INTRODUCCION

La principal función bioquímica de la glucosa es la de proporcionar energía para los procesos de la

vida. El adenosín trifosfato ("ATP") es la fuente de energía universal para las reacciones biológicas.
La oxidación de la glucosa por las vías glucolítica y del ácido cítrico es la fuente principal de energía
para la biosíntesis del ATP.

El sistema para regular los niveles de glucosa sanguínea funciona para lograr dos fines. El primero
es para almacenar glucosa en exceso en relación a las necesidades corporales inmediatas en un
reservorio compacto (glucógeno) y el segundo es para movilizar la glucosa almacenada de manera
que mantenga el nivel de glucosa sanguínea. La regulación de la glucosa sanguínea es esencial para
mantener al cerebro, cuya fuente energética primaria es la glucosa, abastecido por una cantidad
constante de la misma. La función de la insulina es desviar la glucosa extracelular a los sitios de
almacenamiento intracelular en la forma de macromoléculas (como el glucógeno, lípidos y
proteínas). Es así que la glucosa es almacenada en tiempos de abundancia para los momentos de
necesidad.

En respuesta a la baja glucosa en sangre, como en períodos de ayuno, una serie de agentes
hiperglucemiantes actúa en las vías metabólicas intermediarias para formar glucosa a partir de las
macromoléculas almacenadas. De esta forma las proteínas y el glucógeno son metabolizados para
formar glucosa-6-fosfato (gluconeogénesis), la cual es hidrolizada a glucosa en el hígado y liberada
a la sangre para mantener los niveles de glucosa sanguínea.

Los agentes hiperglucemiantes más importantes son el glucagón, la epinefrina, el cortisol, la

tiroxina, la hormona de crecimiento y ciertas hormonas intestinales. El comportamiento de cada
uno de estos agentes es diferente en la regulación de la glucosa sanguínea; mientras que la insulina
favorece el metabolismo anabólico (síntesis de macromoléculas), estas hormonas, en parte, inducen
el metabolismo catabólico para romper grandes moléculas.

OBJETIVOS

Destacar la importancia de la glucosa en el metabolismo humano y su relación con diversas

patologías.

Determinar la concentración de glucosa en una muestra biológica mediante el método enzimático

colorimétrico.
PAP”.

PRINCIPIO
Determinación de la glucosa después de la oxidación enzimática por la glucosa oxidasa. El indicador
colorimétrico es la quinoneimina, la cual se genera de la 4–aminoantipirina y el fenol por el peróxido de
hidrógeno bajo la acción catalítica de la peroxidasa.

GOD
glucosa + O2 → ácido glucónico + H2 O2
POD
2H2 O2 + 4aminoantipirina + fenol → Quinoneimina + 4H2 O
REACTIVOS

Ítem Descripción Concentración

 1 Amortiguadora fosfato pH 7,5 250 mmol/L
2 Fenol 5 mmol/L
3 4–Aminoantipirina 0,5 mmol/L
4 Glucosa oxidasa (GOD) 10 kU/L
5 Peroxidasa (POD) 1 kU/L
6 Estándar de glucosa (100 ± 5) mg/dL (5,55 mmol/L)
7 Ácido benzoico 0,2 g/dL

Preparación de soluciones madre

 Solución madre de glucosa de 10 000 mg/dl. Disolver en un balón aforado de 100 mL 10,000
g de glucosa anhidro (Q.P.) secada a 103 oC durante 1 h, en una solución de ácido benzoico
(0,2 g/dL). esta solución es estable a temperatura ambiente.
 Solución madre de glucosa de 1 000 mg/dl. Disolver en un balón aforado de 100 mL 1,000 g
de glucosa anhidro (Q.P.) secada a 103 oC durante 1 h, en una solución de ácido benzoico
(0,2 g/dL). esta solución es estable a temperatura ambiente.

