icas (81) ANTIBIOTICOS—VALORACIONES MICROBIOLOGICAS INTRODUCCION E INFORMACION GENERAL Enlas condiciones aed lo acti (poten) 6e los antibiicos puede demastarse gor su efecto ribicr sole los ricrorgarsmos La recuecon en Ia actividad micobura puede ser diel de denoswar por metodo: quimeos. Ee captdo ‘Taurefsprocedinicnos par anitioicosreconslden ci Farman des Eads Us (USP pare le Gusta va ‘in microtioligea ese’ mételo anatca etic, ‘Seutlizoy dos enim generals valonesén on cedropies(oen pla) ylavalonessn tricindres (0 eno) 3 Tobi Hits tos lon arbistros que incuyen vooracones merobisOgis: exces l pa de voorai lind: paca © tursiietre). att Tt [oa pi ‘acracs Tatnaopse conn tp — ini chris ———repiiner — ‘line “nso: — ‘Ginorpue ermine cae em eg a | ae se Fabia tonnes) aici Tipe de Vaan Ttiohe indoles ‘ane insoles —— ‘lindroplace ~ a clos Sinope Toler Tabi Tne Totbid vcore ois [Nom»—Reslizar todos os procedimientosdescrtos en las monograliasasépicamente. Tomar las precauciones de seguridac adecuadas al realizar estas valoraciones debido a ls posiblesalergis alos aemacos a que se usan culvos vvos de organi smo las peoceaimientos] Valoracion en clindro-placa:_ La yaloracin en clindro-paca se basa en la cifusin de! entbidtico desce un cfindro vertical ttavés de una capa de agar soliieado en un plato o placa de Pet El crecimiento del micraorganismo especifiea Inaculad © agar resuitainhibio en un area circular 0 20a en tomno al clin que contiene la solucion del antibiotic. Valoracién turbidimétrca: La valoracién turbidimética se basa en la inhibicion del crecimiento de un microorganismo en luna selucisn uniferme del anibidica en un medio ua que favorezca el crecimiento del microorganism en ausencia el anuibstico. Unidades y Estindares de Referencia:_La potencta de los antibisticos se designa en unidades (U) 9 eng de actividad. En amos casos, la unico ug de actividad de antibitica se establece originelmente contra un Esténdar Maestro Federal de los Estados Unidos para et antibitica en cueston. El Estandar de Relerendia USP carrespondionte se calibra en términos del esti. dar mae, fn un principio, se consideraba que un antibstico seleccionado como estindar de referencia constaba en su totalidad deEn un principio, se consideraba que un antibictico selecconade como estindar de referencia constaba en su ttalidad de tua sola entidad quimicay, or la fanta, se le asignaba una potencia de 1000 wq/mg, En muchos de estos casas, a media Aue los métodos de fabrieacin y purfcecion para certs anibioicos avancaron en su desrrlla, ive posible obtener antibié= {ces con mis 86 1000 19 de actvidd/ma, Tales antiisticos tenia una atvidas equlsalente aun rumero determina de ng del estndar de referencia original. No ebstante, la mayoria de las veces, los ug de actividad son, numéricamente, exacts mente equivalents alos ug (paso) dela sustancia pura. En cletas ocasiones, como las Gladas a cantinuacion, los ug ee acts [Sac defnises en teminos cel enénsor maesve orginal equivlen 2 una una 1, Cuando «!antibigtico se presenta como la base libre y en forma de sa, ls ug de actividad han sido deinidos en ver ros de una de estas formes, 2. Cuando i sustaneiaantbstica consta de un niimero de componentes que son quimicamente similares pero que iferen en actividad antbitie. 