Practica 5

Micosis oportunistas

Introducción

La Candidiasis, por los diversos cuadros clínicos que presenta, puede causar
desdeuna micosis superficial, una subcutánea, hasta una profunda o bien
comportarse comooportunista.

Candida albicans puede causar infección aguda o subaguda, produciendo lesiones

en boca, vagina, piel, uñas, bronquios, pulmones y ocasionalmente,
septicemia,endocarditis o meningitis.

Como pueden aislarse cepas patógenas de Candida albicans en piel normal,

mucosa oral y vaginal normales y en la materia fecal de individuos sanos, salta a
la vista que la mayor parte de las infecciones tienen un origen endógeno y la
determinación de la fuente de infección constituye un problema tan difícil como en
el caso de infecciones de Staphylococcusaureus.

La presencia de Candida en el individuo normal explica la diseminación durante

las enfermedades debilitantes, padecimientos malignos del sistema
hamatopoyético, diabetes, lupus eritemetoso, enfermedades granulomatosas,
etc...

La Candidiasis ataca a personas de todas las edades y razas y en ambos sexos,

habiéndose reconocido ciertos factores predisponentes. Los antibióticos de amplio
espectro y las drogas citotóxicas favorecen la infección por Candida albicans y
otras especies de Candida.

Actualmente, Candida albicans y Candida stellatoideason los agentes etiológicos

que se presentan con mayor frecuencias es casos de candidiasis, pero existen
otras especies también capaces de producir enfermedad en el hombre: Candida
krusei; Candida tropicalis; Candida guillemondii; Candida pseudotropicalis;
Candida parakrusei.

Cultivo de muestra de orina

El urocultivo convencional es el método idóneo para el estudio de infección del

tracto urinario, permitiendo diferenciar cualitativa y cuantitativamente una
contaminación de una candiduria significativa.

Objetivo

El alumno será capaz de seleccionar las tácticas de trabajo que lo lleven a la

identificaciónde Candida albicans a partir de diversos especímenes clínicos.
Materiales

 Cajas Petri
 Matraz
 Probeta
 Pipeta
 Balanza analítica
 Estufa
 Mechero bunsen
 Autoclave
 Agua destilada
 Agar de Sabouraud Dextrosa
 Asa bacteriológica
 Cubre boca
 Guantes
 Abate lenguas
 Hisopo estériles
 Bata de laboratorio

Método

Preparación del medio de cultivo

Preparar 700 ml de medio de cultivo Agar de Sabouraud Dextrosa(ASD) en un

matraz Erlenmeyer de 1000 ml. Colocar un agitador magnético y calentar hasta
ebullición, cuidando que no se proyecte o derrame.

Esterilización de medios de cultivo

 Los medios de cultivo se esterilizarán en autoclave de acuerdo con las

siguientes instrucciones:
 Revisar que el agua en la autoclave esté limpia y el nivel coincida con la
marca en el tubo indicador. En caso necesario cambiar o añadir agua
destilada.
 Conectarla y poner la perilla de control en calentamiento máximo. Con el
uso de guantes de asbesto, acomodar los medios y materiales en la
canasta de la autoclave y colocarla dentro.
  Cerrar la tapa, apretar las manijas de dos en dos en posición encontrada y
esperar a que salga el vapor por el orificio de purga, después cerrarlo con la
válvula.
 Dejar que el equipo se caliente hasta alcanzar los 121°C o 15 lbs /in2 de
presión y mantener estas condiciones durante 15 minutos. Revisar
continuamente el manómetro y regular el control de temperatura a valor
medio o mínimo.
 Apagar la autoclave y dejar que la presión baje al valor de cero. Quitar la
válvula y con la ayuda de guantes de asbesto, abrir cuidadosamente la
tapa, desde la parte trasera para evitar que el vapor caliente cause
quemaduras.

Vertido de los medios en cajas Petri

 Enfriar los medios de cultivo de los matraces hasta una temperatura

aproximada de 45-50°C, que coincide con la posibilidad de sostener el
matraz en la palma de la mano sin quemarse.
 Limpiar la mesa con solución de alcohol al 70% (v/v), encender mecheros y
colocarlos a una distancia de 50 cm.
 Verter entre 20 y 25 ml de cada uno de los medios en tres cajas Petri en
esta zona aséptica. Dejar que los medios solidifiquen.

Cultivo de muestra de orina

1. Inocular 1 ó 10 μl de orina no centrifugada en una placaPetri que contenga

agar sabouraud dextrosa (ASD).

2. Incubar a 35 - 37 ºC por 48 – 72 horas en aerobiosis.

3. En la infección del tracto urinario, el valor del recuento de colonias en la

orina no está bien establecido. En general, se acepta que un recuento
mayor a 10 000 UFC/ml, indicaría infección urinaria o candidiasis
diseminada, un recuento inferior no es significativo de infección.

Algunos investigadores señalan que hay que valorar cualquier recuento de

levaduras como anormal y realizar nuevamente el cultivo antes de descartar una
infección.
En general, ante un cultivo positivo, se puede considerar las siguientes
situaciones:

 Candiduria inferior a 1000 UFC/ml: generalmente corresponde a ausencia

de infección, con excepción si la muestra fue obtenida por punción
suprapúbica.

