Manual de Prácticas Iamb

MANUAL DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO DE INGENIERÍA AMBIENTAL I ITSM
ACADEMIA DE INGENIERÍA AMBIENTAL

1
ÍNDICE
Introducción al laboratorio y selección de la bitácora………………………….. 4
Determinación de pH………………………………………………………………. 15
Determinación de sólidos sedimentables.……………….………………………. 20
Coliformes totales y fecales en agua de consumo humano….……………………… 24
Coliformes, coliformes totales y fecales en agua residual………………..…………. 38
Determinación de la Demanda Bioquímica de Oxígeno (DBO5) …………………… 46
Determinación de la Demanda Química de Oxígeno……………………………….. 58
Determinación de Dureza. …………………………………………………………... 63
Determinación de Alcalinidad Total………………………………………………….. 67
Determinación de Conductividad…………………………………………………….. 72
Determinación de Nitrógeno Total Kjeldahl………………………………………….. 77
Determinación de Nitritos en Aguas Naturales y Residuales……………………….. 83

2
INTRODUCCIÓN
En la actualidad, los problemas ambientales han alcanzado tal magnitud que es necesario
abordarlos desde diferentes perspectivas, las ciencias ambientales se han convertido en
una prioridad para la mayoría de las instituciones educativas de enseñanza superior es el
caso del Instituto Tecnológico Superior de la Montaña a través de la academia de
Ingeniería Ambiental, se planteo la necesidad de que los estudiantes tengan un Manual de
Prácticas de Laboratorio de Ingeniería Ambiental I, para complementar los conocimientos
teóricos con la práctica, facilitar la investigación científica y obtener la formación
multidisciplinaria que la vida actual exige.
Con la colaboración de la Ingeniera Ambiental Graciela G. Jiménez Guinto y el Ingeniero

Químico Irving Baylón Fuentes se elaboró el presente manual; el cual es una recopilación
de procedimientos prácticos para determinar la calidad del agua. Se incluyen
determinaciones microbiológicas y fisicoquímicas.
MISIÓN:
Contar con un manual de consulta que permita el desarrollo, individual y colectivo de

alumnos y cuerpos académicos.
OBJETIVOS
Los objetivos que se han planteado para que el laboratorio cumpla cabalmente con las
funciones para las que fue creado, son los siguientes:
 Reforzar el conocimiento sobre los problemas ambientales en los aspectos de

suelo, agua y aire, a nivel de licenciatura, por medio de prácticas de laboratorio.
 Impulsar la investigación sobre los problemas ambientales en los aspectos de agua

suelo y aire, de tal forma que se promueva el equilibrio ambiental, a través del
desarrollo sustentable, con el fin de lograr un futuro prominente para las siguientes
generaciones.
 Brindar un servicio serio y profesional de análisis de agua, suelo y aire a

dependencias oficiales, iniciativa privada y a la sociedad en general, con el
respaldo de profesionistas altamente calificados.

3
PRÁCTICA No 1
INTRODUCCIÓN AL LABORATORIO Y SELECCIÓN DEL LIBRO DE

BITÁCORA.
OBJETIVO.
Conocer los criterios para la selección del libro de bitácora, Realizar una investigación
bibliográfica. Conocer el diseño de protocolos y reportes. Conocer los principales marcos
legales sobre seguridad en el trabajo de laboratorio, contingencias, mitigación y
remediación. Conocer los criterios sobre primeros auxilios relacionados con el trabajo en
laboratorio.
INTRODUCCIÓN.
Una de las características de "el método científico" (cualquiera que éste sea) es la
reproducibilidad o posibilidad de repetición del trabajo realizado por un científico. De esta
manera, cualquier colega en el mundo está en la posibilidad de confirmar los hallazgos
anunciados y, finalmente, contribuir al incremento del conocimiento humano. Siguiendo los
pasos de "una receta" es posible elaborar siempre igual un mismo platillo u obtener un
compuesto químico. En ambos casos, la cocina o el laboratorio químico, la receta para
elaborar una "receta" reproducible es escribirla mientras se está desarrollando o
inventando. Las notas deben tomarse inmediatamente para no dejar nada a la
memoria (que puede fallar) en un cuaderno, libro o libreta seleccionada exclusivamente
para este fin. Esto es el libro de bitácora (o simplemente "bitácora") y, al igual que la
bitácora de a bordo de un navío, debe narrar todas las experiencias que permitan
reconstruir las acciones llevadas a cabo.
El libro de bitácora es el diario de trabajo donde se describen las acciones cotidianas de la

investigación, y es totalmente personal. Se elabora simultáneamente a la experiencia y
debe estar totalmente al alcance de los colegas y compañeros de trabajo para su lectura y
consulta. Además, ya sea que se esté trabajando en un laboratorio, en el campo o en la
biblioteca, siempre se debe tener a la mano el libro de bitácora personal.
Investigación bibliográfica.
La investigación bibliográfica es una compilación de los hallazgos precedentes que sobre

el tema del trabajo o sobre temas afines y relacionados, se encuentran publicados en la
literatura y en otras fuentes de información. Los antecedentes son todos los datos
necesarios que describen la historia previa al trabajo y con los que se justifica su
realización y desarrollo. Los antecedentes se obtienen de la literatura y deben buscarse en
todas las fuentes disponibles al respecto, sean libros, artículos, entrevistas personales, e
incluso fuentes audiovisuales y cibernéticas de información.

