“UNIVERSIDAD NACIONAL DEL SANTA”

FACULTAD DE CIENCIAS
ESCUELA ACADÉMICO PROFESINAL
DE MEDICINA HUMANA

CASO CLÍNICO 01

CURSO:
MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA MÉDICA
DOCENTE:
AZAÑERO LUJÁN GUSTAVO
CICLO:
VI

INTEGRANTES DEL GRUPO:

 GUEVARA QUINECH MARGARITA STHEFANÍA

 MELGAREJO ALVARADO LAURA GABRIELA
 NINAQUISPE MARIÑOS PEDRO
 ROSALES CRUZALEGUI KEVN MIKAEL

2018
STREPTOCOCCUS PNEUMONIAE
Si bien Streptococcus pneumoniae taxonómicamente se ubica dentro de los streptococos del
grupo viridans presenta algunos aspectos particulares que ameritan su estudio separado de los
demás integrantes del grupo. S. pneumoniae es un importante patógeno humano, agente
etiológico reconocido de neumonía, meningitis, sinusitis y otitis media; y en menor frecuencia
también de endocarditis, artritis, y peritonitis.

CARACTERES MICROBIOLÓGICOS:

S. pneumoniae es un microorganismo patógeno capaz de causar diversas infecciones y procesos

invasivos severos. Se trata de una bacteria Gram-positiva de 0.5–1.0 µm de longitud que presenta
una forma oval con los extremos distales lanceolado. Es inmóvil, no forma endosporas, y es un
miembro α-hemolítico del género Streptococcus. Generalmente, se presenta en forma de
diplococo, aunque existen algunos factores que pueden inducir la formación de cadenas. Cuando
se cultiva en placas de agar-sangre en aerobiosis presenta una marcada α–hemólisis debido a la
producción de peróxido de hidrógeno pero, si es incubado en anaerobiosis se observa β–hemólisis
debida a la acción de la neumolisina (Ply). Metabólicamente hablando, neumococo es un
microorganismo microaerófilo, catalasa-negativo, que se encuentra dentro del grupo de las
bacterias del ácido láctico, ya que este compuesto es el principal producto resultante de la
fermentación de carbohidratos. S. pneumoniae es una bacteria auxótrofa para la colina siendo
este aminoalcohol, en forma de fosforilcolina (PCho), un componente estructural de los ácidos
teicoicos (TAs) de pared (WTA) y lipoteicoicos (LTA). Requiere para su óptimo desarrollo de una
atmósfera enriquecida con 5-10% de CO2. Posee una alfahemolisina que degrada la hemoglobina,
dando un color verde alrededor de la colonia cuando se desarrolla en agar sangre.

Hábitat: Forma parte de la flora bacteriana normal de la mucosa nasal y faríngea, siendo su
hábitat preferencial la nasofaringe posterior. La colonización por S. pneumoniae es más elevada en
niños y adultos sobre los 60 años de edad, comparativamente a los adultos de edad mediana.

Rápidamente experimentan lisis por compuestos con actividad en la superficie, lo cual

probablemente elimina o inactiva a los inhibidores de las autolisinas de la pared celular.

Se le puede clasificar como:

• Dominio (Domain): Bacteria

• Filo (Phylum): Firmicutes Class

• Orden Bacilli (Bacilli Order): Lactobacillales

• Familia (Family): Streptococcaceae

• Género (Genus): Streptococcus

• Especies (Species): S. pneumoniae

1. ¿CUÁL ES EL ORGANISMO MÁS PROBABLE DE SER AISLADO EN EL ESPUTO Y HEMOCULTIVOS?

RESPUESTA: STREPTOCOCCUS PNEUMONIAE - ES EL PRINCIPAL MICROORGANISMO CAUSANTE
DE NEUMONIA ADQUIRIDA EN LA COMUNIDAD (NAC).

Las infecciones neumocócicas son una importante causa de morbilidad y mortalidad en el mundo.
Neumococo produce desde patologías relativamente leves, como son la otitis media y la
conjuntivitis, a enfermedades más severas, como la neumonía invasiva, la septicemia y la
meningitis. Neumococo reside de manera natural en la superficie de las mucosas del tracto
respiratorio superior. Debido, posiblemente, a su conocida capacidad de formación de biofilmes.