 Candiduria entre 1000 y 10 000 UFC/ml: de significado clínico dudoso y

puede resultar de una contaminación sobre todo si existe flora mixta.En
ciertos pacientes (niños, diabéticos, cateterizados), un recuento bajo puede
ser de valor, sin embargo considerar una nueva muestra.

 Candiduria entre 10 000 y 50 000 UFC/ml: sugiere la existencia de infección

urinaria. La presencia de leucocitos y clínica del paciente pueden ayudar a
valorar la candiduria. Al encontrar en el cultivo flora fúngica mixta o
asociada con bacterias, sospechar de contaminación.

 Candiduria superior a 50 000 UFC/ml: indica infección.Agentes etiológicos

diferentes al género Candida obliga a la realización de recuentos de
colonias y puede sembrarse inclusive el sedimento urinario.

Cultivo de exudados faríngeos

1. El paciente debe presentarse sin haber tomado alimentos, con aseo bucal
hecho almenos 12 horas antes de tomar la muestra.

2. Se coloca al paciente sentado en posición odontológica. Auxiliarse con una

lámparaadecuada para visualizar perfectamente la cavidad oral.

3. Mediante un abatelenguas estéril sujetar la lengua e introducir un hisopo

estéril,raspando con la punta del algodón las partes más afectadas de las
amígdalas, sin tocarúvula.

4. Repetir la operación con otro hisopo estéril.

Siembra por la técnica de estría cruzada

1. Dividir cada una de las cajas Petri por la parte de atrás en cuatro
cuadrantes. Esterilizar el asa con calor en el mechero.Dejar enfriar el asa y
tomar la muestra de una colonia.
 2. Inocular la muestra haciendo 4 o 5 estrías simples muy juntas de lado a
lado sobre el primer cuadrante de la caja, cerrar la caja. Flamear el asa de
inoculación y hacer girar la caja Petri un cuarto de vuelta.

3. Abrir nuevamente la caja y con el asa de siembra esterilizada y fría, tocar la

superficie del de estrías recién hechas en un punto alejado del inicio. Hacer
un segundo grupo de estrías como en el caso anterior. Realizar el mismo
procedimiento en el tercer cuadrante y en el último cuadrante, sin flamear el
asa de siembra hará una estría más abierta (simple).

4. Las cajas con la base hacia arriba se incuban a 35°C durante 24-48 horas.

Observaciones

En tres cultivos que realizamos, obtuvimos diferentes resultados

Resultados
Crecimiento en forma cualitativa: (-) no hay crecimiento, (+) poco crecimiento, (++)
crecimiento regular y (+++) crecimiento abundante).

Cuadro 1. Resultados de crecimiento

Medio de cultivo Caja 1 Caja 2 Caja 3 Caja 4

Agar Sabouraud
Dextrosa (ASD
Cuestionario

1. ¿Qué es la candidiasis? Enfermedad infecciosa de la piel y de las mucosas

causada por un hongo.
2. ¿Cuáles son los síntomas más comunes de las infecciones por Candida
albicans? Los síntomas varían y pueden incluir comezón y sarpullidos en el área
afectada
3. ¿Cómo se contrae una infección por Candida albicans? Las relaciones
sexuales son un factor de riesgo si uno de los miembros de la pareja padece
candidiasis y el canal del parto puede ser un punto de contagio del bebé al nacer
si la madre presenta la enfermedad (transmisión vertical).
4. Menciona otros medios de cultivo específicos para hongos
 5. ¿Cuáles son los antifúngicos utilizados para tratar las infecciones por
Candida albicans? los antifúngicos más utilizados son los derivados imidazólicos
(fluconazol, itraconazol, ketoconazol, miconazol etc.)

Discusión

Segun otros cultivos de nuestros compañeros llegaron a ser casi parecidas las
comunidades

Conclusión

La practica realizada en el laboratorio nos enseño a utilizar un nuevo agar y

tambien pudimos ver las células por las que estaban constituidos estos hongos.

Bibliografía

 Aquiahuatl-Ramos, M. de los Á., Volke-Sepúlveda, T., Prado-Barragán,

L.A., Shirai-Matsumoto, K., Ramírez-Vives, F. y Salazar-Gonzales, M.
(2012). Manual de prácticas de Microbiología general. Universidad
Autónoma Metropolitana, Unidad Iztapalapa. México.

1. López R. Importancia actual de la micología médica en México. Gac Méd Méx. 2008 Mar; 144
(2):121- 122.

2. Hernandez O, Espejel J, Barón H, Maldonado J, Conde J. Terapia de descontaminación selectiva

del tracto digestivo como profilaxis antifúngica en pacientes críticos. Clinica-UNR.org. 2009 jul; 1-7.

3. Gómez C. Candida Yeast resistance to fluconazol. Infect. 2010 dec; 14(2):172-180. 4. Manzano P,
Mendez L, Hernández F, López M. La resistencia a los antifúngicos: un problema emergente en
México. Gac Med Mex. 2008 oct; 144 (1): 23-26.