4
DISEÑO DE PROTOCOLOS Y REPORTES.
Aunque la forma y estilo de los textos científicos pueden variar tanto como individuos se
dedican y han dedicado a esta actividad, su contenido se puede generalizar en cinco
grandes capítulos, que son:
1. Introducción.
2. Metodología.
3. Resultados.
4. Discusión.
5. Conclusiones.
Ahora que todo esto va precedido por el Título. El Título de un trabajo científico, sea el
protocolo o el informe del mismo, debe representar breve y fielmente el tema principal, la
naturaleza, el resultado y las conclusiones principales obtenidas para o durante su
desarrollo.
La Introducción a su vez está constituida por varios rubros, siendo los más comunes los
antecedentes, la hipótesis y el objetivo. En ella se localizan las preguntas que justifican y
le dan importancia al problema que aborda la investigación. Con base en los antecedentes
se señalan las razones que llevan a plantear el desarrollo del trabajo presente, y de este
modo justifica el objetivo y su realización.
En la Metodología se deben describir en detalle escrupuloso los métodos, los materiales,

los equipos, las substancias, las ecuaciones y las condiciones ambientales exactas y
precisas en las cuales se lleva a cabo la experiencia. Para ser detallado debe emplearse
incluso cualquier modo de registro e ilustración disponible, sean tablas, dibujos,
diagramas, esquemas, fotografías y otras figuras útiles. En el libro de bitácora se
describen el material y el método propuestos, que puede haberse consultado en la
literatura. Asimismo, se deben describir los cambios, modificaciones y adecuaciones que
se hagan al mismo durante el desarrollo de la experiencia. De este modo, en el informe o
reporte del trabajo se deberá redactar únicamente el material y el método finalmente
empleados para la obtención de los resultados del estudio.
Finalmente, las anotaciones del trabajo de laboratorio se acompañan con comentarios que
sean útiles para la realización posterior de la Discusión de los resultados y las
Conclusiones finales del trabajo desarrollado.
Todas estas notas son indispensables para poder elaborar el Reporte de Laboratorio. Este
debe contener, a su vez, Introducción (con el Objetivo), Materiales y Métodos, Resultados
(acompañados con Tablas y/o Figuras), Discusión y Conclusiones.
CUADERNO DE NOTAS
El libro de bitácora es el diario de trabajo y debe llevarse consigo al lugar de labores. Por
lo tanto, es de suponer que se le dará un uso constante y, tal vez, agitado y rudo. En el

5
laboratorio se coloca sobre la mesa de trabajo, por lo que está expuesta a que se
derramen sobre ella reactivos puros o soluciones de ellos; si se trabaja con fuego, puede
llegar a quemarse. Si se está en el campo, se expone a otros riesgos para su integridad,
más aún si se encuentra trabajando en investigación sobre sistemas acuáticos o marinos
(y no siempre se cuenta con un buque oceanográfico).
Es por los anteriores motivos que se requiere tener cuidado para seleccionar el mejor
cuaderno, libro o libreta que vaya a fungir el papel de libro de bitácora de trabajo. Y
precisamente un aspecto importante a considerar es el tipo de papel que se usará. La
regla básica es un papel resistente al rasgado, poco poroso y absorbente,
preferentemente blanco (sin color), ya sea rayado, cuadriculado o liso. El rayado y el
cuadriculado pueden ser útiles para la organización de las notas o para la elaboración de
tablas o gráficas preliminares. Es recomendable realizar pruebas de las propiedades de
diferentes muestras de papel para elegir la más apropiada. Se debe probar la resistencia
al rasgado manual y con la punta afilada de un lápiz duro, del número 3 o mayor o de la
serie H de dibujo. La porosidad y absorbencia se prueban mediante un plumín de punta
fina, uno de punta gruesa y con tinta fuente, aunque ésta ya casi está fuera de uso; se
debe elegir el papel que muestre el menor corrimiento o dispersión de las tintas
ensayadas, pero cuya absorbencia permita la adherencia de la tinta.
Otras pruebas necesarias para escoger el papel son las de resistencia al agua y otros
solventes. Debe soportar el mojado sin romperse ni desbaratarse. Además, si el papel es
rayado o cuadriculado, la tinta de éstos no debe “correrse” al mojar el papel con diversos
solventes. A este respecto, es importante mencionar que no existe el papel ideal, ya que
las tintas de rayado y cuadriculado que no son solubles en agua suelen serlo en solventes
orgánicos, como el etanol. Por otro lado, aunque hay en el mercado papel “resistente al
agua”, éste suele ser soluble en solventes orgánicos. La conclusión es que se debe elegir
el papel que mejor resista todas las pruebas o que salga mejor librado de ellas.
Otro aspecto a considerar es la forma o tipo de cuaderno, libro o libreta en la que se

encuentra el papel elegido. Lo más común es emplear una libreta de pasta dura cosida
como las usadas para la contabilidad. El tamaño suele ser totalmente al gusto del usuario;
pueden ser tamaño carta, esquela, oficio u otro; de 200 o más hojas; de forma francesa o
italiana. Por otra parte, hay quienes utilizan cuadernos de pasta blanda de argollas, espiral
o engrapado, pero el inconveniente es que las hojas se desprenden fácilmente y esto
puede ser de consecuencias negativas para el trabajo, ya que se está expuesto al extravío
de notas que pueden ser importantes. Además, otra regla de oro de la bitácora es “no
desprendas hojas”; por el contrario, es muy frecuente que se añadan o adhieran hojas al
diario, que pueden ser gráficas milimétricas u otras ilustraciones, como fotografías o
gráficas impresas por los aparatos del laboratorio. No se debe olvidar que también es
importante someter a las mismas pruebas de resistencia a las pastas y a la bitácora
misma. A diferencia de las hojas, debe elegirse una bitácora de pastas no absorbentes, tal
vez plastificadas, que la protegerán del mojado cuando esté cerrada. Si se desea tener
una identificación de primera mano sobre la pasta, puede colocarse una etiqueta con las
mismas características del papel. En suma, de las propiedades de la bitácora depende en
gran medida su durabilidad y vida útil, aún después de haberse usado en su totalidad.

