MANUAL DE

PRÁCTICAS DE
LABORATORIO

CARRERA Ingeniería en Biotecnología

ASIGNATURA: Microbiología Gral.
FICHA TECNICA
 FICHA TÉCNICA
MICROBIOLOGÍA GENERAL
Fecha: 13-SEPT-2012
Nombre del catedrático: Jesús Hernández Romano

Nombre de la práctica: Preparación de medios de cultivo II: pico de flauta, líquidos,

semisólidos.
Clave:

Número de práctica: 1 Duración en horas: 2

Justificación:
Como parte de sus actividades, el IBT con frecuencia deberá
sembrar, aislar o describir agentes microbianos, para lo cual
necesitará utilizar medios de cultivo. Conocer la preparación de
los mismos es parte fundamental de su preparación.
Objetivos/Resultados de Que el alumno sea capaz de preparar adecuadamente distintos
aprendizaje: tipos de medios de cultivo.

Laboratorio donde se desarrolla de la práctica:

Actividades a desarrollar:
Preparación de medio de cultivo

Evidencia a generar en el desarrollo de la práctica:

Medios de cultivo en cajas de Petri con diferentes medios de cultivo.

COMPETENCIAS HABILIDADES
Preparar medios de cultivo para aislar
Capacidad de trabajar en equipo microorganismos de interés biotecnológico
para su aplicación en procesos a través de
los métodos microbiológicos adecuados.

Elaboró: Revisó:
INTRODUCCIÓN

La sobrevivencia y crecimiento de los microorganismos depende de los nutrientes disponibles y de

condiciones ambientales favorables. En el laboratorio, las preparaciones de nutrientes que se usan para
cultivar a los microorganismos se denominan medios de cultivo. Los microorganismos pueden cultivarse
utilizando medios químicamente definidos, para los cuales se conocen las cantidades exactas de los
compuestos que los integran, o bien medios complejos, los cuales incluyen materiales cuya composición
exacta se desconoce, como extracto de levadura, de carne, peptonas, etc. Estos componentes son ricos
en vitaminas y nutrientes, pero se desconoce su composición exacta. Los medios complejos son los que
se emplean rutinariamente en laboratorios de bacteriología.

La preparación de medios a partir de productos comerciales deshidratados es simple y directa.

Cada bote trae en su etiqueta las instrucciones para la preparación del medio. Siempre que vaya a
preparar medio, utilice un recipiente de una capacidad de al menos lo doble del volumen de medio que va
a usted a preparar.

La esterilización se lleva a cabo utilizando la autoclave, sin embargo debe revisar antes si el medio
a esterilizar no contiene componentes sensibles a las condiciones de esterilización (121ºC a 15 libras de
presión).

OBJETIVO
Que el alumno sea capaz de preparar adecuadamente distintos tipos de medios de cultivo.

MATERIALES REQUERIDOS POR EQUIPO (Cristalería)

CANTIDAD MATERIAL ESPECIFICACIONES
4 Matraz Erlenmeyer 250 mL
2 Espátula
2 Vidrio de reloj
1 Mechero Fisher
40 Tubos de ensayo con tapa de rosca 18x150
2 propipetas
2 Pipetas serológicas 10 mL
2 Probetas 10 mL
2 Gradillas para tubos de ensayo Para tubos de 18x150

EQUIPO REQUERIDOS
NOMBRE ESPECIFICACIONES
1 Autoclave
1 Balanza analítica
1 Balanza granataria
 OTROS MATERIALES REQUERIDOS
(No suministrados por el Laboratorio)
CANTIDAD MATERIAL ESPECIFICACIONES
1 Algodón Paquete
1 Gasa Paquete
1 Encendedor
1 Marcador Indeleble
1 Maskin Tape
1 Papel aluminio

REACTIVOS REQUERIDOS
NOMBRE CANTIDAD S I R O

Agar nutritivo

Agar bacteriológico

S: Riesgo a la Salud I: Riesgo de Incendio R: Riesgo de reactividad O:especificaciones

Manejo y disposición de los reactivos requeridos:

Los medios de cultivo sobrantes, se colocan en un bote de plástico etiquetado
como “Desechos de medios de cultivo”.
Nombre del reactivo Datos importantes de la ficha técnica
Incendio: combate,
derrame
Salud
Ambiente
Datos de la ficha de seguridad de cada uno de los reactivos que se
utilizarán en el laboratorio.
Datos de la ficha de seguridad de cada uno de los reactivos que se
utilizarán en el laboratorio
Datos de la ficha de seguridad de cada uno de los reactivos que se
utilizarán en el laboratorio
 PROCEDIMIENTO O METODOLOGÍA

En la preparación de todos los medios se utilizará caldo o agar nutritivo, cuya composición es la que sigue:

Caldo nutritivo:
Peptona 5 g/L
Extracto de carne 3 g/L

Agar nutritivo:
Peptona 5 g/L
Extracto de carne 3 g/L
Agar 15 g/L

Los medios con gelatina llevarán:

Caldo Nutritivo + gelatina
Peptona 5 g/L
Extracto de carne 3 g/L
Gelatina 120 g/L

Preparación de medio sólido en cajas de Petri:

1. Se pesa por cuadruplicado la cantidad necesaria para preparar 100 mL de Agar nutritivo en polvo.
2. Se colocan 100 mL de agua destilada en 4 matraces Erlenmeyer de 250 mL con tapón y se vierte en cada uno la cantidad pesada
de cada medio.
3. Se etiquetan los matraces con el nombre del medio que contienen.
4. Se mezcla el medio con el agua, se tapan los matraces sin cerrar herméticamente y se meten a la autoclave.
5. Preservando la esterilidad de las cajas de Petri, se etiquetan de acuerdo con el medio que van a contener.
6. Una vez estériles, los medios se dejan enfriar hasta que la temperatura del medio se soporte con el dorso de la mano,
posteriormente se vierte en las cajas de Petri, en zona de esterilidad (cerca del mechero) colocando una cantidad de medio tal
que apenas cubra la mitad del volumen de la caja (NO LLENE LAS CAJAS CON MEDIO).
7. Las cajas se dejan enfriar para que el medio solidifique.

Preparación de medio en pico de flauta:

1. Cada tubo en pico de flauta llevará 5 mL de agar nutritivo, por lo que se pesan las cantidades necesarias para preparar 60 mL de
agar nutritivo y se colocan en un matraz Erlenmeyer de 250 mL conteniendo los 60 mL de agua destilada.
2. Se mezcla perfectamente para obtener una suspensión homogénea.
3. Con agitación continua para evitar la sedimentación del agar, se colocan 5 mL de medio en cada uno de 15 tubos etiquetado
como “Pico de Flauta”. ES IMPORTANTE QUE CADA VEZ QUE TOME MEDIO DEL MATRAZ AGITE LA SUSPENSIÓN PARA
EVITAR QUE EL AGAR SE DISTRIBUYA DE MANERA NO HOMOGÉNEA.
4. Se cierran los tubos de manera que no quede herméticamente cerrados para evitar que se rompan por la presión del vapor.
5. Se esterilizan en la autoclave de acuerdo con las instrucciones del profesor.
6. Una vez estériles y antes de que solidifiquen, se inclinan en un ángulo de 10º aproximadamente (puede ser con la ayuda de un
cuaderno) y se dejan solidificar.

Preparación de tubos con caldo nutritivo:

1. Se pesa la cantidad necesaria de caldo nutritivo para preparar 40 mL de caldo nutritivo.
2. Se disuelve el medio en 40 mL de agua destilada.
3. Se colocan 3 mL en cada uno de los 10 tubos con tapón de malaquita etiquetados como “Caldo nutritivo”.
4. Se cierran los tubos de manera que no quede herméticamente cerrados para evitar que se rompan por la presión del vapor.
5. Se esterilizan en el autoclave de acuerdo con las instrucciones del profesor.
 Preparación de tubos con caldo nutritivo + gelatina.
1. Se pesan las cantidades necesarias de caldo nutritivo y gelatina para preparar 60 mL.
2. Se adicionan los reactivos a un matraz Erlenmeyer conteniendo 60 mL de agua destilada.
3. Se mezcla perfectamente para obtener una suspensión homogénea.
4. Con agitación continua para evitar la sedimentación de la gelatina, se colocan 5 mL de medio en cada uno de 15 tubos etiquetado
como “Gelatina”. ES IMPORTANTE QUE CADA VEZ QUE TOME MEDIO DEL MATRAZ AGITE LA SUSPENSIÓN PARA EVITAR
QUE LA GELATINA SE DISTRIBUYA DE MANERA NO HOMOGÉNEA.
5. Se cierran los tubos de manera que no quede herméticamente cerrados para evitar que se rompan por la presión del vapor.
6. Se esterilizan en el autoclave de acuerdo con las instrucciones del profesor.
7. Se dejan solidificar en posición vertical.
8. Una vez solidificados y esterilizados los medios, cada equipo deberá tener:
a. 40 cajas de cultivo.
b. 10 tubos en pico de flauta
c. 10 tubos con caldo nutritivo
d. 10 tubos con Caldo nutritivo + gelatina
Estos medios se guardan por equipo, debidamente etiquetados, en refrigeración hasta su próximo uso.

REPORTE DE LA PRÁCTICA

EVIDENCIAS DE LOS RESULTADOS OBTENIDOS DURANTE LA PRÁCTICA En este espacio se

ponen las
observaciones, graficas, cálculos matemáticos dibujos, datos, esquemas, tabla de datos, etc. Que se
generaron durante el desarrollo de la práctica.

DISCUSIÓN

CONCLUSIÓN

BIBLIOGRAFÍA