INFORME DE LA PRÁCTICA N° 5

DETERMINACIÓN DE PROTEÍNAS TOTALES EN SUERO

SANGUÍNEO

1.- OBJETIVOS

 Determinar las concentraciones de proteínas totales en suero sanguíneo.

 Conocer en cantidad porcentual el valor de la Albúmina en un paciente.
 Tener conocimiento respecto a los distintos métodos de análisis de proteínas.
 Conocer las enfermedades ligadas a un incremento o descenso de los niveles de
proteínas en sangre.
 Evaluar los mecanismos de control homeostáticos.

2.- MATERIALES

 Tubos de ensayo  Baño maría

 Pipetas  Kit de proteínas
 Micro pipetas  Suero sanguíneo
 Beakers  Jeringa y agujas
 Espectrofotómetro  Algodón
 Centrífuga  Alcohol yodado

3.- MARCO TEÓRICO

El plasma sanguíneo contiene numerosas sustancias, aunque el agua representa más del
90% de su masa. En mamíferos a las proteínas plasmáticas corresponde entre un 6% y
un 8%, mientras que las sustancias inorgánicas (Na+ y Cl–, principalmente) no son más
del 1%. El resto corresponde a nutrientes (glucosa, aminoácidos, lípidos y vitaminas),
restos nitrogenados, gases (O2 y CO2) y hormonas.

Las proteínas plasmáticas se encuentran en suspensión (o disolución) coloidal en el

plasma y, dado que la mayor parte no pueden atravesar membranas o filtros biológicos
(son demasiado grandes como para pasar por los poros de las paredes capilares),
permanecen en el plasma sin acceder al líquido intersticial, en los animales con sistema
circulatorio cerrado, ni a las células, en los de sistema abierto. Ejercen por ello una
presión osmótica distinta de la que ejercen las sustancias disueltas de menor tamaño. Se
denomina presión coloidosmótica y es responsable de que no se produzca excesiva
transferencia de agua de la sangre al líquido intersticial. Además del efecto
coloidosmótico, las proteínas plasmáticas amortiguan los cambios de pH de la sangre.

Aparte de los vertebrados, el grupo cuyas proteínas plasmáticas (en este caso de la
hemolinfa) mejor se conocen es el de los artrópodos. De especial importancia es una
familia implicada en la formación del exoesqueleto que, como es sabido, se renueva
repetidas veces para permitir el aumento de tamaño. La construcción del caparazón
nuevo conlleva la polimerización de fenoles por fenoloxidasas (PO), proceso en el que
participan dos clases de proteínas: (1) hexamerinas, que transportan fenoles a las células
epiteliales que producen el exoesqueleto, y (2) formas inactivas de las POs (ProPO), que
se activan tras la muda y cuando se necesita reparar tejido dañado. Las ProPOs están
también implicadas en las respuestas inmunes de los artrópodos.

En la sangre de los vertebrados hay tres clases principales de proteínas: albúminas,

globulinas y fibrinógeno. En el cuerpo humano las albúminas representan el 55% y
contribuyen por ello de forma importante a la presión coloidosmótica del plasma.
Aparte del papel osmótico su principal función es la de transportar, combinándose con
ellas, sustancias insolubles en agua, como bilirrubina, sales biliares y ácidos grasos. Las
globulinas representan el 38% y se encuentran en tres posibles formas: alfa (α), beta (β)
y gamma (γ). Cumplen funciones de (1) transporte; α-globulinas y β-globulinas
específicas transportan sustancias tales como la hormona tiroidea, el colesterol o el
hierro (esta última se llama transferrina y es la más abundante); (2) coagulación (α-
globulinas y β-globulinas); (3) reguladoras: son α-globulinas ciertas proteínas que se
encuentran inactivas y que son precursoras de, por ejemplo, hormonas; son activadas
por señales específicas en función de su necesidad; (4) inmunitarias: las
inmunoglobulinas (anticuerpos) son γ-globulinas.