Las enfermedades infecciosas se producen cuando la bacteria gana acceso a áreas generalmente
estériles de las vías respiratorias produciéndose así la diseminación, colonización e invasión de
neumococo, principalmente, del oído medio (produciendo otitis media), los pulmones (neumonía),
el torrente sanguíneo (septicemia) o el sistema nervioso central. Las infecciones bacteriémicas, las
cuales están asociadas con una mayor mortalidad y morbilidad, tienen lugar, generalmente, por
complicaciones de una neumonía. La diseminación entre diferentes individuos ocurre por contacto
directo con secreciones de personas colonizadas.

Un factor que influye en la aparición de síntomas de infección neumocócica es el estado

inmunológico. Así, las personas con ciertas enfermedades de base o infectadas previamente por
otros agentes respiratorios, como el virus de la gripe tienen un mayor riesgo de padecer formas
más graves de la enfermedad, siendo el principal grupo de riesgo los individuos con
inmunodeficiencias de cualquier tipo. Neumococo, además, puede afectar a personas
inmunocompetentes con ciertas enfermedades que requieren de cuidados médicos continuados.
En este último grupo se incluyen los pacientes con afecciones crónicas cardiovasculares, hepáticas,
renales, metabólicas o respiratorias, como son los que sufren enfermedad pulmonar obstructiva
crónica (EPOC). El tabaquismo y alcoholismo son también unos factores de riesgo importantes en
la ENI.

SEGÚN EL CASO:

En los resultados de tinción Gram, deberías esperar una tinción Positiva, debido a la naturaleza
de sus peptidoglicanos.

*TINCIÓN GRAM (procedimiento):

1. Hacer el extendido con un palillo de madera.

2. Dejar secar a temperatura ambiente o fijarlas utilizando un mechero.
3. Fijar la muestra con metanol durante un minuto o al calor (flameado tres veces
aproximadamente).
4. Agregar azul violeta (cristal violeta o violeta de genciana) y esperar un minuto.
5. Enjuagar con agua no directamente sobre la muestra
6. Agregar lugol y esperar un minuto aproximadamente.
7. Agregar alcohol acetona y esperar entre 5 y 30 segundos según la concentración del
reactivo (parte crítica de la coloración). (las gram - se decoloran, las gram + no)
8. Enjuagar con agua.
 9. Tinción de contraste agregando safranina o fucsina básica y esperar un minuto. Este
tinte dejará de color rosado-rojizo las bacterias gram negativas.
10. Lavar levemente con agua.
*Para observar al microscopio óptico es conveniente hacerlo a 100x con aceite de inmersión.
El cristal violeta (colorante catiónico) penetra en todas las células bacterianas (tanto gram
positivas como gram negativas) a través de la pared bacteriana. El lugol es un compuesto
formado por I2 (yodo) en equilibrio con KI (yoduro de potasio) y Sl (Siulterio), los cuales están
presente para solubilizar el yodo, y actúan de mordiente, haciendo que el cristal violeta se fije
con mayor intensidad a la pared de la célula bacteriana. El I2 entra en las células y forma un
complejo insoluble en solución acuosa con el cristal violeta..
La mezcla de alcohol-acetona que se agrega, sirve para realizar la decoloración, ya que en la
misma es soluble el complejo I2/cristal violeta. Los organismos gram positivos no se
decoloran, mientras que los gram negativos sí lo hacen.
Para poner de manifiesto las células gram negativas se utiliza una coloración de contraste.
Habitualmente es un colorante de color rojo, como la safranina o la fucsina. Después de la
coloración de contraste las células gram negativas son rojas, mientras que las gram positivas
permanecen violetas.
La safranina puede o no utilizarse, no es crucial para la técnica. Sirve para hacer una tinción
de contraste que pone de manifiesto las bacterias gram negativas. Al término del protocolo, las
gram positivas se verán azul-violáceas y las gram negativas, se verán rosas (si no se hizo la
tinción de contraste) o rojas (si se usó, por ejemplo, safranina).
NEUMONIA:

La neumonía o pulmonía es una enfermedad del sistema respiratorio que consiste en

la inflamación de los espacios alveolares de los pulmones. La mayoría de las veces la
neumonía es infecciosa, pero no siempre es así. La neumonía puede afectar a un lóbulo
pulmonar completo (neumonía lobular), a un segmento de lóbulo, a los alvéolos próximos a
los bronquios (bronconeumonía) o al tejido intersticial (neumonía intersticial). La neumonía
hace que el tejido que forma los pulmones se vea enrojecido, hinchado y se vuelva doloroso.
Muchos pacientes con neumonía son tratados por médicos de cabecera y no ingresan en
los hospitales. La neumonía adquirida en la comunidad (NAC) o neumonía extrahospitalaria es
la que se adquiere fuera de los hospitales, mientras que la neumonía nosocomial (NN) es la
que se adquiere durante la estancia hospitalaria, una vez transcurridas las 48 horas o dos
semanas después de recibir el alta.

