em forno mufla a 300°C
por 1 hora. Transferir para erlenmeyer de 125 mL e dissolver com aproximadamente 30 mL - 40 mL de
água destilada. Acrescentar 1 mL de solução de K2CrO4 5 g/L e titular com AgNO3 0,05 M até viragem para
coloração vermelho tijolo clara.
Onde:
MR Molaridade real da solução de AgNO3

P Peso do NaCl em grama
V Volume da solução de AgNO3 gasto na titulação, em mL
0,0585 Massa molar do NaCl
7.9. Balões volumétricos (500 mL e 1000 mL)

7.11. Erlenmeyer de 125 mL e 500 mL
7.12. Papel Tornassol
7.13. Béquer de 250 mL e 1000 mL
7.14. Bureta de 50ml (div. 0,05ml)
7.17. Pipetas graduadas (ou pipetador automático)
7.19. Proveta de 50ml
8. Equipamentos

8.2. Forno Mufla
49
8.4. Estufa
9. Amostragem
Para a retirada de amostras na Produção, vide capítulo Amostragem

Para amostras com altos teores de cloretos (sais e misturas minerais), proceder diluições adequadas.
Não calcinar amostras inorgânicas, alterações na estrutura molecular elevam o resultado esperado.
10. Procedimento
10.1 Pesar 5 g da amostra em cadinho ou cápsula de porcelana e levar ao forno mufla a 550°C por quatro
horas. Retirar e esfriar até equilíbrio com a temperatura ambiente;
10.2 Adicionar aproximadamente 5 mL da solução de HNO3 20 mL/L e levar para placa aquecedora até
atingir ebulição;
10.3 Filtrar a quente sobre papel de filtro qualitativo recebendo o filtrado em erlenmeyer de 500 mL.
Fazer lavagens com porções de água destilada quente até um volume aproximado de 300 mL;
10.4 Neutralizar com CaCO3 p.a. utilizando tira de papel tornassol como indicador, depositada no fundo
do frasco. Adicionar excesso de 0,5 g de CaCO3 p.a.;
10.5 Aquecer em placa aquecedora até ebulição por aproximadamente 10 minutos ou até desprendimento
completo do CO2 formado. Esfriar;
10.6 Adicionar 1 mL da solução de K2CrO4 5% e titular com solução de AgNO3 0,05 M até viragem para
coloração vermelho tijolo clara;
10.7 Proceder paralelamente prova em branco dos reagentes utilizados.
11. Cálculos
O cálculo do NaCl % considera que todo cloreto seja proveniente de NaCl.
Onde:
Va Volume da solução de AgNO3 0,05 M gasto na titulação, em mL
Vb Volume da solução de AgNO3 0,05 M gasto na prova em branco, em mL
0,0355 1 mL de AgNO3 0,05M equivale a 0,0355 g de cloreto
0,0585 1 mL de AgNO3 0,05M equivale a 0,0585 g de cloreto de sódio
P Peso original da amostra, em grama
50
12. Bibliografia
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Normas Analíticas do Instituto Adolfo Lutz. Métodos químicos e físicos para
análise de alimentos, V.1. 3. ed. São Paulo: PROL, 1985. p. 36-37
51
MÉTODO Nº 11
Cobalto (VIA ÚMIDA) -
Métodos Analíticos Complexometria de Revisão: 2009
EDTA 3 páginas
1. Introdução
A determinação de Cobalto é realizada por complexometria de EDTA, usando-se murexida como indicador,
em meio alcalino.
2. Recomendações
Seguir as precauções de segurança descritas para os reagentes: ácido clorídrico, hidróxido de sódio,
trietanolamina, hidróxido de amônio.
3. Escopo
Aplicável na determinação do teor de Cobalto em Sulfato de Cobalto.
Não aplicável.
5. Definições
Sulfato de Cobalto é o sal proveniente da reação do Cobalto e do Ácido Sulfúrico. Poderá ser usado na
forma monohidratada (CoSO4 . H2O) ou Heptahidratada (CoSO4 . 7H2O). O Sulfato de Cobalto monohidratado
apresenta coloração rosa choque e o heptahidratado apresenta coloração mais avermelhada.
6. Reações
7.1. Acetato de amônio (CH3COONH4) p.a.

7.2. Ácido clorídrico (HCl) p.a
7.3. Calcon p.a.
7.4. Carbonato de cálcio (CaCO3) p.a.
7.5. EDTA (C10H14N2Na2O8.2H2O) p.a.
7.7. Hidróxido de sódio (NaOH) p.a.
52
7.8. Trietanolamina p.a.
7.9. Solução reagente de hidróxido de sódio 4 M
7.10. Solução reagente de ácido clorídrico 10%
7.11. Solução reagente de trietanolamina 20%
7.12. Solução volumétrica padronizada de EDTA 0,1 M
7.12.1. Preparo: Pesar com exatidão 37,22 g de EDTA, dissolver e transferir quantitativamente para balão
volumétrico de 1000 mL. Completar o volume com água destilada e homogeneizar. Armazenar esta solução
em frasco de polietileno.
7.12.2. Padronização: Pesar exatamente 2,5275 g de carbonato de cálcio p.a., previamente seco em
estufa a 105°C por duas horas. Transferir para erlenmeyer de 250 mL. Adicionar 30 mL de solução de
ácido clorídrico 10%. Transferir quantitativamente para balão volumétrico de 250 mL com água destilada,
completar o volume e homogeneizar. Pipetar volumetricamente uma alíquota de 25 mL para erlenmeyer
de 300 mL e adicionar 5 mL da solução de trietanolamina 20% e 3 mL da solução de hidróxido de sódio
4 M. Adicionar uma pitada de calcon e titular com solução de EDTA 0,1 M
Calculo da molaridade real:
Onde:
P Peso do CaCO3 em mg
V Volume de EDTA gasto na titulação, em mL
mol Unidade molar do CaCO3
MR Molaridade real da solução de EDTA 0,1M
7.13. Indicador Murexida p.a.

7.15. Balão Volumétrico 500 mL
7.16. Béquer 400 mL
7.17. Bureta (divisão de 0,05mL)
7.18. Pipeta volumétrica 25 mL
7.19. Erlenmeyer 500mL
8. Equipamentos
9. Amostragem

Moer e homogeneizar em almofariz, se necessário.
Não secar a amostra, para evitar perda de água de hidratação.
53
10. Procedimento
10.1. Pesar, com aproximação de 0,1 mg, aproximadamente 5g da amostra previamente moída e
homogeneizada em um béquer de 400 mL.
10.2. Dissolver em água destilada com leve aquecimento.
10.3. Esfriar e filtrar, se necessário, sobre papel de filtro qualitativo, recolhendo em balão volumétrico de
500 mL. Completar o volume com água destilada e homogeneizar.
10.4. Transferir, com auxílio de pipeta volumétrica, uma alíquota de 25 mL para erlenmeyer de 500 mL.
10.5. Adicionar 5 g de acetato de amônio p.a. e ajustar o pH, com hidróxido de amônio p.a, para um valor
próximo de 12.
10.6. Adicionar uma pitada de murexida e titular com solução de EDTA 0,1 M, com auxílio de bureta, até
viragem de amarelo para lilás, passando pela coloração vinho intermediária.
11. Cálculos
Onde:
Co% Porcentagem de Cobalto da amostra

V Volume da solução de EDTA 0,1M gasto na titulação, em mL
M Molaridade real da solução de EDTA 0,1M
ma Massa da amostra na alíquota, em grama
0,05893 1 mL de EDTA 0,1M equivale a 0,05893 g de cobalto
12. Bibliografia
ACS COMMITTEE ON ANALYTICAL REAGENTS. American Chemical Society Specifications. Reagent

chemicals. 10. ed. 2006. p. 265
FOOD CHEMICAL CODEX . 2.ed. 1972
54
MÉTODO Nº 12
Determinação de Cobre
– VIA ÚMIDA
3 páginas
1. Introdução
A determinação de Cobre por volumetria é utilizada como alternativa à metodologia por Espectrofotometria
de Absorção Atômica
Os sais cúpricos, quando tratados com iodeto de potássio liberam iodo. O iodo cuproso formado é
insolúvel em ácido acético e solúvel em excesso de iodeto de potássio. O iodo liberado pela ação do
acetato cúprico sobre o iodeto de potássio é determinado por titulação com tiossulfato de sódio.
2. Recomendações

produtos químicos.
3. Escopo
Método aplicável em Sulfato de Cobre
Não aplicável.
5. Definições
Não aplicável.
6. Reações
7.1. Ácido Acético Glacial (CH3COOH) p.a.
55
7.2. Ácido Nítrico (HNO3) p.a.
7.3. Ácido Clorídrico (HCl) p.a.
7.4. Amido solúvel (C6H10O5) p.a.
7.5. Dicromato de Potássio (K2Cr2O7) p.a.
7.6. Hidróxido de Amônio (NH4OH) p.a.
7.7. Iodeto de Potássio (KI) p.a.
7.8. Tiossulfato de sódio (Na2S2O3.5H2O) p.a.
7.9. Carbonato de Sódio Anidro (Na2CO3) p.a.
7.10. Solução de Ácido Nítrico 1+3
7.10.1.Preparo: Adicionar lentamente 25 mL de Ácido Nítrico p.a. em 75 mL de água destilada.
7.11. Solução de Hidróxido de Amônio 1+1
7.11.1. Preparo: Adicionar lentamente 50 mL de Hidróxido de Amônio p.a. em 50 mL de água destilada.
7.12. Solução de Amido 10 g/L
7.12.1. Preparo: Pesar 1,0 g de amido solúvel, acrescentar pequena quantidade de água, formando uma
pasta. Dissolver esta pasta em aproximadamente 80 mL de água destilada em ebulição. Deixar em fervura
por 1 minuto. Resfriar e avolumar a 100 mL. Só se deve usar soluções de amido recentemente preparadas.
Quando apresentar alguma turbidez, desprezar a solução.
7.13. Solução de Ácido Clorídrico 1M
7.13.1. Preparo: Medir 85 mL de Ácido Clorídrico p.a. em proveta de 100 mL e transferir para balão
volumétrico de 1000 mL, contendo aproximadamente 500 mL de água destilada. Esfriar, completar o volume
com água destilada e homogeneizar.
7.14. Solução Volumétrica Padronizada de Tiossulfato de Sódio 0,1M
7.14.1. Preparo: Pesar 24,82 g de Tiossulfato de Sódio p.a. para balão volumétrico de 1000 mL. Dissolver
com água destilada fervida e adicionar 0,2 g de Carbonato de Sódio Anidro. Transferir quantitativamente
para balão volumétrico de 1000 mL, completar o volume com água destilada, fervida e fria. Homogeneizar
e deixar em repouso por 24 horas antes da padronização. Estocar em frasco âmbar.
7.14.2. Padronização: Pesar 0,2 g de Dicromato de Potássio p.a. previamente seco em estufa por 2 horas
a 105°C. Transferir para erlenmeyer de 250 mL com tampa esmerilhada. Acrescentar 70 mL de água
destilada, fervida e fria. Adicionar 2 g de Potássio Iodeto p.a. e solubilizar. Adicionar 20 mL de Ácido
Clorídrico 1M. Tampar o erlenmeyer e estocar imediatamente ao abrigo da luz por 10 minutos. Titular
gotejando a solução de Tiossulfato de Sódio 0,1M até quase desaparecimento da coloração amarela.
Acrescentar 1 mL da solução indicadora de amido 10g/l e continuar a titulação até o desaparecimento da
coloração azul.
Cálculo
Onde
MR Molaridade real da solução de tiossulfato de sódio

P Peso do dicromato de potássio, em mg
V Volume de tiossulfato de sódio 0,1M gasto na titulação, em mL
m Massa do dicromato de potássio p.a., em mg
1 mL de tiossulfato de sódio 0,1 M, equivale a 0,04904 g do dicromato de potássio p.a.
56
7.15. Bureta
7.16. Erlenmeyer.
7.17. Provetas graduadas
7.18. Balão volumétrico
8. Equipamentos

8.2. Agitador magnético e barras magnéticas
8.3. Chapa aquecedora
8.4. Estufa
9. Amostragem
10. Procedimento
10.1. Pesar 0,2 g de amostra, previamente moída e homogeneizada. Transferir para erlenmeyer.
10.2. Adicionar 12,5 mL de solução de Ácido Nítrico 1+3 e dissolver.
10.3. Adicionar 12,5 mL de água destilada e adicionar solução de Hidróxido de Amônio 1+1 gota a gota até
coloração azul escuro, formando um precipitado de Cu(OH)2.
10.4. Ferver em chapa aquecedora durante 3 minutos.
10.5. Acrescentar 4 mL de Ácido Acético Glacial p.a. para dissolver o precipitado. Esfriar.
10.6. Adicionar 1,0 g de Iodeto de Potássio p.a. e titular com solução de Tiossulfato de Sódio 0,1M até
mudança da coloração marrom para amarelo. Titular rapidamente para que não ocorra perda por oxidação.
10.7. Adicionar 1 mL de solução de Amido 10g/L e prosseguir a titulação cuidadosamente até que a
coloração azul desapareça.
11. Cálculos
Onde

F Fator de correção
M Molaridade real da solução de tiossulfato de sódio 0,1M
MA Massa da amostra, em grama
1 mL de tiossulfato de sódio 0,1 M, equivale a 0,06355 g de Cobre.
12. Bibliografia
ASSUMPÇÃO, Rosely M. Viegas; MORITA, Tokio. Manual de Soluções Reagentes e Solventes – padronização,
preparação, purificação. 2. ed. 1972
57
MÉTODO Nº 13
Enxofre Total por
Métodos Analíticos Oxidação e Revisão: 2009
Turbidimetria 4 páginas
1. Introdução
O enxofre elementar é insolúvel na maioria das soluções. O elemento reage com hidróxido de potássio
formando tiossulfatos e sulfetos. Pela ação do peróxido de hidrogênio, estes compostos são oxidados a
sulfatos que posteriormente são precipitados pela reação com cloreto de bário. O precipitado poderá ser
quantificado gravimetricamente após secagem a 250°C. A precipitação realizada em condições adequadas
de tamponamento gera uma turbidez que poderá ser quantificada em colorímetro a 450 nm de comprimento
de onda.
2. Recomendações

produtos químicos.
3. Escopo
Aplica-se a misturas contendo fonte de enxofre elementar.
Não aplicável
5. Definições
Enxofre elementar: enxofre na forma “S” normalmente originário do produto mineral amarelo (bright ou
dark) ou borra de enxofre. Ainda não está oxidado e é insolúvel.
Sulfato: condição de formação de alguns sais (Xx SO4), que são utilizados como matérias primas. Os
sulfatos (SO4-2), em sua grande maioria são solúveis em água.
As principais exceções são: CaSO4, SrSO4, BaSO4 e PbSO4.
6. Reações
58
7.1. Cloreto de bário (BaCl2 . 2H 2O) p.a.

7.3. Sulfato de potássio (K2SO4) p.a.
7.4. Álcool etílico (C2H5OH) p.a.
7.5. Solução alcoólica de Hidróxido de potássio (KOH) 100 g/L
7.5.1. Preparo: Pesar 100 g do KOH e solubilizar com 1000 mL de Álcool etílico. Deixar de repouso de um
dia para outro e filtrar em papel de filtro.
7.6. Solução de Peróxido de hidrogênio (H2O2) a 130 volumes ou 400 mL/L
7.6.1. Preparo: Aconselhável a aquisição da solução pronta.
7.7. Solução de Ácido clorídrico 1:1 v/v
7.7.10. Preparo: Diluir 1 parte de HCl p.a. em 1 parte de água destilada.
7.8. Solução tampão de Cloreto de sódio e Ácido clorídrico
7.8.1. Preparo: Em recipiente de 2 litros, adicionar 900 mL de água destilada. Adicionar lentamente e sob
agitação 240g de cloreto de sódio p.a. Adicionar 20 mL de Ácido clorídrico p.a. e homogeneizar.
7.9. Solução padrão de Sulfato - 500 mg/L
7.9.1. Preparo: Pesar exatamente 0,4534 g de sulfato de potássio p.a. previamente seco em estufa por 2
horas de 105 a 110°C. Transferir o sal quantitativamente para balão volumétrico de 500 mL. Completar o
volume com água destilada e homogeneizar. Guardar em frasco de polietileno identificado. 1 mL desta
solução contém 500 ppm de sulfato.
7.10. Papel filtro qualitativo e faixa branca.
8. Equipamentos

8.3. Estufa
8.4. Dessecador com sílica-gel
8.5. Espectrofotômetro Visível (450 nm)
8.6. Cronômetro
8.7. Agitador magnético e barras magnéticas de tamanhos aproximados
9. Amostragem
10. Procedimento
De acordo com os teores esperados serão feitas as adequações nas massas e diluições.
Produto originalmente na forma de Sulfato, dispensam os itens 10.2.2 e 10.2.3 do Procedimento.
10.1. Preparação da curva de calibração de Sulfato

10.1.1. Transferir para béqueres de 250 mL, com auxílio de bureta volumétrica, os volumes respectivos da
Solução padrão de sulfato (500 ppm) : 6,0, 5,0, 4,0, 3,0, 2,0, e 1,0 mL e completar o volume até 100 mL
com água destilada (94, 95, ... etc). As soluções assim preparadas apresentam em ppm de sulfato
respectivamente: 3000, 2500, 2000, 1500, 1000, e 500.
59
10.1.2. Adicionar a cada béquer, 20 mL de solução de cloreto de sódio e ácido clorídrico e um bastão
magnético.
10.1.3. Adicionar 1,0 g de cloreto de bário p.a. e agitar exatamente 1 minuto. Deixar em repouso por 4
minutos. Durante o repouso acertar o equipamento em 450 nm de comprimento de onda e ajustar a leitura
em 0,000 de absorbância com água destilada. Ler a absorbância dos padrões.
OBS.: podem ser realizadas as agitações e leituras de forma seqüencial, respeitando-se sempre o tempo
de 1 minuto de agitação e 4 minutos de repouso.
10.1.4. Introduzir seqüencialmente as soluções padrões, após agitação de 1 minuto e repouso de 4
minutos, anotando os valores de absorbância obtidos.
10.1.5. Com os valores de absorbância (x) versus ppm de sulfato dos padrões, calcular a equação da reta
por regressão linear (y = ax + b), obtendo as constantes “a” e “b”.
10.2. Análise da amostra
Fazer em paralelo um branco com os reagentes.
10.2.1. Pesar 1,0g de amostra em copo de 400mL, forma alta.
10.2.2. Adicionar 50 mL da solução alcoólica de hidróxido de potássio e levar para aquecimento, deixando
sob fervura até reduzir a 1/3 do volume.
10.2.3. Esfriar e acrescentar lentamente 40mL (de 10 em 10 mL) da solução de peróxido de hidrogênio.
Cuidar da formação de espuma e se for excessiva, adicionar gotas de álcool.
10.2.4.Lavar as paredes com água e deixar sob aquecimento em Banho Maria a 80°C por 01 hora.
10.2.5. Adicionar 10 mL de ácido clorídrico concentrado e água até aproximadamente 100 mL. Ferver por
10 minutos, retirar do aquecimento e resfriar.
10.2.6. Transferir para balão volumétrico de 250 mL, completar o volume com água destilada e homogeneizar.
10.2.7. Pipetar alíquota que contenha de 5 a 30 ppm de SO4 e transferir para copo de 250 mL. Pipetar
volume similar do branco.
10.2.8. Adicionar volume de água destilada para completar 100 mL e 20 mL da solução tampão de cloreto
de sódio e ácido clorídrico.
10.2.9. Sob agitação, iniciando pelo branco, adicionar 1,0 g de Cloreto de bário e agitar exatamente 1
minuto. Deixar em repouso por 4 minutos. Durante o repouso acertar o equipamento em 450 nm de
comprimento de onda. Após exatamente 4 minutos de repouso, ajustar a leitura em 0,000 de absorbância
com o branco e ler a absorbância da amostra, aguardando os 4 minutos de repouso.
OBS. - Podem ser realizadas as agitações e leituras de forma seqüencial, respeitando-se sempre o
tempo de 1 minuto de agitação e 4 minutos de repouso.
11. Cálculos
Onde
LA Leitura da amostra em absorbância (x na equação da reta)

aeb Constantes da equação da reta
100 Valor da simplificação realizado na execução da regressão
PA Peso da amostra, em grama
60
12. Bibliografia
FARMACOPÉIA BRASILEIRA: oficializada pelo governo federal, decreto número 78840 de 25/11/76. São
Paulo: Andrei, 1977. 3. ed. rev e compl. p. 417
MELLOR, J.W.; PARKERS, G.D. Modern Inorganic Chemistry. Long Mans, Green and C.O.
61
MÉTODO Nº 14
Determinação de
Métodos Analíticos Extrato Etéreo – Método Revisão: 2009
SOXHLET 3 páginas
1. Introdução
Este método determina o total de substâncias solúveis em solventes orgânicos, sendo essas substâncias
os acilgliceróis, os ácidos graxos livres, o colesterol, a lecitina, a clorofila, os álcoois voláteis, os óleos
voláteis e as resinas.
2. Recomendações

produtos químicos.
3. Escopo
Aplicável a produtos e subprodutos de origem animal ou vegetal, rações e concentrados, desde que não
submetidos a processo de extrusão. Não aplicável para produtos lácteos e glúten de milho.
Não aplicável.
5. Definições
Não aplicável.
6. Reações
Não aplicável.
7.1. Éter de petróleo p.a ou hexano p.a.

7.2. Balão de fundo chato ou copo tipo reboiler
7.3. Dessecador com sílica gel ou cloreto de cálcio anidros
7.4. Papel de filtro qualitativo previamente desengordurado ou cartucho extrator de cerâmica ou celulose
8. Equipamentos
8.1. Aparelho extrator tipo Soxhlet ou Goldfisch
62
8.3. Estufa de secagem à 105°C (precisão ± 5°C)
9. Amostragem

Para amostras acima de 18% de umidade é necessário proceder à secagem prévia do cartucho contendo
amostra por no mínimo 1 hora à temperatura de 105°C.
10. Procedimento
10.1. Pesar com precisão 2g de amostra, em seguida transferir para cartucho extrator ou cartucho preparado
com papel de filtro.
10.2. Secar o balão ou copo em estufa a 105°C, por uma hora, esfriar em dessecador até a temperatura
ambiente e pesar.
10.3. Introduzir o cartucho no extrator.
10.3.1. Para o equipamento Soxhlet onde o cartucho fique imerso, adicionar quantidade de solvente
suficiente para manter o cartucho imerso durante a análise.
10.3.2. Para o equipamento Soxhlet convencional, adicionar quantidade suficiente para obter um refluxo
e mais 50% do volume de solvente, aproximadamente.
10.4. Proceder à extração.
10.4.1. No equipamento com imersão, extrair 1 hora e meia com o cartucho submerso e o solvente em
ebulição, após este período suspender o cartucho e deixar em refluxo com o solvente por 1 hora à
velocidade de 2 a 4 gotas por segundo.
10.4.2. Para o equipamento convencional extrair por um período mínimo de 3 horas com o solvente em
ebulição e a velocidade de condensação de 2 a 4 gotas por segundo.
10.5. Recuperar o solvente.
10.6. Secar o balão ou copo em estufa a 105°C por 1 hora e meia a 2 horas. A estufa de secagem pode ser
com circulação de ar forçado.
10.7. Esfriar em dessecador até temperatura ambiente e pesar.
10.8. Repetir a operação de secagem até que a diferença entre duas pesagens sucessivas não seja
superior a 0,1% do peso da amostra.
10.9. Conduzir sempre uma prova em branco, testando a qualidade do solvente utilizado e fazer a correção,
se necessário.
11. Cálculos
Onde:
A Peso do balão ou copo + resíduo, em grama

B Peso do balão ou copo vazio, em grama
P Peso da amostra inicial, em grama
63
12. Bibliografia
INSTITUTO ADOLFO LUTZ . Normas Analíticas do Instituto Adolfo Lutz. Métodos químicos e físicos para
análise de alimentos, V.1. 4.ed. São Paulo: PROL, 2005. p. 118-119

Analytical Chemists. Arlington: A.O.A.C., 1995, chapter 33. (method 920.39, C). p.10-1
64
MÉTODO Nº 15
Determinação de
Métodos Analíticos Extrato Etéreo – Revisão: 2009
Hidrólise Ácida 3 páginas
1. Introdução
2. Recomendações

produtos químicos.
Todo o procedimento analítico deste método deve ser realizado em capela de exaustão, por risco de
incêndio.
3. Escopo
Aplicável a produtos e subprodutos extrusados, lácteos e outros que exijam hidrólise ácida devido ao
sistema de processamento empregado.
Não aplicável.
5. Definições
Não aplicável
6. Reações

7.2. Éter etílico p.a.
7.3. Ácido clorídrico p.a.
7.4. Álcool etílico p.a.
7.5. Solução de ácido clorídrico 70% (v/v)
7.5.1. Preparo: Misturar 7 partes de HCl p.a. em 3 partes de água destilada.
65
7.6. Solução de éter de petróleo – éter etílico 1+1
7.6.1. Preparo: Misturar 1 parte de éter de petróleo em 1 parte éter etílico.
7.7. Béquer 250mL
7.9. Erlenmeyer com tampa esmerilhada 250mL (ou outro recipiente equivalente, com tampa)
7.11. Pipetas graduadas de 5mL
7.12. Proveta de 50mL
7.13. Algodão hidrófilo
8. Equipamentos

8.3. Banho maria
9. Amostragem

A amostra deve ser previamente moída.
10. Procedimento
10.1. Pesar 2g de amostra, em seguida transferir para erlenmeyer de 250mL.

10.2. Adicionar 2mL de álcool etílico p.a. e agitar de maneira a umedecer todas as partículas da amostra.
10.3. Adicionar 10 mL de ácido clorídrico 70%, tampar e agitar vigorosamente.
10.4. Levar ao banho maria a temperatura de 70°C - 80°C, manter por 40 minutos, agitando a cada 10
minutos.
10.5. Remover o frasco do banho maria e deixar a temperatura ambiente.
10.6. Adicionar 10mL de álcool etílico p.a., e agitar vigorosamente.
10.7. Adicionar 50mL da solução de éter de petróleo-éter etílico, tampar e agitar vigorosamente durante 30
segundos.
10.8. Remover cuidadosamente a tampa e deixar os vapores saírem.
10.9. Lavar a tampa com pequenas porções de solução de éter de petróleo-éter etílico, transferindo para
dentro do frasco a gordura e partículas aderidas.
10.10. Tampar e deixar em repouso até que o sobrenadante esteja praticamente límpido.
10.11. Filtrar o sobrenadante sobre algodão firmemente adaptado em funil, para béquer de 250mL
previamente seco em estufa a 105°C e tarado.
10.12. Lavar o bico do frasco e tampa, após a transferência com pequenas porções de solução de éter de
petróleo-éter etílico.
10.13. Repetir no mínimo por 3 vezes os itens 10.7 a 10.11, usando 25mL da solução de éter de petróleo-
éter etílico.
10.14. Completadas todas as extrações, lavar com solução de éter de petróleo-éter etílico o bico do
frasco, a tampa, o algodão (até o desaparecimento da cor amarela), o funil e a haste do funil.
10.15. Evaporar a mistura de éteres em banho-maria na temperatura máxima de 60°C e levar o béquer na
estufa a 105°C por 30 minutos ou até peso constante.
10.16. Esfriar em dessecador e pesar.
66
11. Cálculo
Onde:
A Peso do béquer com gordura, em grama

B Peso do béquer vazio, em grama
P Peso da amostra inicial, em grama
12. Bibliografia

Analytical Chemists Arlington: A.O.A.C., 1995. method 954.02
67
MÉTODO Nº 16
Determinação de
Métodos Analíticos Extrato Etéreo – Revisão: 2009
Hidrólise Alcalina 3 páginas
1. Introdução
2. Recomendações

produtos químicos.
incêndio.
3. Escopo
Aplicável a produtos e subprodutos extrusados, lácteos e outros que exijam hidrólise alcalina devido ao
Não aplicável.
5. Definições
Não aplicável
6. Reações
7.1. Álcool etílico absoluto

7.5. Hidroxido de amônio p.a.
7.6. Solução alcoólica indicadora de fenolftaleína 1%
68
7.6.1. Preparo: Dissolver 1 g de fenolftaleína p.a. em aproximadamente em 40 mL de álcool etílico, transferir
para balão volumétrico de 100 mL, completar o volume com álcool etílico e homogeneizar.
7.7. Solução de éter de petróleo – éter etílico 1+1
7.7.1. Preparo: Misturar 1 parte de éter de petróleo em 1 parte éter etílico.
7.8. Béquer 250mL
7.10. Erlenmeyer com tampa esmerilhada 250mL (ou outro recipiente equivalente, com tampa)
7.12. Pipetas graduadas de 5mL
7.13. Proveta de 50mL
7.14. Algodão hidrófilo
8. Equipamentos

8.3 Banho-maria
9. Amostragem

A amostra deve ser previamente moída.
10. Procedimento
10.1. Pesar 1g da amostra e transferir para erlenmeyer de 250mL que deverá conter 10 mL de água
destilada pré aquecida a 65°C.
10.2. Adicionar 1,5mL de hidróxido de amônio p.a., tampar e agitar de maneira que todas as partículas da
amostra fiquem úmidas.
10.3. Adicionar 10 mL de álcool etílico p.a., e 3 gotas de fenolftaleina 1%, tampar e agitar vigorosamente.
10.4. Adicionar 25 mL de éter etílico p.a., tampar e agitar vigorosamente durante 1 minuto.
10.6. Adicionar 25mL de éter de petróleo p.a., tampar e agitar vigorosamente durante 1minuto.
10.8. Lavar a tampa com pequenas porções de solução de éter, transferindo para dentro do frasco a
gordura e partículas aderidas.
10.9. Tampar e deixar em repouso até que o sobrenadante esteja praticamente límpido.
10.10. Filtrar o sobrenadante sobre algodão firmemente adaptado em funil, para béquer de 250mL
previamente seco em estufa a 105°C e tarado.
10.11. Lavar o bico do frasco e tampa, após a transferência com pequenas porções de solução de éter.
10.12. Repetir no mínimo por 3 vezes os itens 10.3 a 10.8, sendo que a partir da segunda extração não
usar álcool etílico absoluto.
10.13. Colocar o béquer em banho-maria na temperatura máxima de 60°C ou sobre corrente moderada de
ar até a completa evaporação da solução de éter.
10.14. Levar o béquer na estufa a 105°C ate peso constante.
10.15. Esfriar em dessecador ate equilíbrio com temperatura ambiente e pesar.
69
11. Cálculo
Onde:
A Peso do béquer com gordura, em grama.