3. Cuando las potencas de una famila de antibiticos se expresan en témninos de un esténdar de eferencia que consta de tn Selo miembro del farlia el cual, na obstants, puede see pax si misma heteraqéneo, No se debe asumir que los ay de actividad coresporiden a fos wy (peso) dela sustancia antibistic, ‘Aparato: El meteral de laboratoio usedo pare almacenar y Wanslerr microorganismos y dluciones de prueba debe ser esté- fily estar exento de reschios que pcieran inereric en le valracin (ver Limpiena de Minor de Vida 10S). Ura un maton do de esteriizacion vadado tal como caer seco, vapor 0 iadiacion; 0 usar material de laboratorio este y desechable Control de temperatura: Se requiere contol termostatico en varias etapas de una valeacion microbyokogica: durante el cue tivo de un mieroorganismo y la preparacién de su incu, sf como durante la incubacién en las valoracones en placa y tubo, Relersealos requisites expecticas de temperatura provistos mis adelante para cada tipo de valoracin, ‘Organisms de prueba: _Elorganimo de prueba para cada anibictica seista en la Tabla 3 para la valoracién en clindro- placa y en la Tabla 8 para a valoracén turbidimetrica, Los organismos de prueba se especcan mediante su ndmero de ident ficgcign en la American Type Culture Cllection (Coleccion de Culvos Tipo de los EEUU. 0 ATCC). ara asegurar el deserpenio aceptable de las organismos de prueba, estos Geben se almacenados y conservados de manera prapiad. Se eben e:tablecer las condiciones de simacenamiento especie durante validacisn o verfiacin del metodo DDesechar los cutivos si se observa un cambio en las caractersticas del organism ‘Almacenamiento prolonged: Para el almacenamento prolangado, mantener ls organisms de prutba en una solucion| de almacenamiento adecuada, tal como suero fetal de ternero al 5036 en caldo, lceol al 109-158 en eaidotipicase de Soja (aldo digerido de casein y soja), sangre de ovja desfribinadao leche descremada, Las cultvos que se van a almacenar ‘furante peridos prolongacos se slmacenan mejor en estado bof laaco se prefierentemypernturas ce 6D" 0 nferiores £0 aceprables temperaturasIneriores a 20" CCultivos primarias: Preparar los cultivosprimaos ransfitiende organismos de prueba desde los vals de almacenamien to prolongacio 2 medios apropiades e incubande en condiciones de crecimiento adecuadas. Aimacenat ls cultivos primasios a Ja temperatura apropiade, por lo general a 28, y desechar después ce tres semanas. Se puede usar e! mismo cultvo prima Fo para prepara los cultvos de trabajo por un maximo de sete clas nicamente. Cultivos de trabajo: _Preparar los cults de trabajo transftendo e!cutivo primaro a medias séldos aproplados para ob: tener colonas aisladas. Incubar ls culos de trabajo en condiciones apropiadkas para obtener un crecimiento salistactori pa- "3 la preparaclén de los inéculos de prueba. Prepararcullivas de wabajo nuevos para cada dia de ands CCreeimiento 0 desempeno na earacteristiens de un arganisme de prieba: Uso culvos mcr, cultivos primar @| cults de trabajo nuevos cuando un orgenismo de prueba presente crecimiento o desempefio ne earacteristicos. Disefios de valoracién: Los disehos experimentales adecuados son clave para incrementar la preclsin y minimizar el sesgo. CControlar les parémetros de incubacién, i dstlbuciin de temperaturas y el lempo es rfico para mininzar el sesgo; esto Se puede lograr acomodando las placasy grads, segin se indica en cada valoracion. Valoracién en clindro-placa: Las comparaciones se limitan alas relaciones entre las meclciones del didmetro dela zona tentra de ls plcas, sn tener en cuenta a vanacion entre placas, Las respuertae inclines ce las peas se normalizan bo- sandose ene! lamatioreativo de la zona del estindar comparado con el tamarie medio de la zona del estandar en todas ls placas. Valoracién turbidimétrica: Para evitar un sesgosistemético,colacaraleatoriamente tubos duplicados en gti separa- das de manera que cada gradila contenga un conjanto completo de tratamiento. El propésito de estaconfiguracin es min- miza Ia infuenela de a estribucisn de la temperatura sobre ls muestras duplicada, La valoracin turbelmética, debi a la

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