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INTRODUCCIÓN
Las enzimas son proteínas que catalizan reacciones químicas en las células. Cada enzima es altamente específica
para la reacción que cataliza; ésta especificidad está determinada por el centro activo de la enzima (en donde
se hallan los grupos químicos responsables de la catálisis) y casi siempre actúa sobre un único sustrato o sobre
un grupo muy reducido de ellos. Por otra parte, muchas enzimas necesitan co-factores (co-reactivos, co-
sustratos) para cumplir su función catalítica y su actividad depende de la integridad de su conformación
proteica.
Ahora, la cinética enzimática estudia la velocidad de reacciones catalizadas enzimáticamente, la cual depende
de la concentración de moléculas de sustrato, la temperatura, la presencia de inhibidores y el pH del medio, que
afecta a la conformación (estructura espacial) de la molécula enzimática. Por lo que, existen diversos métodos
para la obtención de los parámetros cinéticos de una enzima estando la curva de progreso, la curva de Michaelis,
y sus respectivas linealizaciones: Lineweaver-Burk, Hanes y Hofstee, entre otras. Todas ellas, se realizarán en el
presente trabajo, además del establecimiento de un tipo de inhibidor tras la clasificación de este de manera
gráfica.
1. CURVA DE PROGRESO
Sustrato Producto
Tiempo (s) (micromoles) (micromoles)
0 100 0
5 90 10
10 81 19
15 72,9 27,1
20 65,6 34,4
25 59 41
30 53,1 46,9
35 47,8 52,2
40 43 57
45 38,7 61,3
60 34,9 65,1
Conclusiones
- La velocidad inicial (Vo) es de 2,67 micromoles por segundo.
- A los 60 segundos se consume totalmente el sustrato
- Entre los primeros 35 segundos se da la mayor producción de producto, en micromoles
2. Curva Michaelis
A Vo
0 0
10 28,6
20 44,4
30 54,5
40 61,5
50 66,7
60 70,6
70 73,7
80 76,2
90 78,3
100 80
Conclusiones
Al comparar las tres linealizaciones realizadas, se obtuvo que: la constante de Michaelis presenta un
porcentaje de desviación de 0,16% y la velocidad máxima un 0%, en la linealización de Hanes respecto a
la de Lineweaver. Mientras que, la constante de Michaelis presenta 0,11% de desviación y la velocidad
máxima un porcentaje de desviación del 0,02% en la linealización de Hofstee respecto a la de
Lineweaver. Por ende, si se quisiera obtener un valor medio de dichos parámetros resultarían siendo
100 micromoles/seg y 25 UI.
4. TIPO DE INHBIDOR
[I] nm
0 10 20 30
Vo micromoles /minuto
[A]
V0 V10 V20 V30 1/A 1/Vo 1/V10 1/V20 1/V30
mM
0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
1 100 66,7 50 40 1 0,01 0,014992 0,02 0,025
2 133,3 88,9 66,7 53,5 0,5 0,00750 0,011248 0,01499 0,018691
3 150 100 75 60 0,33333 0,00666 0,01 0,01333 0,01666
4 160 106,7 80 64 0,25 0,00625 0,009372 0,0125 0,015625
5 166,7 111,1 83,3 66,7 0,2 0,0059988 0,0090 0,01200 0,014992
6 171,4 114,3 85,7 68,6 0,166 0,005834 0,00874 0,01166 0,014577
7 175 116,7 87,5 70 0,14285 0,00571 0,00856 0,011428 0,014285
8 177,8 118,5 88,9 71,1 0,125 0,00562 0,00843 0,011248 0,014064
9 180 120 90 72 0,1111 0,00555 0,00833 0,011111 0,013888
10 181,8 121,2 90,9 72,7 0,1 0,0055005 0,0082508 0,0110011 0,01375515
Conclusión
- El tipo de inhibidor es no competitivo, con constantes Kii y Kiis de 20. La inhibición no competitiva
normalmente se aplica a enzimas y difiera de la inhibición competitiva en que el inhibidor siempre
se una a la enzima en un sitio diferente al centro activo de la enzima (este otro sitio se denomina
sitio alostérico). Así mismo, su ecuación es 1/Vo =(Km/Vm) (1+([I]/20) (1/A) + (1/Vm) (1+([I]/20).
CONCLUSIÓN
Del presente trabajo se concluye que el estudio de la actividad enzimática es de gran importancia, ya que las
enzimas intervienen en todos los seres vivos, y en el caso de los humanos en los que se facilita su estudio se da
en varios procesos como la digestión y la absorción de nutrientes, entre otros, y son empleadas hasta para el
tratamiento del cáncer. Al ser su intervención mediante la aceleración de las reacciones bioquímicas en el
cuerpo por ser catalizadores, es de suma importancia conocer dicha actividad para cuantificar la presencia de
enzima activa y el nivel de actividad de la misma. Por ende, su estudio permite conocer su funcionamiento en
los procesos metabólicos de los seres vivos, comparar su actividad, establecer de qué vive, cómo se desarrolla
y descubrirse más beneficios y usos.