6
Un formato alterno de bitácora usado que facilita la organización de las notas y la adición
de hojas al diario, es la carpeta de argollas, que también puede ser de la forma y tamaño
preferido por el usuario, aunque también se pueden desprender las hojas como en los
cuadernos de pasta blanda; sin embargo, a diferencia de éstos, en las carpetas se tiene la
posibilidad de reforzar las hojas con etiquetas ad hoc.
REGISTRO DE NOTAS
Al mismo tiempo que se elige el material para el libro de bitácora, debe seleccionarse el
instrumento para la escritura de las notas de trabajo.
Tradicionalmente, los científicos, filósofos, ingenieros, etc., han elaborado sus notas con
tinta o con lápiz de carbón o grafito. La tinta ha sido preferida por los habituados al trabajo
en el laboratorio, mientras que el lápiz ha sido la elección de los naturalistas e ingenieros
en el campo. Ambos instrumentos cuentan con ventajas y problemas. Las tintas
tradicionales, como la de china, pueden ser disueltas por el agua; aún las tintas modernas
insolubles en agua, resultan solubles en diversos solventes orgánicos. La mejor opción
son los bolígrafos, aunque no se escapan de ser probados en el papel que se vaya a
escoger, sometiendo su tinta impresa, tanto al agua como a diversos solventes, como el
etanol.
El otro artefacto para la escritura es el lápiz de grafito. Aún aquí es indispensable elegir el
más apropiado para usarse en el papel seleccionado. Si bien es obvio que el grafito no es
soluble en agua ni en solventes orgánicos, debe escogerse un lápiz que permita una
escritura clara, firme y duradera. Los lápices de dibujo son apropiados por su calidad, pero
si se escoge un lápiz muy suave, de la serie B, la escritura se borra con sólo pasar el dedo
por encima. Por el contrario, si se toma un lápiz muy duro, el trazo es tan tenue y pálido
que puede dificultarse la lectura, aún cuando se escriba con puño muy firme; en este caso
es casi como si se escribiera con un clavo sobre el papel. La mejor recomendación es el
lápiz de dibujo HB o el de escritura 2 ó 2½. Los lápices de mayor graduación también
equivalen a clavos, mientras que los de menor, resultan tan suaves como los B de dibujo.
El lápiz ofrece otras ventajas sobre la tinta: es útil para escribir bajo la tormenta más
cerrada e incluso bajo el agua, además de que es más práctico para elaborar diagramas,
bocetos o dibujos que puedan requerirse.
Por cierto: cuando se está escribiendo con lápiz existe la tentación de borrar lo que se
considere inútil, inapropiado o equivocado. En cambio, cuando se escribe con tinta no
existe esta posibilidad; lo más que se puede hacer es tachar lo escrito. De cualquier modo,
en el caso de una bitácora no importa con qué instrumento se esté escribiendo. La
siguiente regla lo explica: jamás se borra o se tacha completamente. Cuando se considere
necesario, sólo se traza una línea sobre el escrito deseado; uno nunca sabe si la idea
indeseada podrá ser útil o correcta en un momento posterior.
LA REDACCIÓN DE LAS NOTAS

7
Una vez seleccionados el libro de bitácora y el instrumento de escritura, se puede

comenzar a realizar el trabajo relacionado con el laboratorio o el campo: ¡A escribir! Pero
¿cómo hacerlo?
En cualquier actividad científica o técnica, el registro de las notas del trabajo sobre la
bitácora debe ser claro, exacto y preciso. Además, a diferencia del estilo literario clásico
libre, es deseable que el lenguaje usado en la bitácora sea ahorrativo, cauto sin la mayor
complicación que la necesaria. Aunque se debe evitar la metáfora, suele ser necesario el
uso de la analogía o la homología. Por otra parte, si bien debe ser ahorrativo no use
abreviaturas, sobre todo si son personales, ya que su significado suele olvidarse con el
tiempo. Algo más que debe evitarse como a la peste negra, aunque no directamente
relacionado con el estilo, son las anotaciones en papeles u hojas sueltas. Estas suelen ser
perdedizas por muy diversos motivos. Hay incluso profesores que acostumbran confiscar
este tipo de material literario.
Siguiendo con el estilo, dado que el objetivo del libro de bitácora es registrar toda la
información relacionada con el trabajo para ser utilizada en la elaboración y comunicación
de los reportes técnicos, debe buscarse ante todo la claridad. En este sentido, no debe
escatimarse en la repetición de frases o palabras, cuidando siempre la brevedad y
precisión. Por otro lado, si se ve en la necesidad de acuñar algún neologismo, defina
claramente el nuevo término para evitar ambigüedad. Este es, en sí mismo, otro fin de la
labor científica al descubrir nuevos hechos: la aportación de nuevos conceptos o
paradigmas al cuerpo del conocimiento humano.
Una característica común de la redacción técnica y científica, que también la distingue de

otros estilos literarios, es la forma impersonal de expresión utilizada. Es muy poco común,
salvo en los casos de narraciones de tipo histórico o autobiografías, que los científicos
escriban en forma personal: descubrí el principio de. . . En lugar de ello, suelen decir: se
descubrió el principio de . . .
Otra propiedad de la redacción de un escrito técnico es el manejo de los tiempos. Si se

está proponiendo un procedimiento o protocolo de trabajo, se debe redactar en futuro.
Pero una vez que se está desarrollando dicho procedimiento y se están observando los
resultados o es necesario realizar modificaciones al proyecto original, se debe expresar en
tiempo pasado, ya que se trata de lo que se hizo o se llevó a cabo.
LA ORGANIZACIÓN DE LA BITÁCORA
Ya que se trata de una herramienta del trabajo científico o técnico, al elaborar el libro de
bitácora se debe seguir la misma disciplina y rigor que requiere el “método científico” en el
orden, organización y planeación.
Lo primero a escribir en una bitácora de trabajo, son los datos de identificación de la

misma. Ya sea en la cubierta o en la primera página, debe plasmarse claramente el
nombre del propietario de la bitácora, la disciplina, tema o materia para la que se ha
designado, así como la información sobre la adscripción –nombre del laboratorio o lugar