B Peso do béquer vazio, em grama.
P Peso da amostra inicial, em grama.
12. Bibliografia

Analytical Chemists. Arlington: A.O.A.C., 1995. method 989.05
70
MÉTODO Nº 17
Ferro -
Via Úmida
3 páginas
1. Introdução
Fundamenta-se na solubilização do ferro em meio ácido e a quente e posterior redução do Fe+++ a Fe++
pelo cloreto estanhoso. Sua concentração é medida por volumetria de oxi-redução com permanganato
de potássio.
2. Recomendações

produtos químicos.
3. Escopo
Método aplicável para sulfato de ferro.
Não aplicável.
5. Definições
Não aplicável.
6. Reações

7.2. Ácido fosfórico (H3PO4) p.a.
7.3. Ácido sulfúrico (H2SO4) p.a.
7.4. Cloreto estanoso (SnCl2) p.a.
7.5. Cloreto mercúrico (HgCl2) p.a.
7.6. Oxalato de sódio (Na2C2O4) p.a.
71
7.7. Permanganato de potássio (KMnO4) p.a.
7.8. Sulfato de manganês monohidratado (MnSO4 . H2O) p.a.
7.9. Solução reagente de ácido sulfúrico 1+1
7.9.1. Preparo: Diluir uma parte de H2SO4 p.a. em uma parte de água destilada.
7.10. Solução reagente de ácido clorídrico 1 + 2
7.10.1. Preparo: Diluir uma parte de HCl p.a. em duas partes de água destilada.
7.11. Solução reagente de cloreto estanoso 150g/L
7.11.1. Preparo: Pesar 7,5 g de cloreto estanoso p.a. e dissolver em béquer com aproximadamente 20
mL da solução de ácido clorídrico 1 + 2. Transferir para balão volumétrico de 50 mL, completar o volume
com solução de ácido clorídrico 1 + 2 e homogeneizar. Preparar esta solução momentos antes da utilização.
7.12. Solução reagente de ácido clorídrico 200 g/L
7.12.1. Preparo: Medir 47,5 mL de HCl p.a. e transferir para balão volumétrico de 100 mL, contendo
aproximadamente 40 mL de água destilada. Esfriar, completar o volume e homogeneizar.
7.13. Solução de Zimmermann-Reinhardt
7.13.1. Preparo: Dissolver 70 g de MnSO4.H2O p.a. em 500 mL de água destilada. Adicionar 125 mL de
H2SO4 e 125 mL de H3PO4. Agitar e completar o volume para 1000 mL com água destilada.
7.14. Solução reagente de cloreto mercúrico 50g/L
7.14.1. Preparo: Dissolver 5 g de HgCl2 p.a. em béquer contendo aproximadamente 70 mL de água
destilada. Transferir quantitativamente para balão de 100 mL, completar o volume e homogeneizar.
7.15. Solução de Oxalato de sódio 0,05 M
7.15.1. Preparo: Pesar exatamente 6,70 g de oxalato de sódio (Na2C2O4) p.a. previamente seco em estufa
a 105°C por duas horas. Dissolver em béquer com aproximadamente 100 mL de água destilada, transferir
para balão volumétrico de 1000 mL, homogeneizar e completar o volume.
.7.16. Solução volumétrica padronizada de permanganato de potássio 0,02 M
7.16.1. Preparo: Dissolver 3,16 g de permanganato de potássio (KMnO 4) p.a. em béquer contendo
aproximadamente 300/400 mL de água destilada e aquecer a 60/70°C por duas horas. Esfriar, transferir
quantitativamente para balão volumétrico de 1000 mL, completar o volume e homogeneizar. Deixar em
repouso no mínimo por 12 horas ao abrigo da luz.
Filtrar sobre cadinho de vidro sinterizado, amianto ou lã de vidro e estocar em frasco âmbar.
7.16.2. Padronização: Pipetar 20 mL da solução de oxalato de sódio 0,05 M, transferir para erlenmeyer,
adicionar 10 mL de ácido sulfúrico 1+1, aquecer a 70°C - 80°C e titular nessa temperatura gotejando a
solução de permanganato de potássio 0,02 M numa velocidade de 2 a 3 gotas por segundo até coloração
levemente rósea persistente por 30 segundos.
OBS: 5 moles de Na2C2O4 reagem com 2 moles de KMnO4
Onde:
MR Molaridade real
P Massa de Na2C2O4 na alíquota, em mg
V Volume gasto de KMnO4, em mL
m Massa molar do Na2C2O4 , em g
72
7.17. Erlenmeyer
7.20. Bureta graduada
7.21. Provetas
7.22. Béqueres
8. Equipamentos

8.2. Agitador magnético
9. Amostragem
10. Procedimento
10.1. Pesar 0,3 g da amostra previamente preparada e homogeneizada. Transferir para erlenmeyer de 500
mL.
10.2. Adicionar 50 mL da solução de HCl 200g/L, aquecer em placa e evaporar até quase secura.
10.3. Gotejar solução de cloreto estanoso 150 g/L quente até tornar-se incolor. Esfriar.
10.4. Adicionar 10 mL da solução de cloreto mercúrico 50 g/L, 100 mL de água destilada e 25 mL da
solução de Zimmermann-Reinhardt.
10.5. Deixar em repouso por 5 minutos. Adicionar 25 mL de água destilada.
10.6. Titular com solução de KMnO4 0,02 M até coloração levemente rósea persistente.
11. Cálculos
Onde
V Volume da solução de KMnO4 0,02 M gasto na titulação, em mL

F Fator de correção da solução de KMnO4 0,02 M
M Molaridade real da solução de KMnO4 0,02 M
m Massa da amostra, em grama
5 Estequiometria da reação
1 mL de KMnO4 0,02 M equivale a 0,05585 g de ferro
12. Bibliografia
VOGEL, Arthur Israel. Análise química quantitativa. 5. ed. 1992. p. 646-654.
73
MÉTODO Nº 18
Ferro -
Método Volumétrico
4 páginas
1. Introdução
Podemos encontrar o elemento ferro no sulfato ferroso, em dois estados de oxidação, nas formas de
Ferro II e III. O sulfato ferroso é determinado através da titulação com permanganato de potássio e o sulfato
férrico, presente em quantidades pequenas, é determinado através da titulação com tiossulfato de sódio.
Com a somatória dos dois teores obtém-se o teor de ferro total.
2. Recomendações

produtos químicos.
3. Escopo
Aplicável a sulfato ferroso anidro, monohidratado e outros sulfatos de ferro hidratados.
Não aplicável.
5. Definições
Não aplicável.
6. Reações
74
A solução de permanganato de potássio utilizada na determinação de ferro II deve ser estocada em frasco
âmbar.
7.1. Permanganato de potássio p.a.
7.2. Oxalato de sódio p.a.
7.3. Ácido sulfúrico p.a.
7.4. Tiossulfato de sódio p.a.
7.5. Carbonato de sódio p.a.
7.6. Dicromato de potássio p.a.
7.8. Iodeto de potássio p.a.
7.9. Amido solúvel p.a.
7.10. Solução volumétrica padronizada de permanganato de potássio 0,1 M
7.10.1. Preparo: Pesar 3,2 g de permanganato de potássio p.a. e transferir para um béquer de 1000 mL e
completar para 800 mL com água destilada. Aquecer por 2 horas a 60 / 70°C. Resfriar e transferir para um
balão volumétrico de 1000 mL. Completar o volume com água destilada e homogeneizar. Filtrar com
papel de filtro qualitativo e armazenar em frasco âmbar.
7.10.2. Padronização: Pesar exatamente 0,066 g de oxalato de sódio p.a. seco em estufa a 120°C por 2
horas. Transferir para um erlenmeyer e avolumar para 50 mL com água destilada. Adicionar 5 mL de ácido
sulfúrico p.a. e aquecer até 60°C. Titular vagarosamente com a solução de permanganato de potássio
0,1M até viragem do incolor para rosa.
Cálculo:
Onde
FC ¹ Fator de correção da solução de permanganato de potássio 0,1M

MO Massa do oxalato de sódio, em grama
0,066 Unidade molar do oxalato de sódio
V Volume da solução de permanganato de potássio 0,1M gasto na titulação, em mL
7.11. Solução volumétrica padronizada de tiossulfato de sódio 0,1 M

7.11.1. Preparo: Pesar 24,82 g de tiossulfato de sódio p.a. para balão volumétrico de 1000 mL. Dissolver
com água destilada fervida e adicionar 0,2 g de Carbonato de Sódio Anidro. Transferir quantitativamente
e deixar em repouso por 24 horas antes da padronização. Estocar em frasco âmbar.
7.11.2. Padronização: Pesar 0,2 g de dicromato de potássio p.a. previamente seco em estufa por 2 horas
a 105°C. Transferir para erlenmeyer de 250 mL com tampa esmerilhada. Acrescentar 70 mL de água
destilada, fervida e fria. Adicionar 2 g de potássio iodeto p.a. e solubilizar. Adicionar 20 mL de ácido
clorídrico 1M. Tampar o erlenmeyer e estocar imediatamente ao abrigo da luz por 10 minutos. Titular
gotejando a solução de tiossulfato de sódio 0,1M até quase desaparecimento da coloração amarela.
75
Acrescentar 1 mL da solução indicadora de amido 10 g/l e continuar a titulação até o desaparecimento da
coloração azul.
Cálculo:
Onde
FC2 Fator de correção da solução de tiossulfato de sódio

MD Massa do dicromato de potássio, em grama
0,004904 Unidade molar do dicromato de potássio
VT Volume gasto de tiossulfato de sódio, em mL
7.12. Solução de Amido 10 g/L

7.12.1. Preparo: Pesar 1,0 g de amido solúvel, acrescentar pequena quantidade de água, formando uma
pasta. Dissolver esta pasta em aproximadamente 80 mL de água destilada em ebulição. Deixar em fervura
por 1 minuto. Resfriar e avolumar a 100 mL. Só se devem usar soluções de amido recentemente preparadas.
Quando apresentar alguma turbidez, desprezar a solução.
7.14. Béquer
7.15. Bureta
7.16. Funis analíticos
8. Equipamentos
8.1. Estufa de secagem ajustável para 105°C

8.4. Eletrodo de pH
8.5. Eletrodo de referência
8.6. Eletrodo íon específico para flúor
8.7. Cronômetro
8.8. Agitador magnético.
9. Amostragem
10. Procedimento
A determinação do teor de ferro total é realizada em duas etapas envolvendo a titulação de soluções
contendo ferro II e ferro III.
76
10.1. Determinação do Ferro II
10.1.1. Pesar 5,000 g da amostra em um béquer. Anotar o peso. Adicionar 50 mL de água destilada e 20
mL de ácido sulfúrico p.a. Levar ao aquecimento em placa aquecedora até que todo o material seja
solubilizado.
10.1.2. Deixar esfriar e transferir para um balão volumétrico de 250 mL. Completar com água destilada e
homogeneizar.
10.1.3. Transferir uma alíquota de 20 mL para um erlenmeyer. Adicionar 50 mL com água destilada e titular
com a solução de permanganato de potássio 0,1M até viragem do incolor para rosa.
10.2. Determinação do Ferro III
10.2.1. Pesar 0,700 g da amostra, transferir para erlenmeyer com tampa e anotar o peso. Adicionar 50 mL
de água destilada e 5 mL de ácido sulfúrico p.a., agitar até que todo o material seja solubilizado.
10.2.2. Adicionar 3,0 g de iodeto de potássio p.a., tampar o erlenmeyer e repousar ao abrigo da luz por 30
minutos.
10.2.3. Deixar esfriar e transferir para um balão volumétrico de 250 mL. Completar com água destilada e
homogeneizar.
10.2.4. Titular com tiossulfato de sódio 0,1M até viragem do caramelo para a cor anteriormente encontrada.
11. Cálculos
Onde
S Volume de permanganato de potássio gasto na determinação do Ferro II, em mL

FC1 Fator de correção da solução de Permanganato de Potássio
M1 Massa da amostra de ferro II, em grama
L Volume de tiossulfato de sódio gasto na determinação do Ferro III, em mL
FC2 Fator de correção da solução de Tiossulfato de Sódio
M2 Massa da amostra de ferro III, em grama
12. Bibliografia
MORITA, Tokio; ASSUMPÇÃO, Rosely M.V.; Manual de soluções, reagentes e solventes: Padronização –
Preparação – Purificação. 12. ed. reimp. 2003. p.28-29,104,106-107, 118, 120-121
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Métodos físico-químicos para análise de alimentos. 4. ed. (1. ed. digital). 2008.
p. 934, 936
77
MÉTODO Nº 19
Métodos Analíticos Fibra Bruta Revisão: 2009
3 páginas
1. Introdução
Fibra Bruta é o resíduo insolúvel que se obtém após o tratamento sucessivo da amostra com ácidos e
álcalis diluídos a quente, que representa a fração que contém celulose, hemicelulose, lignina e suberina
dos ingredientes. O teor de fibra bruta está relacionado à fração indigestível e por conseqüência à energia,
entretanto por si só não representa o valor nutricional do ingrediente. A fibra bruta tem relação com a
qualidade do ingrediente para processamento e com a densidade.
2. Recomendações

produtos químicos.
3. Escopo
Aplicável em forrageiras, produtos e subprodutos de origem vegetal, rações e concentrados.
Não aplicável.
5. Definições
Não aplicável
6. Reações
Não aplicável
7.1. Acetona (C3H6O) p.a.

7.2. Ácido sulfúrico (H2SO4) p.a. (96% - 98%)
7.3. Alcool etílico (C2H5OH) p.a.
7.4. Álcool octílico (C8H18O) ou álcool amílico (C5H12O) ou solução antiespumante
7.5. Éter de petróleo
7.6. Fibras de óxido de alumínio ou de silicato de alumínio
78
7.8. Solução reagente de ácido sulfúrico 1,25% (0,51 M)
7.8.1. Preparo: Medir 7,0 mL de ácido sulfúrico p.a. e transferir para balão volumétrico de 1000 mL, contendo
aproximadamente 500 mL de água destilada. Esfriar, completar o volume e homogeneizar. Padronizar
esta solução com NaOH 0,2 M e considerar adequada se estiver entre 0,504 M e 0,516 M.
7.9. Solução reagente de hidróxido de sódio 1,25% (0,313 M)
7.9.1. Preparo: Pesar exatamente 12,5 gramas de NaOH p.a. em béquer, solubilizar com água e transferir
quantitativamente para balão volumétrico de 1000 mL Esfriar, completar o volume e homogeneizar. Padronizar
esta solução com ácido sulfúrico 0,4 M e considerar adequada se a molaridade estiver entre 0,310 M e
0,316 M.
7.10. Balão fundo chato 250 mL junta esmerilhada 24/40
7.11. Cadinho de Gooch capacidade 40/50 mL ou cadinho de vidro borossilicato com placa porosa 1 (90
a 150 micra)
7.12. Condensador de bolas
7.13. Dessecador com cloreto de cálcio ou sílica gel anidros
7.14. Funil de Büchner ± 10 cm de diâmetro
7.15. Kitassato de 500 mL
7.16. Papel de filtro qualitativo de 12,5 cm de diâmetro
7.17. Tela de nylon de 100 mesh ou similar
7.18. Tubo digestor de fibra com capacidade de 350 mL
8. Equipamentos
8.1. Aparelho extrator de fibra

8.3. Bomba de vácuo
8.5. Manta aquecedora pequena
8.6. Mufla
9. Amostragem

Recomenda-se desengordurar amostras com teor de extrato etéreo acima de 8%, utilizando-se para isso
balão de fundo chato 250 mL contendo aproximadamente 200 mL de éter de petróleo p.a, acoplado a
gotejador e condensador, onde os cartuchos devem ficar posicionados para receberem refluxo de éter
por 1 hora. Após retirar do condensador, deixar na capela para evaporar o solvente por 20 a 30 minutos.
10. Procedimento
Para substituir a tela de naylon utilizada no procedimento poderão ser utilizados tela de aço inox ou
poliéster.
10.1. Pesar 3 g da amostra e transferir para o tubo digestor, béquer, erlenmeyer ou cadinho de borossilicato
(sistema automático). Adicionar 200 mL de ácido sulfúrico 1,25% (0,51M) – para sistema automático injetar
150 mL - e algumas gotas de antiespumante. Digerir em refluxo por exatamente 30 minutos a partir da
ebulição.
79
10.2. Filtrar quantitativamente a quente sob vácuo, em funil de Büchner provido de tela de naylon ou
cadinho de vidro borossilicato (sistema automático). Proceder a lavagens sucessivas do resíduo com
água fervente até completa neutralização.
10.3. Retornar o resíduo ao tubo, béquer ou erlenmeyer, lavando a tela com 200 mL de hidróxido de
sódio 1.25% (0,313M) – para sistema automático, injetar 150 mL - e algumas gotas de antiespumante.
Digerir em refluxo por exatamente 30 minutos a partir do início da ebulição.
10.4. Transferir quantitativamente a quente sob vácuo em funil Büchner provido de tela de naylon ou
diretamente em cadinho de vidro borossilicato
10.5. Transferir quantitativamente o resíduo com auxilio de água quente para cadinho de vidro borossilicato
ou cadinho de Gooch contendo camada densa de fibras de silicato de alumínio ou fibras de óxido de
alumínio (que não permita a passagem do resíduo durante a filtração). Lavar com porções de água quente
e em seguida com aproximadamente 20 mL de álcool etílico p.a. e 20 mL de acetona p.a..
10.6. Levar para estufa a 105°C até peso constante (4 a 6 horas). Retirar, esfriar em dessecador até
equilíbrio com a temperatura ambiente e pesar.
10.7. Incinerar em mufla à 550°C a 600°C por 2 horas. Retirar à temperatura de 250°C - 300°C. Esfriar em
dessecador até equilíbrio com a temperatura ambiente e pesar.
11. Cálculo
Onde:
A Peso do cadinho + resíduo, em grama

B Peso do cadinho + cinzas, em grama
12. Bibliografia

Analytical Chemists. Arlington: A.O.A.C., 1997. Bc 6-49.
80
MÉTODO Nº 20
Fibra Detergente
Ácido (F.D.A.)
3 páginas
1. Introdução
A amostra é digerida em solução de detergente ácido que solubiliza o conteúdo celular, a hemicelulose,
os minerais solúveis e a maior parte da proteína insolúvel, deixando inalteradas as frações de lignina e
celulose.
Usado como estimador da fração de difícil digestão do alimento.
2. Recomendações

produtos químicos.
3. Escopo
Não aplicável.
5. Definições
Não aplicável
6. Reações
Não aplicável

7.3. CTAB (brometo de cetil-trimetilamônio / C19H42BrN) p.a.
7.4. Solução reagente de ácido sulfúrico 2 M
7.4.1. Preparo: Medir 30 mL de H2SO4 p.a. e transferir para balão volumétrico de 1000 mL contendo
aproximadamente 500 mL de água destilada. Esfriar, completar o volume e homogeneizar. Corrigir a
molaridade, se necessário.
7.5. Solução detergente ácido
81
7.5.1. Preparo: Pesar 20 g de CTAB (brometo de cetil-trimetilamônio / C19H42BrN) p.a e adicionar em 1 litro
de solução de H2SO4 2 M. Agitar até a completa dissolução.
7.6. Béquer de 600 mL forma alta ou erlenmeyer de 500 mL com junta esmerilhada
7.7. Cadinho de vidro borossilicato com placa porosa (90 a 150 micra) cap. 50 mL
7.9. Frasco Kitassato
7.10. Pisseta
8. Equipamentos

8.3. Conjunto para determinação de fibra bruta (unidade de refluxo)
8.4. Estufa de secagem 105oC (precisão ± 5oC)
9. Amostragem

A amostra deve ser previamente moída, no mínimo em malha de 1 mm e homogeneizada.
10. Procedimento
10.1. Pesar aproximadamente 1 g de amostra e transferir para tubo digestor do aparelho extrator de fibra.
10.2. Adicionar 100 mL de solução de detergente ácido, escorrendo-a lentamente pela parede do tubo,
evitando assim formação de muita espuma.
10.3. Colocar o tubo no bloco digestor a 150°C, acoplado ao condensador de refluxo.
10.4. Após atingir ebulição, reduzir a temperatura do bloco para 100°C e controlar para que não forme
muita espuma; digerir por 1 (uma) hora.
10.5. Durante a digestão, observar se partículas de amostra aderem a parede do tubo acima do nível da
solução. Se isto ocorrer, levantar os condensadores e, com mínimo de água destilada possível, lavar a
parede do tubo, levando amostra que estiver aderida novamente para a solução.
10.6. Terminada a digestão, filtrar amostra sob vácuo em cadinho de placa porosa, previamente tarado,
utilizando kitassato como auxílio. Transferir o conteúdo do tubo para o cadinho utilizando pisseta com
água quente, tomando o cuidado de lavar bem o tubo de fibra para que toda amostra passe para o
cadinho.
10.7. Lavar o filtrado no mínimo por 3 vezes com água destilada quente, tomando o cuidado de fechar o
vácuo, a cada vez que a água destilada quente for adicionada, permitindo que fique de molho por 2
minutos.
10.8. Lavar, igualmente, o filtrado 2 vezes com acetona (30-40 mL), interrompendo o vácuo cada vez que
a acetona for adicionada ao filtrado, permitindo que fique de molho por no mínimo 15 a 30 segundos (2
minutos é o ideal).
10.9. Retirar o cadinho do kitassato e secar em estufa por 4 a 6 horas a 105°C ou até peso constante.
Deixar esfriar em dessecador e pesar
82
11. Cálculo
Onde:

B Peso do cadinho, em grama
C Peso da amostra, em grama
12. Bibliografia

SILVA, Dirceu Jorge. Análise de Alimentos – Métodos químicos e biológicos. 3. ed. 2006. p. 100-107
PEREIRA, João Ricardo Alves; ROSSI JR., Paulo. Manual prático de avaliação nutricional de alimentos.
Piracicaba: FEALQ, s.d. p 3-4
83
MÉTODO Nº 21
Fibra Detergente
Neutro (F.D.N.)
3 páginas
1. Introdução
A amostra é digerida em solução de detergente neutro que solubiliza o conteúdo celular, formado
principalmente de proteínas, gorduras, carboidratos solúveis, pectina e outros constituintes solúveis em
água. FDN corresponde às frações de celulose, lignina e hemicelulose que não são digeridas e
correspondem a fibra dietética para não ruminantes.
2. Recomendações

produtos químicos.
3. Escopo
Não aplicável.
5. Definições
Não aplicável
6. Reações
Não aplicável

7.2. Alfa amilase (estável ao calor)
7.3. Borato de sódio (B4Na2O7.10H2O) p.a.
7.4. E.D.T.A. dissódico (C10H12CaN2Na2O8) p.a.
7.5. Fosfato dissódico (Na2HPO4) p.a.
7.6. Lauril sulfato de sódio (C12H25NaO4S) p.a.
7.7. Trietilenoglicol (C6H14O4) p.a.
84
7.8. Solução detergente neutro
7.8.1. Preparo:
7.8.1.1. Pesar 18,61g de E.D.T.A. dissódico e 6,81 g de borato de sódio, transferir para béquer de 500 mL
contendo cerca de 300 mL de água destilada; aquecer até a dissolução; adicionar 30 g de lauril sulfato de
sódio e 10 mL de trietilenoglicol.
7.8.1.2. Pesar 4,56 g de fosfato dissódico e transferir para outro béquer de 500 mL, contendo cerca de 300
mL de água destilada, aquecer até a dissolução.
7.8.1.3. Misturar as soluções “7.8.1.1” e “7.8.1.2”, completar o volume para 1000 mL com água destilada e
homogeneizar. O pH deve estar entre 6,9 e 7,1. Corrigir se necessário com solução de HCl 10% ou
solução de NaOH 10%
7.9. Béquer de 600 mL forma alta ou erlenmeyer de 500 mL com junta esmerilhada
7.10. Cadinho de vidro borossilicato com placa porosa (90 a 150 micra) cap. 50 mL
7.12. Frasco Kitassato
7.13. Pisseta
8. Equipamentos

8.3. Conjunto para determinação de fibra bruta (unidade de refluxo)
8.4. Estufa de secagem 105°C (precisão ± 5°C)
9. Amostragem

Recomenda-se desengordurar amostras com teor de extrato etéreo acima de 3%.
Para amostras com valores elevados de amido, aumentar a quantidade de alfa amilase.
A amostra deve ser previamente moída, no mínimo em malha de 1 mm e homogeneizada.
10. Procedimento
10.1. Pesar aproximadamente 1 g de amostra e transferir para tubo digestor do aparelho extrator de fibra.
10.2. Adicionar 100 mL de solução de detergente neutro e algumas gotas de solução antiespumante,
escorrendo-as lentamente pela parede do tubo, evitando assim formação de muita espuma. Adicionar
também 0,5 mL de alfa amilase.
10.3. Colocar o tubo no bloco digestor a 150°C, acoplado ao condensador de refluxo. Após atingir ebulição
reduzir a temperatura do bloco para 100°C e controlar para que não forme muita espuma; digerir por 1
(uma) hora.
10.4. Durante a digestão observar se partículas de amostra aderem a parede do tubo acima do nível da
solução. Se isto ocorrer, levantar os condensadores e, com mínimo de água destilada possível, lavar a
parede do tubo, levando amostra que estiver aderida novamente para a solução.
10.5. Terminada a digestão, filtrar amostra sob vácuo em cadinho de placa porosa, previamente tarado,
utilizando kitassato como auxílio. Transferir o conteúdo do tubo para o cadinho utilizando pisseta com
água quente, tomando o cuidado de lavar bem o tubo de fibra para que toda amostra passe para o
cadinho.
85
10.6. Lavar o filtrado no mínimo por 3 vezes com água destilada quente, tomando o cuidado de fechar o
vácuo, a cada vez que a água destilada quente for adicionada, permitindo que fique de molho por 2
minutos.
10.7. Lavar, igualmente, o filtrado 2 vezes com acetona (30-40mL) , interrompendo o vácuo cada vez que
a acetona for adicionada ao filtrado, permitindo que fique de molho por no mínimo 15 a 30 segundos.
10.8. Retirar o cadinho do kitassato e secar em estufa por 4 a 6 horas a 105°C ou até peso constante.
Deixar esfriar em dessecador e pesar.
11. Cálculo
Onde:

B Peso do cadinho, em grama
12. Bibliografia
VAN SOEST, P.J,; ROBERTSON J.B.; LEWIS, B.A. Methods for dietary fiber, neutral, s.d.
J. DAIRY SCI. Detergent fiber and non-starch polysaccharides inrelation to animal nutrition, v.74, 1991, p.
3583 – 3597
86
MÉTODO Nº 22
Flúor - Método
Potenciométrico I
5 páginas
1. Introdução
O eletrodo de fluoreto é um sensor íon seletivo. O elemento principal do eletrodo de fluoreto é um

monocristal de fluoreto de lantânio, que estabelece um potencial entre a solução de fluoreto interna do
eletrodo e a solução cuja concentração pretende-se determinar. O cristal entra em contato com a amostra
em uma face e uma solução interna de referência com a outra face. A atividade do íon depende da força
iônica total, do pH e das espécies complexantes do íon fluoreto na solução. A adição de um tampão
adequado permite manter a força iônica uniforme e constante, ajustar o pH e liberar o íon fluoreto dos
complexos existentes.
2. Recomendações

produtos químicos.
3. Escopo
Fosfatos naturais, industrializados e misturas que os contenham.

O método potenciométrico com eletrodo de íon seletivo de fluoreto é adequado para concentrações de
íon fluoreto acima de 0,2 mg/L. A adição de solução tampão elimina algumas interferências e, nestes
casos, evita-se a destilação prévia. As vantagens deste método são: alta seletividade, simplicidade e
rapidez.
Não aplicável.
5. Definições
Não aplicável.
6. Reações
Não aplicável.
7.1. Ácido acético (C2H4O2) p.a.
87
7.2. CDTA - Ácido 1,2 – ciclohexylenediamino tetra acético- (C14H22N2 O 8.H2O) p.a.
7.5. Verde de bromocresol (C21H14Br4 O5S) p.a.
7.6. Fluoreto de sódio (NaF) p.a.
7.7. Etanol (C2H5OH) p.a.
7.8. Solução reagente de hidróxido de sódio 6M
7.8.1. Preparo: Pesar 24,6 g de NaOH p.a. em béquer. Dissolver com água destilada.
Transferir quantitativamente para balão volumétrico de 100 mL. Esfriar, completar o volume e homogeneizar.
7.9. Solução reagente de ácido clorídrico 1:1 v/v
7.9.1. Preparo: Diluir uma parte de HCl p.a. em uma parte de água destilada. Esfriar e homogeneizar.
7.10. Solução reagente de ácido clorídrico 100 g/kg
7.10.1. Preparo: Transferir 8,4 mL de HCl p.a. para balão volumétrico de 100 mL, contendo aproximadamente
70 mL de água destilada. Esfriar e completar o volume.
7.11. Solução padrão de flúor 1000 mg/L
7.11.1. Preparo: Pesar 2,21 g de NaF, previamente seco em estufa a 105°C por 2 horas, seco em dessecador
por 30 minutos e transferir para balão volumétrico de 1000 mL. Dissolver com água destilada, completar o
7.12.1. Preparo: Pipetar 50 mL da solução padrão 1000 mg/L e transferir para balão volumétrico de 500 mL.
Completar o volume com água destilada e homogeneizar.
7.13. Soluções padrões de trabalho
7.13.1. Preparo: Definir os valores a utilizar na curva padrão do equipamento, conforme a faixa de
concentração das amostras. Pipetar volume igual a cada valor definido acima, da solução padrão 100 mg/
L e transferir a balão volumétrico de 100 mL. Completar o volume com água destilada e homogeneizar.
NOTA: para realizar curva em mV ou mV relativo, os padrões devem ser em razão decimal entre eles
(Ex.: 0,20; 2,0 e 20,0 mg/L).
7.14. Solução tampão TISAB IV pH 5,3-5,4
7.14.1. Preparo: Em béquer de 500 mL, dissolver em água destilada e deionizada 145 g de NaCl p.a.,
142,5 mL de ácido acético p.a., 10 g de CDTA. Ajustar o pH em 5,3-5,4 com NaOH 6M, transferir
quantitativamente para balão volumétrico de 1000 mL e completar o volume com água destilada e deionizada.
O pH final deverá ser 5,3 a 5,4.
Obs: No preparo da solução tampão, a temperatura deve ser controlada, pois o CDTA decompõe-se em
temperaturas superiores a 55°C.
7.15. Solução indicadora de verde de bromocresol 1 g/kg
7.15.1. Preparo: Dissolver 0,1 g de verde de bromocresol p.a. em Etanol p.a.. Transferir quantitativamente
para balão volumétrico de 100 mL e completar o volume (pH = 3,8 – cor amarela; pH = 5,4 – cor azul).
7.17. Béquer
8. Equipamentos

88
8.4. Potenciômetro com escala em mV ou concentração.
8.5. Eletrodo de pH
9. Amostragem
10. Procedimento
As condições de leitura potenciométrica da amostra, tais como tempo de estabilização, temperatura da

solução e agitação são as mesmas utilizadas na preparação da curva de calibração.
10.1. Confecção da curva padrão do equipamento.