Dada su naturaleza hidrofóbica, el transporte de sustancias lipídicas en la sangre se

produce mediante la formación de complejos lipoproteínicos. La mayor parte de los
triglicéridos, el colesterol y los fosfolípidos se encuentran en el plasma en forma de
gotitas unidas a transportadores proteicos, formando complejos de lipoproteínas que son
solubles. Los cuatro tipos de lipoproteínas son: (1) de alta densidad (HDLs), con alto
contenido proteico, menor de fosfolípidos y menor aún de colesterol; (2) de baja
densidad (LDLs), con menor contenido de proteína, algo de fosfolípidos y más de
colesterol; (3) muy baja densidad (VLDLs), con muy bajo contenido de proteína y alto
de lípido, triglicéridos en este caso; y (4) quilomicrones, que son producidos por las
células absortivas del intestino y que transportan triglicéridos, colesterol y fosfolípidos
tras una comida.

El colesterol que se transporta mediante lipoproteínas de baja densidad (LDL) es el

conocido popularmente como “colesterol malo”, porque la función de esas lipoproteínas
es la de transportar el colesterol a las células y, por lo tanto, también lo transporta a las
que tapizan el interior de los vasos sanguíneos, razón por la cual contribuye a que se
acumule en esos enclaves. Es por ello causa importante de patologías cardiovasculares.
A diferencia del LDL, el “colesterol bueno” es retirado de las células por lipoproteínas
de alta densidad para transportarlo al hígado y metabolizarlo allí. De ahí el diferente
significado de una y otra forma de lipoproteínas.

Además de las reseñadas hasta ahora, hay animales en cuyas cavidades internas el fluido
correspondiente (líquido celómico, hemolinfa o sangre) contiene proteínas con
funciones respiratorias. Se trata de pigmentos respiratorios que no se encuentran en el
interior de células especializadas, sino que desempeñan sus funciones manteniéndose en
suspensión coloidal. Nos referiremos a estas proteínas en una próxima anotación
dedicada a específicamente a los pigmentos respiratorios.

3.1.- LAS PROTEÍNAS PLASMÁTICAS MÁS IMPORTANTES SON:

 FIBRINÓGENO.- El fibrinógeno es una proteína soluble del plasma sanguíneo

precursor de la fibrina, su longitud es de 46 nm, su peso 340 kDa.
Es responsable de la formación de los coágulos de sangre. Cuando se produce
una herida se desencadena la transformación del fibrinógeno en fibrina gracias a
la actividad de la trombina. Es una molécula fibrilar, que en sus extremos tiene
cargas fuertemente negativas. Estos extremos permiten la solubilidad del
compuesto y también repelen a otras moléculas del compuesto, previniendo la
agregación.
Compuesto por tres pares de cadenas de polipéptidos que son, 2 cadenas Aα, 2
Bβ y 2γ (Aα,Bβ,γ)2 unidas por enlaces disulfuro, estas cadenas además están
genéticamente ligadas y reguladas en forma coordinada en el ser humano. Estas
cadenas son sintetizadas en el hígado.
 ALBÚMINA.- Es una proteína que se encuentra en gran proporción en el
plasma sanguíneo, siendo la principal proteína de la sangre, y una de las más
abundantes en el ser humano. Se sintetiza en el hígado.
La concentración normal en la sangre humana oscila entre 3,5 y 5,0 gramos por
decilitro, y supone un 54,31 % de la proteína plasmática. El resto de proteínas
presentes en el plasma se llaman en conjunto globulinas. La albúmina es
fundamental para el mantenimiento de la presión oncótica, necesaria para la
distribución correcta de los líquidos corporales entre el compartimento
intravascular y el extravascular, localizado entre los tejidos. La albúmina tiene
carga eléctrica negativa. La membrana basal del glomérulo renal, también está
cargada negativamente, lo que impide la filtración glomerular de la albúmina a
la orina. En el síndrome nefrótico, esta propiedad es menor, y se pierde gran
cantidad de albúmina por la orina.
Debido a que los animales pequeños, como por ejemplo las ratas, viven con una
presión sanguínea baja, necesitan una presión osmótica menor, y también
necesitan una baja cantidad de albúmina para mantener la distribución de los
fluidos.
Si efectuamos una electroforesis de las proteínas del suero a un pH fisiológico,
la proteína albúmina es la que más avanza debido a su elevada concentración de
cargas negativas (obviando la pequeña banda llamada prealbúmina, que la
precede).
 Características:
 Posee un pKa de 8.5
 Tiene un pH de 7.4
 Tiene un masa molecular de 67 000 daltons
 Tiene un pI de 4.9
 Funciones de la albúmina:
 Mantenimiento de la presión oncótica.
 Transporte de hormonas tiroideas.
 Transporte de hormonas liposolubles.
 Transporte de ácidos grasos libres. (Esto es, no esterificados)
 Transporte de bilirrubina no conjugada.
 Transporte de muchos fármacos y drogas.
 Unión competitiva con iones de calcio.
  Control del pH.
 Funciona como un transportador de la sangre y lo contiene el
plasma.
 Regulador de líquidos extracelulares, efecto Donnan.
 Causas de la deficiencia de albúmina:
 Cirrosis hepática: por disminución en su síntesis hepática.
 Desnutrición.
 Síndrome nefrótico: por aumento en su excreción.
 Trastornos intestinales: pérdida en la absorción de aminoácidos
durante la digestión y pérdida por las diarreas.
 Enfermedades genéticas que provocan hipoalbuminemia, que son
muy raras.
 Algunos procedimientos médicos, como la paracentesis.
 Tipos de albúmina:
 Seroalbúmina: Es la proteína del suero sanguíneo.
 Ovoalbúmina: Es la albúmina más abundante de la clara del
huevo.
 Lactalbúmina: Es la albúmina de la leche.
 Conalbúmina u ovotransferrina: constituye en torno al 13 % de la
clara del huevo. Tiene una gran afinidad por el hierro.
 GLOBULINAS.- Las globulinas son un grupo de proteínas solubles en agua,
solubles en disoluciones salinas, que se encuentran en todos los animales y
vegetales.
Entre las globulinas más importantes destacan las seroglobulinas (de la sangre),
las lactoglobulinas (de la leche), las ovoglobulinas (del huevo), la legúmina, el
fibrinógeno, las inmunoglobulinas (anticuerpo) y numerosas proteínas de las
semillas.
Las globulinas son un importante componente de la sangre, específicamente del
plasma.
 Globulinas alfa 1:
 La TBG: Se encarga de fijar la hormona tiroidea. Transporta T3 y
T4.
 La alfa 1 glucoproteína ácida: También conocida como
orosomucoide, es un reactante de fase aguda sintetizado en el
 hígado como respuesta a la inflamación crónica y aguda,
quemaduras, tumores y daño del tejido.
 La RBP: Es la hormona fijadora de retinol, la cual transporta
vitamina "A". Normalmente se asocia a la prealbúmina.
 La alfa 1 o antitripsina: Es la encargada de controlar la acción de
las enzimas lisosomales.
 Globulinas alfa 2:
 La macroglobulina (alfa 2): La función primordial de ésta es
neutralizar las enzimas proteolíticas.
 La haptoglobina: Es la encargada de fijar la Hb plasmática de los
eritrocitos, y la transporta al hígado para que no se excrete por la
orina.
 La ceruloplasmina: Transporta y fija el 90 por ciento del cobre
sérico. El otro 10 por ciento es transportado por la albúmina.
 La protrombina: participa en el proceso de la coagulación
transformándose en trombina que transforma el fibrinogeno en
fibrina (coágulo).
 Globulinas beta:
 La hemopexina: Es la que fija y transporta el grupo hemo de la
hemoglobina (Hb) hacia el hígado.
 La transferrina: Transporta hierro del intestino a depósitos de
ferritina en diferentes tejidos, y de allí a donde sean necesarios.
 El complejo C3 del complemento: Son proteínas séricas que
actúan en inmunidad inespecífica, provocando la lisis de distintas
bacterias.
 Globulinas gamma:
 Corresponden a las inmunoglobulinas séricas o anticuerpos (IgA,
IgE, IgG, IgM, IgD).