Preparación de patrones para la curva de calibración

Para la validación de glucosa se prepararon una serie de patrones de concentraciones conocidas

para la curva de calibración:

Se prepararon una serie de muestras patrón de diferentes concentraciones a partir de una solución
madre de glucosa, para realizar un análisis de linealidad, para definir el rango óptimo de
concentración de la curva de calibración. Para esto se realizaron unos ensayos para definir estos
valores de concentración. El procedimiento para la preparación de las soluciones patrón para la
curva de calibración se muestra a continuación:

 Patrón de 10 mg/dl: Se toma 1 mL de solución madre de glucosa 1 000 mg/dl en un balón

aforado de 100 mL, y se afora con agua destilada.
 Patrón de 20 mg/dl: Se toma 2 mL de solución madre de glucosa 1 000 mg/dl en un balón
aforado de 100 mL, y se afora con agua destilada.
 Patrón de 50 mg/dl: Se toma 5 mL de solución madre de glucosa 1 000 mg/dl en un balón
aforado de 100 mL, y se afora con agua destilada.
 Patrón de 100 mg/dl: Se toma 1 mL de solución madre de glucosa 10 000 mg/dl en un balón
aforado de 100 mL, y se afora con agua destilada.
 Patrón de 200 mg/dl: Se toma 2 mL de solución madre de glucosa 10 000 mg/dl en un balón
aforado de 100 mL, y se afora con agua destilada.
 Patrón de 300 mg/dl: Se toma 3 mL de solución madre de glucosa 10 000 mg/dl en un balón
aforado de 100 mL, y se afora con agua destilada.
 Patrón de 400 mg/dl: Se toma 4 mL de solución madre de glucosa 10 000 mg/dl en un balón
aforado de 100 mL, y se afora con agua destilada.
 Patrón de 500 mg/dl: Se toma 5 mL de solución madre de glucosa 10 000 mg/dl en un balón
aforado de 100 mL, y se afora con agua destilada.
 Patrón de 600 mg/dl: Se toma 6 mL de solución madre de glucosa 10 000 mg/dl en un balón
aforado de 100 mL, y se afora con agua destilada.

PROCEDIMIENTO

Tabla 1. Determinación la linealidad de la curva de calibración y rango de trabajo

E1=10 E2=20 E3=50 E4=100 E5=200 E6=300 E7=400 E8=500

Tubos Blanco
mg/dl mg/dl mg/dl mg/dl mg/dl mg/dl mg/dl mg/dl
Agua
10 μL --- --- --- --- --- --- --- ---
destilada
Estándar 10 μL 10 μL 10 μL 10 μL 10 μL 10 μL 10 μL 10 μL
1000 1000 1000 1000 1000 1000 1000 1000 1000
Reactivo
μL μL μL μL μL μL μL μL μL
Mezclar, incubar 20 min. a 20 – 25 ºC o 10 min. a 37 ºC.
Leer la absorbancia a 500 nm contra el blanco de reactivo dentro de 60 min.

ANALISIS ESTADISTICO
Intervalo de validación y construcción de la curva de calibración

Los datos obtenidos para la linealidad registrar en la siguiente tabla:

Tabla 2. Datos correspondientes a la curva de calibración para la determinación de glucosa en

sangre

Volumen Concentración
Concentración Volumen
de solución de solución
estándar de solución Transmitancia Absorbancia factor= A/C
estándar madre
(mg/dL) madre (mL)
(mL) (mg/dL)
10 25 8000 0.03125 98 0.00877392 0.00087739 X
20 25 8000 0.0625 90 0.04575749 0.00228788 X
50 25 8000 0.15625 81 0.09151498 0.0018303
100 25 8000 0.3125 66.5 0.17717836 0.00177178
200 25 8000 0.625 44 0.35654732 0.00178274
300 25 8000 0.9375 30 0.52287875 0.00174293
400 25 8000 1.25 20 0.69897 0.00174743
500 25 8000 1.5625 13 0.88605665 0.00177211
600 25 8000 1.875 4 1.39794001 0.0023299 X
PROMEDIO 0.00177455
DESVIACIÓN 3.14E-05
%CV 1.76847297
 Tabla 3. Determinación de los parámetros de la curva de calibración

Concetración
de glucosa Transmitancia Absorbancia X2 Y2 XY
40 85.2 0.06956041 1600 0.00483865 2.78241621
100 67 0.1739252 10000 0.03024997 17.3925197
500 13.5 0.86966623 250000 0.75631935 434.833116
SUMATORIA 640 1.11315183 261600 0.79140798 455.008052

Pendiente, b1
n ∑ XY − ∑ X ∑ Y
b1 =
n ∑ X 2 − (∑ X)2
Intercepto, b0
∑ Y − b1 ∑ X
b1 =
n
b1 0.00173936
b0 8.40E-03

𝐴 − 0.0084
𝐶=
0.00174

MUESTRA Transmitancia Absorbancia Concentración PATRON Transmitancia2 Absorbancia2 Concentración2