La -Rx Tórax: “Denso infiltrado del lóbulo inferior derecho con evidencia de un absceso
pulmonar” solo intensifica las sospechas para pensar que se tratase de una neumonía
bacteriana.

Por lo que en el medio de cultivo:

 SE LE REALIZA LA PRUEBA DE SENSIBILIDAD A LA OPTOQUINA (MEDIO DE CULTIVO:

AGAR SANGRE): entiéndase que:

La Streptococcus pneumoniae tiene un patrón hemolítico indistinguible de otros estreptococos

alfa-hemolíticos. Para diferenciar S. pneumoniae de otros estreptococos alfa-hemolíticos se utiliza
la prueba de susceptibilidad a optoquina.
La identificación de un microorganismo con tinción de Gram positiva y morfología consistente
con S. pneumoniae se realiza cuando se presenta una zona de inhibición alrededor del disco
impregnado con optoquina. Otros estreptococos alfa-hemolíticos no muestran esta zona de
inhibición.

A) Estreptococos del grupo viridans resistentes a optoquina

B) S. pneumoniae con un halo de inhibición alrededor del disco que indica sensibilidad

Lo que confirmaría que se trata de un Streptococco Neumoniae.

2. ¿QUÉ TOXINAS PRODUCE ESTE MICROORGANISMO Y SU MECANISMO DE DEFENSA?

*PATOGENIA (TOXINAS) – FACTORES DE VIRULENCIA:

 • CAPSULA POLISACARÍDICA: Derivados de carbohidratos, N-acetil –D-glucosamina y ácido
N-acetilmurámico, unidos a cadenas de 4 a 6 aminoácidos (péptidos stem).

*Previene la eliminación mecánica por acción del mucus.

*Carga negativa: impedimento estérico para interacción con receptores en fagocitos.

PROTEINAS EXPUESTAS

*También reduce exposición a algunos antibióticos. A LA

SUPERFICIE

 NEUMOLISINA: Citotoxina formadora de poros en la membrana.

*Liberada durante la autolisis .

*Muchos efectos patológicos en la inhibición del barrido ciliar.

*Activar TCD4+.

* Impide el estallido respiratorio de fagocitos.

* Induce los CK y QK inflamatorias (Activa la inflamación).

 PROTEÍNAS DE UNIÓN A COLINA (CBPS):

*Familia de proteínas que incluye factores de virulencia como la proteína de superficie

neumocócica (PspA) o antígeno A protector, la N-acetil-muramoil-L-alaninamidasa (LytA), la β-N-
acetilglucosamidasa (LytB), la lisozima (LytC) y la proteína de superficie neumocócica C (PspC, SpsA
o CbpA, proteína de unión a colina). La estructura básica de las CBPs es modular, generalmente
con un péptido líder, un dominio N-terminal biológicamente activo que determina la función y un
dominio C-terminal muy conservado de unión a colina.

 Antígeno A protector (PspA):

• Protección del neumococo frente al sistema del complemento, ya que la

alta polaridad de esta proteína podría estabilizar la carga de la cápsula por
el extremo electropositivo y evitar la activación del complemento a través
de la región electronegativa presente en PspA. Por otro lado, se generan
fuerzas electroquímicas de repulsión entre la bacteria y los fagocitos, lo
cual explicaría un mecanismo de evasión de la fagocitosis.

 Autolisinas - LytA y LytC e Hidrolasa de pared LytB:

• Enzimas degradantes; implicadas en el crecimiento de la pared celular y en

el proceso de separación de los microorganismos durante la reproducción,
aunque su principal actuación es en la destrucción de la pared celular.