8
de trabajo, domicilio y teléfono institucionales y/o particulares. Esto último es fundamental

para evitar el riesgo de pérdida o extravío.
Otra información que debe encontrarse en el libro de bitácora es la relacionada con la

seguridad para el trabajo de laboratorio o de campo. En primer lugar, e inmediatamente
después de los datos de identificación del titular, debe contarse con las instrucciones de
primeros auxilios pertinentes para los incidentes más comunes. Por ejemplo, en el trabajo
químico puede ocurrir el derrame de ácidos o álcalis sobre la piel o sobre las mucosas;
puede haber quemaduras por fuego o calor; pueden ocurrir accidentes eléctricos o
mecánicos punzocortantes. La persona involucrada puede inhalar vapores o gases
irritantes, tóxicos o venenosos, o sufrir de shock o de paros cardiaco y respiratorio. Por
otra parte, cuando sucede un evento inesperado es frecuente que se derramen reactivos
líquidos o sólidos, o incluso haya escapes o emanaciones de gases o vapores, todos los
cuales deben ser detenidos, reducidos y eliminados oportuna y apropiadamente, por lo
que es indispensable también tener disponible las medidas más comunes de contención y
mitigación de incidentes, químicos en este caso. Más abajo se podrá encontrar mayor
información.
En el libro de bitácora, cada página que se usa debe ser numerada en secuencia,
iniciando con la primera del cuaderno. Una vez numerada, cada página inicia con la fecha.
Esto permite una rápida identificación del contenido por parte del autor y usuario del libro
de bitácora. Ya que se ha numerado y fechado la página, se puede proceder a verter uno
de los contenidos más relevantes del cuaderno de laboratorio: el protocolo de trabajo.
Aunque la forma y estilo de los textos científicos pueden variar tanto como individuos se
dedican y han dedicado a esta actividad, su contenido se puede generalizar en cinco
grandes capítulos, que son: la Introducción, la Metodología, los Resultados, la Discusión y
las Conclusiones. Ahora que todo esto va precedido por el Título.
EL TÍTULO
El Título de un trabajo científico, sea el protocolo o el informe del mismo, debe representar
breve y fielmente el tema principal, la naturaleza, el resultado y las conclusiones
principales obtenidas para o durante su desarrollo. Si bien se puede ser ingenioso para
enfatizar la claridad, debe evitarse el enfoque periodístico, sensacionalista y amarillista. El
título "Los voraces cocodrilos" deberá evitarse en bien de "Estudio de los hábitos
alimenticios del Crocodilus moreleti". La brevedad del título no debe caer en tipo
periodístico de la pieza de rock mexicano "Matola y violola con una pistola", ni la extensión
excesiva deberá parecerse al de la canción de autores argentinos "La bella y graciosa
moza se fue a lavar la ropa, la mojó en el arroyuelo y cantando la lavó, la frotó sobre una
piedra y la colgó de un abedul".
LA INTRODUCCIÓN
El primer capítulo en las anotaciones de un trabajo en el libro de bitácora y en el informe

del mismo es la Introducción. La introducción a su vez está constituida por varios rubros,
siendo los más comunes los antecedentes, la hipótesis y el objetivo.
9
Los antecedentes son la parte donde se plasman los datos necesarios que describen la
historia previa al trabajo que se está desarrollando. En ella se localizan las preguntas que
justifican y le dan importancia al problema que aborda la investigación. Normalmente
incluye una compilación de los hallazgos precedentes que sobre el tema del trabajo o
sobre temas afines y relacionados, se encuentran publicados en la literatura y en otras
fuentes de información. Con base en dichos antecedentes se señalan las razones que
llevan a plantear el desarrollo del trabajo presente, y de este modo justifica su desenlace
con el fin adicional de motivar al lector.
Dado que la Introducción consta de antecedentes citados de la literatura, deben relatarse
todas las fuentes consultadas al respecto, sean libros, artículos, entrevistas personales, e
incluso fuentes audiovisuales y cibernéticas de información.
Es obvio que si se trata de un trabajo experimental, deben indicarse las hipótesis que se
intenta demostrar o refutar. A fin de cuentas éste será el objetivo del trabajo, poner a
prueba la hipótesis sustentada en los antecedentes del campo.
LA METODOLOGÍA
Lo que caracteriza a cualquier trabajo científico o tecnológico, y que lo distingue de otras

actividades humanas, es la posibilidad de repetir innumerables veces en el tiempo la
experiencia y obtener exactamente los mismos resultados. Por lo tanto, un capítulo
indispensable en todo trabajo científico y tecnológico es la metodología.
En la Metodología se debe describir en detalle escrupuloso los métodos, los materiales, el

equipo, las substancias, las ecuaciones y las condiciones ambientales exactas y precisas
en las cuales se lleva a cabo la experiencia. Para ser detallado debe emplearse incluso
cualquier modo de ilustración disponible, sean tablas, dibujos, diagramas, esquemas,
fotografías y otras figuras útiles. En la bitácora se describen el material y el método
propuestos, que puede haberse consultado en la literatura. Asimismo, se deben describir
los cambios, modificaciones y adecuaciones que se hagan al mismo durante el desarrollo
de la experiencia. De este modo, en el informe o reporte del trabajo se deberá redactar
únicamente el material y el método finalmente empleados para la obtención de los
resultados del estudio.
Es necesario que los materiales y equipos se anoten con la marca, modelo y número de
serie, ya que permitirá reproducir o adecuar la metodología en cualquier repetición
posterior, aunque no se cuente con equipos idénticos a los previamente empleados. En
cuanto a los reactivos y otras sustancias, es necesario aclarar el número de muestras, la
concentración de las soluciones, así como los pesos y medidas empleados, sin dejar de
mencionar las especificaciones y los grados de calidad utilizados.
Cuando son necesarios los cálculos para la preparación de las soluciones y los materiales
o para el desarrollo del trabajo, aquellos se anotan en una página aparte, debidamente
rotulada e identificada con el trabajo al que corresponde.
Finalmente, las anotaciones del trabajo de laboratorio se acompañan con Comentarios