Proceder conforme abaixo, ou seguir orientações específicas do Manual do equipamento.
10.1.1. Em balão volumétrico de 100 mL, adicionar 10 mL de solução TISAB IV e completar o volume com
água destilada e deionizada.
10.1.2. Transferir para béquer de 100 mL e mergulhar os eletrodos de íon específico e de referência.
Manter velocidade de agitação constante (utilizar a mesma velocidade para leitura da amostra).
10.1.3. Utilizando micropipeta de 100 microlitros, acrescentar, sucessivamente, os volumes indicados na
tabela abaixo, anotando os potenciais desenvolvidos para cada volume adicionados.
Vol. Sol. padrão (1000 mg/kg) Concentração após adição
100 microlitros 1 mg/kg
10.1.4. Traçar a curva anotando os potenciais obtidos em ordenada e a concentração em abcissa (papel
semilogarítimico), ou então, uma equação de regressão, na qual o coeficiente de correlação deverá ser
próximo de 1000.
Havendo recurso no equipamento, as leituras e a curva poderão ser realizadas diretamente em concentração,
conforme orientação do fabricante.
10.1.5. Proceder prova de recuperação em fluoretos de cálcio ou sódio, utilizando água destilada e
deionizada.
10.2. Procedimento Analítico
10.2.1. Triturar e homogeneizar uma porção da amostra em gral. Pesar em cadinho de platina ou níquel de
0,25 a 0,5 g da amostra, dependendo do teor de flúor esperado.
89
10.2.2. Adicionar aproximadamente 2,5 g de NaOH p.a.. Fundir a amostra (brandamente no início) em
capela usando bico de Bunsen, até formação de uma pasta homogênea. Tomar os cuidados necessários
para evitar a projeção da amostra. Esfriar à temperatura ambiente.
10.2.3. Transferir o cadinho com a amostra fundida para béquer de 600 mL, adicionar água destilada e
deionizada de modo a cobri-lo e, aproximadamente 20 mL de HCl 1:1 v/v. Deixar em repouso até completa
solubilização do resíduo.
10.2.4. Transferir quantitativamente para balão de 250 ou 500 mL, sem filtrar. Acertar o pH no próprio balão,
com NaOH 6M e/ou HCl 100 g/kg, utilizando verde de bromocresol como indicador, de maneira que o pH
esteja entre 5,3 e 5,4. Completar com água destilada.
10.2.5. Pipetar volumetricamente alíquota de 50 mL para balão volumétrico de 100 mL. Adicionar 10 mL de
solução TISAB IV. Completar o volume com água destilada e deionizada. O pH desta solução (solução de
leitura) deve estar entre 5,3 e 5,4.
Transferir a solução para béquer de 150 mL e proceder à determinação potenciométrica em escala mV,
com agitação constante e após estabilização (mínimo 3 minutos), fazer a leitura.
11. Cálculos
O volume da alíquota utilizado não é considerado no cálculo da concentração do flúor contido na amostra,
como também não é considerado na preparação da curva.
Onde:
L Leitura de flúor, obtida na curva de mV x conc, em mg/kg

S Volume do balão avolumado, em L
P Massa da amostra, em mg
A Volume da alíquota utilizada da solução estoque, em L
As leituras realizadas em mV são transformadas em mg/kg empregando o gráfico ou a equação de

regressão.
12. Bibliografia
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Métodos Físico-Químicos para Análise de Alimentos. 4. ed. Brasília: Instituto
Adolfo Lutz, 2005. Minerais e Contaminantes Inorgânicos, c. XXIII. p. 737 -754
90
MÉTODO Nº 23
Flúor – Método
Potenciométrico II
4 páginas
1. Introdução
O eletrodo de fluoreto é um sensor íon seletivo. O elemento principal do eletrodo de fluoreto é um

monocristal de fluoreto de lantânio, que estabelece um potencial entre a solução de fluoreto interna do
eletrodo e a solução cuja concentração pretende-se determinar. O cristal entra em contato com a amostra
em uma face e uma solução interna de referência com a outra face. A atividade do íon depende da força
iônica total, do pH e das espécies complexantes do íon fluoreto na solução. A adição de um tampão
adequado permite manter a força iônica uniforme e constante, ajustar o pH e liberar o íon fluoreto dos
complexos existentes.
2. Recomendações

produtos químicos.
3. Escopo

O método potenciométrico com eletrodo de íon seletivo de fluoreto é adequado para concentrações de
íon fluoreto acima de 0,2 mg/L. A adição de solução tampão elimina algumas interferências e, nestes
casos, evita-se a destilação prévia. As vantagens deste método são: alta seletividade, simplicidade e
rapidez.
Não aplicável.
5. Definições
Não aplicável.
6. Reações
Não aplicável.
7.1. Ácido cítrico (C6H8O7. H2O) p.a.
91
7.4. Azul de bromotimol p.a.
7.5. Fluoreto de sódio (NaF) p.a.
7.6. Etanol (C2H5OH) p.a.
7.7. Solução de citrato neutro de amônio - pH 7,0
7.7.1. Preparo: Dissolver 370 g de Ácido cítrico p.a. em 1,5 L de água destilada. Neutralizar com 345 mL
de hidróxido de amônio p.a. Esfriar e acertar o pH em 7,0 com solução de Hidróxido de amônio 1+1 v/v,
ou solução de Ácido cítrico 70 g/L. Armazenar e conferir periodicamente o pH, aceitando uma variação de
6,97 a 7,03.
7.8. Solução reagente de ácido cítrico 70 g/L
7.8.1. Preparo: Pesar 7,0 g de ácido cítrico p.a. para cada 100 mL de solução. Dissolver em água destilada,
transferir para balão volumétrico, completar o volume com água deionizada/destilada e homogeneizar.
7.9. Solução reagente de hidróxido de amônio 1+1 v/v
7.9.1. Preparo: Diluir uma parte de NH4OH p.a. em uma parte de água destilada.
7.10.1. Preparo: Pesar 2,21 g de NaF, previamente seco em estufa a 105°C por 2 horas, seco em dessecador
por 30 minutos e transferir para balão volumétrico de 1000 mL. Dissolver com água destilada, completar o
7.11.1. Preparo: Pipetar 50 mL da solução padrão 1000 mg/L e transferir para balão volumétrico de 500 mL.
Completar o volume com água destilada e homogeneizar.
7.12.1. Preparo: Definir os valores a utilizar na curva padrão do equipamento, conforme a faixa de
concentração das amostras. Pipetar volume igual a cada valor definido acima, da solução padrão 100 mg/
L e transferir a balão volumétrico de 100 mL. Completar o volume com água destilada e homogeneizar.
NOTA: para realizar curva em mV ou mV relativo, os padrões devem ser em razão decimal entre eles
(Ex.: 0,20; 2,0 e 20,0 mg/L).
7.13. Solução indicadora de azul de bromotimol 1,0 g/L
7.13.1. Preparo: Dissolver 0,1 g de azul de bromotimol em 20 mL de etanol p.a.. Transferir para balão
volumétrico de 100 mL, completar o volume com água destilada/ deionizada e homogeneizar.
7.15. Béquer
8. Equipamentos

8.4. Potenciômetro com escala em mV ou concentração.
8.5. Eletrodo de pH
92
9. Amostragem
10. Procedimento
As condições de leitura potenciométrica da amostra, tais como tempo de estabilização, temperatura da

solução e agitação são as mesmas utilizadas na preparação da curva de calibração.
10.1. Confecção da curva padrão do equipamento. Proceder conforme abaixo, ou seguir orientações
específicas do Manual do equipamento.
10.1.1. Em mV ou mV Relativo
10.1.1.1. Adicionar 20 mL dos respectivos padrões de trabalho em 3 béqueres de 50 mL identificados e 20
mL de solução tampão de citrato neutro de amônio 1+1 v/v.
10.1.1.2. Acertar em “zero” com o padrão intermediário (relação mV), com agitação constante. Deixar
estabilizar e em seguida ler o padrão inferior e superior, que serão respectivamente positivo e negativo.
10.1.1.3. Plotar as leituras em gráfico (monolog) ou fazer uma equação de regressão (logaritmo da
concentração x mV). O coeficiente de correlação deve estar próximo de 1,0000.
10.1.2. Em concentração
10.1.2.1. Medir volumetricamente 20 mL dos respectivos padrões de trabalho em, no mínimo 3 béqueres
de 50 mL identificados, outro com 20 mL de água (zero) e adicionar 20 mL de solução tampão de citrato
neutro de amônio 1+1 v/v.
10.1.2.2. Adicionar os padrões em seqüência crescente, sob agitação constante. Após a estabilização,
realizar os ajustes necessários nos valores.
10.1.3. Após estabelecer a curva padrão, conferir com uma amostra de controle, com teor conhecido.
10.2. Procedimento Analítico
10.2.1. Pesar de 0,5 a 5,0 g de amostra e transferir para béquer.
10.2.2. Adicionar 5 mL de HCl p.a., aquecer brandamente e adicionar água destilada até 100 mL.
NOTA: não deixar entrar em ebulição.
10.2.3. Adicionar lentamente solução de hidróxido de amônio 1+1 v/v para precipitação dos metais (até a
turvação da solução).
10.2.4. Adicionar de 4 a 5 gotas de solução indicadora de azul de bromotimol e solução de ácido cítrico 70
g/L para complexação dos metais, até a viragem de azul para amarelo.
10.2.5. Transferir quantitativamente para balão volumétrico, sem filtrar. Completar o volume com água destilada
e homogeneizar.
10.2.6. Pipetar volumetricamente uma alíquota de 20 mL, transferir para béquer e adicionar 20 mL de
solução de citrato neutro de amônio pH 7,0.
10.2.7. Proceder à leitura potenciométrica em mV ou concentração (mg/kg), com agitação constante e
após estabilização (mínimo 3 minutos).
11. Cálculos
O volume da alíquota utilizado não é considerado no cálculo da concentração do flúor contido na amostra,
como também não é considerado na preparação da curva.
As leituras realizadas em mV são transformadas em mg/kg empregando o gráfico ou a equação de

regressão.
93
Onde:
L Leitura de flúor (mg/kg)

S Volume do balão utilizado, em mL
P Massa da amostra, em grama
12. Bibliografia
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Métodos físico-químicos para análise de alimentos. 4. ed. 2005. p. 364.
94
MÉTODO Nº 24
Fósforo Solúvel em
Ácido Cítrico 2%
3 páginas
1. Introdução
Consiste em solubilizar o fósforo da amostra numa solução de ácido cítrico a 20 g/L por agitação, com
posterior formação de complexo colorido entre o fosfato, vanadato e molibdato de amônio, de cor amarela,
cuja absorbância ou transmitância é medida entre 400 e 430 nm.
2. Recomendações

produtos químicos.
3. Escopo
Não aplicável.
5. Definições
Não aplicável.
6. Reações
Não aplicável

7.2. Fosfato de potássio monobásico (KH2PO4) p.a.
7.3. Metavanadato de amônio (NH4VO3) p.a.
7.4. Molibdato de amônio ( (NH4)6Mo7O24.4H2O ) p.a.
7.5. Ácido cítrico (C6H8O7. H2O ) p.a.
7.6. Solução reagente de ácido cítrico 20 g/Kg
7.6.1. Pesar 20 g de ácido cítrico p.a., solubilizar em água destilada e transferir para balão volumétrico de
1000 mL. Completar o volume e homogeneizar.
95
7.7. Solução reagente de Metavanadato de amônio 2,5 g/L
7.7.1. Pesar 2,5 g de metavanadato de amônio p.a. e solubilizar em 500 mL de água destilada quente.
Esfriar e adicionar lentamente com agitação 350 mL de HNO3 p.a. Esfriar e transferir para balão volumétrico
de 1000 mL, completar o volume e homogeneizar. Estocar ao abrigo da luz.
7.8. Solução reagente de Molibdato de amônio 50 g/L
7.8.1. Pesar 50g de molibdato de amônio p.a. e solubilizar em 500 mL de água destilada quente (60/
70°C). Esfriar e transferir para balão volumétrico de 1000 mL, completar o volume e homogeneizar. Estocar
ao abrigo da luz.
7.9. Reagente misto
7.9.1. Juntar 1 parte da solução de metavanadato de amônio com 1 parte da solução de molibdato de
amônio e homogeneizar. Esta junção poderá ser realizada durante a solubilização dos reagentes.
Recomendação: observar a correta temperatura de preparação, evitando a precipitação de um dos
reagentes.
7.10. Solução padrão de fósforo - 0,1 mg /mL
7.10.1. Preparo: Pesar exatamente 0,4394 g de KH2PO4 p.a., previamente seco em estufa a 105°C por
duas horas. Solubilizar e transferir quantitativamente para balão volumétrico de 1000 mL. Adicionar
aproximadamente 500 mL de água destilada. Completar o volume e homogeneizar. Cada mL desta solução
contém 0,1 miligrama de fósforo.
7.11. Balões volumétricos ou garrafas Stohlman
7.12. Papel de filtro quantitativo, filtração média
7.13. Espectrofotômetro ou Colorímetro
7.14. Pipetas graduadas
8. Equipamentos

8.2. Agitador tipo Wagner ou similar ou agitador magnético
9. Amostragem

A amostra deve apresentar granulometria correspondente à no máximo 0,425 mm (ABNT).
10. Procedimento
10.1. Confecção da Curva Padrão:

10.1.1. Efetuar pelo menos 5 diluições de maneira a obter o intervalo de concentrações desejadas.
10.1.2. Pipetar volumetricamente, para balões de 100 mL, alíquotas das soluções preparadas, seguindo
os itens 10.2.4, 10.2.5 e 10.2.6 do procedimento analítico.
10.1.3. Fazer a equação de regressão entre as leituras de absorbância ou transmitância versus a
concentração (mg) das soluções. O ideal que a correlação esteja no mínimo em 0,999.
10.2. Procedimento analítico:
A coloração amarela do complexo formado possui estabilidade limitada, devendo ser obedecido o tempo
de espera para realização das medições.
10.2.1. Pesar 1,0 g de amostra e transferir para um balão volumétrico de 250 mL ou garrafa Stohlman.
10.2.2. Adicionar 100 mL de solução de ácido cítrico 20 g/Kg.
96
10.2.3. Agitar durante 30 minutos à velocidade de 30 rpm - 40 rpm (agitador tipo Wagner). Empregando-se
outro sistema, a velocidade deve ser branda, mas suficiente para provocar revolução completa do material.
10.2.4. Completar o volume, homogeneizar e filtrar em papel filtro médio.
10.2.5. Pipetar volumetricamente, para balão de 100 mL, alíquota da solução estoque de maneira que a
leitura esteja em uma faixa de 40% a 71% de transmitância ou 0,100 a 0,800 de absorbância.
10.2.6. Adicionar 20 mL do reagente misto. Completar o volume com água destilada, homogeneizar e
aguardar no mínimo 10 minutos e no máximo 30 minutos para efetuar a leitura.
10.2.7. Fazer a leitura em absorbância ou transmitância após zerar com o branco, usando comprimento de
onda de 420 nm ou o estabelecido entre 400 e 430 nm por meio de varredura do melhor pico de absorbância.
10.2.8. Calcular através curva padrão previamente elaborada ou usar equação de regressão para obtenção
da concentração de fósforo (mg) na alíquota.
11. Cálculos
Onde:
LA Leitura da amostra (abs ou T)

LP Leitura do padrão (abs ou T)
C Concentração de P na alíquota, em mg
B Volume do balão, em mL
P Peso da amostra, em mg
A Volume da alíquota, em mL
Onde:
PS Fósforo Solúvel
Pt Fósforo Total
12. Bibliografia
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Métodos físico-químicos para análise de alimentos. 4. ed., 2005. p. 748.
A.O.A.C. - ASSOCIATIONS OF OFFICIAL ANALYTICAL CHEMISTS. Official Methods of Analyses of the

Association of Analytical Chemists. 14. ed.,1984. p. 167.
97
MÉTODO Nº 25
Determinação de
Métodos Analíticos Fósforo Total - Revisão: 2009
Colorimétrico I 4 páginas
1. Introdução
conteúdo de fósforo. Em seguida procede-se à formação de um complexo colorido entre o fosfato e os
reagentes vanadato e molibdato de amônio, de cor amarela, cuja absorbância é medida na faixa de 400 a
430 nm.
2. Recomendações

produtos químicos.
3. Escopo
Produtos ou subprodutos de origem animal, vegetal e mineral, rações e concentrados.
Não aplicável.
5. Definições
Não aplicável.
6. Reações

7.4. Metavanadato de amônio (NH4VO3) p.a.
7.5. Molibdato de amônio ((NH4)6Mo7O24.4H2O ) p.a.
7.6. Solução reagente de ácido clorídrico 1+3 v/v
7.6.1. Preparo: Diluir 1 parte de HCl p.a. em 3 partes de água destilada.
7.7. Solução reagente de Metavanadato de amônio 2,5 g/L
98
7.7.1. Preparo: Pesar 2,5 g de metavanadato de amônio p.a. e solubilizar em 500 mL de água destilada
quente. Esfriar e adicionar lentamente com agitação 350 mL de HNO3 p.a. Esfriar e transferir para balão
volumétrico de 1000 mL, completar o volume e homogeneizar. Estocar ao abrigo da luz.
7.8. Solução reagente de Molibdato de amônio 50 g/L
7.8.1. Preparo: Pesar 50 g de molibdato de amônio p.a. e solubilizar em 500 mL de água destilada quente
(60/70°C). Esfriar e transferir para balão volumétrico de 1000 mL, completar o volume e homogeneizar.
Estocar ao abrigo da luz.
7.9. Reagente misto
7.9.1. Preparo: Juntar 1 parte da solução de metavanadato de amônio com 1 parte da solução de molibdato
de amônio e homogeneizar. Esta junção poderá ser realizada durante a solubilização dos reagentes.
Recomendação: observar a correta temperatura de preparação, evitando a precipitação de um dos
reagentes.
7.10. Solução padrão de fósforo - 0,1 mg /mL
7.10.1. Preparo: Pesar exatamente 0,4394 g de KH2PO4 p.a., previamente seco em estufa a 105°C por
duas horas. Solubilizar e transferir quantitativamente para balão volumétrico de 1000 mL. Adicionar
aproximadamente 500 mL de água destilada. Completar o volume e homogeneizar. Cada mL desta solução
contém 0,1 miligrama de fósforo.
7.13. Béquer
7.19. Provetas
8. Equipamentos

8.2. Forno mufla
8.3. Fotocolorímetro ou espectrofotômetro (400 a 430 nm)
9. Amostragem
10. Procedimento
10.1. Confecção da Curva Padrão de Fósforo (solução padrão de fósforo)

10.1.2. Pipetar volumetricamente, para balões de 100 mL, alíquotas das soluções preparadas, seguindo
os itens 10.2.8 e 10.2.9 do procedimento analítico.
10.1.3. Fazer a equação de regressão entre as leituras de absorbância ou transmitância versus a
concentração (mg) das soluções. O ideal que a correlação esteja no mínimo em 0,999.
99
10.2. Procedimento analítico
A coloração amarela do complexo formado possui estabilidade limitada, devendo ser obedecido o tempo
de espera para a realização das medições.
10.2.1. Para ingredientes e misturas minerais
10.2.1.1. De acordo com a concentração estimada do metal na amostra, pesar de 1,0 a 3,0 g com
aproximação de 0,1 mg. Desenvolver paralelamente uma prova em branco e amostra de verificação,
contendo os mesmos volumes de reagente misto e água destilada.
10.2.2. Para produtos e subprodutos de origem animal e vegetal, rações e concentrados
10.2.2.1. Proceder conforme o item 10.2.1.1, porém, realizar a pesagem da amostra em cadinho de
porcelana ou quartzo e calcinar por quatro horas a 550°C.
10.2.3. Transferir a massa pesada em 10.2.1.1 ou a Matéria Mineral obtida em 10.2.2.1 após a calcinação,
para copo béquer ou erlenmeyer e adicionar 50 mL de solução de ácido clorídrico 1:3.
NOTA: usar a solução de HCl 1:3 para transferir a Matéria Mineral obtida em 10.2.2.1.
10.2.4. Levar à placa aquecedora, aquecer e reduzir a até 1/3 do volume inicial.
10.2.5. Transferir para balão volumétrico de capacidade adequada. Lavar o material com porções de água
destilada e/ou deionizada até a completa transferência da amostra.
10.2.6. Completar o balão com água destilada e/ou deionizada, avolumar e homogeneizar. Filtrar se
necessário, em papel de filtro de porosidade média.
10.2.7. Pipetar volumetricamente, para balão de 100 mL, alíquota da solução estoque de maneira que a
10.2.8. Adicionar 20 mL do reagente misto. Completar o volume com água destilada, homogeneizar e
aguardar no mínimo 10 minutos e no máximo 30 minutos para efetuar a leitura.
10.2.9. Fazer a leitura em absorbância ou transmitância após zerar com o branco, usando comprimento de
onda de 420 nm ou o estabelecido entre 400 e 430 nm por meio de varredura do melhor pico de absorbância.
10.2.10. Calcular através curva padrão previamente elaborada ou usar equação de regressão para obtenção
da concentração de fósforo (mg) na alíquota.
11. Cálculos
Onde
LB Leitura do padrão (abs ou T)
B Volume do balão inicial, em mL
100
12. Bibliografia
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Métodos físico-químicos para análise de alimentos. 4. ed, 2005. p. 748.

Association of Analytical Chemists. 14. ed.,1984. p. 167.
101
MÉTODO Nº 26
Determinação de
Métodos Analíticos Fósforo Total - Revisão: 2009
Colorimétrico II 4 páginas
1. Introdução
conteúdo de fósforo. Os íons ortofosfato e molibidato condensam em solução ácida para dar o ácido
molibdofosfórico (Ácido fosfomolibdico) que, por redução seletiva produz uma cor azul devido ao azul de
molibdênio, cuja composição é incerta. A intensidade da cor azul é proporcional à quantidade de fosfato
inicialmente incorporada ao heteropoliácido.
2. Recomendações

produtos químicos.
3. Escopo
Produtos ou subprodutos de origem animal, vegetal e mineral, rações e concentrados.
Não aplicável.
5. Definições
Não aplicável.
6. Reações

7.5. Ácido 1-amino 2-naftol 4-sulfônico (C10H9NO4S) p.a. ou sulfato de p-metilaminofenol (C14H20N2O6S) p.a.
7.6. Molibdato de amônio ((NH4)6Mo7O24.4H2O ) p.a.
7.7. Bissulfito de sódio (NaHSO3) p.a.
102
7.8. Sulfito de sódio (Na2SO3) p.a.
7.9. Solução reagente de ácido clorídrico 1+1 v/v
7.9.1. Preparo: Diluir 1 parte de HCl p.a. em 1 parte de água destilada.
7.10. Solução reagente de ácido sulfúrico 500 g/L
7.10.1. Preparo: Transferir cuidadosamente 266,5 mL de H2SO4 p.a. para balão volumétrico de 1000 mL,
contendo aproximadamente 700 mL de água destilada. Esfriar, completar o volume e homogeneizar.
7.11. Solução padrão de fósforo 0,1 mg/mL
7.11.1. Preparo: Pesar exatamente 0,4394 g de KH2PO4 p.a., previamente seco em estufa a 105oC por duas
horas. Solubilizar e transferir quantitativamente para balão volumétrico de 1000 mL. Adicionar
aproximadamente 500 mL de água destilada e 10 mL de H2SO4 500 g/L. Completar o volume e homogeneizar.
7.12. Solução reagente de molibdato de amônio 25 g/L
7.12.1. Preparo: Pesar 12,5 g de molibdato de amônio p.a. e solubilizar em 100 mL de água destilada .
Medir 150 mL de H2SO4 500 g/L e transferir para balão volumétrico de 500 mL. Adicionar a solução de
molibdato de amônio sobre a de ácido sulfúrico. Completar o volume com água destilada e agitar
vigorosamente. Estocar em frasco âmbar sob refrigeração.
7.13. Solução reagente de bissulfito de sódio 150 g/L.
7.13.1. Preparo: Pesar 15 g de bissulfito de sódio p.a., solubilizar em água destilada, transferir para balão
volumétrico de 100 mL , completar o volume e homogeneizar.
7.14. Solução reagente de sulfito de sódio 200 g/L.
7.14.1. Preparo: Pesar 10 g de sulfito de sódio p.a., solubilizar em água destilada, transferir para balão
7.15. Solução reagente de ácido 1-amino 2-naftol 4-sulfônico ou sulfato de p metilaminofenol
7.15.1. Preparo: Pesar 250 mg do reagente em béquer. Adicionar uma ou duas gotas de solução de
bissulfito de sódio 150 g/L para formar uma pasta. Adicionar, transferindo para um balão de 100 mL, 97 mL
de solução de bissulfito de sódio 150 g/L e 2,5 mL de solução de sulfito de sódio 200 g/L. Não havendo
completa dissolução, adicionar mais solução de sulfito de sódio 200 g/L, evitando-se o excesso. Descansar
por uma noite, filtrar com papel de filtro qualitativo filtração rápida e estocar em frasco âmbar.
7.16. Balões volumétricos de 10, 25 e 250 mL
7.18. Béquer de 250 mL ou 300 mL
7.24. Provetas
8. Equipamentos

8.2. Forno mufla
8.3. Fotocolorímetro ou espectrofotômetro (700 a 730 nm)
103
9. Amostragem
10. Procedimento
A coloração azul do complexo formado possui estabilidade limitada, devendo ser obedecido o tempo
para realização das medições.
10.1. Confecção da Curva Padrão de Fósforo (solução padrão de fósforo)

10.1.2. Pipetar volumetricamente, para balões de 50 mL, alíquotas das soluções preparadas, seguindo os
itens 10.2.5, 10.2.6 e 10.2.7 do procedimento analítico.
10.1.3. Fazer a equação de regressão ou plotar as leituras de absorbância (gráfico milimetrado) ou
transmitância (gráfico semilog) versus a concentração (mg) das soluções.
Não calcinar amostras inorgânicas ou que tenham na sua composição fosfatos que sofrem redução nesta
faixa de temperatura.
Opcionalmente ao item 10.2.1 do procedimento analítico, poderá ser efetuada pré-queima em placa
aquecedora ou bico de Bunsen, transferindo em seguida para o forno mufla (550/600°C).
10.2.1. Pesar de 1 a 3 g da amostra em cadinho. Levar à mufla e gradualmente aumentar a temperatura
(550/600°C) até obtenção de cinzas claras (3 horas no mínimo). Retirar à 250/300°C e esfriar em dessecador.
10.2.2. Com o auxilio de bastão de vidro, transferir as cinzas obtidas para béquer de 250 mL ou 300 mL.
Lavar o cadinho com pequenas porções de solução de HCl 1+1 totalizando 40 mL, em seguida lavar com
água destilada, cobrir com vidro de relógio e levar à placa aquecedora até que haja redução de 1/3 do
volume. Esfriar.
10.2.3. Filtrar sobre papel de filtro qualitativo para balão volumétrico de 200 mL ou mais adequado à
concentração. Completar o volume com água destilada e homogeneizar (solução estoque).
10.2.4. Pipetar volumetricamente, para balão de 50 mL, alíquotas da solução estoque de maneira que a
10.2.5. Adicionar cerca de 25 mL de água destilada e 5 mL de solução de molibdato de amônio 2,5%.
Misturar girando o balão.
10.2.6. Adicionar 2 mL de ácido 1-2-4 aminonaftolsulfônico ou sulfato de p-aminofenol e marcar o tempo.
Completar o volume, tampar e agitar. Preparar um branco contendo os mesmos volumes de molibdato de
amônio, ácido 1-2-4 aminonaftolsulfônico ou sulfato de p-metilaminofenol e água destilada.
10.2.7. Decorridos exatos 20 minutos, fazer a leitura em absorbância ou transmitância após zerar com o
branco, usando 720 nm de comprimento de onda ou o estabelecido por meio de varredura.
10.2.8. Plotar a absorbância (gráfico milimetrado) ou transmitância (gráfico semilog) na curva padrão
previamente elaborada ou usar equação de regressão para obtenção da concentração de fósforo (mg) na
alíquota.
11. Cálculos
104
Onde
LB Leitura do padrão (abs ou T)
B Volume do balão inicial, em mL
12. Bibliografia
VOGEL, A.J. Análise Inorgânica Quantitativa. 4. ed. Rio de Janeiro: Ed. Guanabara, 1981. p. 561.
PORTARIA Nº. 108, de 04 de setembro de 1991. Diário Oficial da União, Seção 1. p. 19813. 17 de
setembro de 1991.
105
Glicídios MÉTODO Nº 27
(Açúcares Redutores em
Métodos Analíticos Glicose, Não Redutores em Revisão: 2009
Sacarose, Amido e Lactose) 5 páginas
1. Introdução
Neste grupo de compostos, que são hidratos de carbono, têm-se os mais variados tipos de substâncias,
desde os monossacarídeos, representados pela glicose e frutose, os dissacarídeos dos quais os mais
frequentes em alimentos são sacarose e lactose, até os polissacarídeos, como amido e celulose.
Os monossacarídeos, glicose e frutose são açúcares redutores (isto é sofrem oxidação – doam elétrons)
por possuírem grupo carbonílico e cetônico livres, capazes de se oxidarem na presença de agentes
oxidantes em soluções alcalinas. Os dissacarídeos, que não possuem essa característica sem sofrerem
hidrólise prévia da ligação glicosídica, são denominados de açúcares não redutores. Ao sofrerem hidrólise
por ácidos diluídos ou pela ação da enzima invertase, liberam a glicose e a frutose e passam a ser
denominados açúcares invertidos, que possuem maior poder adoçante e não formam cristais.
No método, o cobre do reativo de Fehling (solução alcalina de sulfato de cobre em tampão de tartarato
duplo de sódio e potássio) é reduzido a óxido cuproso.
2. Recomendações

produtos químicos.
3. Escopo
Aplicável a produtos ou subprodutos de origem vegetal, rações, concentrados e lácteos.
Não aplicável.
5. Definições
Não aplicável
6. Reações
7.1. Acetato de zinco ou sulfato de zinco p.a.
106
7.3. Azul de metileno p.a.
7.4. Ferrocianeto de potássio p.a.
7.5. Glicose anidra p.a.
7.6. Hidróxido de sódio p.a.
7.7. Fehling A (sulfato de cobre pentahidratado p.a.)
7.8. Fehling B (tartarato duplo de sódio e potássio p.a + hidróxido de sódio p.a.)
7.9. Solução padrão de glicose
7.9.1. Preparo: Pesar exatamente 0,500g de glicose, previamente seca em estufa a 70°C, durante uma
hora. Transferir quantitativamente para balão volumétrico de 100mL com auxilio de água destilada. Dissolver
bem e completar o volume. A solução de glicose deve ser recentemente preparada.
7.10. Solução de Fehling
7.10.1. Preparo Fehling A: Dissolver 34,639g de sulfato de cobre pentahidratado em água destilada.
Transferir quantitativamente para balão volumétrico de 1000mL. Completar o volume com água destilada e
homogeneizar.
7.10.2. Preparo Fehling B: Dissolver exatamente 173g de tartarato duplo de sódio e potássio (sal de
Rochelle) e 125 g de hidróxido de sódio em água destilada. Transferir quantitativamente para balão
volumétrico de 1000mL. Completar o volume com água destilada e homogeneizar.
7.10.3. Padronização: Colocar na bureta a solução padrão de glicose. Transferir com pipeta volumétrica,
10 mL de cada solução de Fehling (A e B) para um erlenmeyer de 250 mL. Adicionar 40 mL de água
destilada e aquecer até ebulição. Titular com a solução padrão de glicose, sem agitação, até o aparecimento
de um precipitado de cor vermelho tijolo e o desaparecimento total da cor azul original. Mantendo a
ebulição, adicionar uma gota de azul de metileno a 1%, continuar a titulação até nova viragem
(desaparecimento total da cor azul). O consumo estimado da glicose é aproximadamente 10 mL.
O tempo de titulação não deve ultrapassar três minutos
Cálculo:
7.11. Solução Hidróxido de sódio 40%

7.11.1. Preparo: Dissolver 40 g de Hidróxido de Sódio p.a. em água destilada. Transferir quantitativamente
para um balão volumétrico de 100 mL, esfriar, completar o volume e homogeneizar.
7.12. Ferrocianeto de Potássio 15%
7.12.1. Preparo: Dissolver 15 g de Ferrocianeto de Potássio p.a. em água destilada. Transferir
quantitativamente para um balão volumétrico de 100 mL, completar o volume e homogeneizar.
7.13. Acetato de Zinco 30%
Acrescentar o acetato de zinco à água aos poucos, assim, a sua dissolução será mais rápida.
7.13.1. Preparo: Dissolver 30g de Acetato de Zinco p.a. em água destilada. Transferir quantitativamente
para balão volumétrico de 100 mL, completar o volume e homogeneizar.
7.14. Solução Indicadora de Azul de Metileno 1%
7.14.1. Preparo: Dissolver 1,0 g de Azul de Metileno em 10 mL de Álcool Etílico p. a. Transferir com água
destilada para um balão volumétrico de 100 mL, completar o volume e homogeneizar.
107
7.15. Balão volumétrico de 250mL e 100mL
7.16. Bureta de 50 mL
7.19. Pipetas volumétricas de 10 e 5 mL
8. Equipamentos