Dominio de unión a colina

Lyt FUNCIÓN
(propiedad lítica)

Induce una elevada respuesta inflamatoria (Liberando Factores de virulencia - liberación de

LytA extremo C-terminal.
los componentes de la pared celular).

LytB Es una glucosaminidasa que actúa en la separación celular del neumococo. extremo N-terminal.

LytC Es una autolisina con actividad lisozimática. extremo N-terminal.

 Adhesinas - Proteína de superficie C:

• La proteína de superficie C (PspC, SpsA o CbpA, proteína de unión a colina)

es la CBP predominante en los aislados del neumococo.

• La PspC actúa como puente entre la colina de los TAs y los glicoconjugados
de las células humanas a través del ectodominio del receptor Ig polimérico
o componente secretor.

• La unión con las células del hospedador bloquea los residuos de colina de
la pared celular evitando el ataque de estos por citoquinas humanas
activadas y evadiendo así la fagocitosis.

• Hace el reclutamiento del factor H del complemento que realizan algunas

PspC evitando así la activación de 3Cb, responsable de la
opsonofagocitosis.
 OTRAS PROTEÍNAS Y ESTRUCTURAS IMPLICADAS EN VIRULENCIA NEUMOCÓCICA:

 Hemolisinas:

• Las hemolisinas son exotoxinas producidas por los neumococos. Se han

descrito dos tipos: la neumolisina (Ply) y otra hemolisina que no se inhibe
por anticuerpos antineumocócicos específicos y que puede inactivarse por
colesterol.

 La Ply:

 Enzima citoplasmática perteneciente a un grupo de

proteínas conocido como citolisinas dependientes de
colesterol (CDCs). 4 dominios, siendo el 4,º el responsable
de la unión a colesterol.

 Su actuación depende en mayor medida de la autolisina,

ya que su liberación se produce tras la lisis neumocócica.

 Estimula la producción de TNF-α e IL-1β.

 Bloquea la respuesta inmune: a bajas concentraciones

inhibe el mecanismo de respiración de neutrófilos y
monocitos, la quimiotaxis, la actividad bactericida de las
células polimorfonucleares (PMN) y la producción de
algunas linfoquinas e inmunoglobulinas.

 Activa la ruta clásica del complemento uniéndose a la

región Fc de la Ig G, generando poros transmembrana por
oligomerización en la superficie de las células que revisten
el tracto respiratorio y disminuyendo el movimiento ciliar.

 Neuraminidasa:

• Presente en todos los serotipos de neumococo. Se conocen dos formas de

la enzima: neuraminidasa A (NanA) y B (NanB).

 NanA se localiza en la superficie de la bacteria y contiene una

secuencia a través de la cual podría unirse al peptidoglicano. Su
actividad máxima es a pH 5.

 NanB es aproximadamente 100 veces más pequeña que NanA y

su actividad máxima es en torno a pH 7.

• LIBERA EL ÁCIDO SIÁLICO presente en los glicanos de superficie celular del

hospedador (mucinas, glicolípidos y glicoproteínas) variando los patrones
 de glicosilación. LA PÉRDIDA DEL ÁCIDO SIÁLICO FACILITARÍA LA
PERSISTENCIA BACTERIANA EN EL TRACTO RESPIRATORIO

 IgA proteasa:

• En todos los neumococos.

• Es una de las cuatro METALOPROTEASAS que puede producir el

neumococo junto con ZmpB, ZmpC y ZmpC.

• Libera inmunoglobulina A serotipo-específica que se une a las mucosas y

al neumococo, aumentando la adherencia de la bacteria a la superficie de
la célula del hospedador.

 Pili:

• Organelas alargadas que se extienden a través de la cápsula polisacarídica.

Estas estructuras poliméricas se generan en una reacción mediada por una
transpeptidasa, donde se produce un entrecruzamiento covalente entre
motivos LPXTG

• La expresión del pili potencia la adherencia inicial de la bacteria y

promueve la colonización en la nasofaringe.

*MECANISMO DE DEFENSA:

El neumococo expresa moléculas de superficie como PspA que inhiben la unión de C3b a la
superficie evitando la activación de la vía alterna. PspC se une al factor H, un regulador negativo
de la vía alterna. Por este medio se inhibe la captación y destrucción por parte de fagocitos
portadores de receptores de complemento.