3.2.- PROCEDIMIENTO
4.1.- DETERMINACIÓN DE PROTEÍNAS TOTALES

Preparar la siguiente batería de tubos:

Tubo de ensayo (ml)

SOLUCIONES BLANCO (B) ESTÁNDAR (S) MUESTRA (M)

Agua destilada 50 µl ----------------- ---------------

Suero patrón (S) ------------- 50 µl ---------------

Suero sanguíneo (M) ------------- ----------------- 50 µl

Reactivo EDTA/Cu 3.5 ml 3.5 ml 3.5 ml

 Mezclar e incubar por 15 minutos a 37 °C.

 Leer la absorbancia en el espectrofotómetro a 540 nm
 Anotar los resultados de absorbancia (Abs. M, Abs. S y Abs B)
 Reemplazar en la siguiente fórmula, los valores obtenidos:

*Concentración Prot. St. = 5.0 g/dl

𝑔
𝑔 𝑆𝑡. 𝑃𝑟𝑜𝑡. ( )
𝑃𝑟𝑜𝑡. 𝑡𝑜𝑡𝑎𝑙𝑒𝑠 ( ) = (𝐴𝑏𝑠. 𝑀) 𝑥 𝑑𝑙
𝑑𝑙 (𝐴𝑏𝑠. 𝑆)

4.2.- DETERMINACIÓN DE ALBÚMINA

Preparar la siguiente batería de tubos:

Tubos de ensayo (ml)

SOLUCIONES Blanco Estándar Muestra

Suero patrón --------------- 10 µl ---------------

Suero sanguíneo --------------- --------------- 10 µl

Reactivo 3.5 ml 3.5 ml 3.5 ml

 Mezclar e incubar por 10 minutos a 22 °C

 Leer la absorbancia en el espectrofotómetro a 625 nm
 Anotar los resultados de absorbancia (Abs. M, Abs. S y Abs. B)
  Reemplazar en la siguiente fórmula, las absorbancias:

*Concentración Álbum. St. = 2.7 g/dl

𝑔
𝑔 2.7 ( )
𝐴𝑙𝑏ú𝑚𝑖𝑛𝑎 ( ) = (𝐴𝑏𝑠. 𝑀 − 𝐴𝑏𝑠. 𝐵) 𝑥 𝑑𝑙
𝑑𝑙 (𝐴𝑏𝑠. 𝑆 − 𝐴𝑏𝑠. 𝐵)

4.3.- DETERMINACIÓN DE GLOBULINA

Hallar la diferencia de la concentración de proteínas totales menos la concentración de

albúmina.

𝑔 𝑔 𝑔
𝐺𝑙𝑜𝑏𝑢𝑙𝑖𝑛𝑎 ( ) = 𝑃𝑟𝑜𝑡𝑒í𝑛𝑎𝑠 𝑡𝑜𝑡𝑎𝑙𝑒𝑠 ( ) − 𝐴𝑙𝑏ú𝑚𝑖𝑛𝑎 ( )
𝑑𝑙 𝑑𝑙 𝑑𝑙

4.4.- RELACIÓN ALBÚMINA/GLOBULINA

𝑔
𝐴 𝐴𝑙𝑏ú𝑚𝑖𝑛𝑎 ( )
𝑅𝑒𝑙𝑎𝑐𝑖ó𝑛 = 𝑑𝑙
𝐺 𝑔 𝑔
𝑃𝑟𝑜𝑡𝑒í𝑛𝑎𝑠 𝑡𝑜𝑡𝑎𝑙𝑒𝑠 ( ) − 𝐴𝑙𝑏ú𝑚𝑖𝑛𝑎 ( )
𝑑𝑙 𝑑𝑙

4.5.- VALORES DE REFERENCIA

Se determinará el contenido de proteínas y albúmina en suero de personas sanas, de

ambos sexos, con la alimentación mixta normal y edades entre 17 y 40 años;
obteniéndose los siguientes rangos:

Proteínas totales: 6.1 a 7.9 g/dl Globulina: 2.5 a 3.2 g/dl

Albúmina: 3.5 a 4.8 g/dl Relación A/G: 1.2 a 2.2

5.- RESULTADOS DEL GRUPO N° 3

5.1.- Determinando las proteínas totales

𝑔
𝑔 𝑆𝑡. 𝑃𝑟𝑜𝑡. ( )
𝑃𝑟𝑜𝑡. 𝑡𝑜𝑡𝑎𝑙𝑒𝑠 ( ) = (𝐴𝑏𝑠. 𝑀) 𝑥 𝑑𝑙
𝑑𝑙 (𝐴𝑏𝑠. 𝑆)

Abs. M (grupo 3) = 0.258 Abs. S = 0.203 Abs. B = 0.016

Análisis.- Reemplazando los valores en la fórmula, obtuvimos un valor de 6,2 g/dl,

realizando la comparación con los valores de referencia, notamos que el integrante de
nuestro grupo, al cual tomamos una muestra de sangre, presenta una carencia mínima
0.2 g/dl para llegar a estar igual a los valores estables de proteínas totales, esto se puede
dar debido a una mala alimentación como también otros factores ya mencionados en el
marco teórico.

5.2.- Determinando la albúmina

𝑔
𝑔 2.7 ( )
𝐴𝑙𝑏ú𝑚𝑖𝑛𝑎 ( ) = (𝐴𝑏𝑠. 𝑀 − 𝐴𝑏𝑠. 𝐵) 𝑥 𝑑𝑙
𝑑𝑙 (𝐴𝑏𝑠. 𝑆 − 𝐴𝑏𝑠. 𝐵)

Abs. M (grupo 3) = 0.443 Abs. S = 0.249 Abs. B = 0.045

Análisis.- Reemplazando los valores en la fórmula, obtuvimos un valor de 4.8 g/dl,

realizando nuevamente la comparación respectiva con los valores de referencia,
notamos que el integrante de nuestro grupo, al cual tomamos una muestra de sangre, se
encuentra entre los valores estables, es contradictorio con el primer valor obtenido, ya
que la albúmina es la proteína que se encuentra en mayor cantidad en el plasma
sanguíneo y este es muy determinante en los valores de proteínas totales, entonces
podemos concluir que la compañera presenta una cantidad muy inferior en otras
proteínas que se encuentra constituido el plasma, como el fibrinógeno o las globulinas.

5.3.- Determinando la globulina

𝑔 𝑔 𝑔
𝐺𝑙𝑜𝑏𝑢𝑙𝑖𝑛𝑎 ( ) = 𝑃𝑟𝑜𝑡𝑒í𝑛𝑎𝑠 𝑡𝑜𝑡𝑎𝑙𝑒𝑠 ( ) − 𝐴𝑙𝑏ú𝑚𝑖𝑛𝑎 ( )
𝑑𝑙 𝑑𝑙 𝑑𝑙

Proteínas totales = 5.9 g/dl Albúmina = 4.8 g/dl

Análisis.- Reemplazando los valores en la fórmula, obtuvimos un valor de 1.1 g/dl,

realizando la comparación respectiva con los valores de referencia, notamos que se
encuentra una cantidad baja, una diferencia de 1.4 g/dl de los valores estables, lo que
nos llega a entender que si teníamos razón debido a la conclusión, de que el resto de
proteínas plasmáticas diferentes a la albúmina se encontraban en una cantidad inferior a
los valores determinados.

5.4.- Relación albúmina/globulina

𝑔
𝐴 𝐴𝑙𝑏ú𝑚𝑖𝑛𝑎 ( )
𝑅𝑒𝑙𝑎𝑐𝑖ó𝑛 = 𝑑𝑙
𝐺 𝑔 𝑔
𝑃𝑟𝑜𝑡𝑒í𝑛𝑎𝑠 𝑡𝑜𝑡𝑎𝑙𝑒𝑠 ( ) − 𝐴𝑙𝑏ú𝑚𝑖𝑛𝑎 ( )
𝑑𝑙 𝑑𝑙
 Albúmina = 4.8 g/dl

Proteínas totales = 5.9 g/dl

Análisis.- Reemplazando los valores en la fórmula, obtuvimos un valor de 4.3, lo que

nos llega a determinar que se encuentra por encima de los valores de referencia, por una
cantidad de 2.1, concluyendo que existe una anomalía entre estos valores proteicos.