8.2. Banho-maria (60°C)
9. Amostragem
10. Procedimento
10.1. Glicídios Redutores em Glicose (GRG)
10.1.1. Pesar em balança analítica 5g da amostra em béquer de 150 mL e dissolver com cerca de 50 mL
de água.
10.1.2. Transferir para balão volumétrico de 250 mL, lavando bem o béquer.
10.1.3. Adicionar 5 mL da solução de ferrocianeto de potássio 15% e 5 mL de solução de acetato de zinco
30%. Agitar, completar o volume com água destilada e deixar sedimentar por 15 minutos.
10.1.4. Filtrar em papel de filtro seco e receber o filtrado em erlenmeyer seco.
10.1.5. Titulação: Em erlenmeyer de 250 mL, pipetar volumetricamente 10 mL das soluções de Fehling (A
e B). Adicionar 40 mL de água destilada e aquecer até ebulição.
10.1.6. Colocar a solução amostra na bureta e gotejar no erlenmeyer sem agitação, até o desaparecimento
da coloração azul. Mantendo a ebulição, adicionar de 1 a 2 gotas de azul de metileno a 1% e continuar a
titulação até que se forme um precipitado vermelho tijolo e a coloração azul desapareça totalmente. A
titulação não deve ultrapassar de 2 a 3 minutos.
10.2. Glicídios não Redutores em Sacarose
10.2.1. Transferir 50 mL do filtrado (da amostra) para um béquer de 250 mL. Adicionar 2 mL de ácido
clorídrico concentrado e levar a banho-maria a 60°C por 60 minutos.
10.2.2. Esfriar e neutralizar com solução de hidróxido de sódio 10%, (pH 7), usando papel de tornassol
como indicador.
10.2.3. Esfriar e completar o volume a 100 mL em balão volumétrico.
10.2.4. Filtrar em papel de filtro qualitativo para erlenmeyer seco.
10.2.5. Titulação: Proceder como para Glicídios Redutores em Glicose.
10.3. Amido
10.3.1. Pesar 5 g de amostra, adicionar 100 mL de água destilada e misturar.
10.3.2. Adicionar 10 mL de ácido clorídrico concentrado. Aquecer a ebulição por 30 minutos.
10.3.3. Esfriar e neutralizar com hidróxido de sódio 40%, usando papel de tornassol como indicador.
10.3.4. Transferir para balão volumétrico de 250 mL e adicionar 10 mL de ferrocianeto de potássio 15% e
10 mL de acetato ou sulfato de zinco 30%. Agitar, esfriar e completar o volume do balão volumétrico com
água destilada.
108
10.3.5. Filtrar em papel de filtro qualitativo para erlenmeyer seco.
10.3.6. Titulação: Proceder como para Glicídios Redutores em Glicose.
10.4. Lactose
10.4.1. Seguir o procedimento descrito para Glicídios Redutores em Glicose.
11. Cálculo
11.1. Glicídios Redutores em Glicose:
Onde:
100 Porcentagem
250 Volume da solução da amostra, em mL
T Titulo da solução de fehling em açúcar redutor
V Volume de amostra gasto na titulação, em mL
11.2. Glicídios não Redutores em Sacarose
Onde:
100 Porcentagem
P Peso da amostra, em gramas
GRG Glicídios Redutores em Glicose
0,95 Fator de transformação de hexoses para sacarose
109
11.3. Amido
Onde:
100 Porcentagem
11.3.1. Quando a amostra só contiver amido, multiplicar o resultado por 0,90, que é o fator de transformação
da glicose em amido:
11.3.2. Se a amostra contiver Sacarose:
11.3.3. Se a amostra contém sacarose e glicose:
11.4. Lactose
Onde:
100 Porcentagem
T Título da solução de fehling em açúcar redutor
1,39 Constante da Lactose
12. Bibliografia
análise de alimentos, v.1. 4. ed. São Paulo: PROL, 2005. p. 125-130.
110
MÉTODO Nº 28
Métodos Analíticos Granulometria Revisão: 2009
2 páginas
1. Introdução
Este método baseia-se na determinação das proporções com que as partículas de diferentes dimensões
entram na composição da amostra.
2. Recomendações

produtos químicos.
3. Escopo
Método aplicável a produtos ou subprodutos de origem animal, vegetal, mineral e misturas que os
contenham.
Não aplicável.
5. Definições
Não aplicável.
6. Reações
Não aplicável.
7.1. Conjunto de peneiras metálicas com tampa e fundo, com 20,3 cm de diâmetro
7.2. Ar comprimido ou pincéis para limpeza das peneiras
8. Equipamentos

8.2. Aparelho vibrador para peneiras
111
9. Amostragem

Moer e homogeneizar em almofariz se necessário.
10. Procedimento
O número de peneiras e o tamanho das malhas deverão ser estabelecidos conforme o tipo do produto.
A secagem da amostra em estufa à 105°C e posterior equilíbrio com a temperatura ambiente
(aproximadamente 2 horas) antes da pesagem evitam a aderência de partículas finas nas malhas, que
obstruem a passagem da amostra.
10.1. Pesar individualmente as peneiras e fundo.
10.2. Montar o conjunto de peneiras no aparelho vibrador, sobrepondo-as em ordem crescente de abertura
das malhas.
10.3. Pesar aproximadamente de 100 a 200 g da amostra e transferir para peneira superior do conjunto.
10.4. Tampar e fixar o conjunto no vibrador.
10.5. Ajustar o reostato do equipamento na posição 10 ou na regulagem recomendada pelo fabricante,
correspondente a 750 vibrações/minuto.
10.6. Ligar e deixar por um período de 10 minutos.
10.7. Pesar individualmente as peneiras e fundo com as frações retidas.
11. Cálculos
Onde
A Peso da peneira ou fundo + amostra retida, em grama

B Peso da peneira ou fundo, em grama
12. Bibliografia
setembro de 1991
112
MÉTODO Nº 29
Hidrólise Ácida -
Método Direto
3 páginas
1. Introdução
os acilgliceróis, os ácidos graxos livres, o colesterol, a lecitina, a clorofila, os alcoóis voláteis, os óleos
2. Recomendações

produtos químicos.
incêndio.
3. Escopo
Aplicável a produtos e subprodutos extrusados, lácteos e outros que exijam hidrólise ácida devido ao
Não aplicável.
5. Definições
Não aplicável
6. Reações
7.1. Ácido Clorídrico p.a.

7.2. Celite 545 ou areia de diatomácea
7.3. Solução de ácido clorídrico 40% (v/v)
7.3.1. Preparo: Adicionar cuidadosamente 400 mL de ácido clorídrico p.a. em um balão volumétrico de
1000 mL já com aproximadamente 500 mL de água destilada. Esperar esfriar a temperatura ambiente e
completar o volume com água destilada.
113
7.4. Balão de fundo chato de 250 mL com junta 24 X 40 ou erlenmeyer de 250 ou 500mL com boca
esmerilhada
7.5. Papel de filtro quantitativo faixa branca φ = 12,5 cm
7.6. Funil de vidro 60o
7.7. Papel de filtro qualitativo φ = 12,5 cm
7.8. Proveta de vidro 50 mL
7.9. Béquer de vidro
8. Equipamentos
8.1. Aparelho digestor adaptado com condensador de bolas

9. Amostragem

É importante secar bem o papel com resíduo, pois a umidade dificulta a extração.
10. Procedimento
10.1. Pesar aproximadamente 3g de amostra, transferir para balão ou erlenmeyer de boca esmerilhada.
Com auxílio de uma proveta adicionar 50mL da solução de ácido clorídrico 40% agitando vagarosamente
para solubilização, tomando o cuidado de não deixar amostra aderida a parede do frasco.
10.2. Adaptar o balão ou erlenmeyer ao condensador de bolas, verificar se a água para refrigeração dos
condensadores está aberta e colocar em refluxo no aparelho digestor por 45 minutos, após a solução
entrar em ebulição, com agitações ocasionais.
10.3. Terminado o tempo de digestão, lavar o condensador com pequenas porções de água destilada
quente, retirar o recipiente do aparelho e tampar.
10.4. Levar a capela de exaustão de gases, destampar o frasco, adicionar pequena porção de celite ou
areia diatomácea (aproximadamente 1 g) na solução e agitar lentamente.
10.5. Filtrar, evitando perdas, sobre papel de filtro qualitativo, previamente umedecido com água, lavando
o erlenmeyer com porções de água destilada quente para retirar toda solução do frasco.
10.6. Lavar o resíduo com água destilada (~400mL) quente até que o filtrado torne-se límpido, em seguida
colocar o papel com o resíduo retido em um béquer e secar por uma hora em estufa a 105°C.
10.7. Após secar e esfriar a temperatura ambiente, dobrar o papel envolvendo-o com outro papel de filtro
qualitativo, evitando perda de resíduo (pode-se usar um grampeador de papéis para fechá-lo).
10.8. Proceder à extração conforme metodologia de extrato etéreo soxhlet deste compêndio, a partir do
item 10.3 do método.
11. Cálculo
114
Onde:
A Peso do balão ou copo + resíduo (gordura), em grama

B Peso do balão ou copo vazio, em grama
C Peso da amostra inicial, em grama
12. Bibliografia
PROCEDIMENTO B. Diretiva Européia 98/64/CE. Journal Officiel des Communautés Européennes. 19 de

setembro de 1998.
115
Índice de MÉTODO Nº 30
Métodos Analíticos Dispersibilidade Revisão: 2009

Proteica 4 páginas
1. Introdução
O índice de dispersibilidade protéica determina o quanto a proteína presente na soja é solúvel em água
nas condições do método. O método de PDI é internacionalmente reconhecido como sendo eficaz e de
alta repetibilidade e reprodutividade. Consiste na solubilização das proteínas hidrossolúveis e em sua
quantificação pelo método de Kjeldahl.
2. Recomendações
O Ácido Sulfúrico é prejudicial à saúde se inalado ou se entrar em contato com a pele e olhos, portanto a
solução de catalisador líquido deve ser preparada em capela com o uso de luvas adequadas e óculos de
segurança.
3. Escopo
A presente metodologia é aplicável a grãos de soja moídos, farelo de soja, sojas extrusadas, integrais e
semi-integrais, com ou sem gordura.
Não aplicável
5. Definições
Não aplicável
6. Reações
As reações envolvidas dependerão do procedimento para determinação de proteína adotado.
Usar somente reagentes de grau analítico, a não ser que especificado em contrário.

7.2. Sulfato de Sódio Anidro p.a.
7.3. Sulfato de Cobre pentahidratado p.a.
7.4. Selenito de Sódio p.a.
116
7.5. Biftalato de Potássio - Padrão Primário p.a.
7.7. Ácido acético p.a.
7.8. Álcool etilíco 99,5°GL
7.10. Solução Alcalina Diluída (KOH 3% utilizado para correção de pH)
7.10.1. Preparo: Dissolver em béquer 3g de KOH p.a. com água destilada ou similar e transferir para
balão volumétrico de 100 mL. Completar o volume e homogeneizar.
7.11. Solução de Ácido Acético 3% (utilizado para correção de pH)
7.11.1. Preparo: Pipetar 3 mL de Ácido Acético p.a para dentro de um béquer contendo aproximadamente
60 mL de água destilada ou similar. Transferir para balão volumétrico de 100 mL e completar o volume com
água destilada ou similar.
7.12. Vermelho de Metila p.a.
7.13. Bloco digestor
7.14. Funil de Buckner
7.15. Kitassato
7.16. Algodão
7.17. Erlenmeyer de 250 ml
7.18. Balão Volumétrico de 100 mL
7.19. Tubo de centrífuga
7.21. Béquer de 600 mL de plástico
7.22. Pipeta volumétrica de 15 mL
7.23. Tubo para macro
8. Equipamentos
8.1. Liquidificador ou agitador (Waring Blender)

8.2. Centrífuga
8.3. Balança analítica ou semi-analítica
8.4. Destilador de proteína Kjeldahl
8.5. Microbureta ou bureta semi-automática calibrada
8.6. Repipetador com dosagem regulável (dispenser)
9. Amostragem
10. Procedimento
10.1. Pesar 20g de amostra em um béquer de 600 mL de plástico.

10.2. Adicionar com proveta 300 mL de água destilada ou similar neutra (pH entre 6,8 – 7,2). A temperatura
da água deve estar em 25°C, pois a dispersibilidade protéica está diretamente relacionada com a
temperatura.
10.3. Acoplar o béquer com amostra ao agitador Waring Blender e agitar a aproximadamente 8500 rpm
por 10 minutos.
117
10.4. Retirar o béquer do agitador e deixar em repouso até decantação da amostra.
10.5. Transferir aproximadamente 40 mL do sobrenadante para um tubo de centrífuga.
10.6. Centrifugar por 10 minutos ou até que o sobrenadante esteja isento de partículas em suspensão.
10.7. Pipetar volumetricamente 15 mL do sobrenadante para tubo de macro.
10.8. Seguir o procedimento Kjeldahl ou procedimento Dumas para determinação de proteína bruta.
11. Cálculo
11.1. Método Dumas
Onde
PD Proteína dispersível
V¹ Volume de HCl 0,1M gasto na titulação da amostra, em mL
V² Volume de HCl 0,1M gasto na titulação do branco, em mL
6,25 Fator de transformação de nitrogênio em proteína
M Molaridade da solução de HCl
14 Massa molar do nitrogênio
m Massa da amostra na alíquota, em mg
11.2. Método Kjeldahl
Onde
PD Proteína dispersível
V¹ Volume de NaOH 0,2M gasto na titulação, em mL
Fc¹ Fator de correção do NaOH 0,2M
V² Volume de H2SO4 0,1M gasto na titulação, em mL
Fc² Fator de correção do H2SO4
M¹ Molaridade da solução de NaOH
M² Molaridade da solução de H2SO4
m Massa da amostra na alíquota, em mg
118
11.3. Índice de dispersibilidade protéica
12. Bibliografia
Chemists Society. AOCS revised, 1993. v. 1. Method Ba 10-65 (modificado)
AMERICAN ASSOCIATION OF CEREAL CHEMISTS. 2. ed. AACC, 1995. v. 2. Method 46-24 (modificado)
119
MÉTODO Nº 31
Métodos Analíticos Índice de Iodo Revisão: 2009
4 páginas
1. Introdução
O índice de iodo de um óleo ou gordura é a medida do seu grau de insaturação, considerando que o iodo
reage com as duplas ligações; verifica-se que quanto maior o grau de insaturação, maior será
proporcionalmente o índice de iodo e reciprocamente, quanto maior a quantidade de iodo adcionada,
maior o número de duplas ligações. O método de Wijs é aplicável a todos os óleos e gorduras normais
que não contenham ligações duplas conjugadas. Cada óleo possui um intervalo característico do valor do
índice de iodo. A fixação do iodo ou de outros halogênios se dá nas ligações etilênicas dos ácidos
graxos.
Os resultados são obtidos em termos de número de miligramas de iodo absorvidos por grama de amostra.
2. Recomendações

produtos químicos.
3. Escopo
Aplicável a óleos e gorduras de origem vegetal e animal.
Não aplicável.
5. Definições
Não aplicável.
6. Reações

7.3. Dicromato de potássio (K2Cr2O7) p.a.
120
7.4. Iodeto de potássio (KI) p.a.
7.5. Clorofórmio p.a.
7.6. Solução de Wijs
7.8. Solução reagente de iodeto de potássio 15%
7.8.1. Preparo: Dissolver 15 g de KI p.a. em água destilada, fervida e fria. Transferir para balão volumétrico
de 100 mL, completar o volume com água destilada, fervida e fria e homogeneizar.
7.9. Solução indicadora de amido 1%
7.9.1. Preparo: Pesar 1 g de amido p.a. e transferir para béquer de 250 mL. Adicionar aproximadamente
50 mL de água destilada e aquecer até ebulição. Esfriar. Transferir para balão volumétrico de 100 mL,
completar o volume com água destilada e homogeneizar. Preparar esta solução momentos antes do uso.
7.10.1. Preparo: Pesar 24,82 g de Na2S2O3.5H2O e 0,2g de carbonato de sódio anidro (Na2CO3). Dissolver
em béquer contendo aproximadamente 100 mL de água destilada, fervida e fria. Transferir quantitativamente
e deixar em repouso durante 24 horas. Padronizar e estocar em frasco âmbar
7.10.2. Padronização: Pesar exatamente 0,2 g de dicromato de potássio (K2Cr2O7) p.a. previamente seco
em estufa a 105°C por duas horas. Transferir para erlenmeyer de 250 mL com tampa esmerilhada.
Acrescentar aproximadamente 70 mL de água destilada, fervida e fria. Adicionar 2 g de KI e solubilizar.
Adicionar 20 mL de ácido clorídrico 1 M. Tampar o erlenmeyer e estocar imediatamente ao abrigo da luz
por 10 minutos. Titular gotejando a solução de tiossulfato de sódio 0,1 M até quase desaparecimento da
coloração amarela. Acrescentar 1 mL da solução indicadora de amido 1% e continuar a titulação até
desaparecimento da coloração azul.
Cálculo do Fator:
Onde:
P Peso do K2Cr2O7 na alíquota, em mg

V Volume da solução de tiossulfato de sódio 0,1M gasto na titulação, em mL
M Molaridade da solução de tiossulfato de sódio
49 Massa molar do K2Cr2O7 dividido pela variação do NOX do mesmo elemento.
7.11. Balão volumétrico de 100 mL

7.13. Bureta (div. 0,05 mL)
7.14. Frasco de iodo âmbar ou erlenmeyer âmbar de 500 mL
7.15. Papel vegetal
121
8. Equipamentos
9. Amostragem
10. Procedimento
Fazer no máximo 3 amostras e 1 branco para não ultrapassar o tempo de reação.

Titular inicialmente o branco cujo gasto de solução de tiossulfato de sódio 0,1 M deve ser de 47 a 51 mL,
em condições normais.
Dobrar o papel vegetal de maneira a ter o formato de um recipiente.
Peso da amostra conforme índice de iodo esperado:
Índice de iodo esperado Peso da amostra (g)
<5 3,0000
5 - 20 1,0000
21 - 50 0,4000
51 - 100 0,2000
101 - 150 0,1300
151 - 200 0,1000
10.1. Pesar a amostra isenta de umidade e impurezas em papel vegetal, conforme a porcentagem de iodo
esperada (acima).
10.2. Transferir para erlenmeyer âmbar de 500 mL contendo 20 mL de clorofórmio p.a. e agitar até a
completa dissolução da amostra.
10.3. Adicionar volumetricamente 25 mL da solução de Wijs. Tampar e agitar vagarosamente até completa
homogeneização.
10.4. Paralelamente preparar e conduzir uma prova em branco.
10.5. Deixar em repouso por 30 minutos ao abrigo da luz e temperatura aproximada de 25oC.
10.6. Decorrido o tempo de reação adicionar volumetricamente 20 mL da solução de iodeto de potássio
15% (recém-preparada). Havendo necessidade para melhor visualização da viragem, adicionar 100 mL de
água destilada recentemente fervida e fria.
10.7. Titular lentamente com solução de tiossulfato de sódio 0,1 M, com agitação constante até uma fraca
coloração amarela.
10.8. Adicionar 1 mL de solução de amido 1% recentemente preparada e continuar a titulação até o
11. Cálculos
122
Onde:
V² Volume da solução tiossulfato de sódio 0,1M gasto na titulação do branco, em mL

V¹ Volume da solução tiossulfato de sódio 0,1M gasto na titulação, em mL
Fc Fator de correção da solução tiossulfato de sódio 0,1M
1 mL de tiossulfato de sódio equivale a 0,1269 g de iodo
12. Bibliografia
INSTITUTO ADOLFO LUTZ . Normas Analíticas do Instituto Adolfo Lutz.: Métodos químicos e físicos para
análise de alimentos. 4. ed. São Paulo: PROL, 2005. p. 597-599
AMERICAN OIL CHEMISTS SOCIETY. Official methods and recommended praticces of the American Oil
Chemists Society. AOCS, 1990. AOCS Recommended Practice, Cd 1 -25.
123
MÉTODO Nº 32
Determinação de Iodo -
Via Úmida
3 páginas
1. Introdução
Determinação de Iodo em Iodato de cálcio e potássio.

Os sais iodatos, quando tratados com iodeto de potássio em meio ácido, liberam iodo. O iodo liberado
pela ação do iodeto de potássio e ácido sulfúrico é determinado por titulação com o tiossulfato de sódio.
2. Recomendações

produtos químicos.
3. Escopo
Método aplicável para Iodato de cálcio e potássio.
Não aplicável.
5. Definições
Não aplicável.
6. Reações
7.1. Ácido sulfúrico (H2SO4) p.a. (d = 1,84 g/mL)

7.2. Ácido Clorídrico HCl 1M
7.4. Dicromato de potássio (K2Cr2O7) p.a.
7.7. Solução reagente de Iodeto de Potássio 100 g/L
124
7.7.1. Preparo: Dissolver 50 g de KI p.a. em água destilada, previamente fervida e resfriada. Transferir
para balão volumétrico de 500 mL, completar o volume com água destilada, fervida e resfriada e
homogeneizar.
7.8. Solução reagente de Ácido clorídrico 1M
7.8.1. Preparo: Medir 85 mL de HCl p.a. e transferir para balão volumétrico de 1000 mL, contendo
7.9. Solução de Ácido sulfúrico 100 g/L
7.9.1. Preparo: Medir 5,6 mL de H2SO4 p.a. e transferir para balão volumétrico de 100 mL, contendo
7.10.1. Preparo: Pesar 24,82 g de Na2S2O3.5H2O p.a. e 0,2g de carbonato de sódio anidro (Na2CO3).
Dissolver em béquer contendo aproximadamente 100 mL de água destilada, fervida e resfriada. Transferir
quantitativamente para balão volumétrico de 1000 mL, completar o volume com água destilada, fervida e
resfriada. Homogeneizar e deixar em repouso durante 24 horas. Padronizar e estocar em frasco âmbar.
7.10.2. Padronização: Pesar 0,2 g de Dicromato de Potássio p.a. previamente seco em estufa por 2 horas
a 105°C. Transferir para erlenmeyer de 250 ml com tampa esmerilhada. Acrescentar 70 ml de água destilada,
fervida e fria. Adicionar 2 g de Potássio Iodeto p.a. e solubilizar. Adicionar 20 ml de Ácido Clorídrico 1M.
Tampar o erlenmeyer e estocar imediatamente ao abrigo da luz por 10 minutos. Titular gotejando a solução
de Tiossulfato de Sódio 0,1M até quase desaparecimento da coloração amarela. Acrescentar 1 ml da
solução indicadora de amido 10g/l e continuar a titulação até o desaparecimento da coloração azul
Cálculo da molaridade real
Onde
MR Molaridade real
m Massa do Dicromato de Potássio p.a., em mg
V Volume de Tiossulfato de sódio gasto na titulação, em mL
1 mL de Tiossulfato de sódio 0,1 M, equivale a 0,04904 g do Dicromato de Potássio p.a.
7.11. Solução indicadora de amido 10 g/L

7.11.1. Preparo: Pesar 1g de amido p.a. e transferir para béquer de 250 mL. Adicionar aproximadamente
completar o volume com água destilada e homogeneizar. Preparar momentos antes do uso.
8. Equipamentos

8.2. Bureta
8.3. Erlenmeyer com tampa esmerilhada
8.4. Pipeta graduada
8.5. Proveta
8.6. Balões Volumétricos.
125
9. Amostragem

10. Procedimento
10.1. Pesar 0,1 g da amostra previamente moída e homogeneizada. Transferir para erlenmeyer de 300
mL com tampa esmerilhada.
10.2. Adicionar 100 mL da solução de KI 100g/L.
10.3. Adicionar 10 mL da solução de H2SO4 100 g/L.
10.4. Agitar até dissolução e deixar em repouso por 10 minutos ao abrigo da luz.
10.5. Titular lentamente com solução de tiossulfato de sódio 0,1 M até uma fraca coloração amarela.
10.6. Adicionar 1 mL da solução de amido 10 g/L recentemente preparada e continuar a titulação até o
11. Cálculos
Onde:
V Volume de Tiossulfato de Sódio 0,1M gasto na titulação, em mL

M Molaridade real da solução de Tiossulfato de Sódio 0,1M
1 mL de Tiossulfato de sódio 0,1 M, equivale a 0,02116 g de Iodo.
12. Bibliografia
FARMACOPEIA PORTUGUESA VII. 2002. Método Iodo (I2), v.2. p.318
126
MÉTODO Nº 33
Métodos Analíticos Lignina Revisão: 2009
3 páginas
1. Introdução
A lignina é um polímero tridimensional encontrado na maioria das plantas terrestres, e que associado à
celulose na parede celular tem como função conferir rigidez, impermeabilidade e resistência a ataques
microbiológicos e mecânicos aos tecidos vegetais. Na alimentação animal é a fração menos digestível
das forrageiras em geral, desta maneira a lignina não digerida forma uma “barreira física” à digestão dos
nutrientes contidos no interior das células.
2. Recomendações

produtos químicos.
3. Escopo
Não aplicável.
5. Definições
Não aplicável
6. Reações
7.1. Ácido Sulfúrico p.a.

7.2. Solução de ácido sulfúrico 72%
7.2.1. Preparo: Em um balão volumétrico de 250 mL, contendo aproximadamente 40 mL de água destilada,
adicionar 180 mL de ácido sulfúrico p.a. Adicionar lentamente o ácido pelas paredes do balão, deixar a
solução esfriar e completar o volume com água destilada.
127
7.4. Cadinho de vidro borossilicato nº.2 (porosidade 90 a 150 micra), cap. 50 mL
7.5. Dessecador com sílica gel
8. Equipamentos

8.4. Mufla
9. Amostragem
10. Procedimento
10.1. Colocar o cadinho filtrante com o resíduo da fibra em detergente ácido em um béquer de 100 mL,
contendo aproximadamente 10 mL de ácido sulfúrico 72%. Adicionar 30mL de H2SO4 72% dentro do
cadinho para umedecer a amostra.
10.2. Com um pequeno bastão de vidro, mexer ocasionalmente para misturar a amostra e o ácido e
permitir que o ácido entre em contato com todas as partículas da amostra. Manter sempre a amostra
coberta de ácido, durante 3 horas.
10.3. Após as 3 horas, filtrar sob vácuo até esgotar e enxaguar abundantemente com água quente, até a
retirada total do ácido.
10.4. Levar o cadinho para estufa a 105°C por 3 horas. Esfriar o cadinho em dessecador e pesar.
10.5. Em seguida, colocar o cadinho filtrante na mufla a 550°C e queimar por 3 horas.
10.6. Remover o cadinho da mufla quando estiver abaixo de 250°C. Esfriar em dessecador e pesar
novamente.
11. Cálculo
Onde:
A Peso do cadinho vazio, em grama

B Peso do cadinho + lignina, em grama
C Peso do cadinho + cinzas, em grama
128
12. Bibliografia
129
MÉTODO Nº 34
Manganês -
Colorimetria
3 páginas
1. Introdução
A determinação de Manganês por colorimetria é utilizada como alternativa à metodologia por

Espectrofotometria de Absorção Atômica.
Fundamenta-se na oxidação do manganês em meio ácido. O periodato oxida lentamente os sais de
manganês a permanganato, com coloração característica que é medida colorimetricamente.
2. Recomendações
Observar as precauções de segurança dos reagentes ácido clorídrico, ácido nítrico e ácido fosfórico.
3. Escopo
Método aplicável em sulfato de manganês e óxidos de manganês.
Não aplicável.
5. Definições
Não aplicável.
6. Reações

7.4. Metaperiodato de potássio (KIO4) p.a.
7.5. Sulfato de manganês monohidratado (MnSO4.H2O) p.a.
7.6. Ampola padrão de Manganês (1,000g ± 0,002).
7.7. Solução padrão de manganês
130
7.7.1. Preparo: Pesar exatamente 0,3076 g de MnSO4.H2O, solubilizar e transferir quantitativamente para
balão volumétrico de 100 mL. Completar o volume e homogeneizar. Cada mL desta solução contém 1,0
mg de manganês.
7.9. Béquer
7.10. Bureta
7.11. Pipeta volumétrica
8. Equipamentos

8.2. Fotocolorímetro ou Espectrofotômetro
9. Amostragem
10. Procedimento
10.1. Confecção da Curva Padrão:

10.1.1. Transferir volumetricamente alíquotas de 0,5 mL; 1,0 mL; 2,0 mL e 3,0 mL da solução padrão para
béquer de 600 mL.
10.1.2. Adicionar em cada alíquota 100 mL de água destilada, 10 mL de HNO3 p.a., 10 mL de H3PO4 p.a. e
0,5 g de KIO4.
10.1.3. Ferver por 10 minutos até que a solução adquira coloração semelhante à do permanganato.
10.1.4. Esfriar e transferir para balão volumétrico de 200 mL, completar o volume e homogeneizar.
10.1.5. Fazer as leituras em absorbância após zerar com o branco (todos os reagentes utilizados no
preparo da curva, exceto a solução padrão), usando 530 nm de comprimento de onda ou o estabelecido
por meio de varredura.
A alíquota a ser tomada da solução a ser analisada deverá estar na faixa da curva padrão.
10.2.1. Pesar 0,5 g da amostra previamente moída e homogeneizada. Transferir para béquer de 250 mL.
10.2.2. Adicionar 8 mL de HCl p.a., aquecer em placa aquecedora e evaporar até quase secura.
10.2.3. Dissolver em água destilada e transferir quantitativamente para balão volumétrico de 500 mL,
completar o volume e homogeneizar. Filtrar, desprezando os primeiros 10 mL.
10.2.4. Retirar do filtrado uma alíquota de 5 mL e transferir para béquer de 600 mL e prosseguir conforme
os passos 10.1.2, 10.1.3, 10.1.4 e 10.1.5.
11. Cálculos
131
Onde:
LA Leitura da Amostra (abs)

LP Leitura do Padrão (abs)
P Peso da Amostra na alíquota, em mg
12. Bibliografia
ASSOCIATION OF OFFICIAL ANALYTICAL CHEMISTS; HELRICH, Kenneth; AOAC INTERNATIONAL. Official

methods of analysis. 14. ed. Ed. Arlington, 1984
132
MÉTODO Nº 35
Métodos Analíticos Matéria Insaponificável Revisão: 2009
4 páginas
1. Introdução
Matéria insaponificável são substâncias que freqüentemente se encontram dissolvidas nas gorduras e
óleos e que não podem ser saponificadas por tratamento usual com soda (NaOH), mas são solúveis em
solventes normais para gorduras e óleos. Incluem-se neste grupo de componentes, alcoóis alifáticos de
alto peso molecular, esteróis (sitosterol, colesterol, tocoferóis), pigmentos e hidrocarbonetos.
Geralmente os níveis encontrados e aceitáveis são:
• Teor em óleos vegetais – em geral, entre 1 a 2%
• Óleo de abacate: até 7% (avocatinas)
• Óleo de café: até 12% (álcoois diterpênicos)
2. Recomendações

produtos químicos.
3. Escopo
O método é aplicável a gorduras e óleos animais e vegetais, não sendo adequado para gorduras e óleos
contendo quantidade excessiva de matéria insaponificável, como os óleos marinhos. Este método também
não é aplicável para alimentos com elevado teor de gordura.
Não aplicável.
5. Definições
Não aplicável.
6. Reações
7.1. Etanol 95% (C2H5OH) p.a.

133
7.6. Solução reagente de hidróxido de potássio 50% (p/v)
7.6.1. Preparo: Dissolver 100g de KOH p.a em água destilada, esfriar e completar o volume para 200 mL.
7.7. Solução volumétrica padronizada de hidróxido de sódio 0,02 M
7.7.1. Preparo: Pesar cerca de 0,82g de NaOH p.a. e dissolver em água destilada. Transferir
quantitativamente para balão volumétrico de 1000 mL, completar o volume e homogeneizar.
7.7.2. Padronização: Pesar exatamente 1,5 g de biftalato de potássio p.a. previamente seco em estufa a
105oC por duas horas. Dissolver em erlenmeyer com aproximadamente 75 mL de água destilada. Adicionar
4 gotas de solução indicadora de fenolftaleína e titular gotejando a solução de NaOH 0,02 M até coloração
levemente rósea.
Onde:

V Volume da solução de NaOH 0,02M gasto na titulação, em mL
7.8. Solução alcoólica indicadora de fenolftaleína 1%

7.8.1. Preparo: Dissolver 1,0 g de fenolftaleína p.a. em aproximadamente 40 mL de água destilada. Transferir
para balão volumétrico de 100 mL, completar o volume com etanol e homogeneizar.
7.9. Solução de etanol 10%
7.9.1. Preparo: Misturar 10 mL de etanol p.a. 95% em 90 mL de água destilada.
7.12. Bureta (div. 0,05 mL)
7.13. Condensador de refluxo
7.14. Erlenmeyer ou balão Soxhlet de 250 mL
7.15. Funil de separação de 500 mL
7.16. Funil de vidro haste curta
8. Equipamentos

8.2. Banho termostático
8.3. Estufa de secagem com circulação de ar forçada 100oC (precisão ± 5oC)
134
9. Amostragem
10. Procedimento
10.1. Pesar em erlenmeyer ou balão Soxhlet, 5 g da amostra bem homogeneizada.