que sean útiles para la realización posterior de la Discusión de los resultados y las
Conclusiones finales del trabajo desarrollado.
10
Todas estas notas son indispensables para poder elaborar el Reporte de Laboratorio. Este
debe contener, a su vez, Introducción (con el Objetivo), Materiales y Métodos, Resultados
(acompañados con Tablas y/o Figuras), Discusión y Conclusiones.
SEGURIDAD Y CONTINGENCIA.
Seguridad, en este caso se refiere fundamentalmente a la previsión, la precaución y el

cuidado en el trabajo para reducir la probabilidad de incidentes no deseados. El concepto
de seguridad no excluye la existencia del peligro, pero sí reduce el riesgo de daños a
niveles menores. Con un poco de cuidado, basado en información, se elimina casi por
completo la posibilidad de un accidente. En la práctica, la seguridad en el laboratorio
significa el empleo de cualquier instalación, dispositivo o sistema que sirva para reducir el
riesgo de peligros o accidentes antes, durante y después de la sesión de trabajo.
El ácido sulfúrico concentrado, por ejemplo, representa un riesgo en potencia. Cuando es

manejado por personas que cuentan con el entrenamiento adecuado y que, por lo tanto,
conocen sus propiedades peligrosas y toman las precauciones necesarias, el ácido
sulfúrico concentrado es "de uso seguro". Por el contrario, la carencia de capacitación y
conciencia sobre la seguridad, el exceso de confianza, así como el no aplicar las medidas
precautorias requeridas, aumenta el riesgo hasta niveles inaceptables.
PRIMEROS AUXILIOS.
Debe contarse con las instrucciones de primeros auxilios pertinentes para los incidentes
más comunes. Por ejemplo, en el trabajo químico puede ocurrir el derrame de ácidos o
álcalis sobre la piel o sobre las mucosas; puede haber quemaduras por fuego o calor;
pueden ocurrir accidentes eléctricos o mecánicos punzo cortantes. La persona involucrada
puede inhalar vapores o gases irritantes, tóxicos o venenosos, o sufrir de shock o de paros
cardiaco y respiratorio.
Algo indispensable para toda persona que se encuentre desarrollando trabajos en

laboratorios, en campo, en planta piloto o planta de producción es contar con una
identificación personal en la que se debe indicar el tipo sanguíneo, alergias y avisos sobre
padecimientos crónicos y/o uso de prótesis o aparatos biomédicos, como marcapasos,
lentes de contacto, etc. Sobre estos últimos, se debe señalar que su uso está
contraindicado para trabajos químicos o biológicos.
MATERIAL CON QUE DEBE CONTAR TODO EL SEMESTRE.
 Gogles o anteojos neutros de policarbonato o vidrio endurecido con protección

lateral
 Bata larga (a la rodilla o pantorrilla) de algodón 100% y manga larga, con botones.
Se recomienda que sea blanca

11
 Cinco frascos de vidrio de ~100 ml con tapa metálica (jugo Gerber)*

 Cinta para encubrir (masking tape) de 1.27 cm de ancho
 Cuaderno u hojas de papel
 Detergente bajo en fosfatos
 Encendedor para mechero o estufa y/o cerillos
 Escobillones de varios tamaños
 Fibra verde
 Franela de algodón limpia
 Guantes de neopreno para manejar ácidos y solventes alifáticos
 Guantes de nitrilo para manejar solventes y derivados orgánicos
 Lápiz o pluma o bolígrafo
 Marcador indeleble, preferentemente negro
 Rollo de papel higiénico blanco o caja de pañuelos desechables blancos
 Toallas absorbentes de papel blanco
MATERIALES Y EQUIPOS.
 2 Cristalizadores grandes
 Espátula
 4 Pipetas serológicas de 5 ml
 5 Vasos de precipitados de 100 ml
REACTIVOS Y SUSTANCIAS.
 25 ml Acetona o quitaesmalte
 25 ml Ácido acético o vinagre
 25 ml Agua destilada o desmineralizada
 100 g Bicarbonato de sodio
 25 ml Etanol o alcohol etílico 96°
RECOMENDACIONES:
 Anteojos de policarbonato o monogogles

 Guantes de nitrilo para solventes orgánicos
 Ropa de algodón
 Maneje ácidos y solventes en campana para vapores
 No respire los vapores
 Baño de ojos disponible
 Regadera de seguridad disponible
 Extinguidor de polvo químico o CO2 (Tipo ABC)
 Lave abundantemente después de usar los reactivos
 Colóquese ropa de algodón para protección (bata)
 Revise que las llaves de gas estén cerradas
 Revise que las llaves de agua estén cerradas

12
 Revise que las llaves de aire comprimido estén cerradas

 Revise que los contactos eléctricos estén libres
 Revise que los interruptores de luz del laboratorio estén encendidos
 Revise que los extractores de aire estén encendidos
DESARROLLO DE LA PRÁCTICA
1 Revise que la campana de extracción esté encendida.