Otro mecanismo de evasión del complemento está dado por la autolisis de algunas bacterias lo
que libera PLY y de esta forma activa el complemento lejos de la bacteria , previniendo el ataque a
las bacterias vivas.

3. ¿CÓMO SE CLASIFICAN LOS COCOS GRAM POSITIVO?

Estos se pueden clasificar, en primera instancia, en cuanto a sus requerimientos atmosféricos. Así
tenemos los cocos Gram positivos anaerobios estrictos constituidos por los géneros Peptococcus
y Peptoestreptococcus. Por otro lado tenemos los cocos Gram positivos aerobios y anaerobios
facultativos que están constituidos por la familia Micrococacceae (géneros Staphylococcus,
Micrococcus, Planococcus y Stomacoccus) y los géneros Streptococcus y Enterococcus.

GRAM
POSITIVO

Cocos Bacilos

Catalasa Catalasa
Aerobios Anaerobios
positivo negativo

No
Staphylo Strepto Estero Esporulados
Esporulados

Coagulasa + Coagulasa -

A. PARA PODER DIFERENCIAR A LOS STAPHYLOCOCCOS EXISTEN 2 PRUEBAS:

Las pruebas o ensayos bioquímicos son aquellas que ponen en evidencia la existencia de una
enzima o pasos metabólicos determinados. Ahora enumeraremos las pruebas bioquímicas
necesarias para la identificación de los estafilococos.

1. PRUEBA DE LA CATALASA:

 Que tiene como objetivo: Separar la Flia. Micrococacceae (catalasa +) de los Géneros
Streptococcus y Enterococcus (catalasa -).
 Que tiene como Fundamento: La enzima catalasa descompone el peróxido de hidrógeno
(H2O2) en agua y oxígeno bajo la fórmula 2 H2O22 H2O + O2. De esta manera las
bacterias se protegen del efecto tóxico del H2O2, que es un producto final del
metabolismo aerobio de los azúcares.

2. PRUEBA DE LA COAGULASA:

 Que tiene como objetivo: Permite separar S.aureus, que posee coagulasa, de las otras
especies de estafilococos que genéricamente se denominan coagulasa negativos.
  Que tiene como Fundamento: S.aureus posee dos tipos de coagulasa:
¬ Una endocoagulasa o coagulasa ligada o "clumping factor" que está unida a la pared
celular. Esta actúa directamente sobre el fibrinógeno provocando la formación de
coágulos o grumos cuando se mezcla una suspensión bacteriana con plasma citratado
(test en lámina).
¬ Una exocoagulasa o coagulasa libre que actúa mediante la activación de un factor
(CRF), formándose un complejo coagulasa-CRF, el cual reacciona con el fibrinógeno
produciéndose un coágulo de fibrina (test en tubo).

B. PARA PODER DIFERENCIAR A LOS STREPTOCOCCOS EXISTE:

Dentro de las pruebas bioquímicas para la identificación, la primera, luego de determinar que se
trata de un coco Gram positivo, es la prueba de la catalasa. La misma ya fue comentada en el
capítulo de estafilococos. Luego de determinar que se trata de un coco Gram positivo catalasa
negativo, debemos proceder a observar el efecto que tiene la cepa sobre el agar sangre
(hemólisis). Así podemos clasificar este grupo de gérmenes en:

 ß hemolíticos: son aquellos que producen una hemólisis total de los glóbulos rojos,
observándose como un halo transparente alrededor de las colonias.
 α hemolíticos: son aquellos que producen hemólisis parcial, la cual se observa como un
halo con tonalidad verdosa alrededor de las colonias.
 Gamma hemolíticos: son aquellos que no producen hemólisis sobre el agar sangre.

LINKOGRAFIA:
*http://higiene1.higiene.edu.uy/DByV/Streptococcus%20pneumoniae%20cap%EDtulo%20de%20li
bro.pdf

* http://www.higiene.edu.uy/cefa/Libro2002/Cap%2019.pdf

* https://www.nature.com/articles/s41579-018-0001-8

*http://aprendeenlinea.udea.edu.co/lms/moodle/pluginfile.php/186037/mod_page/content/1/B
acteriologia/Pruebas_de_laboratorio/Sensibilidad_a_optoquina.html

* https://eprints.ucm.es/45633/1/T39429.pdf

* https://scielo.conicyt.cl/pdf/rci/v18s1/art02.pdf