6.- CONCLUSIÓN

Realizando toda está practica pudimos observar, analizar y comparar valores obtenidos
en el laboratorio con los valores de referencia, para así determinar cuáles son las
anomalías que ocurre en el déficit o el incremento abrupto en la cantidad de proteínas
constituidas en una dieta regular de un paciente (en este caso un compañero de la clase).
También fue de gran ayuda para conocer las distintas enfermedades que pueden
ocasionar su alteración de está.

7.-

CUESTIONARIO

1. Grafique los niveles de estructura de las proteínas.

2. ¿Cuáles son las funciones de la albúmina?

 Mantenimiento de la presión oncótica.
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FACULTAD DE MEDICINA HUMANA

 T
ransporte de hormonas tiroideas.
 Transporte de hormonas liposolubles.
 Transporte de ácidos grasos libres. (Esto es, no esterificados)
 Transporte de bilirrubina no conjugada.
 Transporte de muchos fármacos y drogas.
 Unión competitiva con iones de calcio.
 Control del pH.
 Funciona como un transportador de la sangre y lo contiene el plasma.
 Regulador de líquidos extracelulares, efecto Donnan.
3. ¿Cuáles son las funciones de las globulinas?
Son las proteínas de la sangre y junto con la albúmina constituyen las 2
proteínas séricas. Dentro de sus funciones se encuentra: transporte de
compuestos endógenos/exógenos poco solubles en agua, regulación de la
presión oncótica y el balance intra/extravasal de agua, respuesta inflamatoria y
control de la infección.
4. ¿Qué patologías pueden alterar las concentraciones normales de proteínas
plasmáticas?
 Enfermedad de Crohn
 Enfermedad celíaca
 Enfermedad de Whipple
 Inflamación o infección crónica, incluso VIH y hepatitis B o C
 Mieloma múltiple
 Enfermedad de Waldenstrom
 Cirrosis
 Nefrosis
 Neumonía
 Infecciones agudas
 Fiebre reumática
5. ¿Cuál es el significado de la relación albúmina/globulina?
Es una medida para determinar la diferencia en cantidad que se encuentra en
nuestro organismo, mientras más alejados estén de los valores de referencia (1.2
a 2.2) se encontrará una anomalía ya sea que la albúmina se encuentre en valores
superiores o inversamente.
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FACULTAD DE MEDICINA HUMANA

6. ¿
Cómo se evalúa el estado nutricional considerando los valores plasmáticos
de proteínas y albúmina?
Pues realizando un examen de laboratorio de una muestra de sangre. Para así
determinar los valores de proteínas y albúmina en nuestro organismo.
7. ¿Cuáles son los valores de proteínas y albúminas en IRC?
Los valores de proteínas suelen ser menores a 5.5 g/dl y en el caso de la
albúmina suele ser menores a 2.9 g/dl
8. ¿Cuáles son los valores de proteínas y albúmina en enfermedades
hepáticas?
Dependiendo de la enfermedad la cantidad de proteínas quedará disminuida y la
misma manera con la albúmina.
9. ¿Cuáles son los valores de proteínas y albúmina en quemados?
Los pacientes en este caso presentan una cantidad de proteínas reducida entre los
valores menores a 2 g/dl y en el caso de albúmina es cuando se encuentra
valores de menores a 1 g/dl.
10. ¿Cuáles son los valores de proteínas y albúminas en síndrome nefrótico?
Los valores de proteínas y albúmina se encuentran entre (0.75 – 1.25 g/dl).

8.- BIBLIOGRAFÍA
1) Peréz, J. I. (2017). Proteínas Plasmáticas. Cultura científica de la UPV/EHU.

2) Ramos, E. G. (Abril de 2000). MED LINE. Obtenido de http://www.medbc.com

3) Sanchez, L. (2012). Aula virtual de biología . Obtenido de Funciones de la

proteína: http://trabajosmedicos.blogspot.com

4) Tafur, J. (2011). Monografías. Obtenido de https://www.monografias.com

9.- ANEXOS
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