2 Revise que la acetona esté en la campana.
3 Revise que el ácido acético esté en la campana.
4 Revise que el agua destilada esté sobre la mesa.
5 Revise que el bicarbonato de sodio sobre la mesa.
6 Revise que el Etanol esté en la campana.
7 Colóquese los guantes de neopreno o nitrilo.
8 Lave el material con agua corriente y detergente.
9 Enjuague el material con agua destilada.
10 Seque el material con franela o con papel absorbente.
11 Seque los guantes de neopreno con franela o con papel absorbente.
12 Colóquese anteojos de policarbonato o monogógles sin ventilación.
13 Selección del libro de bitácora.
14 Etiquete cada vaso de precipitados con el nombre de un reactivo.
15 Vierta los reactivos en sendos vasos de precipitados.
16 Tome una hoja de papel del cuaderno.
17 Corte la hoja en seis trozos iguales.
18 Sobre cada trozo trace un garabato con lápiz, pluma y bolígrafo.
19 Coloque los trozos de papel separados sobre la mesa.
20 Con una pipeta vierta 1 ml de acetona sobre uno de los trozos de papel.
21 Con una pipeta vierta 1 ml de ácido acético sobre unos trozos de papel.
22 Con una pipeta vierta 1 ml de agua sobre uno de los trozos de papel.
23 Con una pipeta vierta 1 ml de etanol sobre uno de los trozos de papel.
24 Observe lo que sucede con el garabato en cada trozo de papel y anote.
Neutralice lentamente los residuos ácidos (ver Forma de desechar)

Deseche los residuos ácidos (ver Forma de desechar)
Deseche los residuos orgánicos (ver Forma de desechar)
FORMA DE DESECHAR.
 Neutralice los residuos ácidos con bicarbonato de sodio.
 Deseche.
LAVE Y ENJUAGUE EL MATERIAL

13
1 Seque el material con papel o con franela

2 Guarde y entregue el material y los equipos
3 Revise que no haya reactivos en la campana
4 Apague la campana de extracción
5 Revise que no haya reactivos sobre la mesa
6 Revise que la mesa esté limpia y seca
7 Revise que las llaves de gas estén cerradas
8 Revise que las llaves de agua estén cerradas
9 Revise que las llaves de aire comprimido estén cerradas
10 Revise que los contactos eléctricos estén libres
11 Revise que los extractores de aire estén apagados
12 Revise que los interruptores eléctricos del laboratorio estén apagados
13 Retírese el equipo de protección personal
14 Guarde el equipo de protección personal
15 Revise que la luz del laboratorio esté apagada
CUESTIONARIO
1 Realice una investigación sobre medidas de Seguridad química.

2 Realice una investigación sobre medidas de Contingencias químicas.
3 Realice una investigación sobre Primeros auxilios en incidentes químicos.
4 Realice una investigación sobre Leyes, reglamentos y normas químicas.
5 Incluya la información más importante en su nuevo libro de bitácora.
6 Elabore un reporte con los hallazgos de su investigación experimental:
Introducción (antecedentes, hipótesis y objetivo experimental).
Metodología (materiales y métodos).
Resultados (descripción, tablas y/o figuras).
Discusión (análisis y explicación de los resultados).
Conclusiones (confirmación o rechazo de la hipótesis).
Referencias (bibliografía consultada y utilizada).
BIBLIOGRAFÍA
 Cole-Parmer 97-98. Cole-Parmer Instrument Company, Vernon Hills, IL. 1996.

 Hackett, W.J. y Robbins, G.P. 1982. Manual Técnico de Seguridad.
Representaciones y Servicios de Ingeniería, S.A., México.
 The Merk Catalogue. Merk KgaA, Darmstadt, BRD. 1996.
 The Merk Index. 12th ed. Merk KgaA, Darmstadt, BRD. 1996.

14
PRÁCTICA No 2
DETERMINACIÓN DE Ph (ACIDEZ)
INTRODUCCIÓN
El principio básico de la medida electrométrica del pH se fundamenta en el registro

potenciométrico de la actividad de los iones hidrógeno por el uso de un electrodo de vidrio
y un electrodo de referencia, o un electrodo combinado.
La fuerza electromotriz (fem) producida por el sistema electroquímico varía linealmente

con el pH y puede verificarse por la obtención de una gráfica de pH vs. fem para diferentes
soluciones de pH conocido. El pH de la muestra se determina por interpolación.
El método es aplicable a aguas potables, superficiales, y salinas, aguas residuales

domésticas e industriales y lluvia ácida.
LIMITACIONES E INTERFERENCIAS
El electrodo de vidrio está libre de interferencias debidas a color, turbidez, material

coloidal, oxidantes, reductores o alta salinidad, excepto para interferencias del ion sodio en
soluciones de pH mayor de 10; este error se reduce con la utilización de electrodos
especiales ("error bajo de sodio, low sodium error").
Las capas de materiales aceitosos presentes en algunos tipos de aguas pueden disminuir
la respuesta del electrodo. Se limpian suavemente con un paño o mediante lavado con
detergente y enjuague con agua destilada. Puede ser necesario un tratamiento adicional
con HCl 1+9 para remover la película remanente.
Las mediciones de pH varían con la temperatura en dos formas: por efectos mecánicos
causados por cambios en las propiedades de los electrodos y por efectos químicos
producidos por alteración de las constantes de equilibrio. En el primer caso, se incrementa
la pendiente de la ecuación de Nernst con el aumento de temperatura y los electrodos
requieren de un mayor tiempo para lograr el equilibrio térmico.
Este efecto provoca cambios significativos en el pH. Debido a que los equilibrios químicos
afectan el pH, los estándares para preparar las soluciones tampón tienen pH específico a
la temperatura indicada.
Reportar siempre la temperatura a la cual se mide el pH. La mayoría de los instrumentos

de medida del pH están equipados con compensadores de temperatura que corrigen los
errores del primer tipo, pero la medición sólo puede mostrar el pH a la temperatura de la
medida.