10.2. Adicionar 30 mL de etanol 95% p.a. e 5 mL da solução de KOH 50%. Ferver brandamente sob refluxo
durante uma hora ou até completa saponificação.
10.3. Adicionar 40 mL de etanol p.a. 95% e 40 mL de água destilada para solubilizar a amostra saponificada.
10.4. Transferir a amostra fria para um funil de separação de 500 mL, lavando as paredes do erlenmeyer
com pequenas porções de éter de petróleo p.a., para retirada de toda a amostra.
10.5. Adicionar 50 mL de éter de petróleo p.a.. Agitar antes de tampar o funil de separação para a liberação
dos gases e, após tampar, agitar vigorosamente durante 1 minuto. Deixar em repouso até que as fases se
separem.
10.6. Recolher a camada inferior em béquer para nova extração e transferir a camada superior para um
segundo funil de separação.
10.7. Repetir os itens 10.5 e 10.6 por mais 6 vezes.
10.8. Lavar os extratos combinados no segundo funil de separação no mínimo 5 vezes, com porções de
25 mL de solução de etanol p.a. 10%, agitando vigorosamente e desprezando a camada alcoólica (inferior).
10.9. Transferir a fração etérea (superior), filtrando sobre papel de filtro para balão Soxhlet ou erlenmeyer
previamente tarado. Lavar o papel de filtro com porções de éter de petróleo p.a.
10.10. Recuperar o éter de petróleo em conjunto Soxhlet e evaporar o solvente remanescente em banho
termostático. Completar a secagem em estufa com circulação de ar forçada a 100oC por uma hora. Esfriar
em dessecador até equilíbrio com a temperatura ambiente e pesar. Repetir a operação de secagem
durante 30 minutos até peso constante.
10.11. Após a pesagem, dissolver o resíduo em 50 mL de etanol previamente neutralizado, usando solução
de fenolftaleína 1% como indicador e à temperatura aproximada de 50oC. Titular com solução de hidróxido
de sódio 0,02 M até coloração rósea. Corrija a massa do resíduo para ácidos graxos livres contidos,
usando a seguinte relação: 1 mL de solução de NaOH 0,02 M equivale a 0,0056 g de ácido oléico.
11. Cálculos
Onde:
A Massa do resíduo obtido após a secagem, em grama

B Massa do ácido graxo determinado por titulação. Fazer conversão conforme abaixo,
antes de fazer o cálculo da matéria insaponificável:
Peso ácidos graxos (g) = mL gasto da solução de NaOH 0,02 M x MR x 0,0056
135
12. Bibliografia
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Normas Analíticas do Instituto Adolfo Lutz.: Métodos químicos e físicos para
análise de alimentos. 4. ed. São Paulo: PROL, 2005. p. 606-608
Chemists Society. AOCS, 1990. AOCS Official method, Ca 6a-40.
136
MÉTODO Nº 36
Cinzas ou
Matéria Mineral
2 páginas
1. Introdução
É o resíduo inorgânico resultante da queima da amostra a uma temperatura de 550 a 600°C, fornecendo
dados da quantidade de minerais totais contidos nos produtos de origem vegetal, animal ou de misturas.
2. Recomendações
Antes da aplicação do método é imprescindível observar as condições de segurança operacional do

método.
3. Escopo
Aplicável a produtos ou subprodutos de origem animal, vegetal ou mineral, rações e concentrados.
Não aplicável.
5. Definições
Não aplicável
6. Reações
Não aplicável
7.1. HNO3 p.a. ou água oxigenada 30 volumes

7.2. Cadinho ou cápsula de porcelana
8. Equipamentos

8.2. Forno mufla
137
9. Amostragem
A amostra deve estar homogênea, devendo-se avaliar a necessidade de moagem prévia.
10. Procedimento
O resíduo obtido na queima da amostra, pode não representar toda a substância inorgânica, pois alguns
sais sofrem redução ou volatilização nesta faixa de temperatura.
10.1. Pesar o cadinho ou cápsula de porcelana, limpo e previamente calcinado em mufla a 550°C - 600°C
por 30 minutos e resfriado em dessecador até equilíbrio com a temperatura ambiente.
10.2. Pesar de 2 a 3 g da amostra no cadinho ou cápsula.
10.3. Levar à mufla e gradualmente aumentar a temperatura (550°C - 600°C) até obtenção de cinzas claras
(3 horas no mínimo). Opcionalmente pode-se efetuar pré-queima em placa aquecedora ou bico de Bunsen,
transferindo em seguida para o forno mufla (550°C - 600°C).
10.4. Não se obtendo cinzas claras após o período mínimo de calcinação, recomenda-se a adição de 2
a 3 gotas de HNO3 p.a. ou água oxigenada 30 volumes e retorno ao forno mufla por mais uma hora.
10.5. Retirar a 250°C - 300°C, esfriar em dessecador até equilíbrio com a temperatura ambiente.
10.6. Pesar.
11. Cálculo
Onde:
A Peso do recipiente + resíduo, em grama

B Peso do recipiente, em grama
12. Bibliografia
análise de alimentos, v.1. 4.ed. São Paulo: PROL, 2005. P. 105 – 106

Analytical Chemists . Arlington: A.O.A.C., 1995. method 900.02. c. 44. p. 3
138
MÉTODO Nº 37
Métodos Analíticos Matéria Pré-Seca Revisão: 2009
2 páginas
1. Introdução
O método é utilizado para produtos ou subprodutos de Origem animal e vegetal que apresentam teores
elevados de umidade impossibilitando determinados procedimentos analíticos ou quando alterações de
nutrientes ou perdas em condições ambientes.
2. Recomendações
Não aplicável.
3. Escopo
Aplicável a produtos ou subprodutos de origem animal e vegetal que apresentem teores elevados de
umidade, impossibilitando determinados procedimentos analíticos ou quando ocorrem alterações de
nutrientes ou perdas em condições ambientes.
Não aplicável.
5. Definições
Peso da bandeja refere-se ao peso da bandeja de alumínio vazia.
6. Reações
Não aplicável.
7.1. Bandejas de Alumínio (22 X 16 X 6 cm)
8. Equipamentos

8.2. Estufa de secagem com renovação e circulação forçada de ar 55 ± 5°C
139
9. Amostragem

Forragens verdes, silagens e tubérculos devem ser cortados com instrumento inoxidável, antes da pré-
secagem.
10. Procedimento
10.1. Pesar aproximadamente 300g de amostra, dispondo-a de forma homogênea em bandeja de alumínio
previamente tarada.
10.2. Colocar em estufa com renovação e circulação forçada de ar a 55 ± 5°C por um período de 48 a 72
horas ou até que o material apresente consistência quebradiça, permitindo a moagem.
10.3. Retirar da estufa e deixar esfriar a temperatura ambiente até equilíbrio com a umidade.
10.4. Pesar o conjunto bandeja + amostra.
11. Cálculos
Onde:
A Peso da bandeja + amostra após secagem, em grama

B Peso da bandeja, em grama
12. Bibliografia
SILVA, Dirceu Jorge, QUEIROZ, Augusto César de. Análise de Alimentos – Métodos Químicos e Biológicos.
3.ed. Viçosa: Ed. UFV, 2006. p. 23-29
140
Determinação de Metais por MÉTODO Nº 38
Espectrofotometria de
Métodos Analíticos Absorção Atômica (EAA) ou Revisão: 2009
Plasma de Argônio
Indutivamente Acoplado (ICP) 4 páginas
1. Introdução
Baseia-se na extração, por calcinação e/ou digestão ácida, do elemento mineral contido na amostra e a
determinação da sua concentração por meio da técnica de absorção atômica.
2. Recomendações

produtos químicos.
3. Escopo
Método aplicável para determinação de Cálcio, Magnésio, Sódio, Potássio, Cobalto, Cobre, Zinco, Ferro,
Manganês, Níquel, Cromo, Cádmio e Chumbo em ingredientes minerais e suas misturas, produtos ou
subprodutos de origem animal e vegetal, rações e concentrados.
Não aplicável.
5. Definições
Não aplicável.
6. Reações
Não aplicável.
Podem-se usar padrões diluídos certificados (ampolas ou similar) para preparação dos pontos da curva
analítica. Recomenda-se não utilizar a solução padrão de 1000 mg/L (solução estoque) para preparar as
soluções de trabalho. Usa-se somente para preparar a solução de 100 mg/L.
7.1 Solução de HCl - 1:3 v/v.

7.1.1 Preparo: Diluir uma (1) parte de HCl p.a. em três (3) partes de água destilada / deionizada e
homogeneizar. Proceder exatamente na ordem descrita.
141
7.2. Solução Matriz do elemento - 1000 mg/L
7.2.1. Preparo: Preparar através de Ampola padrão, Padrões primários ou similares do elemento de
interesse. Solução padrão pronta poderá ser adquirida, preferencialmente com Certificado.
Seguir orientações do fabricante, quando aplicável.
7.3. Solução Padrão do elemento - 100 mg/L
7.3.1. Preparo: Solução padrão pronta poderá ser adquirida, preferencialmente com Certificado. Partindo
da Matriz de 1000 mg/L, realizar diluições proporcionais de 1:10 v/v. Transferir para balão volumétrico,
completar o volume com água deionizada e/ou destilada e homogeneizar. Armazenar em frasco de
polietileno.
7.4.1. Preparo: Pipetar da solução padrão 100 mg/L do elemento e transferir para balões volumétricos,
pelo menos 3 diferentes alíquotas, estabelecidas de acordo com a faixa ótima de trabalho do elemento,
conforme orientação do fabricante. Pode-se usar a seguinte equação para calcular o volume a pipetar,
para as soluções de trabalho desejadas:
NOTA: Partindo da solução de 100 mg/L e utilizando balão final de 100 mL, o volume a pipetar será igual
ao valor desejado.
Adicionar ácido clorídrico a cada balão, para atingir concentração final de aproximadamente 10 mL/L do
ácido. Completar os volumes com água destilada e/ou deionizada e homogeneizar.
7.5. Branco
7.5.1. Preparo: Diluir em balão volumétrico de 100mL a mesma quantidade de ácido clorídrico contido na
alíquota final da solução da amostra. Se tiver sido utilizada substância supressora, esta também deverá
ser adicionada ao balão na mesma quantidade. Completar o volume com água destilada e/ou deionizada
e homogeneizar.
7.6. Solução supressora de trióxido de lantânio 50 g/L – Solução a ser adicionada nas determinações de
cálcio (Ca), magnésio (Mg) e sódio (Na)
7.6.1. Preparo: Pesar exatamente 58,65g de trióxido de lantânio. Sob refrigeração, lenta e cuidadosamente,
adicionar 250 mL de ácido clorídrico p.a. Esfriar, transferir e completar o volume com água destilada e/ou
deionizada em balão volumétrico de 1000mL. Homogeneizar.
NOTA: por questão de segurança, poderá utilizar o volume de ácido clorídrico, diluído em água.
7.8. Cadinho de porcelana ou quartzo de 50mL
7.9. Copo béquer ou Erlenmeyer
8. Equipamentos
8.1. Balança Analítica (resolução de 0,0001g)

8.2. Espectrofotômetro de absorção atômica (EAA) ou Plasma de Argônio Indutivamente Acoplado (ICP)
8.3. Forno Mufla
142
9. Amostragem
10. Procedimento
10.1. Para ingredientes e misturas minerais

10.1.1. De acordo com a concentração estimada do metal na amostra, pesar de 0,5 a 5,0g com aproximação
de 0,1 mg. Desenvolver paralelamente uma prova em branco e amostra de verificação.
10.2. Para produtos e subprodutos de origem animal e vegetal, rações e concentrados
10.2.1. Proceder conforme o item 10.1, porém, realizar a pesagem da amostra em cadinho de porcelana
ou quartzo e calcinar por quatro horas a 550°C.
10.3. Transferir a massa pesada em 10.1.2 ou a Matéria Mineral obtida em 10.2.2 após a calcinação, para
copo béquer ou erlenmeyer e adicionar 50 mL de solução de ácido clorídrico 1:3.
NOTA: usar a solução de HCl 1:3 para transferir a Matéria Mineral obtida em 10.1.2.
10.4. Levar à placa aquecedora, aquecer e reduzir a até 1/3 do volume inicial.
10.5. Transferir para balão volumétrico de capacidade adequada. Lavar o material com porções de água
destilada e/ou deionizada até a completa transferência da amostra.
10.6. Completar o balão com água destilada e/ou deionizada, avolumar e homogeneizar. Filtrar, se
necessário, em papel de filtro de porosidade média.
10.7. Fazer outras diluições, se necessário, adequando a concentração do elemento na amostra à curva
padrão previamente estabelecida.
NOTA: igualar a adição de HCl entre os padrões e a amostra.
Para as determinações de cálcio (Ca), magnésio (Mg) e sódio (Na), por EAA, adicionar 10 mL de trióxido
de lantânio 50 g/L nas soluções finais dos padrões e amostras.
10.8. Colocar o EAA (combinação de gases, queimador, lâmpada, comprimento de onda, fenda, chama
adequada) ou ICP, nas condições operacionais para determinação do elemento, conforme orientação do
fabricante.
10.9. Calibrar o aparelho com o branco e os padrões. Conferir a calibração, mediante a leitura da amostra
de verificação.
10.10.Fazer a leitura da concentração da amostra.
11. Cálculos
143
Onde:
C Concentração do elemento na solução da amostra, em mg/L

V Volume inicial da solução da amostra, em mL
P Massa da amostra, em grama
FD Fator de diluição (volume balão / volume pipeta), em mL
12. Bibliografia
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Métodos físico-químicos para análise de alimentos. 4. ed., 2005. p. 740.

Association of Analytical Chemists. 14. ed., 1984. p. 164.
VOGEL, Arthur Israel. Análise química quantitativa. 5. ed, 1992. p. 646-654.
preparação, purificação. 2. ed., 1972. p. 399, 414.
144
Micotoxinas (Aflatoxinas MÉTODO Nº 39
Métodos Analíticos B1, B2, G1 e G2, Revisão: 2009

Ocratoxina, Zearalenona e
Esterigmatocistina) 8 páginas
1. Introdução
Micotoxinas são metabólitos tóxicos produzidos por alguns fungos denominados de fungos toxigênicos,
sendo os principais representantes os dos gêneros Aspergillus, Penicillium e Fusarium, que infectam
produtos e subprodutos agrícolas.
Estas toxinas são carcinogênicas, mutagênicas e teratogênicas e, dependendo da dosagem, causam
doenças ou mesmo a morte quando ingeridas pelo homem ou pelos animais domésticos.
As Micotoxinas não são completamente removidas por processos de descontaminação industrial, por
isso a importância do controle de qualidade. Entre as principais micotoxinas de interesse na área de
alimentos citamos: aflatoxinas, patulina, ocratoxina, zearalenona, tricotecenos, fumonisinas entre outras.
As Micotoxinas determinadas por este método são:
Aflatoxinas: produzidas por fungos do gênero Aspergillus flavus e Aspergillus parasiticus. Estes fungos
produzem vários tipos de Aflatoxinas como B1, B2, G1, G2 e M1, entretanto, a Aflatoxina B1 é a mais
freqüente de todas e a mais potente em toxicidade. A aflatoxina M1 é derivada da ingestão de aflatoxina (
B1, B2, G1, G2 ) ela é encontrada no leite e seus derivados.
Porcentagem de Toxicidade das Aflatoxinas:
Aflatoxina B1 tem 100%;
Aflatoxina B2 tem 50%;
Aflatoxina G1 tem 25%;
Aflatoxina G2 tem 12,5%;
Esterigmatocistina: produzida por fungo do gênero Aspergillus versicolor e Aspergillus nidulans.
Ocratoxina: produzida por fungo do gênero Aspergillus ochraceus e várias espécies do fungo Penicillium,
somente a Ocratoxina A é de importância toxicológica.
Zearalenona: é uma micotoxina estrogênica produzida pelo fungo do gênero Fusarium graminearum e
Fusarium moniliforme.
2. Recomendações

produtos químicos e padrões de toxinas.
145
3. Escopo
Aplicável em milho, amendoim, trigo, triticale, cevada, centeio, farelos, canjicas, quireras, farinhas, rações
e outros tipos de alimentos destinados para consumo humano ou animal.
Não aplicável.
5. Definições
Não aplicável
6. Reações
7.1. Acetato de Etila p.a.

7.2. Acetona p.a.
7.3. Ácido Fórmico p.a.
7.5. Ácido Trifluoracético p.a.
7.6. Celite p.a.
7.7. Cloreto de Alumínio p.a.
7.8. Cloreto de Potássio p.a.
7.10. Dicromato de Potássio p.a.
7.11. Etanol p.a.
7.12. Metanol p.a.
7.13. Padrões para Aflatoxinas, Ocratoxina, Esterigmatocistina e Zearalenona (Diluídos)
7.14. Sulfato de Amônio p.a.
7.15. Sulfato de Cobre Penta Hidratado p.a.
7.16. Sulfato de Sódio Anidro p.a.
7.17. Toluol p.a.
7.18. Solução de ácido sulfúrico 0,009M
7.18.1. Preparo: Pipete 1 mL de ácido sulfúrico e transfira para balão volumétrico de 2000 mL e complete
o volume com água.
7.19. Solução A (dicromato de potássio 0,25mM)
7.19.1. Preparo: Pese aproximadamente 78 mg (0,078 g) de dicromato de potássio previamente dessecado
e dissolva em 1000 mL de ácido sulfúrico 0,009M.
7.20. Solução B (dicromato de potássio 0,125mM)
7.20.1. Preparo: Pipete 25 mL da solução A e transfira para um balão de 50 mL e complete o volume com
solução de ácido sulfúrico 0,009M.
7.21. Solução C (dicromato de potássio 0,0625 mM)
146
7.21.1. Preparo: Pipete 25 mL da solução B e transfira para balão de 50 mL e complete o volume com
solução de ácido sulfúrico 0,009M.
7.22. Solução de Cloreto de Potássio 4%
7.22.1. Preparo: Pesar 40g de Cloreto de Potássio e diluir em balão volumétrico de 1000 mL com água
destilada
7.23. Solução de Sulfato de Amônia 30%
7.23.1. Preparo: Pesar 300g de Cloreto de Amônia e diluir em balão volumétrico de 1000mL com água
destilada.
7.24. Solução de Sulfato de Cobre Penta Hidratado 10%
7.24.1. Preparo: Pesar 100g de Sulfato de Cobre e diluir em balão volumétrico de 1000 mL com água
destilada.
7.25. Solução de Ácido Sulfúrico 20%
7.25.1. Preparo: Adicionar cuidadosamente 20 mL de Ácido Sulfúrico concentrado em um béquer contendo
50 mL de água. Após esfriar completar o volume em balão volumétrico 100 mL com água destilada.
7.26. Solução de Cloreto de Alumínio 20%
7.26.1. Preparo: Pesar 20 g de Cloreto de Alumínio e dissolver em balão volumétrico de 100 mL com
álcool etílico a 74%.
7.28. Béquer de 600, 400, 50 mL
7.29. Cromatofolhas ou cromatoplacas de sílica gel 20x20 cm e 0,25 mm de espessura
7.30. Cuba com tampa para Cromatografia em Camada Delgada
7.31. Espátula de alumínio
7.32. Frasco âmbar (≅ 20ml)
7.33. Funil de separação tipo pêra de 500 mL
7.34. Funil de vidro Ø 11 e 5 cm
7.35. Lã de vidro
7.36. Micropipeta
7.37. Microseringa
7.38. Nebulizador de vidro de 150 mL (Sistema com ar comprimido ou semelhante)
7.41. Pipetador automático
7.42. Proveta de 500, 250, 25 e 10 mL
8. Equipamentos

8.2. Banho Maria
8.3. Câmara Escura - Luz Ultra Violeta 366 nm
8.5. Liquidificador
8.6. Ultra-Som
9. Amostragem
147
10. Procedimento
10.1. Procedimento de verificação:

10.1.1. Avaliação de desempenho espectrofotômetro
10.1.1.1. Ler as absorbâncias das soluções 0,25 / 0,125 e 0,065 mM de dicromato de potássio, a 350nm,
usando como branco a solução de ácido sulfúrico 0,009 M. Em seguida calcular separadamente, a
absortividade molar de cada uma das soluções e o fator de correção do espectrofotômetro.
Cálculo:
Onde:
A Absorbância das soluções de dicromato de potássio, calculadas separadamente.

C Concentração das soluções de dicromato de potássio em mM
Tirar a média dos 3 valores de absortividade molar:
Onde:
εa Absortividade molar da solução de dicromato de potássio 0,25 mM

εb Absortividade molar da solução de dicromato de potássio 0,125 mM
εc Absortividade molar da solução de dicromato de potássio 0,065 mM
Determinar o fator de correção (CF) para o espectrofotômetro substituindo na equação:
Onde:
3160 Valor de absortividade molar para soluções de dicromato de potássio.

absortividade molar média
O intervalo de aceitabilidade do fator de correção (CF) é o obtido entre 0,95 e 1,05. Se o valor do fator de
correção estiver fora do intervalo aceitável, teste novamente o aparelho. Se o valor persistir, o aparelho
está descalibrado e necessita de reparo técnico.
148
10.1.2. Checagem concentração micotoxinas
10.1.2.1. Dissolução dos padrões de micotoxina em solventes:
Solvente 1 = metanol
Solvente 2 = tolueno-acetonitrila (9+1)
Solvente 3 = benzeno-ácido acético (99+1)
Solvente 4 = benzeno
Solvente 5 = clorofórmio
Solvente 6 = tolueno
Solvente 7 = heptano
10.1.2.2. Após a dissolução dos padrões de micotoxinas em seus respectivos solventes, ler as
absorbâncias nos comprimentos de onda de máxima absorção e determinar a concentração, usando os
dados fornecidos na tabela acima, através do seguinte cálculo:
Onde:
A absorbância
CF fator de correção do aparelho
PM peso molecular da micotoxina
ε absortividade molar da micotoxina
10.1.3. Procedimento analítico

10.1.3.1. Pesar 50 g de amostra moída e bater no liqüidificador por 5 minutos com 270 mL de Metanol pa.
e 30 mL de Solução Cloreto de Potássio 4%.
149
10.1.3.2. Filtrar qualitativamente toda a amostra e retirar, utilizando proveta, 150 mL do filtrado. Transferir
para um béquer de 600 mL. Adicionar 150 mL de Sulfato de Amônia 30% ( ou Solução de Sulfato de Cobre
10%) e 10g de Celite, misturar com uma bastão de vidro e filtrar qualitativamente.
Nota: para feijão, arroz e amendoim, use como clarificante a solução de cobre 10% e para milho e mandioca,
a solução de sulfato de amônia 30%.
10.1.3.3. Retirar 150 mL do filtrado e transferir quantitativamente para um funil de separação de 500 mL com
150 mL de água destilada e 10 mL de Clorofórmio.
10.1.3.4. Agitar cuidadosamente por 3 minutos (abrindo a torneira do funil para aliviar o gás formado) e
deixar separar as fases. Se não houver separação, acrescentar mais 10 mL de Clorofórmio.
10.1.3.5. Recolher a fase do clorofórmio em um béquer 50 mL com funil contendo lã de vidro e sulfato de
sódio. Repetir a extração com 10 mL de clorofórmio . Em seguida, medir o volume em proveta e colocar
em frasco âmbar para evaporar o clorofórmio em banho maria.
10.1.3.6. Diluir o produto da evaporação em clorofórmio de acordo com a conveniência (normalmente 300
µl), utilizando micropipeta. Dissolver em ultra-som.
10.1.4. Triagem das micotoxinas
10.1.4.1. Aplicar 4 vezes na cromatoplaca 3, 5 ou 7µl do extrato da amostra, utilizando microseringa.
Sobre uma das alíquotas, aplicar uma quantidade adequada dos padrões, geralmente 1µl .
10.1.4.2. Colocar a cromatofolha em cuba de vidro, contendo a fase móvel tolueno-acetato de etila-ácido
fórmico (60+40+10).
10.1.4.3. Deixar eluir até restar aproximadamente 1 cm para atingir a borda superior da placa.
10.1.4.4. Retirar da cuba e deixar evaporar em capela.
10.1.4.5. Observar a placa em câmara escura e lâmpada UV a nível qualitativo, para verificar presença de
aflatoxina e ocratoxina.
10.1.4.6. Em seguida, nebulizar a placa com Cloreto de Alumínio 20% e levar à estufa 105°C por 3
minutos.
10.1.4.7. Decorrido o tempo de 3 minutos, observar novamente sob lâmpada UV a possível presença das
toxinas zearalenona e esterigmatocistina.
10.1.5. Quantificação
10.1.5.1. Aplicar, separadamente para cada micotoxina, volumes correspondentes a 3, 5, 7 e 10 µl do
extrato da amostra e do padrão.
10.1.5.2. Para quantificação de aflatoxinas, desenvolver as placas em acetona-clorofórmio (10:90).
10.1.5.3. Para quantificação de ocratoxina A desenvolver as placas em tolueno-acetato de etila-ácido
fórmico (50:40:10).
10.1.5.4. Para quantificação de zearalenona e esterigmatocistina, desenvolver as placas em tolueno-
acetato de etila-ácido fórmico (60:40:10), seguida de pulverização com solução de cloreto de alumínio
20%.
10.1.5.5. Compare a intensidade de fluorescência da mancha da micotoxina da amostra com as do padrão
e determine qual das manchas da amostra corresponde a uma das do padrão. Se a intensidade da
fluorescência da mancha de menor volume da amostra for maior que a do padrão, a amostra deverá ser
diluída e recromatografada.
10.1.6. Testes confirmatórios para aflatoxinas
10.1.6.1. A confirmação da micotoxina analisada poderá ser realizada da seguinte maneira:
10.1.6.1.1. Reação com ácido sulfúrico: Pulverize a placa com H2SO4 20%. Deixe secar e observe sob
lâmpada UV. A fluorescência da aflatoxina muda de azul ou verde para amarelo. Este teste somente
confirma a ausência de aflatoxinas.
10.1.6.1.2. Reação com TFA (ácido trifluoroacético): Marque uma placa, verticalmente, dividindo-a em
duas regiões e em cada uma delas cromatografe dois pontos da amostra e dois do padrão. Em uma das
150
regiões sobreponha 1 µl da solução de TFA em um dos pontos da amostra e em um dos pontos dos
padrões(em cima do spot de B1). Aqueça a placa por 10 minutos a (35-40)°C e desenvolva o cromatograma
com clorofórmio-acetona (85:15 ou 9+1). Examine a placa sob lâmpada UV. A aflatoxina com TFA aparecerá
em 1/3 do Rf da aflatoxina original.
10.1.6.1.3. Testes confirmatórios para ocratoxina A:
a) mudança da fase móvel para hexano-acetato de etila-ácido acético (10:30:10);
b) reação química: Exponha a placa com a mancha suspeita de conter ocratoxina A ao vapor de
amônia. A fluorescência da ocratoxina A na luz UV passa de verde para azul brilhante com aumento da sua
intensidade.
c) derivatização com trifluoreto de boro a 14% em metanol: Adicione 50 µl deste composto ao
frasco com o resíduo seco da amostra. Leve a uma placa aquecedora a 65°C por 15 minutos. O resíduo
do solvente deve ser removido usando nitrogênio. Redissolva em volume adequado de acetonitrila para
a cromatografia. Aplique em uma placa, 10 µl do extrato original da amostra e 10µl do extrato que reagiu
com BF3. Desenvolva o cromatograma em benzeno-metanol-ácido acético (18:1:1) e examine a placa sob
luz UV. O éster formado tem Rf mais elevado do que o da ocratoxina A, mas com a mesma fluorescência.
11. Cálculo
Onde:
Conc Pd Concentração do Padrão, em µg/mL

Vol apl Pd Volume aplicado do Padrão, em µL, comparado com aquele que
assemelha ao da amostra
Dil final do extrato Diluição final do extrato feita com clorofórmio, em µL, depois da
evaporação
Vol apl am Volume aplicado da amostra, em µL, comparado com aquele que
assemelha ao da amostra
Peso am Peso da amostra na partição, em grama
12. Bibliografia
AMAYA, Délia B. Rodrigues; SOARES, Lúcia Valente. Screening and quantification of ochratoxin A in corn,
peanuts, beans, rice and cassava. J. Assoc. Off. Anal. Chem., 1985. v. 68 p. 1128-1130.
AMAYA, Délia B. Rodrigues; SOARES, Lúcia Valente. Survey of Aflatoxins, Ochratoxin A, Zearalenone and
Sterigmatocystin in Some Brazilian Foods by using Multi-toxins thin-layer chromatografic Method. J. Assoc.
Off. Anal. Chem., 1989. v. 72. p. 22-26.
AOAC. Official Methods of Analysis.15.ed. 1990 c.49. p.1184-1213.
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Métodos físico-químicos para análise de alimentos. 4. ed. 2005. método 407/IV.
151
MÉTODO Nº 40
Espectrofotometria de
Métodos Analíticos Reflectância no Infra Revisão: 2009
Vermelho Próximo (NIR) 2 páginas
1. Introdução
A radiação no infravermelho próximo (NIR) é utilizada principalmente para a determinação quantitativa

rotineira de espécies como água, proteínas, hidrocarbonetos de baixo peso molecular e gorduras em
produtos das indústrias agrícolas, alimentícias, petrolíferas e químicas. Tanto medidas de reflexão como
de transmissão são utilizadas, embora a reflectância seja mais empregada. Suas absortividades molares
são pequenas e os limites de detecção estão na ordem de 0,1%.
A parte do espectro eletromagnético visível ao olho humano se estende de 400 a 730 nm, enquanto que
o espectro eletromagnético do infravermelho (IV) vai de 2500 a 600000 nm. A região intermediária entre o
IV e o espectro visível é denominada de infravermelho próximo.
2. Recomendações
A estabilidade do equipamento pode ser interferida por variações na corrente elétrica (picos de energia),
vibração na bancada (local onde se encontra o aparelho instalado), corrente de ar.
A heterogeneidade das amostras também provoca interferência nos resultados. De forma geral, as amostras
devem ser homogêneas e consistentes com a amostra da calibração.
3. Escopo
Aplicável em amostras de origem orgânica.
Verificar manual específico de cada equipamento.
5. Definições
Calibração: Sugere-se que uma calibração deve conter no mínimo 100 amostras, de acordo com a
recomendação do fabricante, com análises via úmida inserindo os resultados no espectro da amostra.
Considera-se que uma calibração ideal deve apresentar um coeficiente de correlação > 95%.
Amostra de referência: é aquela utilizada para verificar a calibração do equipamento.
NIR: Near Infrared.
152
6. Reações
Não aplicável.
7.1. Moinho
7.2. Célula de Leitura
7.3. Espátula
7.4. Pincel
8. Equipamentos
8.1. Espectrofotômetro de Infravermelho Próximo.
9. Amostragem

As amostras devem ser preparadas conforme a necessidade de cada equipamento (moído ou não moído),
considerando a homogeneidade como um fator importante para a representatividade da curva de calibração.
10. Procedimento
10.1. Preparar a amostra.

