TÉCNICAS DE ESTERILIZACIÓN DE

MATERIALES Y MEDIOS DE CULTIVO

En el laboratorio de Microbiología es imprescindible trabajar con material y soluciones
estériles con el objetivo de que los resultados que obtengamos correspondan a los
microorganismos que están presentes en la muestra en estudio y no a contaminantes
procedentes del medio o los materiales. Por eso antes de comenzar el trabajo práctico del
laboratorio debemos esterilizar junto con los medios de cultivo, el material que
posteriormente utilizaremos.
Existen diversos métodos de esterilización. La selección del método a aplicar en cada
caso está determinada por el tipo de producto a esterilizar. Los métodos térmicos de
esterilización son comúnmente los más utilizados para eliminar los microorganismos.
Esterilización por:

1) AGENTES FÍSICOS
El calor se puede aplicar como agente esterilizante de dos formas: el calor húmedo el cual
destruye a los microorganismos por desnaturalización de las proteínas y el calor seco que
destruye a los microorganismos por oxidación de sus componentes celulares. El calor es
considerado como el método de esterilización por excelencia siempre y cuando el material
a esterilizar soporte altas temperaturas sin sufrir ningún tipo de daño. La radiación, o
emisión y propagación de la energía a través de un medio, puede ser utilizada como agente
para la eliminación de microorganismos.
a. Calor húmedo: Autoclave
Ventajas del calor húmedo:
-Rápido calentamiento y penetración.
-Destrucción microorganismos en corto tiempo.
-No deja residuos tóxicos.
-Hay un bajo deterioro del material expuesto.
-Económico
Desventajas: Esquema de Autoclave
-No permite esterilizar soluciones que formen emulsiones con el agua.
-Es corrosivo sobre ciertos instrumentos metálicos.
b. Calor seco: Estufas
Ventajas del calor seco:
-No es corrosivo para metales e instrumentos.
 -Permite la esterilización de sustancias en polvo y no acuosas, y de sustancias
viscosas no volátiles.
Desventajas:
-Requiere mayor tiempo de esterilización, respecto al calor húmedo, debido a la
baja penetración del calor.

c. Radiaciones

2) AGENTES MECÁNICOS
La filtración permite la remoción de todos los microorganismos presentes en un líquido
o un gas reteniéndolos sobre la superficie de un material.

3) AGENTES QUÍMICOS
Algunas sustancias químicas pueden ser usadas como agentes esterilizantes porque
tienen la capacidad de promover una o más reacciones químicas capaces de dañar los
componentes celulares de los microorganismos (proteínas, membranas, etc.).

ESTERILIZACIÓN POR:
 4) DESARROLLO DE LA PRACTICA DE LABORATORIO:

- Proceso de limpieza y esterilización de materiales de vidrio:

Lavar las cajas de Petri y pipetas, enjuagarlas y dejar escurrir el exceso de agua en papel
toalla. Una vez secos los materiales, procederemos a envolverlos con papel kraft. Luego
se colocaran en horno a 150°C durante 2 horas. Para los tubos de ensayo elaboramos
tapones de algodón.

Placas de Petri y pipetas sin esterilizar

Lavado de placas de Petri

Proceso de envoltura de las cajas de Petri con papel Kraft

Proceso de envoltura de las pipetas con papel Kraft.

 Tubos de ensayo envueltos con papel Kraft,
para luego ser esterilizados.

- Proceso de esterilización de medios de cultivo:

Preparamos 100 ml de Agar nutritivo (AN), lo calentamos en un baño con agua hasta
ebullición; y utilizando una pipeta vaciamos 10 ml de medio en tres tubos con tapón de
rosca. Se esteriliza en la autoclave.