15
TOMA Y PRESERVACIÓN DE MUESTRAS
Las muestras deben ser analizadas inmediatamente, preferiblemente en el campo

después de obtener la muestra.
Las aguas de alta pureza y las aguas que no están en equilibrio con la atmósfera, están
sujetas a cambios cuando se exponen a la atmósfera, por lo cual los frascos de muestra
deben llenarse completamente y mantenerse sellados hasta el análisis.
APARATOS
El instrumento de medida del pH está constituido por un potenciómetro, un electrodo de

vidrio, un electrodo de referencia y un mecanismo compensador de temperatura; cuando
se sumergen los electrodos en la solución problema se completa el circuito. Muchos
medidores de pH pueden realizar lecturas en escalas de pH o de milivoltios; algunos
tienen expansión de escala que permite hacer lecturas de 0,001 unidades de pH, pero la
mayoría de instrumentos no son tan precisos. Para trabajos de rutina usar instrumentos
con exactitud y reproducibilidad de 0,1 unidades de pH en un rango de 0 a 14 y equipados
con un compensador de temperatura.
Electrodo de referencia, consiste en una semicelda que provee un potencial de electrodo

constante; los más comúnmente usados son electrodos de calomel y plata: cloruro de
plata. Seguir las recomendaciones del fabricante para el uso y cuidado del electrodo de
referencia. Llenar los electrodos no sellados con el electrolito correcto hasta el nivel debido
y asegurarse de que la unión esté humedecida.
Electrodo de vidrio. El electrodo sensor es un bulbo de vidrio especial que contiene una
concentración fija de HCl o una solución tamponada de cloruro en contacto con un
electrodo de referencia interno. Los electrodos combinados incorporan los electrodos de
vidrio y de referencia en uno solo. Utilizar un electrodo especial de error bajo de sodio,
"low sodium error", que puede operar a altas temperaturas para mediciones de pH
mayores de 10, los electrodos estándar de vidrio producen valores bajos. Para medir pH
inferiores a 1 emplear una membrana líquida, los electrodos estándar de vidrio producen
valores altos.
Vasos. Usar preferiblemente vasos de polietileno o de tetrafluoroetileno (TFE, teflón).

Agitador. Usar un agitador magnético con barra agitadora recubierta de TFE o un agitador
mecánico con hélice recubierta en plástico.
REACTIVOS
Preparación General. Calibrar el sistema de electrodos con soluciones tampón estándar

de pH conocido. Debido a que las soluciones tampón se pueden deteriorar como resultado

16
del crecimiento de mohos o por contaminación, es necesario prepararlas frescas para

trabajos de precisión. Se pesan las cantidades de reactivos especificadas en la Tabla 1, se
disuelven en agua destilada, a 25°C y se diluyen a 1000 mL. Esto es particularmente
importante para las soluciones tampones de borato y carbonato.
El agua destilada, hervida y fría debe tener una conductividad menor de 2 µmhos/cm. A 50
mL agregar una gota de la solución saturada de KCl para usar en el electrodo de
referencia. Si el pH de esta solución de prueba está entre 6,0 y 7,0, se puede usar para
preparar las soluciones estándar.
Para preparar las soluciones estándar, consultar en el "Standard Methods" las condiciones
de temperatura, tiempo, precauciones de secado de los reactivos y los pH de las
soluciones tampón estándar a temperaturas diferentes de 25ºC. Por ejemplo, el KH2PO4
se debe secar a una temperatura entre 110°C y 130°C por 2 horas, el hidrato tetraoxalato
de potasio, no se debe calentar a más de 60°C, y las otras sales tampón especificadas no
se deben secar.
La regla general es seleccionar y preparar las soluciones tampón clasificadas como

estándares primarios, mostradas en la Tabla 1; reservar los estándares secundarios para
situaciones extremas encontradas en mediciones de las aguas residuales. Para uso
rutinario, almacenar las soluciones tampón y las muestras en botellas de polietileno.
Reemplazar las soluciones tampón cada cuatro semanas.
Solución saturada de tartrato ácido de potasio. Agitar vigorosamente un exceso (5 a 10 g)

de cristales finos de KHC4H4O6 con 100 a 300 mL de agua destilada, a 25°C, en una
botella con tapón de vidrio. Separar por decantación o filtración la solución clara del
material no disuelto. Preservar, para dos meses o más, por adición de un cristal de timol (8
mm de diámetro) por cada 200 mL de solución preparada.
Solución saturada de hidróxido de calcio. Calcinar CaCO3 bien lavado y de bajo grado
alcalino, en una cápsula de platino por ignición durante 1 hora a 1000°C. Enfriar e hidratar,
adicionando lentamente agua destilada mientras se agita, calentar a ebullición, enfriar,
filtrar y recoger el Ca(OH)2 sólido en un filtro de vidrio fritado de porosidad media. Secar a
110ºC, enfriar y pulverizar hasta obtener gránulos finos y uniformes. Agitar vigorosamente
un exceso de estos gránulos con agua destilada en una botella de polietileno tapada.
Después de mezclar, alcanzar la temperatura de 25 C. Con la ayuda de un equipo de
filtración al vacío, filtrar el sobrenadante a través de un filtro de vidrio sinterizado de
porosidad media y usar el filtrado como la solución tampón. Descartar la solución tampón
cuando el CO2 atmosférico cause la aparición de turbidez.