10.2. Transferir a amostra previamente homogeneizada para a célula com auxílio da espátula.
10.3. Inserir a célula no equipamento e selecionar a curva de acordo com a amostra a ser analisada. O
início da leitura será selecionado de acordo com o manual do equipamento.
10.4. Ao término da leitura o programa apresentará o resultado.
11. Cálculos
Cada programa realizará o cálculo de acordo com a curva de calibração.
12. Bibliografia
FOSS QUICK START GUIDE ISIscan TM. Infrasoft International 2001. ISIscan Website. http://216.23.177.12/
html/isiscan/isiscan/isiscanhome.htm
PERKIN ELMER. Manual do equipamento FT – NIR System.
SILVERSTEIN, Robert M. Identificação Espectrométrica de Compostos Orgânicos. 6. ed. Rio de janeiro:

LCT, 2000.
153
MÉTODO Nº 41
Nitrogênio não
Proteico
3 páginas
1. Introdução
A análise de nitrogênio não protéico quantifica os compostos nitrogenados, como nitratos, nitritos, sais de
amônia, uréia e outros compostos que não fazem parte da proteína verdadeira dos alimentos. Precipita-se
todo o nitrogênio orgânico da amostra com ácido tricloroacético.
2. Recomendações
O ácido clorídrico é nocivo e prejudicial à saúde se inalado ou se entrar em contato com a pele e olhos,
portanto a solução de HCl deve ser preparada em capela com o uso de luvas adequadas e óculos de
segurança. A mesma regra se aplica ao uso do ácido sulfúrico, sendo que a solução de catalisador líquido
deve ser também preparada em capela, observando os devidos cuidados de segurança.
O ácido tricloroacético é cancerígeno e causa lesões de pele. Deve ser manuseado com luva e é necessário
extremo cuidado no momento da pesagem.
3. Escopo
Amostras nitrogenadas de origem orgânica e inorgânica.
Não Aplicável
5. Definições
Não Aplicável
6. Reações
7.1. Ácido tricloroacético p.a.

7.2. Solução de Ácido Tricloroacético 20%
7.2.1. Preparo: Dissolver 200 g de ácido tricloroacético p.a. em 1 L de água destilada.
154
7.3. Soluções usadas na análise de Proteína Bruta
7.4. Erlenmeyer de 250 mL com tampa
7.7. Funil de vidro
7.8. Papel filtro quantitativo (Whatman 541 ou faixa preta)
7.9. Tubo macro
7.10. Conjunto para digestão, destilação e titulação usados na análise de Proteína Bruta
8. Equipamentos

8.2. Refrigerador
9. Amostragem
10. Procedimento
Para forragens e alimentos concentrados energéticos, recomenda-se tomar uma alíquota de 20 mL.
10.1. Pesar 5,0 g de amostra com tamanho de partícula de 1 mm, em Erlenmeyer de 250 mL com tampa.
10.2. Adicionar volumetricamente 50 mL de água destilada e agitar vigorosamente por 10 minutos.
10.3. Deixar a solução em repouso por 30 minutos.
10.4. Adicionar volumetricamente 50 mL de solução de ácido tricloroacético 20% e deixar em refrigerador
por 3 horas.
10.5. Filtrar em papel de filtro quantitativo desprezando os primeiros 10 mL filtrados, coletar o filtrado
restante. Tomar cuidado para não misturar o sobrenadante com a amostra.
10.6. Homogeneizar o filtrado, pipetar volumetricamente 10 mL para tubo macro.
10.7. Determinar N-total na alíquota seguindo procedimento analítico 1 ou 2, do método nº. 48 – Proteína
Bruta – Método Kjeldahl, para determinação de proteína bruta.
11. Cálculos
11.1. Cálculo do procedimento 1 de Proteína para NNP
Onde
Va Volume da solução de HCl 0,1M gasto na titulação da amostra, em mL

Vb Volume da solução de HCl 0,1 M gasto na titulação da prova em branco, em mL
M Molaridade da solução de HCl
155
Fc Fator de correção do HCl 0,1M
Pa Peso da amostra na alíquota, em mg
11.2. Cálculo do Procedimento 2 de Proteína para NNP
Onde
V¹ Volume da solução de H2SO4 0,1M gasto na titulação da amostra, em mL

V² Volume da solução de NaOH 0,2M gasto na titulação da amostra, em mL
Fc¹ Fator de correção da solução de H2SO4 0,1M
Fc² Fator de correção da solução de NaOH 0,2M
M¹ Molaridade da solução de H2SO4
M² Molaridade da solução de NaOH
P Peso da amostra na alíquota, em mg
12. Bibliografia
A.O.A.C. Association of Official Agricultural Chemists. Official methods of analysis. 12. ed. Washington,
D.C., 1975.
KRISHNAMOORTHY, U.; MUSCATO, T.V.; SNIFFEN, C.J.; VAN SOEST, P.J. Nitrogen fractions in select
feedstuffs. J. Dairy Sci., v. 65, p.217-225, 1982.
156
MÉTODO Nº 42
Nitrogênio Insolúvel em
Métodos Analíticos Detergente Ácido Revisão: 2009
(NIDA) 3 páginas
1. Introdução
celulose.
O nitrogênio insolúvel em detergente ácido (NIDA) é aquele que permanece no resíduo de fibra em
detergente ácido. Eles podem estar presentes naturalmente nas plantas e, entretanto, ser considerados
uma estimativa dos danos causados pelo calor durante o armazenamento ou processamento. O nitrogênio
em amostras excessivamente aquecidas é normalmente indisponível para os animais
2. Recomendações

produtos químicos.
3. Escopo
Não aplicável.
5. Definições
Não aplicável
6. Reações
Digestão
157
No recipiente contendo a amostra digerida:
No recipiente com ácido bórico (onde será recolhido o destilado):
Titulação

7.3. Papel de filtro previamente seco em estufa a 105°C
7.4. Frascos de macro Kjeldahl
8. Equipamentos
8.1. Balança analítica (resolução de 0,0001g )

9. Amostragem
10. Procedimento
10.1. Para a determinação do NIDA, utilizar o resíduo obtido na análise de FDA (fibra detergente ácida),
método n° 20 deste compêndio, substituindo no momento da filtração o cadinho filtrante por papel de filtro
previamente seco em estufa a 105°C por no mínimo 1 hora ou até peso constante.
10.2. No final do tempo de refluxo da amostra de FDA, filtrar em papel de filtro previamente seco e
pesado, sob vácuo mínimo.
10.3. Em paralelo fazer uma prova em branco, filtrando a solução de FDA sobre um papel de filtro, para
calcular o nitrogênio do papel e dos reagentes.
10.4. Dobrar o papel de filtro contendo a amostra, secar por três horas ou até peso constante em estufa
a 105º C e repesar.
10.5. Registrar o peso (este peso é necessário para o cálculo de FDA, mas não entra no cálculo de
NIDA).
10.6. Inserir o papel de filtro mais a amostra em frascos de macro Kjeldahl e determinar o nitrogênio,
conforme método nº 48 – Proteína Bruta – Método Kjeldahl. Faça o mesmo procedimento para o branco.
158
11. Cálculo
Onde:
VA Volume de HCl 0,1M gasto na amostra, em mL

VB Volume de HCl 0,1M gasto na prova em branco, em mL
MR Molaridade real do HCl 0,1M
0,014 Unidade molar do nitrogênio, em g/mol
P Peso da amostra original (usado na extração do FDA), em grama
12. Bibliografia
SILVA, Dirceu Jorge. Análise de Alimentos – Métodos químicos e biológicos, 3. ed. 2006. p. 120-122
159
MÉTODO Nº 43
Nitrogênio Insolúvel em
Métodos Analíticos Detergente Neutro Revisão: 2009
(NIDIN) 3 páginas
1. Introdução
celulose.
O nitrogênio insolúvel em detergente neutro (NIDN) é aquele que permanece no resíduo de fibra em
detergente neutro. Eles podem estar presentes naturalmente nas plantas e, entretanto, ser considerados
uma estimativa dos danos causados pelo calor durante o armazenamento ou processamento. O nitrogênio
em amostras excessivamente aquecidas é normalmente indisponível para os animais
2. Recomendações

produtos químicos.
3. Escopo
Não aplicável.
5. Definições
Não aplicável
6. Reações
Digestão
160
Titulação

7.3. Papel de filtro previamente seco em estufa a 105°C
7.4. Frascos de macro Kjeldahl
8. Equipamentos
8.1. Balança analítica (resolução de 0,0001g )

9. Amostragem
10. Procedimento
10.1. Para a determinação do NIDN, utilizar o resíduo obtido na análise de FDN (fibra detergente neutro),
método nº 21 deste compêndio, substituindo no momento da filtração o cadinho filtrante por papel de filtro
previamente seco em estufa a 105°C por no mínimo 1 hora ou até peso constante.
10.2. No final do tempo de refluxo da amostra de FDN, filtrar em papel de filtro previamente seco e
pesado, sob vácuo mínimo.
10.3. Em paralelo fazer uma prova em branco, filtrando a solução de FDN sobre um papel de filtro, para
calcular o nitrogênio do papel e dos reagentes.
10.4. Dobrar o papel de filtro contendo a amostra, secar por três horas ou até peso constante em estufa a
105°C e repesar.
10.5. Registrar o peso (este peso é necessário para o cálculo de FDN, mas não entra no cálculo de NIDN).
10.6. Inserir o papel de filtro mais a amostra em frascos de macro Kjeldahl e determinar o nitrogênio,
conforme método nº 48 – Proteína Bruta – Método Kjeldahl. Faça o mesmo procedimento para o branco.
161
11. Cálculo
Onde:
VA Volume de HCl 0,1M gasto na amostra, em mL

VB Volume de HCl 0,1M gasto na prova em branco, em mL
MR Molaridade real do HCl 0,1M
0,014 Unidade molar do nitrogênio, em g/mol
P Peso da amostra original (usado na extração do FDN), em grama
12. Bibliografia
SILVA, Dirceu Jorge. Análise de Alimentos – Métodos químicos e biológicos, 3. ed. 2006. p. 120-122
162
MÉTODO Nº 44
Métodos Analíticos Índice de Peróxido - Revisão: 2009

Método a Frio
4 páginas
1. Introdução
O peróxido oxida o iodeto a iodo elementar que, por sua vez, forma com o amido um complexo de
inclusão de cor característica escura.
Os peróxidos são substâncias que apresentam uma ligação oxigênio-oxigênio e que contenham o oxigênio
em estado de oxidação -1. Geralmente se comportam como substâncias oxidantes.
A peroxidação lipídica é iniciada por formas químicas de oxigênio, de grande reatividade, chamadas
radicais livres, e a sua formação é acelerada pela presença de metais, principalmente ferro (Fe), cobre
(Cu), zinco (Zn) e níquel (Ni), por altas temperaturas, efeito da luz solar, pela concentração de oxigênio e
por outros tipos de irradiações, como microondas, raio X, etc. Os microrganismos possuem enzimas
que podem exercer efeito oxidante.
Os peróxidos formados podem se ligar a um grande número de produtos instáveis, que destroem a
molécula de ácido graxo, originando os produtos de oxidação, que são tóxicos. Muitos deles são pequenos
e voláteis, liberando odor característico de ranço, percebidos em processos de avançado estado de
oxidação. Esta etapa, geralmente, é lenta, podendo durar horas, semanas ou meses, dependendo do
tipo de gordura e das condições ambientais, porém uma vez iniciado o processo, é muito difícil de
controlar.
2. Recomendações

produtos químicos.
3. Escopo
Aplicável a produtos alimentícios secos (farinhas de origem animal e vegetal, rações, etc.) ou úmidos
(carnes, salsichas, peixes, etc.) e óleos e gorduras susceptíveis a oxidação.
Não aplicável.
5. Definições
Não aplicável
6. Reações
163

7.7. Metanol p.a.
7.8. Sulfato de sódio anidro (Na2SO4) p.a.
7.10. Sulfato de sódio 1,5%(m/v)
7.10.1. Preparo: Pesar 1,5g de sulfato de sódio anidro e dissolver em 100 mL de água destilada.
7.11. Solução de iodeto de potássio saturado (m/v)
7.11.1. Preparo: Adicionar iodeto de potássio à água destilada, recentemente fervida, até saturação. Para
ter certeza de que a solução está saturada, verifique se há cristais sem dissolver. Preparar a solução no
dia do teste. Estocar em frasco âmbar.
OBS: 2 mL de água a 20o C dissolvem aproximadamente 2,88g de KI
7.12. Solução indicadora de amido 1%(m/v)
7.12.1. Preparo: Pesar 1g de amido p.a. em béquer de 250 mL. Adicionar 50 mL de água destilada e
aquecer até ebulição. Esfriar e completar o volume para 100 mL. Preparar esta solução momentos antes
do uso.
7.13. Ácido clorídrico 1M (v/v)
7.13.1. Preparo: Diluir 8,5 mL de ácido clorídrico para 100 mL de água destilada em balão volumétrico.
7.14. Solução padronizada de tiossulfato de sódio 0,01 M
7.14.1. Preparo: Pesar 2,482 g de Na2S2O3.5H2O p.a., previamente seco em estufa a 105oC por duas horas.
Dissolver em béquer contendo aproximadamente 100 mL de água destilada, fervida e fria. Transferir
fria. Homogeneizar e estocar em frasco âmbar
em estufa a 105oC por duas horas. Dissolver em béquer com aproximadamente 50 mL de água destilada,
fervida e fria, transferir quantitativamente para balão volumétrico de 200 mL, completar o volume com água
destilada, fervida e fria e homogeneizar. Pipetar 10 mL da solução de dicromato de potássio e transferir
para erlenmeyer de 250 mL com tampa. Acrescentar aproximadamente 70 mL de água destilada, fervida e
fria. Adicionar 2 g de KI e solubilizar. Adicionar 20 mL de ácido clorídrico 1 M. Tampar o erlenmeyer e
estocar imediatamente ao abrigo da luz por 10 minutos. Titular gotejando a solução de Na2S2O3.5H2O até
aproximadamente 20 mL. Acrescentar 1 mL da solução indicadora de amido 1% e continuar a titulação até
Cálculo do fator:
164
Onde:

V Volume gasto na titulação, em mL
FC Fator de correção
49 Unidade molar do dicromato de potássio (g/mol)
7.16. Bureta de 25 mL
7.18. Erlenmeyer de 250 mL com tampa esmerilhada
7.21. Pipetas volumétricas de 10 mL, 25 mL e 50 mL
7.22. Provetas de 25 mL e 50 mL
8. Equipamentos
8.1. Centrífuga de baixa rotação (ou funil de decantação)

8.2. Agitador / barra magnética de agitação ou mesa agitadora
9. Amostragem

10. Procedimento
Os volumes de solventes que serão adicionados inicialmente (25, 50 e 20 mL), correspondem a uma
relação em volume de 1:2:0,8 clorofórmio: metanol: água. Nessa proporção os três solventes coexistem
em uma solução homogênea.
No entanto em um segundo momento quando da adição de mais clorofórmio e mais água muda-se a
proporção para 2:2:1,8, causando a separação total de clorofórmio que carrega os lipídios (camada inferior),
portanto, teoricamente todos os lipídios da amostra ficam dissolvidos em 50 mL de clorofórmio.
10.1. Pesar em um erlenmeyer de 250 mL , uma quantidade de amostra suficiente para que contenha no
mínimo 2 g de óleo, ou seja , (massa da amostra(g) x teor de óleo (%) / 100 = 2 g. Anotar o peso.
Geralmente para amostras em que o teor de gordura é elevado (acima 18%), pesar 10 g e para amostras
com baixo teor de gordura, pesar 20 g.
10.2. Adicionar 50 mL de metanol, 25 mL de clorofórmio e suficiente quantidade de água que , somada à
água da amostra (proveniente da umidade) resulte em 20 mL . (ex.: a umidade de 10 g de amostra é 5%,
então 20 mL – 0.5 mL = 19.5 mL de água necessária a ser adicionada ). Colocar a barra magnética e tampar
hermeticamente o erlenmeyer, ou usar agitador tipo kline, durante 30 minutos.
10.3. Adicionar, em seguida, 25 mL de clorofórmio e 25 mL de solução de sulfato de sódio 1,5%. Tampar
e agitar por mais 2 minutos.
165
10.4. Transferir a solução com a amostra para um funil de separação e deixar separar as camadas de forma
natural (ou centrifugar a 1000 rpm por dois minutos para acelerar a separação).
10.5. Deixar verter a camada inferior (clorofórmio + lipídio) para um funil pequeno contendo papel de filtro
e um pouco de sulfato de sódio anidro (para remover os traços de água que, invariavelmente, são arrastados)
recolhendo o filtrado em erlenmeyer de 125 mL. A solução deve ficar límpida.
10.6. Pipetar exatamente 10 mL do filtrado e transferir para um béquer de 50 mL previamente tarado (é
recomendável que este passo seja levado adiante, após a confirmação de peróxido positivo, este dado
somente será necessário para o cálculo). Colocar na estufa a 105oC por 60 minutos, resfriar em dessecador
e pesar.
10.7. Com outra pipeta volumétrica tomando os mesmos cuidados, pipetar exatamente 20mL do filtrado
para um erlenmeyer de 250 mL, adicionar 20 mL de ácido acético concentrado e 0,5 mL de solução fresca
de iodeto de potássio saturado. Agitar e deixar o erlenmeyer tampado por 1 minuto em local escuro.
10.8. Após 1 minuto adicionar 30 mL de água destilada e 1 mL de amido 1%. Se ao acrescentar o amido,
imediatamente aparecer alguma alteração (mesmo que pequena) de cor, continuar a titulação. Caso não
se verifique mudança alguma de coloração, dar como encerrada a análise, ou seja, 0,00 de peróxido.
10.9. Titular o iodo liberado com tiossulfato de sódio 0,01M, com agitação constante. O ponto final é
quando a cor azul desaparece totalmente.
10.10.Fazer uma prova em branco com reagentes, sendo que a titulação desta prova não deve gastar
mais que 0,5 mL de tiossulfato de sódio 0.01 M.
11. Cálculo
Onde:
A Volume de tiossulfato de sódio 0,01M gasto na titulação da amostra, em mL

B Volume de tiossulfato de sódio 0,01M gasto na titulação da prova branco, em mL
F Fator de correção do tiossulfato de sódio
P Peso da gordura extraída na alíquota x 2 (peso do béquer mais gordura-peso do béquer
vazio), em grama
1000 Conversão para miliequivalente
12. Bibliografia
BLIGH, E.G. & DYER, W.J. A rapid method of total lipid extration and purification. Can. J. Biochem. Physiol.
37:911, 1959.
análise de alimentos. 3. ed. São Paulo, 1985. v. 1. Método 17.9, p. 256
166
MÉTODO Nº 45
Métodos Analíticos Índice de Peróxido - Revisão: 2009

Método a Quente
4 páginas
1. Introdução
O peróxido oxida o iodeto a iodo elementar que, por sua vez, forma com o amido um complexo de
inclusão de cor característica escura.
Os peróxidos são substâncias que apresentam uma ligação oxigênio-oxigênio e que contenham o oxigênio
em estado de oxidação -1. Geralmente se comportam como substâncias oxidantes.
A peroxidação lipídica é iniciada por formas químicas de oxigênio, de grande reatividade, chamadas
radicais livres, e a sua formação é acelerada pela presença de metais, principalmente ferro (Fe), cobre
(Cu), zinco (Zn) e níquel (Ni), por altas temperaturas, efeito da luz solar, pela concentração de oxigênio e
por outros tipos de irradiações, como microondas, raio X, etc. Os microrganismos possuem enzimas
que podem exercer efeito oxidante.
Os peróxidos formados podem se ligar a um grande número de produtos instáveis, que destroem a
molécula de ácido graxo, originando os produtos de oxidação, que são tóxicos. Muitos deles são pequenos
e voláteis, liberando odor característico de ranço, percebidos em processos de avançado estado de
oxidação. Esta etapa, geralmente, é lenta, podendo durar horas, semanas ou meses, dependendo do
tipo de gordura e das condições ambientais, porém uma vez iniciado o processo, é muito difícil de
controlar.
2. Recomendações

produtos químicos.
3. Escopo
Aplicável a produtos alimentícios secos (farinhas de origem animal e vegetal, rações, etc.) ou úmidos
(carnes, salsichas, peixes, etc.) e óleos e gorduras susceptíveis a oxidação.
Não aplicável.
5. Definições
Não aplicável
6. Reações
167

7.4. Butilhidroxitolueno (BHT)
7.9. Solução de ácido acético + clorofórmio (3 + 2)
7.9.1. Preparo: Misturar 3 partes de ácido acético em duas partes de clorofórmio.
7.10. Solução reagente de ácido clorídrico 1 M
7.10.1. Preparo: Medir 8,5 mL de HCl p.a. e transferir para balão volumétrico de 100 mL contendo
7.11. Solução indicadora de amido 1%
7.11.1. Preparo: Pesar 1 g de amido p.a. e transferir para béquer de 250 mL. Adicionar aproximadamente
completar o volume com água destilada e homogeneizar.
7.12. Solução reagente de iodeto de potássio saturada
7.12.1. Preparo: Adicionar 20 mL de água destilada fervida e fria em um béquer de 50mL e ir adicionando
KI p.a. até saturação.
7.13. Solução de éter de petróleo + BHT
7.13.1. Preparo: Dissolver 1 g de BHT em 1000 mL de éter de petróleo p.a.
7.14. Solução padronizada de tiossulfato de sódio 0,01 M
7.14.1. Preparo: Pesar 2,482 g de Na2S2O3.5H2O p.a., previamente seco em estufa a 105°C por duas
horas. Dissolver em béquer contendo aproximadamente 100 mL de água destilada, fervida e fria. Transferir
fria. Homogeneizar e estocar em frasco âmbar
em estufa a 105°C por duas horas. Dissolver em béquer com aproximadamente 50 mL de água destilada,
fervida e fria, transferir quantitativamente para balão volumétrico de 200 mL, completar o volume com água
destilada, fervida e fria e homogeneizar. Pipetar 10 mL da solução de dicromato de potássio e transferir
para erlenmeyer de 250 mL com tampa. Acrescentar aproximadamente 70 mL de água destilada, fervida e
fria. Adicionar 2 g de KI e solubilizar. Adicionar 20 mL de ácido clorídrico 1 M. Tampar o erlenmeyer e
estocar imediatamente ao abrigo da luz por 10 minutos. Titular gotejando a solução de Na2S2O3.5H2O até
aproximadamente 20 mL. Acrescentar 1 mL da solução indicadora de amido 1% e continuar a titulação até
Cálculo do fator:
168
Onde:
V Volume gasto na titulação, em mL
FC Fator de correção
49 Unidade molar do dicromato de potássio (g/mol)

7.16. Béquer de 25 mL, 50 mL, 150 mL, 400 mL e 1000 mL
7.18. Bureta de 25 mL (div 0,05mL)
7.20. Erlenmeyer de 250 mL com tampa esmerilhada
8. Equipamentos

8.2. Banho termostático (70°C – 80°C)
9. Amostragem

10. Procedimento
10.1. Óleos e gorduras: pesar 5 g da amostra em erlenmeyer de 250mL e pular para passo 10.4.
10.2. Outros produtos: pesar 50g de amostra e adicionar 100 mL da solução de éter de petróleo e agitar
ocasionalmente, em seguida filtrar em funil de vidro contendo papel de filtro qualitativo ou algodão
(opcionalmente poderá se centrifugar à 2500 rpm durante 10 minutos, desde que a centrífuga seja à prova
de explosão).
10.3. Em um erlenmeyer de 250 mL, previamente tarado, receber o filtrado e evaporar o resíduo de éter
em banho-maria à 80°C. Colocar em estufa a 105°C, durante 10 minutos. Esfriar em dessecador e repesar.
10.4. Após a pesagem do frasco contendo a gordura, adicionar 30 mL da mistura ácido acético + clorofórmio
e 0,5 mL da solução de iodeto de potássio saturada, agitar até completa dissolução.
10.5. Tampar o frasco e deixar em repouso por aproximadamente 1 minuto no escuro (ao abrigo da luz),
com agitações ocasionais.
10.6. Acrescentar 30 mL de água destilada e agitar vagarosamente.
10.7. Adicionar 1 mL da solução de amido. Se ocorrer mudança de cor escuro (azul / violeta), mesmo que
a mudança de tonalidade seja sutil, proceder a titulação com a solução de tiossulfato de sódio 0,01 M até
o completo desaparecimento da coloração azul.
10.8. Fazer um branco da mistura clorofórmio + ácido acético e solução de amido.
169
11. Cálculo
Onde:
A Volume de tiossulfato de sódio 0,01M gasto na titulação da amostra, em mL

B Volume de tiossulfato de sódio 0,01M gasto na titulação da prova branco, em mL
F Fator de correção do tiossulfato de sódio
P Peso da gordura, em grama
1000 Conversão para miliequivalente
12. Bibliografia
ASSOCIATION OF OFICIAL ANALYTICAL CHEMISTS. Oficial methods of analysis of the Association of

análise de alimentos. 4. ed. São Paulo: Prol, 2005. p. 593-594
170
MÉTODO Nº 46
Digestibilidade Protéica
Métodos Analíticos em Pepsina no Revisão: 2009
Sobrenadante 5 páginas
1. Introdução
Na formulação de rações é muito importante o conhecimento da digestibilidade protéica, pois essa

informação nos leva a alcançar melhores resultados para o crescimento dos animais e para o ambiente,
reduzindo o excesso de nutrientes excretados. Um dos métodos para predizer o valor protéico é através
da solubilidade das proteínas de origem animal em Pepsina. Esse procedimento mantém uma boa
correlação com os métodos “in vivo”, tendo a vantagem de ser de fácil e rápida execução e de ter um
custo reduzido, além de ser muito bem aceito entre os laboratórios das fábricas de rações animais.
2. Recomendações
O ácido clorídrico é nocivo e prejudicial à saúde se inalado ou se entrar em contato com a pele e olhos,
portanto a solução de HCl deve ser preparada em capela com o uso de luvas adequadas e óculos de
segurança. A mesma regra se aplica ao uso do ácido sulfúrico, sendo que a solução de catalisador líquido
deve ser também preparada em capela, observando os devidos cuidados de segurança.
3. Escopo
Esse procedimento é aplicável a fontes protéicas de origem animal e tem por objetivo quantificar “in vitro”
a solubilidade em pepsina da fração protéica de amostras de produtos e subprodutos de origem animal
(farinha de carne, farinha de penas, farinha de sangue, etc...)
Não aplicável
5. Definições
Não aplicável
6. Reações
6.1. Reações enzimáticas:
O princípio da reação é a formação do complexo “chave-fechadura”, que se forma no momento em que a

enzima (pepsina) entra em contato com seu substrato (amostra em questão).
171
6.2. Demais reações
As demais reações envolvidas no processo dependerão do procedimento para determinação de proteína

escolhido.
Usar somente reagentes de grau analítico, a não ser que especificado em contrário.

7.2. Sulfato de Sódio Anidro p.a
7.3. Sulfato de Cobre pentahidratado p.a
7.4. Selenito de Sódio p.a
7.5. Biftalato de Potássio - Padrão Primário p.a.
7.6. Álcool Etilíco p.a.
7.8. Ácido Clorídrico p.a.
7.9. Pepsina 1:10000 (Sigma P 7000, Merck ou Difco)
7.10. Solução de ácido clorídrico 0,0744 M
7.10.1. Preparo: em um balão volumétrico de 2000 mL contendo aproximadamente 1500 mL de água
destilada ou similar, adicionar 12,50 mL de ácido clorídrico concentrado (d=1,180 e pureza 36,50%).
Completar o volume com água destilada ou similar e homogeneizar.
7.11. Solução pepsina 0,02%
7.11.1. Preparo: pesar 20 mg de pepsina (atividade digestiva de 1:10000) em um béquer de 100 mL.
Dissolver com aproximadamente 50 mL da solução de ácido clorídrico 0,0744 M Depois de dissolvida a
pepsina, transferir para um balão volumétrico de 100 mL, lavando o béquer com pequenas porções da
solução de ácido clorídrico 0,0744 M. Completar o volume com a solução de ácido e homogeneizar.
Preparar a solução imediatamente antes de sua utilização.
7.12. Solução pepsina 0,002 %
7.12.1. Preparo: em um balão volumétrico de 1000 mL, transferir os 100 mL da solução pepsina 0,02 % e
completar o volume com ácido clorídrico 0,0744 M. Preparar a solução imediatamente antes da sua utilização.
7.13. Solução pepsina 0,0002 %
7.13.1. Preparo: em um balão volumétrico de 1000 mL, transferir 100 mL da solução pepsina 0,002 % e
completar o volume com ácido clorídrico 0,0744 M. Preparar a solução imediatamente antes da sua utilização.
7.14. Vermelho de Metila p.a.
7.15. Tubo para macro com borda reforçada
7.16. Frasco com tampa ou Erlenmeyer de 250 mL
172
8. Equipamentos
8.1. Estufa de Secagem com circulação de ar a 105°C

8.2. Destilador de proteína Kjeldahl
8.4. Microbureta ou bureta semi-automática
8.5. Repipetador com dosagem regulável (dispenser)
8.6. Bloco Digestor para tubos de macro Kjeldahl
8.7. Estufa agitadora para pepsina a 45°C ou equivalente
9. Amostragem

Não é necessário desengordurar a amostra.
10. Procedimento
Em caso de necessidade, pode ser feita a digestibilidade sem o uso de estufa giratória. O preparo será
o mesmo e a incubação será por 63 horas a 45°C, sem agitação rotativa. O coeficiente de variação do
resultado desta análise parada em relação ao método padrão (16 horas sob agitação) é aproximadamente
10% para substratos disponíveis (carne, peixe, sangue, etc) e até 20% para substratos indisponíveis
(penas e vísceras).
10.1. Pesar 1,00 g da amostra em Erlenmeyer de 250 mL ou frasco com tampa específico para estufa
de pepsina. Adicionar 75 mL da solução pepsina na concentração adequada (0,02%, 0,002% ou 0,0002%)
para a amostra (substrato em questão), conforme solicitação.
10.2. Homogeneizar para que toda a amostra entre em contato com a solução. Tampar o frasco e incubar
por 16 horas a 45°C, com agitação rotativa leve, em estufa agitadora tipo Wagner.
10.3. Transferir o conteúdo do frasco de incubação para tubo de centrífuga e centrifugar por 10 minutos ou
até que não haja partículas em suspensão no sobrenadante.
10.4. Filtrar o sobrenadante com papel de filtro qualitativo em béquer de 100mL de plástico.
10.5. Transferir alíquota de 15 mL do extrato filtrado para tubo de macro Kjeldahl.
10.6. Seguir o procedimento de determinação de proteína do método nº. 48 – Proteína Bruta – Método
Kjeldahl ou do método nº. 47 – Proteína – Método Dumas. Se o método Kjeldahl for utilizado para
determinação de proteína bruta, deve-se adicionar 32 mL de mistura catalítica.
Sugestões para concentração de Pepsina e preparo do Erlenmeyer com vermelho de metila: (método
Kjeldahl.)
Amostra Conc. Pepsina (%) Volume de ácido (mL)
Farinha de sangue 0,002 10

Farinha de carne 0,002 8
Farinha de peixe 0,002 8
Farinha de penas 0,02 8
Farinha penas e vísceras 0,02 8
Farinha de vísceras 0,02 8
173
11. Cálculos
É necessário o valor de proteína bruta para calcular o teor de digestibilidade em pepsina.
11.1. Para método Dumas
Onde
Va Volume de HCl 0,1M gasto na titulação, em mL

Vb Volume de HCl 0,1M gasto no branco, em mL
F Fator de correção do HCl 0,1M
M Molaridade do HCl
11.2. Para método Kjeldahl
Onde
PBA % proteína bruta no sobrenadante da amostra

V¹ Volume de NaOH 0,2M gasto na titulação, em mL
Fc¹ Fator de correção do NaOH 0,2M
V² Volume de H2SO4 0,1M gasto na titulação, em mL
Fc² Fator de correção do H2SO4 0,1M
M¹ Molaridade da solução de NaOH
M² Molaridade da solução de H2SO4
P Peso da amostra na alíquota, em mg (1,00g/75mLx15mL)
174
11.3. Digestibilidade em pepsina
Onde
PBA % proteína bruta no sobrenadante da amostra

PB % proteína bruta da amostra
12. Bibliografia
BELLAVER, C. Zanotto D. L. Determinação da digestibilidade da proteína em pepsina. EMBRAPA. 2003.
ASSOCIATION OF OFFICIAL ANALYTICAL CHEMISTS. Official Methods of Analysis. 14. ed. Washington,
DC, 1984
175
MÉTODO Nº 47
Métodos Analíticos Proteína - Revisão: 2009

Método Dumas
3 páginas
1. Introdução
No método Dumas, a amostra sofre uma digestão oxidativa com oxigênio a aproximadamente 900-1200°C;
então o gás é arrastado com auxílio de hélio, purificado (incluindo a remoção de água) e os óxidos de
nitrogênio formados são reduzidos a nitrogênio elementar pelo contato com metal quente (tungstênio ou
cobre), o qual é determinado quantitativamente por detector de condutividade térmica. O conteúdo de
nitrogênio é multiplicado pelos fatores de conversão específicos para proteína.
2. Recomendações

produtos químicos.
3. Escopo
Amostras orgânicas e inorgânicas.
Não aplicável
5. Definições
Não aplicável
6. Reações
Matéria orgânica + O2 Æ CO2 + SO2 + NOX + H2O + partículas de óxidos
O equipamento é dotado de filtros que retém as partículas de óxidos, os gases interferentes e a água. O
NOX depois de isolado é reduzido a N2 e detectado por condutividade térmica.
Alguns reagentes podem variar em função do equipamento. Consultar o manual de instruções do

equipamento.
176
7.1. Folhas de estanho ou navículas de cerâmica
7.2. Espátula
8. Equipamentos

8.2. Instrumento de proteína por combustão
8.3. Estufa de secagem (105° ± 5°C)
9. Amostragem
10. Procedimento
Ajustar os parâmetros de operação do equipamento de combustão (temperatura do forno, fluxo de oxigênio,

valores de calibração e demais controles) de acordo com as instruções do fabricante.
Estabilizar a temperatura do forno.
Estabilizar o sistema passando uma série de brancos (no mínimo 5 brancos são recomendados) ou até
que os resultados sejam repetitivos.
Realizar a curva de calibração utilizando o padrão de EDTA, determinando no mínimo 3 pontos, pesar de
50 – 400 mg de EDTA em duplicata.
Ajustar o equipamento diariamente utilizando o ponto intermediário da curva de calibração como ponto de
verificação do padrão.
10.1. Pesar de 150 - 300 mg de amostra em folha de estanho.