1 69 0.16115091 89.88 1 66.8 0.17522354 98.12
2 68.5 0.16430943 91.71 2 66.9 0.17457388 97.76
3 67 0.1739252 91.47 3 66.7 0.17587417 98.53

[]PROM=92mg/dL

La concentración de glucosa en sangre es de 92 mg/dL

 Blanco fortificado= 50mg/dL

Repeticiones A B C
1 49.83 49.88 49.65
2 49.94 49.94 50.23
3 50.25 49.25 48.85
Promedio (a) 50.01 49.69 49.58
Prom de promedio
(b) 49.76
n 3 3 3
n(a-b)^2 0.188 0.0147 0.0972 SDCB
N 9 0.2999
k 3

Fuentes de
variación SDC G.L DCM
Entre grupos 0.2999 k-1=2 0.15
Dentro
grupos 1.3474 N-k=6 0.2246
TOTAL 1.6473 N-1=8 0.2059

(A-XA)^2 (B-XB)^2 (C-XC)^2

0.0324 0.0361 0.0049
0.0049 0.0625 0.4225
0.0576 0.1936 0.5329
SUMATORIA 0.0949 0.2922 0.9603 SDCW
1.3474

𝑆𝑟 = √𝐷𝐶𝑀𝑊 = 0.474
𝑆𝑟
%𝐶𝑉𝑟 = 𝑥100 = 0.95%
𝑥̿
|𝐷𝐶𝑀𝑊 − 𝐷𝐶𝑀𝐵 |
𝑆𝐿2 = = 0.0249
𝐾

𝑆𝑅 = √𝑆𝑟 2 + 𝑆𝐿2 = 0.4996

 𝑆𝑅
%𝐶𝑉𝑅 = 𝑥100 = 0.01%
𝑋̿
𝑉𝐸
%𝑅 = 𝑥100 = 99.52%
𝑉𝑡
|𝑉𝐸 − 𝑉𝑡 |
%𝐸𝑟 = 𝑥100 = 0.48%
𝑉𝑡
COMENTARIO

Cuando se tiene un exceso de glucosa en la sangre por arriba del límite superior normal para una
edad, se presenta la hiperglucemia. Aunque los valores altos de glucosa sérica en ayunas se
relacionan con suma frecuencia con la presencia de diabetes sacarina, el número de enfermedades
y trastornos fisiológicos que pueden llevar a incrementos mayores es vasto. El aumento de la
concentración de glucosa sérica se dan en: respuesta a la tensión, enfermedad de Cushing, diabetes
mellitus, acromegalia, hipertiroidismo, pancreatitis crónica, administración de algunos fármacos
como diuréticos clorotiacídicos porque suprimen la secreción de insulina, coma hiperosmolar no
cetónico.

La hipoglucemia es un trastorno caracterizado por una concentración de glucosa en ayunas, menor

al límite inferior normal para el grupo de edad y esto sucede en: enfermedad hepática, desnutrición,
posgastrectomía, tolerancia deficiente a la glucosa, administración excesiva de insulina,
hipoglucemia funcional o espontánea, ingestión de alcohol en ayunas.

Debido a que la concentración de glucosa sérica por lo general se vuelve anormal sólo cuando hay
un trastorno grave de esta interacción, el verificar la glucosa sérica ayuda a evaluar la función e
integridad del sistema.

La prueba de glucosa en ayunas evalúa de modo aproximado la capacidad del cuerpo para regular
la glucosa y proporciona información acerca de la clase de anormalidad, si es que la hay. No se
tomarán alimentos ni bebidas, excepto agua, cuando menos por ocho horas antes de tomar la
muestra.

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

KAPLAN, A. Lawrence, Amadeo J. Pesce; Química Clínica Teoría, análisis y correlación; 3ª ed; trad.
Tania Carreón Valencia; ed. Javier Ortega Ceseña; México 1996. 7.

GONZÁLEZ Buitrago J.M., Arilla Ferreriro E., Rodríguez-Segada M., Sanchez Pozo A; Bioquímica
Clínica; 1ª ed; ed. McGraw-Hill; México, 1998.

TRESELER Kathleen Morrison; Laboratorio clínico y pruebas de diagnóstico; 3ª ed; trad. Dr. Jorge
Mérigo; ed. El manual moderno; México, D.F, 1998.
ANEXOS

Anexo1. Muestras fortificadas con estándar de glucosa.