10.2. Levar as amostras pesadas para pré-secagem em estufa 105°C por 30 min, para retirar o excesso de
umidade, se necessário.
10.3. Fechar a folha de estanho adequadamente, retirando o ar da embalagem.
10.4. Introduzir as amostras no equipamento.
10.5. Colocar os dados de identificação e massa no sistema.
10.6. Iniciar as análises.
10.7. Realizar as leituras do teor de Nitrogênio diretamente no equipamento.
11. Cálculos
11.1.Para produtos lácteos:
11.2. Para ovo:
177
11.3. Para trigo e derivados:
11.4. Para outros grãos de cereais e oleaginosas:
Onde:
N Teor de nitrogênio
12. Bibliografia
ASSOCIATION OF OFFICIAL ANALYTICAL CHEMISTS. Official Methods of Analysis. 18. ed. rev. 2.
Gaithersburg, MD, USA, 2007. Crude protein in meat and meat products including pet foods, c. 39. Method
992,15. p. 6-7
178
MÉTODO Nº 48
Métodos Analíticos Proteína Bruta - Revisão: 2009

Método KJELDAHL
8 páginas
1. Introdução
O ensaio é baseado na digestão de amostras nitrogenadas com ácido sulfúrico concentrado, em presença
do catalisador.
Este método se baseia em três etapas: digestão, destilação e titulação. O nitrogênio da amostra é
transformado em sulfato de amônio por digestão ácida, e em nitrogênio amoniacal por destilação em
meio alcalino. O nitrogênio então é quantificado por titulação em ácido padronizado.
2. Recomendações

produtos químicos.
3. Escopo
Amostras nitrogenadas de origem orgânica e inorgânica, com exceção de nitratos e nitritos.
Não aplicável.
5. Definições
Sendo o conteúdo de nitrogênio das diferentes proteínas aproximadamente 16%, introduze-se o fator
empírico 6,25 para transformar o número de gramas de protídeos. Em alguns casos, emprega-se um valor
diferente de 6,25.
6. Reações
Digestão
179
Titulação
7.1. Ácido bórico p.a.

7.5. Etanol p.a.
7.6. Carbonato de sódio p.a.
7.8. Hidróxido de sódio p.a.
7.9. L-Cistina p.a.
7.10. Lisina p.a.
7.11. Selenito de Sódio p.a.
7.12. Sulfato de cobre pentahidratado p.a.
7.13. Sulfato de sódio anidro ou sultafo de potássio anidro p.a.
7.14. Tiossulfato de sódio p.a.
7.15. Solução volumétrica padronizada de ácido clorídrico 0,1M
7.15.1. Preparo: Medir 8,5 mL de HCl p.a. e transferir para balão volumétrico de 1000mL, contendo
aproximadamente 500mL de água destilada. Esfriar, completar o volume e homogeneizar.
7.15.2. Padronização: Pesar exatamente 5,299g de carbonato de sódio (Na2CO3) p.a., previamente seco
a 270°C por uma hora. Dissolver em água destilada, transferir para um balão volumétrico de 1000mL e
completar o volume. Pipetar 20mL da solução de Na2CO3 e transferir para um erlenmeyer de 250mL.
Adicionar 3 gotas de solução de vermelho de metila 0,1%. Titular até viragem para coloração rósea.
Aquecer a ebulição, para eliminar o gás carbônico. Esfriar e prosseguir a titulação. Repetir esta operação
até coloração rósea permanente.
180
Onde:
MR Molaridade real da solução de HCl 0,1M

P Peso do Na2CO3, em mg
Mol Unidade molar do Na2CO3 (105,988/2)
V Volume de HCl 0,1M gasto na titulação, em mL
7.16. Solução de ácido bórico 4%

7.16.1. Preparo: Pesar 40 g de H 3BO 3 p.a. e transferir para béquer de 1000 mL. Dissolver em
aproximadamente 500 mL de água destilada, utilizando agitação. Transferir quantitativamente, por papel
filtro qualitativo, para balão volumétrico de 1000 mL, completar o volume e homogeneizar.
7.17. Mistura catalítica
7.17.1. Preparo: Peneirar separadamente o sulfato de sódio ou potássio anidros e o sulfato de cobre
pentahidratado em peneira com malha de 1 mm. Juntar 10 partes de Na2SO4 ou K2SO4 e uma parte de
CuSO4.5H2O. Homogeneizar e guardar em frasco com tampa.
7.18. Solução alcoólica indicadora de vermelho de metila 0,1%
7.18.1. Preparo: Dissolver 0,1 g de vermelho de metila p.a. em aproximadamente 40 mL de água destilada.
Transferir para balão volumétrico de 100 mL, completar o volume com etanol e homogeneizar.
7.19. Solução reagente de hidróxido de sódio 50% (P/V)
7.19.1. Preparo: Dissolver 500 g de NaOH p.a. ou grau técnico de boa qualidade em água destilada.
Adicionar 30 g de tiossulfato de sódio evitar a carbonatação quando o período de armazenamento for
longo e completar para 1000 mL em béquer.
7.20. Solução mista
7.20.1. Preparo: Dissolver 0,132 g de vermelho de metila p.a. em 40 mL de água destilada. Transferir
quantitativamente para balão volumétrico de 200 mL. Dissolver 0,066g de verde de bromocresol p.a. em
40 mL de água destilada. Juntar ao balão contendo vermelho de metila, completar o volume com etanol
p.a. e homogeneizar. O indicador misto poderá ser incorporado à solução de ácido bórico 4% (8 mL por
litro).
7.21. Verde de bromocresol p.a.
7.23. Bureta
7.24. Conjunto Kjeldahl para digestão e destilação macro e micro
7.25. Erlenmeyer de 125 mL, 250 mL ou 500 mL
7.26. Frasco Kjeldahl de 500 mL ou 800 mL ou tubo de digestão (macro ou micro).
7.27. Pérolas de vidro ou zinco metálico granulado 20 mesh
Soluções para uso no procedimento 2:
7.29. Solução indicadora de fenolftaleína 1%
7.29.1. Preparo: Pesar 1 grama de fenolftaleína P.A. em balão volumétrico de 100 mL. Dissolver com
álcool etilíco 99,5°GL. Completar o volume do balão com álcool etilíco 99,5°GL e homogeneizar.
7.30. Solução Indicadora de vermelho de metila 0,1%
7.30.1. Preparo: Pesar 1 g de vermelho de metila e dissolver em 800 mL de álcool etilíco 99,5°. Adicionar
200 mL de água destilada ou similar. Filtrar em funil de Buckner com algodão, se necessário.
7.31. Catalisador líquido
7.31.1. Preparo: Para preparar 1 litro, adicionar, na ordem descrita: 05,00 g de selenito de sódio p.a.;
10,00 g de sulfato de cobre p.a.; 53,5 g de sulfato de sódio p.a.; 500 mL de ácido sulfúrico p.a.; 437,5 mL
181
de água destilada ou similar. Respeitar a ordem de adição dos reagentes. Esperar esfriar para poder
utilizar a solução.
7.32. Solução de NaOH 0,2M
7.32.1. Preparo: Pesar 8,00 g de NaOH 99,99% em béquer de 250 mL e diluir com água destilada ou
similar. Após esfriar, transferir para balão volumétrico de 1.000 mL. Completar o volume com água destilada
ou similar. Considerar a pureza do reagente e corrigir massa.
7.32.2. Padronização: Pesar em erlenmeyer de 125 ou 250 mL, 0,5000 g de Biftalato de Potássio, previamente
seco à 105°C, por 2 horas. Adicionar 40-50 mL de água destilada ou similar e titular com NaOH 0,2M,
usando gotas de solução de fenolftaleína como indicador até viragem levemente rosa.
Onde:
MR¹ Molaridade real da solução de NaOH 0,2M

P Peso do Biftalato de potássio, em g
Mol Unidade molar do biftalato de potássio (204,22865)
V Volume de NaOH 0,2M gasto na titulação, em L
FC ¹ Fator de correção da solução de NaOH 0,2M
MT ¹ Molaridade teórica da solução de NaOH 0,2M
7.33. Solução de H2SO4 0,1M

7.33.1. Preparo: Adicionar 5,6 mL de H2SO4 p.a. (97% de pureza) em béquer contendo 700 mL de água
destilada ou similar. Após esfriar, transferir para balão volumétrico de 1000 mL, completar o volume com
água destilada ou similar e homogeneizar. Considerar a pureza do reagente e corrigir volume.
7.33.2. Padronização: Tomar uma alíquota de 10 mL de H2SO4 0,1M e transferir para um erlenmeyer de 125
ou 250mL. Adicionar 3 gotas de indicador vermelho de metila 0,1% e titular com solução de NaOH 0,2M
padronizada, até viragem de rosa para amarelo
Onde:
FC ² Fator de correção da solução de H2SO4 0,1M
FC ¹ Fator de correção da solução de NaOH 0,2M
V² Volume de H2SO4 0,1M gasto na titulação, em L
182
8. Equipamentos

8.2. Funil Buckner
8.3. Bomba a vácuo
8.4. Microbureta ou bureta semi-automática calibrada
9. Amostragem
10. Procedimento
Destilar de modo que o condensado seja obtido à temperatura ambiente.

O terminal do condensador deve ficar mergulhado na solução durante a fase de destilação.
Quando houver viragem da cor vermelha para amarela durante a fase de destilação, desconsiderar a
análise em processo.
Orientação para volumes de H2SO4 0,1 M a ser utilizado, de acordo como percentual de proteína bruta
esperado:
% PB mL H2SO4
até 10% 10
`` 20% 15
`` 30% 25
`` 40% 30
`` 60% 50
`` 80% 60
Proceder sempre uma prova de recuperação utilizando lisina, sulfato de amônio anidro p.a. (sem digestão)
ou cloreto de amônio p.a..
Amostra com alto teor de gordura ou que apresente formação de espuma durante a fase de digestão ou
destilação, utilizar algumas gotas de solução antiespumante.
10.1. Procedimento 1:
10.1.1. Pesar de 0,2 a 2,0g (conforme teor de proteína esperado) da amostra e transferir para frasco
kjeldahl de tubo de digestão.
10.1.2. Adicionar de 1,5g a 15g de mistura catalítica e 5 a 7 perolas de vidro (balão) e de 5mL a 20mL de
H2SO4 p.a. O ácido deve ser adicionado cuidadosamente, escorrendo pela parede do frasco.
10.1.3. Iniciar a digestão com temperatura baixa. Prosseguir, elevando até o máximo de 420°C, evitando
deixar pontos pretos aderidos à parede do frasco. Continuar por mais 30 minutos após clareamento
completo da mistura.
10.1.4. Esfriar, adicionar de 15 a 250mL de água destilada (dependendo da capacidade do frasco), Agitar
até dissolução e esfriar.
10.1.5. Colocar no erlenmeyer aproximadamente 50mL de ácido bórico 4% com indicador misto para
receber o destilado.
183
10.1.6. Levar o erlenmeyer ao destilador mergulhando o terminal do condensador na solução receptora,
completando com água destilada, se necessário.
10.1.7. Recolher aproximadamente 200mL do destilado ou quantidade suficiente para o carregamento de
todo o nitrogênio da amostra.
10.1.8. Retirar o erlenmeyer, lavar o terminal do condensador e titular com solução de HCl 0,1M até
viragem do indicador misto (verde para rosa).
10.1.9. Proceder paralelamente prova em branco dos reagentes utilizados.
10.1.10. Para verificação do método pode-se utilizar um aminoácido nitrogenado de alto grau de pureza.
Faz-se a análise de proteína bruta e compara-se o valor encontrado com o percentual teórico de proteína
bruta presente no aminoácido. Sugere-se a utilização de L-Cistina ou Lisina.
10.2. Procedimento 2:
10.2.1. Pesar de 0,2 a 2,0g (conforme teor de proteína esperado) da amostra e transferir para frasco
kjeldahl de tubo de digestão.
10.2.2. Adicionar 4 mL de catalisador líquido para amostras de micro e 40 mL de catalisador líquido para
amostras de macro.
10.2.3. Levar ao digestor de micro pré-aquecido a 100°C e aumentar gradativamente a temperatura até
completa digestão (cor esverdeada). Esta queima leva, geralmente, 2 horas para se completar. O período
crítico é na faixa de 150 a 250°C, quando as amostras podem subir nas paredes do tubo e precisam ser
monitoradas para evitar perdas.
O tempo e a temperatura do bloco digestor seguem a seguinte seqüência:
100°C: 15 min.
150°C: 15 min.
200°C: 15 min.
250°C: 45 min.
400°C (temperatura máxima): 45 min.
10.2.4. Retirar do digestor, esfriar e adicionar aproximadamente 250 a 350 mL de a água destilada
(dependendo da capacidade do frasco). Agitar até a dissolução e esfriar. Imediatamente antes da destilação,
adicionar uma pitada de zinco granulado.
10.2.5. Colocar em erlenmeyer aproximadamente 50 mL água destilada, volume de H2SO4 0,1M de acordo
com a porcentagem de proteína estimada e 3 a 5 gotas de solução indicadora de vermelho de metila
0,1%.
10.2.6. Levar o erlenmeyer ao destilador mergulhando o terminal do condensador na solução receptora.
10.2.7. Adicionar cuidadosamente ao frasco Kjeldahl 50 a 80ml de NaOH 50%, conectar imediatamente ao
destilador e proceder a destilação.
10.2.8. No caso dos destiladores automáticos, conectar o tubo de suporte e bocal apropriados e proceder
a destilação.
10.2.9. Recolher aproximadamente 200 mL do destilado, mantendo o terminal do condensador mergulhado
na solução receptora até que toda a amônia seja liberada.
10.2.10. Retirar o erlenmeyer, lavar o terminal do condensador e titular o excesso de ácido com solução
de NaOH 0,2M até viagem do indicador vermelho para amarelo
10.2.11. Proceder paralelamente prova em branco dos reagentes utilizados.
184
11. Cálculos
11.1. Cálculo procedimento 1
Onde:
Va Volume de HCl 0,1M gasto na titulação, em mL

Vb Volume de HCl 0,1M gasto na prova em branco, em mL
MR Molaridade real da solução de HCl 0,1M
0,014 Massa milimolar do nitrogênio
6,25 Fator de transformação do nitrogênio em proteína considerando 16% de
nitrogênio (100/16 = 6,25). Este fator pode variar conforme tabela abaixo:
Alimento Fator Empírico
Trigo e derivados 5,83

Leite e derivados 6,38
Outros alimentos 6,25
11.2. Cálculo procedimento 2
Onde
PB % proteína bruta na amostra

Va Volume de H2SO4 0,1M utilizado, em mL
Vb Volume de H2SO4 0,1M consumido na prova em branco, em mL
Fc¹ Fator de correção do H2SO4 0,1M
V² Volume de NaOH 0,2M gasto na titulação, em mL
Fc² Fator de correção do NaOH 0,2M
185
12. Bibliografia
ASSOCIATION OF OFFICIAL ANALYTICAL CHEMISTS. Official Methods of Analysis. 18. ed. Gaithersburg,
MD, USA, 2005. Method 2001.11
ASSOCIATION OF OFFICIAL ANALYTICAL CHEMISTS. Official Methods of Analysis. 18. ed. Gaithersburg,
MD, USA, 2005. Method 936.15
AMERICAN ASSOCIATION OF CEREAL CHEMISTS. Aproved Methods of Analysis of AACC. 9. ed. 1999.
Official Method 46-16
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Normas Analíticas do Instituto Adolfo Lutz: Métodos físico-químicos para análise
de alimentos. 4. ed. Brasília: Editora MS, 2005. p. 122-125.
SILVA, Dirceu Jorge; QUEIROZ, Augusto César de. Análises de Alimentos. Métodos Químicos e Biológicos.
3. ed. Minas Gerais: Editora UFV, 2005.
186
MÉTODO Nº 49
Métodos Analíticos Resíduo Insolúvel Revisão: 2009

em HCI
3 páginas
1. Introdução
É o resíduo inorgânico, insolúvel em solução de ácido clorídrico, do material resultante da queima da

amostra a uma temperatura em torno de 600°C, contidos nos produtos de origem mineral, vegetal, animal
ou de misturas.
2. Recomendações

produtos químicos.
3. Escopo
Aplicável a produtos ou subprodutos de origem animal, vegetal ou mineral, rações e concentrados.
Não aplicável
5. Definições
Não aplicável
6. Reações
Não aplicável.
7.1. HNO3 p.a. ou água oxigenada 30 volumes

7.2. Cadinho ou cápsula de porcelana
7.4. Cadinho de porcelana
7.5. Pinça metálica
7.6. Papel de filtro quantitativo, filtração média
7.8. Ácido Clorídrico 1:1
7.8.1. Preparo: Diluir cuidadosamente uma parte de ácido clorídrico p.a. em uma parte igual de água
destilada.
187
8. Equipamentos

8.2. Forno mufla
9. Amostragem

10. Procedimento
Para materiais de origem mineral não é necessário queima da amostra.

O resíduo obtido na queima da amostra, pode não representar toda a substância inorgânica, pois alguns
sais sofrem redução ou volatilização nesta faixa de temperatura.
10.1. Pesar o cadinho ou cápsula de porcelana, limpo e previamente calcinado em mufla a 550°C - 600°C
por 30 minutos e resfriado em dessecador até equilíbrio com a temperatura ambiente.
10.2. Pesar de 2 a 3 g da amostra no cadinho ou cápsula.
10.3. Levar à mufla e gradualmente aumentar a temperatura (550°C - 600°C) até obtenção de cinzas claras
(3 horas no mínimo). Opcionalmente pode-se efetuar pré-queima em placa aquecedora ou bico de Bunsen,
transferindo em seguida para o forno mufla (550°C - 600°C).
10.4. Não se obtendo cinzas claras após o período mínimo de calcinação, recomenda-se a adição de 2 a
3 gotas de HNO3 p.a. ou água oxigenada 30 volumes e retorno ao forno mufla por mais uma hora.
10.5. Retirar a 250°C - 300°C, esfriar em dessecador até equilíbrio com a temperatura ambiente.
10.6. Transferir quantitativamente as cinzas contidas no cadinho para béquer de 250 mL, lavando com
três porções de aproximadamente 20 mL de solução de ácido clorídrico 1:1. Ferver por 5 minutos.
10.7. Filtrar quantitativamente sobre papel de filtro, lavando o resíduo com água destilada quente até
eliminação de todo o ácido.
10.8. Transferir o papel de filtro com resíduo para cápsula ou cadinho de porcelana, previamente tarado.
Levar à mufla e gradualmente aumentar a temperatura. Manter por duas horas (no mínimo) à temperatura
de 550 / 600°C.
10.9. Retirar a 250 / 300°C. Resfriar em dessecador até a temperatura ambiente e pesar.
11. Cálculos
Onde:
A Peso do recipiente + resíduo, em grama

B Peso do recipiente, em grama
188
12. Bibliografia
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Normas Analíticas do Instituto Adolfo Lutz. : Métodos químicos e físicos para
análise de alimentos. 3. ed. São Paulo: PROL, 1985. p. 31

Analytical Chemists. 18. ed. A.O.A.C., 2005. c.4. p.8. method 942.05.
189
MÉTODO Nº 50
Determinação de Selênio
Métodos Analíticos por Via Úmida - Revisão: 2009
Volumetria Iodométrica 4 páginas
1. Introdução
A determinação de Selênio por volumetria é utilizada como alternativa à metodologia por Espectrofotometria
de Absorção Atômica.
O íon selenito em solução ácida é tratado com um excesso de tiossulfato de sódio padronizado. O
excesso não deve ser superior a 6 mL. O tiossulfato de sódio em excesso é quantificado por titulação
com solução padrão de iodo, utilizando amido como indicador.
2. Recomendações
Vide precauções de segurança dos reagentes ácido clorídrico, tiossulfato de sódio, Dicromato de potássio
e Iodeto de potássio.
O Selenito de sódio é um produto cáustico e venenoso. Evitar contato com a pele e olhos, usando luvas
de borracha e óculos de proteção.
3. Escopo
Método aplicável em Selenito de sódio.
Não aplicável.
5. Definições
Não aplicável.
6. Reações

7.2. Tiossulfato de sódio (Na2S2O3) p.a.
7.3. Carbonato de sódio (Na2CO3) p.a.
190
7.4. Dicromato de potássio( K2Cr2O7 ) p.a.
7.5. Iodeto de potássio (KI ) p.a.
7.6. Amido ( C6H10O5 ) p.a.
7.7. Solução de ácido clorídrico 500 mililitros por litro (mL/L)
7.7.1. Preparo: Adicionar lentamente 500 mL de HCl p.a. para cada 500 mL de água destilada, medidos em
proveta. Esfriar, homogeneizar e armazenar.
7.8.1. Preparo: Pesar 24,82 g de Na2S2O3.5H2O p.a. e 0,2g de carbonato de sódio anidro (Na2CO3). Dissolver
em béquer contendo aproximadamente 100 mL de água destilada, fervida e resfriada. Transferir
resfriada. Homogeneizar e deixar em repouso durante 24 horas. Padronizar e estocar em frasco âmbar.
7.8.2. Padronização: Pesar 0,2 g de dicromato de potássio p.a. previamente seco em estufa por 2 horas
a 105°C. Transferir para erlenmeyer de 250 ml com tampa esmerilhada. Acrescentar 70 ml de água destilada,
fervida e fria. Adicionar 2 g de Potássio Iodeto p.a. e solubilizar. Adicionar 20 ml de Ácido Clorídrico 1M.
Tampar o erlenmeyer e estocar imediatamente ao abrigo da luz por 10 minutos. Titular gotejando a solução
de tiossulfato de sódio 0,1M até quase desaparecimento da coloração amarela. Acrescentar 1 ml da
solução indicadora de amido 10g/l e continuar a titulação até o desaparecimento da coloração azul.
Cálculo:
Onde
MR Molaridade real
m Massa do Dicromato de Potássio p.a., em mg
v Volume de Tiossulfato de sódio gasto na titulação, em mL
1 mL de tiossulfato de sódio 0,1 M, equivale a 0,04904 g do dicromato de potássio p.a.
7.9. Solução indicadora de amido 10 g/L

7.9.1. Preparo: Pesar 1g de amido p.a. e transferir para béquer de 250 mL. Adicionar aproximadamente 50
mL de água destilada e aquecer até ebulição. Esfriar. Transferir para balão volumétrico de 100 mL, completar
o volume com água destilada e homogeneizar. Preparar momentos antes do uso.
7.10. Solução volumétrica padronizada de Iodo 0,1M
7.10.1. Preparo: Pesar 36g de iodeto de potássio e dissolver em 100 mL de água destilada. Acrescentar
12,75g de iodo puro, dissolver, transferir para balão de 1000 mL, completar o volume com água destilada
e homogeneizar. Estocar em frasco âmbar em local escuro. Repousar por 24 horas.
7.10.2. Padronização: Pipetar 25 mL da solução de Iodo para erlenmeyer de 250 mL e adicionar 10 mL de
ácido clorídrico 500 mL/L. Titular com solução de tiossulfato de sódio 0,1M até desaparecimento da coloração
castanha característica de iodo (a solução passa de castanho a amarelo palha), então acrescentar 2 mL de
solução de amido 5 g/L. Prosseguir a titulação gota a gota até incolor.
191
Cálculo
Onde
MR¹ Molaridade Real da solução de Iodo 0,1M

25 Alíquota da solução de Iodo 0,1M
MR Molaridade Real da solução de tiossulfato de sódio 0,1M
7.11. Erlenmeyer com tampa

7.13. Béquer de diversos volumes
7.14. Bureta volumétrica
7.16. Pipeta graduada
7.17. Proveta graduada.
8. Equipamentos
8.1. Agitador magnético e barras magnéticas

8.3. Chapa de aquecimento
8.4. Estufa para 150°C
9. Amostragem
10. Procedimento
10.1. Pesar de 1,0 a 3,0g da amostra e transferir para um balão volumétrico de 100 mL. Se a amostra
apresentar resíduo insolúvel, dissolver com 3 mL de ácido clorídrico p.a. Completar o volume com água
destilada e homogeneizar.
10.2. Pipetar 20 mL para erlenmeyer de 250 mL, adicionar 5 mL de ácido clorídrico 500 mL/L, água
destilada até 100mL e 2 mL de amido 5 g/L.
10.3. Acrescentar 50 mL de solução de tiossulfato de Sódio 0,1M e titular imediatamente com a solução
de iodo 0,1M até coloração castanha claro.
192
11. Cálculos
Onde
50 Alíquota de solução de tiossulfato de sódio 0,1M, em mL

MR Molaridade real da solução de tiossulfato de sódio 0,1M
V Volume de solução de iodo 0,1M gasto na titulação, em ml
MR¹ Molaridade real da solução de iodo 0,1M
PA Peso da amostra, em grama
dil Diluição (100/20) = 5.
0,01974 1 mL tiossulfato de sódio 0,1 M equivale a 0,01974 g de selênio(78,96/4/1000).
12. Bibliografia
MARINI, José Luiz. Manual de Análises de Sais Minerais e Matérias Primas. 1992. p. 65.
193
MÉTODO Nº 51
Solubilidade Protéica
em KOH
3 páginas
1. Introdução
O índice de solubilidade em KOH determina o quanto à proteína presente na soja é solúvel em solução de
KOH 0,036 M e em sua posterior quantificação pelos métodos de Kjeldahl ou Dumas.
2. Recomendações
O Ácido Sulfúrico e o Hidróxido de Potássio são prejudiciais à saúde se inalados ou se entrarem em

contato com a pele e olhos, portanto a solução de catalisador líquido, bem como a solução de KOH
0,036M deve ser preparada em capela com o uso de luvas adequadas e óculos de segurança.
3. Escopo
Grãos de oleaginosas e derivados.
Não Aplicável
5. Definições
Não Aplicável
6. Reações
As reações envolvidas dependerão do procedimento para determinação de proteína adotado.
Usar somente reagentes de grau analítico, a não ser que especificado em contrário
7.2. Solução volumétrica padronizada de hidróxido de potássio (0,036 M)
Ajustar a solução de KOH exatamente 0,036 M.
7.2.1. Preparo: Pesar 2,376 g de KOH p.a., solubilizar em água destilada. Transferir quantitativamente para
balão volumétrico de 1000 mL, completar o volume e homogeneizar
7.2.2. Padronização: Pesar com exatidão 0,2 g de biftalato de potássio p.a., previamente seco em estufa
a 120°C por 2 horas. Dissolver em erlenmeyer com aproximadamente 75 mL de água destilada, adicionar
4 gotas de solução alcoólica de fenolftaleína 1% e titular gotejando a solução de KOH até coloração
levemente rósea.
194
Onde
MR Molaridade real
Mol Unidade molar do Biftalato de Potássio
V Volume de KOH gasto na titulação, em mL
8. Equipamentos
8.1. Agitador tipo Wagner ou tipo Kline ou agitador magnético (todos) com controle de rotação
8.3. Centrífuga (1500 rpm)
8.4. Equipamentos usados na determinação de proteína bruta
9. Amostragem

Moer a amostra de maneira que passe em peneira de 0,5 mm
10. Procedimento
Devido à alta sensibilidade do método, trabalhar com solução de KOH exatamente 0,036M.
10.1. Pesar 2 g da amostra, transferir para erlenmeyer de 250 ou 300 mL e adicionar volumetricamente
100 mL de solução de KOH 0,2% (0,036 M).
10.2. Agitar por 20 minutos, o mínimo suficiente para revolver toda a amostra, usando agitador tipo Wagner
ou tipo Kline ou agitador magnético (todos) com velocidade correspondente.
10.3. Centrifugar o sobrenadante por 10 minutos a 1.500 r.p.m.
10.4. Transferir cuidadosamente o sobrenadante para um béquer de 50 mL evitando-se a passagem de
partículas da amostra.
10.5. Pipetar volumetricamente 25 mL do centrifugado e transferir para frasco Kjeldahl ou 10 mL para tubo
de digestão.
10.6. Proceder conforme descrito no método 48 – Proteína Bruta – método Kjeldahl, para determinação
de proteína bruta.
10.7. Proceder paralelamente prova em branco dos reagentes utilizados.
195
11. Cálculos
Para o cálculo da porcentagem de proteína do sobrenadante, utilizar o peso da amostra na alíquota

empregada.
12. Bibliografia
setembro de 1991
196
MÉTODO Nº 52
Métodos Analíticos Tanino Revisão: 2009
3 páginas
1. Introdução
Taninos (do francês tanin) são polifenóis de origem vegetal. As plantas os usam como defesa química
contra o ataque de herbívoros vertebrados ou invertebrados e contra os microorganismos.
Os taninos estão concentrados na testa da semente e formam complexos com carboidratos e principalmente
proteínas, reduzindo assim sua digestibilidade e piorando a palatabilidade, pois confere ao sorgo sabor
adstringente. O tanino pode estar presente no grão de sorgo em menor ou maior concentração, identificando-
os como de baixo ou alto tanino. A presença de altos níveis de tanino, que caracteriza as variedades
resistentes ao ataque de pássaros, tem influência negativa no desempenho dos animais.
2. Recomendações

produtos químicos.
3. Escopo
Aplicável à Sorgo.
Não aplicável.
5. Definições
Não aplicável
6. Reações
7.1. Ácido tânico p.a.

7.3. Ácido fosfomolíbdico hidratado (H3[P(Mo3O10)4].H2O) p.a.
7.4. Carbonato de sódio anidro (Na2CO3) p.a
7.5. Tungstato (wolframato) de sódio (Na2Wo4.2H2O) p.a.
197
7.6. Solução de Folin-Dennis
7.6.1. Preparo: Pesar 2 g de ácido fosfomolíbdico e 10g de tungstato de sódio, adicionar 5mL de ácido
fosfórico em 75 ml de água destilada, transferir para o balão de fundo chato e refluxar por 2 horas em
condensador. Esperar esfriar, transferir para balão volumétrico de 100 mL e completar o volume com
água destilada.
7.7. Solução saturada de carbonato de sódio
7.7.1. Preparo: Dissolver 35 g de carbonato de sódio em 100 mL de água destilada a (70 – 80°C), aquecer
até dissolver completamente.
7.8. Solução padrão de ácido tânico
7.8.1. Preparo: Dissolver 50 mg de ácido tânico em 500 mL de água destilada. Transferir 20 mL desta
solução para balão volumétrico de 100 mL e completar o volume com água destilada.
7.9. Balão fundo chato 250 mL junta esmerilhada 24/40
7.10. Balões volumétricos de 500 mL e 100 mL
7.11. Condensador
7.12. Pipeta volumétrica de 5 mL e 20 mL
7.13. Pipetas graduadas de 5 mL e 10 mL
8. Equipamentos

8.2. Centrífuga
9. Amostragem
10. Procedimento
Caso o laboratório não possua centrífuga, é possível substituir deixando a amostra em repouso por 15
minutos.
10.1. Confecção da Curva Padrão

10.1.1. Pipetar para balões volumétricos de 100 mL, contendo 60 mL de água destilada e 2 mL da solução
de Folin-Denis, alíquotas de 0,5 mL; 1,0 mL; 1,5 mL; 2,0 mL; 2,5 mL e 3,0 mL da solução padrão de ácido
tânico. Seguir os passos 10.2.5, 10.2.6, 10.2.7 e 10.2.8 do Procedimento Analítico.
10.1.2. Existe a possibilidade de preparar apenas um ponto da curva de concentração (0,1mg) para leitura
juntamente com a amostra todas as vezes que realizar análise. Para isso transferir 20mL da solução de
ácido tânico para balão volumétrico de 100 mL e completar o volume com água destilada.
10.2.1. Pesar 0.5g de amostra e transferir para balão de fundo chato adaptado a um refluxo, adicionar 90
mL de água destilada e refluxar por 5 horas.
10.2.2. Deixar esfriar, transferir para balão volumétrico de 100 mL e completar o volume com água destilada.
10.2.3. Centrifugar por 5 minutos. Pipetar uma alíquota de 5 mL do sobrenadante e transferir para balão
volumétrico de 100 mL , adicionar 5 mL do reagente de Folin-Dennis, 10 mL da solução de carbonato de
sódio e completar o volume com água destilada.
198
10.2.4. Agitar bem e aguardar por 30 minutos.
10.2.5. Fazer o padrão, adicionando 5 mL da solução diluída padrão de ácido tânico (0,1 mg), 5 mL do
reagente de Folin-Dennis, 10 mL de carbonato de sódio e completar o volume com água destilada em
balão volumétrico de 100 mL.
10.2.6. Fazer um branco com 5 mL do reagente de Folin-Dennis, 10 mL de carbonato de sódio e completar
o volume com água destilada em balão volumétrico de 100 mL.
10.2.7. Fazer a leitura em absorbância, após zerar com o branco, usando 760 nm de comprimento de
onda ou o estabelecido por meio de varredura.
11. Cálculo
Onde:
ASBA Absorbância da amostra

CP Concentração do padrão na alíquota de leitura
ASBP Absorbância do padrão
CA Concentração da amostra na alíquota de leitura
12. Bibliografia
ASSOCIATION OF OFICIAL ANALYTICAL CHEMISTS. Official methods of analysis. 15. ed. 1990. method
952.03
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Métodos Físico-Químicos para Análise de Alimentos. 4. ed. Brasília: Instituto
Adolfo Lutz, 2005. método 255/IV.
199
MÉTODO Nº 53
Teste de Rancidez -
Reação de Kreiss
3 páginas
1. Introdução
Rancidez é o nome que se dá às alterações no odor e no sabor do alimento, provocada pela ação do ar
(rancidez oxidativa) ou de microrganismos (rancidez cetônica). A floroglucina reage em meio ácido com
os triglicerídeos, dando uma coloração rósea ou vermelha, cuja intensidade aumenta com a deterioração
devida, provavelmente, à presença de aldeído malônico ou de aldeído epidrínico. Geralmente, quando a
coloração de Kreiss é intensa, pode-se deduzir que o valor do índice de peróxido será elevado.
2. Recomendações

produtos químicos.
3. Escopo
Aplicável a produtos cárneos e a óleos e gorduras.
Não aplicável.
5. Definições
Não aplicável
6. Reações

7.3. Floroglucina p.a.
7.4. Permanganato de potássio p.a.
7.5. Solução de Floroglucina 0,1%
7.5.1. Preparo: Pesar 0,1g de floroglucina p.a. e dissolver em éter etílico p.a. para balão volumétrico de
100 mL . Esta solução deve ser preparada no mesmo dia.
200
7.6. Solução de Permanganato de Potássio 0,002 M
7.6.1. Preparo: Pese 0,32 g de KMnO4 e transfira para um béquer de 2L. Adicione 1000 mL de água, cubra
com um vidro de relógio e leve a ebulição. Deixe a solução em fervura suave durante cerca de 20
minutos. Esfrie à temperatura ambiente, deixe em repouso em frasco fechado por alguns dias, no escuro,
e filtre através de cadinho de Gooch com placa porosa. Transfira o filtrado para frasco escuro, com rolha
esmerilhada.
7.8. Cadinho de Gooch com placa porosa
7.9. Erlenmeyer 250 mL
7.10. Papel de filtro qualitativo ou algodão hidrófilo
7.11. Pipeta graduada de 5mL
7.12. Proveta de 25 ou 50 mL com tampa ou tubo de ensaio de no mínimo 20 mL com tampa
8. Equipamentos
8.1. Agitador Kline ou magnético

8.3. Banho-maria
9. Amostragem
10. Procedimento
É possível utilizar a gordura extraída pelo extrator Soxhlet, após a determinação de extrato etéreo.
10.1. Pesar 50g de amostra previamente moída, adicionar 100 mL da solução de éter de petróleo e agitar
em agitador Kline ou magnético durante 30 minutos. (Opcionalmente pode-se deixar a amostra em contato
com o éter, ao abrigo da luz e calor, por uma noite).
10.2. Filtrar em funil de vidro contendo papel de filtro qualitativo ou algodão.
10.3. Receber o filtrado em um erlenmeyer de 250 mL e evaporar o resíduo de éter em banho-maria a
80°C.
10.4. Colocar em estufa a 105°C, durante 10 minutos. Esfriar em dessecador. Este processo de evaporação
também pode ser realizado, opcionalmente, no rotaevaporador.
10.5. Transfira, com auxílio de uma pipeta, 5mL da gordura fundida para uma proveta ou tubo de ensaio
com tampa. Adicione 5mL de ácido clorídrico, tampe e agite por 30 segundos.
10.6. Adicione 5 mL de solução de floroglucina 0,1%, tampe e agite novamente por 30 segundos. Deixe
em repouso por 10 minutos.
Na presença de substâncias rançosas, a camada inferior apresentará coloração rósea ou vermelha.

Se a intensidade da coloração for fraca, compare a camada inferior com uma solução de permanganato
de potássio (KMnO4) 0,0012% (3,8 mL de uma solução 0,002M diluído para 100mL). Se a intensidade for a
mesma, ou inferior, pode-se deixar de levar em consideração o resultado, contanto que as características
sensoriais do produto sejam satisfatórias.
201
11. Cálculo
Não aplicável
12. Bibliografia
INSTITUTO ADOLFO LUTZ . Normas Analíticas do Instituto Adolfo Lutz.: Métodos químicos e físicos para
análise de alimentos. 4. ed. São Paulo: PROL, 2005. p. 507 – 508
202
MÉTODO Nº 54
Métodos Analíticos Umidade - Revisão: 2009

Método Direto
2 páginas
1. Introdução
A amostra de alimento se destila adicionando tolueno. O azeótropo formado, tolueno/água, se separa

devido à reduzida densidade do tolueno após a condensação. A água arrastada é medida após o término
da destilação.
2. Recomendações

produtos químicos.
3. Escopo
Amostras líquidas, forragens, silagens e outras passíveis de alterações quando analisadas pelo método
indireto.
Não aplicável
5. Definições
Não aplicável
6. Reações
Não aplicável
7.1. Tolueno p.a.

7.2. Balão de fundo redondo ou chato, capacidade 500 mL com junta esmerilhada
7.3. Condensador Liebig com junta esmerilhada.
8. Equipamentos
203
8.2. Manta ou placa aquecedora com controle de temperatura
8.3. Sistema receptor graduado de “Dean and Stark” ou “Bidwell Stirling” com capacidade para 10 mL ou
20 mL, divisão 0,1 mL com juntas (superior e inferior) esmerilhadas.
9. Amostragem
10. Procedimento
10.1. Pesar 20 a 30 g da amostra “in natura” (ou conforme a quantidade de água estimada), diretamente no
balão.
10.2. Adicionar aproximadamente 200 mL de Tolueno p.a., conectar ao sistema e este ao condensador.
10.3. Aquecer a mistura lentamente, controlando a temperatura para manter o líquido em constante ebulição.
10.4. Destilar até volume constante da fase aquosa no tubo graduado.
10.5. Desligar e proceder à leitura do volume final à temperatura ambiente.
11. Cálculo
Onde:
V Volume da fase aquosa no tubo graduado, em mL

12. Bibliografia
3. ed. Minas Gerais: Editora UFV, 2005. p. 33-35.
MATISSEK, R; SCHNEPEL, F.M; STEINER, G. Analisis de los alimentos: Fundamentos, métodos,

aplicaciones. 2.ed. Espanha: Ed. Acribia, 1992. p.8-9
204
MÉTODO Nº 55
Métodos Analíticos Umidade e Voláteis Revisão: 2009

em Grãos
3 páginas
1. Introdução
Umidade e voláteis corresponde à perda em peso sofrida pela amostra quando aquecida em condições
nas quais a água e outras substâncias voláteis são removidas.
Existem muitas variações quanto ao tamanho, temperaturas e tempo de método padrão sendo esta
metodologia uma sugestão que não invalida a utilização de métodos diferentes, mais que possam reproduzir
resultados semelhantes ao método sugerido.
2. Recomendações
Ao utilizar estufa sem circulação de ar, recomenda-se não processar grande número de amostras
simultaneamente.
3. Escopo
Grãos de cereais e oleaginosas.
Não aplicável
5. Definições
A expressão “até peso constante” significa que os valores obtidos em duas pesagens sucessivas diferem
no máximo, em 0,0005 g por grama de substância.
Subentende-se “temperatura ambiente” como sendo a temperatura de 25°C (± 10°C).
6. Reações
Não aplicável
7.1. Cadinho pesa filtro ou cápsula de alumínio

7.2. Dessecador com cloreto sílica-gel anidro
205
7.3. Espátula
7.4. Moinho
8. Equipamentos

8.2. Estufa de secagem (preferencialmente com circulação de ar)
9. Amostragem

A amostra não deve sofrer aquecimento durante o processo de moagem, pois isto acarreta em perda de
umidade, aconselha-se o uso de moinho do tipo ultra-centrífugo
10. Procedimento
Não deixar pesa filtro ou cadinho de alumínio em dessecador por um período superior a 3 horas.
10.1. Pré-secagem utilizando estufa a 45°C por 24 horas

10.1.1. Pesar uma cápsula de alumínio ou cadinho pesa filtro, previamente seco em estufa a 135°C ± 5°C
e resfriado em dessecador até temperatura ambiente, registrar a identificação e o peso.
10.1.2. Pesar aproximadamente 15 gramas da amostras do grão na cápsula de alumínio ou cadinho pesa
filtro.
10.1.3. Colocar em estufa a 45°C ± 2°C por 24 horas
10.1.4. No final deste tempo, retirar e colocar em dessecador até equilíbrio com a temperatura ambiente.
10.1.5. Pesar, anotar e determinar a umidade da etapa de pré-secagem.
10.1.6. Moer e reservar esta amostra para secagem definitiva.
10.2. Secagem definitiva utilizando estufa com circulação forçada de ar a 135°C por duas horas
10.2.1. Pesar uma cápsula de alumínio ou cadinho pesa filtro, previamente seco em estufa a 135°C ± 5°C
e resfriado em dessecador até temperatura ambiente, registrar a identificação e o peso.
10.2.2. Pesar aproximadamente 3 gramas da amostras do grão que sofreu pré-secagem e moagem, na
cápsula de alumínio ou cadinho pesa filtro.
10.2.3. Colocar em estufa a 135°C ± 5°C por 2 horas ou até peso constante.
10.2.4. No final deste tempo, retirar e colocar em dessecador até equilíbrio com a temperatura ambiente.
10.2.5. Pesar, anotar e determinar a umidade da etapa de secagem definitiva.
11. Cálculo
11.1. Cálculo da umidade da pré-secagem
206
Onde:
U¹ Umidade pré-secagem (%)
A Peso do pesa filtro ou cadinho de alumínio, em grama
B Peso do pesa filtro ou cadinho de alumínio + amostra úmida, em grama
C Peso do pesa filtro ou cadinho de alumínio + amostra após secagem, em grama
11.2. Cálculo da umidade da secagem definitiva
Onde:
U² Umidade secagem definitiva (%)
D Peso do pesa filtro ou cadinho de alumínio, em grama
E Peso do pesa filtro ou cadinho de alumínio + amostra úmida, em grama
F Peso do pesa filtro ou cadinho de alumínio + amostra após secagem, em grama
11.3. Cálculo da umidade corrigida

11.3.1. Fator de correção:
11.3.2. Umidade corrigida:
11.4. Cálculo da umidade total
12. Bibliografia
ASSOCIATION OF OFFICIAL ANALYTICAL CHEMISTS Official Methods of Analysis. 18. ed. AOAC
INTERNATIONAL, Gaithersburg, MD, USA, 2005. method 934.01
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Normas Analíticas do Instituto Adolfo Lutz: Métodos físico-químicos para análise
de alimentos. 4. ed. Brasília: Editora MS, 2005. p. 98-99.
3. ed. Minas Gerais: Editora UFV, 2005. p. 23-29.
LAZZARI, A. Flávio. Umidade, Fungos e Micotoxinas na Qualidade de Sementes, Grãos e Rações. 1. ed.
Curitiba: Ed. do Autor, 1993.
207
MÉTODO Nº 56
Métodos Analíticos Umidade e Voláteis Revisão: 2009
3 páginas
1. Introdução
Umidade e voláteis corresponde à perda em peso sofrida pela amostra quando aquecida em condições
nas quais a água e outras substâncias voláteis são removidas.
2. Recomendações
Ao utilizar estufa sem circulação de ar, recomenda-se não processar grande número de amostras
simultaneamente.
3. Escopo
Produtos e subprodutos de origem vegetal, animal e mineral, rações e concentrados.
Não aplicável
5. Definições
Não aplicável
6. Reações
Não aplicável
7.1. Pesa filtro ou cápsula de alumínio

7.2. Dessecador com cloreto de cálcio ou sílica-gel anidros.
7.3. Espátula
8. Equipamentos

8.2. Estufa de secagem 105°C ± 5°C
208
9. Amostragem
10. Procedimento
10.1. Pesar a cápsula ou pesa filtro, limpo e previamente seco em estufa a 105°C por uma hora, resfriar
em dessecador até temperatura ambiente.
10.2. Pesar de 3 a 5 g da amostra.
10.3. Colocar em estufa pré-aquecida a 105°C até peso constante (4 a 6 horas).
10.4. Retirar o recipiente da estufa, esfriar em dessecador até equilíbrio com a temperatura ambiente.
10.5. Pesar.
11. Cálculo
Onde:
A Peso do recipiente + amostra, em grama

B Peso do recipiente + amostra após secagem, em grama
12. Bibliografia
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Normas Analíticas do Instituto Adolfo Lutz.: Métodos químicos e físicos para
análise de alimentos. 3 ed. São Paulo: IMESP, 1985. p. 21-22.
209
MÉTODO Nº 57
Métodos Analíticos Uréia Revisão: 2009
4 páginas
1. Introdução
Consiste na determinação do nitrogênio da uréia, liberado pela ação enzimática da urease.
2. Recomendações

produtos químicos.
3. Escopo
Esse procedimento é aplicável à uréia ou produtos que a contenham.
Não aplicável
5. Definições
Não aplicável
6. Reações
7.1. Cloreto de cálcio (CaCl2) p.a.

7.2. Óxido de magnésio (MgO) p.a.
7.3. Urease p.a. ou “Jack bean meal”(feijão branco)
7.4. Uréia (CH4N2O) p.a.
7.5. Acido bórico 4%
7.6. Solução reagente neutra de urease 1%
7.6.1. Determinação da acalinidade: Pesar exatamente 0,1 g de urease p.a., dissolver em 50 mL de água
destilada e titular com solução volumétrica padronizada de HCl 0,1M, utilizando vermelho de metila 0,1%
como indicador até viragem para coloração rósea. Anotar a quantidade de HCl 0,1M necessária para
neutralizar 0,1 g de urease.
7.6.2. Preparo: Pesar exatamente 1 g de urease p.a. em béquer de 100 mL e dissolver com
aproximadamente 50 mL de água destilada. Neutralizar esta solução utilizando a relação gramas de urease
210
p.a. / mL de HCl 0,1 M obtida na determinação da alcalinidade. Transferir para balão volumétrico de 100
mL, completar o volume com água destilada e homogeneizar.
7.6.3. Determinação da atividade enzimática: Adicionar quantidades crescentes de solução neutra de
urease 1% a várias amostras de 0,1 g de uréia p.a. e prosseguir a partir do item 10.2 do procedimento.
Conforme os resultados obtidos, determina-se a quantidade mínima de solução necessária para hidrolizar
0,1 g de uréia.
7.7. Solução volumétrica padronizada de ácido clorídrico 0,1 M
7.7.1. Preparo: Medir 8,5 mL de HCI p.a. e transferir para balão volumétrico de 1.000 mL, contendo
7.8. Solução volumétrica padronizada de ácido sulfúrico 0,1 M
7.8.1. Preparo: Medir 5,5 mL de H2SO4 p.a. e transferir para balão volumétrico de 1000 mL contendo
7.9. Solução volumétrica padronizada de hidróxido de sódio 0,2 M
7.9.1. Preparo: Pesar cerca de 8,2 g de NaOH p.a. e dissolver em água destilada. Transferir quantitativamente
para balão volumétrico de 1.000 mL, completar o volume e homogeneizar.
7.10. Solução indicadora mista
7.10.1. Preparo: Dissolver 0,132 g de vermelho de metila p.a. em 70 mL de etanol p.a. Transferir
quantitativamente para balão volumétrico de 200 mL. Dissolver 0,066g de verde de bromocresol p.a.
em 70 mL de etanol p.a.. Juntar ao balão contendo vermelho de metila, completar o volume com
etanol p.a. e homogeneizar. Observação: O indicador misto poderá ser incorporado à solução de ácido
bórico 4% (8 mL por litro).
7.11. Solução reagente de cloreto de cálcio 25%
7.11.1. Preparo: Pesar 25 g de CaCl 2 p.a. em béquer e dissolver com água destilada. Transferir
7.12. Solução antiespumante
7.13. Vermelho de metila
7.14. Bureta (div. 0,05mL)
7.15. Conjunto Kjeldahl para destilação macro
7.17. Frasco Kjeldahl de 500 ou 800 mL
7.18. Pérolas de vidro 4 a 6 mm
7.19. Provetas de 10 e 100 mL
8. Equipamentos
9. Amostragem
10. Procedimento
Quando houver viragem da cor vermelha para amarela durante a fase de destilação, desconsiderar a
análise em processo.
211
10.1. Pesar de 0,2 a 2 g da amostra, conforme o teor esperado de uréia e transferir para frasco Kjeldahl de
500 ou 800 mL.
10.2. Adicionar aproximadamente 300 mL de água destilada e 10 mL de solução neutra de urease 1% ou
“Jack bean meal” em excesso (500 - 600 mg). Tampar hermeticamente e deixar à temperatura ambiente
por 1 hora ou 20 minutos a 40°C.
10.3. Abrir o frasco Kjeldahl e, sem agitar, adicionar 2 g de óxido de magnésio p.a., 5 mL de solução de
cloreto de cálcio 25%, 3 mL de solução antiespumante e 7 - 8 pérolas de vidro.
10.4. Levar ao destilador, arrolhando rapidamente o frasco. Agitar e proceder à destilação. Destilar de
modo que o condensado seja obtido à temperatura ambiente.
Nota: O terminal do condensador deve ficar mergulhado na solução durante a fase de destilação.
10.5. Recolher cerca de 150 a 200 mL do destilado em erlenmeyer de 300 mL ou 500 mL, contendo 50 mL
de solução de ácido bórico 4% ou volume de solução de H2SO4 0,1 M, conforme o percentual de uréia
esperado. (Neste caso, utilizar como indicador vermelho de metila 0,1%).
Nota: Orientação para volumes de H2SO4 0,1 M a serem utilizados, de acordo com o percentual de uréia
esperado:
Concentração Esperada de Uréia mL H2SO4 0,1 M
até 1% 5
2% 10
5% 25
Proceder sempre a uma prova de recuperação utilizando uréia p.a. (100 a 200 mg). Para valores esperados
acima de 5%, pesar massa correspondente e usar alíquota apropriada.
10.6. Retirar o erlenmeyer, lavar o terminal do condensador e titular com HCl 0,1 M quando a solução
receptora for H3BO3 4%, ou com NaOH 0,2 M, quando a solução receptora for H2SO4 0,1 M. Proceder à
titulação conforme descrito na metodologia para determinação de proteína bruta.
10.7. Recolher aproximadamente 200 mL do destilado, mantendo o terminal do condensador mergulhado
na solução receptora até que toda a amônia seja liberada.
10.8. Retirar o erlenmeyer, lavar o terminal do condensador e titular o excesso de ácido com solução de
NaOH 0,2 M até viragem do indicador (vermelho para amarelo). Observação: Ao utilizar ácido bórico 4%
empregar como titulante HCl 0,1 M até viragem do indicador misto (verde para rosa).
11. Cálculos
11.1. Procedimento com uso de H2SO4 0,1 M (titulação com NaOH):
Onde:
Va Volume da solução de H2SO4 0,1 M utilizado, em mL

Vb Volume da solução de H2SO4 0,1 M utilizado na prova em branco, em mL
F¹ Fator de correção da solução de H2SO4 0,1 M
Vs Volume da solução de NaOH 0,2 M gasto na titulação, em mL
212
F² Fator de correção da solução de NaOH 0,2 M
2,143 Fator de transformação do nitrogênio em uréia
11.2. Procedimento com uso de ácido bórico (titulação com HCl):
Onde:
Va Volume da solução de HCl 0,1 M gasto na titulação, em mL

Vb Volume da solução de HCl 0,1 M gasto na prova em branco, em mL
F¹ Fator de correção da solução de HCl 0,1 M
M¹ Molaridade da solução de HCl
2,143 Fator de transformação do nitrogênio em uréia
12. Bibliografia
setembro de 1991
213
MÉTODO Nº 58
Métodos Analíticos Determinação de Zinco - Revisão: 2009

Via Úmida
4 páginas
1. Introdução
A determinação de zinco por volumetria é utilizada como alternativa à metodologia por Espectrofotometria
de Absorção Atômica
Baseia-se na reação da amostra com o cloreto de amônio, para eliminação de contaminação por outros
metais. Posteriormente é adicionado excesso de ácido sulfúrico formando sulfato de zinco e o excesso
do ácido presente é titulado com solução alcalina de titulo conhecido.
2. Recomendações

produtos químicos.
3. Escopo
Método aplicável em Óxido de Zinco.
Não aplicável.
5. Definições
Não aplicável.
6. Reações
7.1. Ácido sulfúrico (H2SO4) p.a. (d = 1,84 g/mL)

7.2. Carbonato de sódio (Na2CO3) p.a.
7.3. Cloreto de amônio (NH4Cl) p.a.
214
7.5. Solução de Ácido Sulfúrico 0,5M
7.5.1. Preparo: Medir 27,5 mL de ácido sulfúrico p.a. e transferir para balão volumétrico de 1000 mL,
contendo aproximadamente 500 ml de água destilada. Esfriar, completar o volume com água destilada e
homogeneizar.
7.5.2. Padronização: Pesar exatamente 1,00 g de carbonato de sódio (Na2CO3) p.a. previamente seco em
mufla a 270°C por uma hora. Dissolver em erlenmeyer, adicionando aproximadamente 30 mL da solução
de H2SO4 0,5M e 4 gotas de solução de vermelho de metila. Prosseguir a titulação gotejando a solução de
H2SO4 0,5M até leve coloração rósea. Aquecer até ebulição e esfriar. Havendo permanência da coloração
rósea, considerar terminada a titulação. Caso contrário, prosseguir repetindo a operação até coloração
permanente.
Onde
MR Molaridade real da solução de H2SO4

P Peso do Na2CO3, em mg
V Volume de H2SO4 0,5M gasto na titulação, em mL
mol Unidade molar do Na2CO3
7.6. Solução volumétrica padronizada de hidróxido de sódio 1M

7.6.1. Preparo: Pesar aproximadamente 45 g de NaOH p.a. e dissolver em água destilada. Transferir
7.6.2. Padronização: Pesar exatamente 3,0 g de biftalato de potássio p.a. previamente seco em estufa a
120°C por duas horas. Dissolver em erlenmeyer com aproximadamente 75 mL de água destilada. Adicionar
4 gotas de solução indicadora de fenolftaleína 10g/L e titular gotejando a solução de NaOH 1M até
coloração levemente rósea.
Onde

P Peso do biftalato de potássio, em mg
V Volume de NaOH 1M gasto na titulação, em mL
mol Unidade molar do biftalato de potássio
215
7.7. Solução alcoólica indicadora de vermelho de metila 1 g/L
7.7.1. Preparo: Dissolver 0,1 g de vermelho de metila p.a. em aproximadamente 40 mL de água destilada.
Transferir para balão volumétrico de 100 mL, completar o volume com álcool etílico e homogeneizar.
7.8. Solução alcoólica indicadora de fenolftaleína 10 g/L
7.8.1. Preparo: Dissolver 1,0 g de fenolftaleína p.a. em aproximadamente 40 mL de água destilada. Transferir
para balão volumétrico de 100 mL, completar o volume com álcool etílico e homogeneizar.
7.11. Bureta
7.12. Cápsula ou cadinho de porcelana
7.13. Erlenmeyer
8. Equipamentos

8.2. Forno mufla
9. Amostragem

10. Procedimento
10.1. Pesar 1,5 g da amostra, previamente moída e homogeneizada, em cadinho ou cápsula de porcelana.
10.2. Levar ao forno mufla e aumentar gradualmente a temperatura até 550/600°C. Manter durante 2 horas.
10.3. Retirar a 250°C e resfriar em dessecador até equilíbrio com a temperatura ambiente.
10.4. Transferir quantitativamente com o auxílio de bastão de vidro e água destilada para erlenmeyer de
500 mL contendo 2,5 g de cloreto de amônio.
10.5. Adicionar 50 mL de solução de H2SO4 1M. Aquecer até dissolução e esfriar a temperatura ambiente.
10.6. Adicionar 5 a 10 gotas de solução de vermelho de metila 1 g/L e titular com solução de hidróxido de
sódio 1M até viragem de vermelho para amarelo.
11. Cálculos
Onde:
V¹ Volume da solução de H2SO4 1M empregada, em mL
M¹ Molaridade real da solução de H2SO4 1M
V² Volume da solução de NaOH 1M gasto na titulação, em mL
M² Molaridade real da solução de NaOH 1M
1 mL de H2SO4 1M equivale 0,032685 g do zinco
216
12. Bibliografia
preparação, purificação. 2. ed. 1972
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Métodos físico-químicos para análise de alimentos. 4. ed. 2005
217

Metodos - Analiticos I245

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Tabela 1 – Recomendações para a seleção de planos de amostragem

1. Existência (ou não) de documentos nacionais ou internacionais de referência na amostragem dos

3. Natureza da característica de controle

6. Escolha do tipo de plano de amostragem

Métodos Analíticos Índice de Acidez I - Revisão: 2009

Antes da aplicação do método é imprescindível observar as condições de segurança e manuseio dos

Aplicável a produtos e subprodutos de origem animal e vegetal, rações e concentrados.

6.1. Hidrólise de uma molécula de triglicerídio (formação dos AGL):

7.1. Álcool Etílico Absoluto p.a.

Cálculo da molaridade real:

7.8. Carvão ativado

8.1. Balança analítica (resolução de 0,0001 g)

Para a retirada de amostras na Produção, vide capítulo Amostragem.

10.1. Pesar 5 g de amostra em erlenmeyer ou béquer de 250 mL;

Antes da aplicação do método é imprescindível observar as condições de segurança e manuseio dos

Aplicável a óleos brutos e refinados, vegetais e animais e gorduras animais.

6.1. Hidrólise de uma molécula de triglicerídio (formação dos AGL):

7.1. Álcool Etílico Absoluto p.a.

7.9. Balão volumétrico de 100 e 1000 mL

8.1. Balança analítica (resolução de 0,0001 g)

Para a retirada de amostras na Produção, vide capítulo Amostragem.

Antes da aplicação do método é imprescindível observar as condições de segurança e manuseio dos

Aplicável a melaço de cana e seus semelhantes.

6.1. Hidrólise de uma molécula de triglicerídio (formação dos AGL):

7.1. Álcool Etílico Absoluto p.a.

Cálculo da molaridade real:

7.8. Balão volumétrico de 100 e 1000 mL

8.1. Balança analítica (resolução de 0,0001 g)

Para a retirada de amostras na Produção, vide capítulo Amostragem.

10.1. Pesar 2 g de amostra em erlenmeyer ou béquer de 250 mL;

VA Volume de NaOH 0,1 M gasto na titulação da amostra, em mL

Métodos Analíticos Índice de Acidez Revisão: 2009

Antes da aplicação do método é imprescindível observar as condições de segurança e manuseio dos

Aplicável em leite em pó integral, desnatado e soro de leite.

7.1. Solução alcoólica indicadora de Fenolftaleína 1%

7.3. Erlenmeyer de 250 mL

8.1. Balança analítica (resolução de 0,0001 g)

Para a retirada de amostras na Produção, vide capítulo Amostragem.

10.1. Pesar de 5 g de amostra em erlenmeyer de 250 mL.

V Volume de NaOH 0,1 M gasto na titulação da amostra, em mL

Antes da aplicação do método é imprescindível observar as condições de segurança e manuseio dos

Aplicável a óleos e gorduras de origem vegetal e animal.

7.1. Ácido clorídrico (HCl) p.a.

8.1. Balança analítica (resolução de 0,0001 g)

Para a retirada de amostras na Produção, vide capítulo Amostragem.

10.1. Pesar 1 g de amostra em béquer de 250 mL.

A Peso do balão de Soxhlet + resíduo, em grama.

ASSOCIATION OF OFICIAL ANALYTICAL CHEMISTS. Official methods of analysis of the Association of

Métodos Analíticos Atividade Ureática Revisão: 2009

Antes da aplicação do método é imprescindível observar as condições de segurança e manuseio dos