17
Soluciones auxiliares: NaOH 0,1N; HCl 0,1N; HCl 5N (diluir cinco volúmenes de HCl 6N en
un volumen de agua destilada), y solución ácida de fluoruro de potasio (disolver 2 g de KF
en 2 mL de H2SO4 concentrado y diluir a 100 mL con agua destilada).
Preparación de soluciones estándar de pH estándar.
PROCEDIMIENTO
CALIBRACIÓN INSTRUMENTAL
En cada caso se deben seguir las instrucciones del fabricante para el manejo del pH metro
y para el almacenamiento y preparación de los electrodos para su uso. Las soluciones
recomendadas para períodos cortos de almacenamiento de los electrodos varían con el
tipo de electrodo y el fabricante, pero generalmente tienen una conductividad mayor de
4000 µmhos/cm. El agua del grifo es un mejor sustituto que el agua destilada, pero un
tampón de pH 4 es mejor para el electrodo de vidrio sencillo y una solución saturada de
KCl es preferible para un electrodo de referencia de calomel y Ag/AgCl. Para un electrodo
combinado es preferible una solución saturada de KCl. Mantener los electrodos húmedos
retornándolos a la solución de almacenamiento mientras que el instrumento no esté en
uso.
Antes de usarlos, retirar los electrodos de la solución de almacenamiento, enjuagarlos y

secar con un papel suave, colocar en la solución tampón inicial, y ajustar el punto
isopotencial. Seleccionar un segundo tampón que esté en un rango de 2 unidades del pH
de la muestra y llevar el tampón y la muestra a la misma temperatura, la cual puede ser la
temperatura ambiente, una temperatura fija tal como 25ºC, o la temperatura de una
muestra fresca. Retirar los electrodos del primer tampón, enjuagarlos abundantemente con
agua destilada, secarlos y sumergirlos en el segundo tampón. Registrar la temperatura de
medición y ajustar el indicador de temperatura en el pH-metro hasta que el equipo indique
el valor de pH del tampón a la temperatura de análisis (esto es el ajuste de pendiente).
Utilizar el valor de pH de las tablas para el tampón usado a la temperatura del ensayo.
Retirar los electrodos del segundo tampón, enjuagarlos abundantemente con agua
destilada y secarlos. Sumergirlos en un tercer tampón por debajo de pH 10,
aproximadamente tres unidades de pH de diferencia con el segundo; la lectura estará
dentro de 0,1 unidades para el pH del tercer tampón. Si la respuesta del pH-metro muestra
una diferencia mayor de 0,1 unidades de pH con respecto al valor esperado, buscar
averías o fallas de los electrodos o el potenciómetro.
El propósito de la estandarización es ajustar la respuesta del electrodo de vidrio al

instrumento. Cuando se hacen mediciones de pH sólo ocasionalmente, se debe calibrar el
instrumento antes de cada medición. Cuando se hacen mediciones frecuentes y el
instrumento es estable, la calibración se puede hacer con menor frecuencia. Si los valores
de pH de las muestras varían ampliamente, se debe hacer una calibración para cada

18
muestra con un tampón que tengo un pH dentro del intervalo de 1 a 2 unidades con
respecto a la muestra.
Tratamiento de la muestra. Establecer el equilibrio entre los electrodos y la muestra

agitándola para garantizar la homogeneización; agitar lentamente para minimizar la
incorporación de dióxido de carbono. Para muestras tamponadas o con alta fuerza iónica,
acondicionar los electrodos después de lavarlos dejándolos dentro de la muestra por un
minuto. Secar, sumergir en una porción fresca de la misma muestra y leer el pH. Con
soluciones diluidas o débilmente tamponadas, equilibrar los electrodos sumergiéndolos en
tres o cuatro porciones sucesivas de muestra. Tomar una muestra fresca para medir el pH.
PRECISIÓN
Con un cuidadoso uso del pH metro y con buenos electrodos, se puede lograr una
precisión de 0,02 unidades de pH y una exactitud de 0,05. Sin embargo, el límite de
exactitud bajo condiciones normales es de 0,1 unidades de pH, especialmente para
mediciones en agua y soluciones débilmente tamponadas. Por esta razón, reportar los
valores de pH con aproximación a 0,1 unidades de pH.
El análisis electrométrico de una muestra sintética de pH 7,3 realizado por 30 laboratorios

se obtuvo con una desviación estándar de 0,13 unidades de pH.

19
PRÁCTICA No 3
DETERMINACIÓN DE SÓLIDOS SEDIMENTABLES EN AGUAS

NATURALES, RESIDUALES Y RESIDUALES TRATADAS
Las aguas naturales, residuales o residuales tratadas con altos contenidos de sólidos
sedimentables no pueden ser utilizadas en forma directa por las industrias o las plantas
potabilizadoras. De ello se deriva el interés por determinar en forma cuantitativa este
parámetro.
OBJETIVO
Establecer el método de prueba para la determinación de sólidos sedimentables en aguas

naturales, residuales y residuales tratadas.
PRINCIPIO
La materia sedimentable se define como la cantidad de sólidos que en un tiempo

determinado se depositan en el fondo de un recipiente en condiciones estáticas. El método
propuesto es volumétrico.
MATERIALES
- Frasco de polietileno o vidrio con un mínimo de capacidad de 1 litro, con tapa;
- Cono de sedimentación tipo Imhoff de vidrio o plástico;
- Bases para Conos Imhoff;
- Agitador largo de vidrio, y
- Reloj.
RECOLECCIÓN, PRESERVACIÓN Y ALMACENAMIENTO DE MUESTRAS
Colectar un volumen de muestra homogéneo y representativo superior a 1 L en un frasco

de polietileno o vidrio con tapa de boca ancha, teniendo siempre en cuenta que el material
en suspensión no debe adherirse a las paredes del recipiente.

20
No se recomienda la adición de agentes preservadores. Transportar la muestra y

mantenerla a 4°C hasta realizar el análisis. Las muestras deben estar a temperatura
ambiente al momento del análisis.
CONTROL DE CALIDAD
Cada laboratorio que utilice este método está obligado a operar un programa de control de
calidad (CC) formal.
Es obligatorio para el laboratorio mantener los siguientes registros:
- Los nombres y títulos de los analistas que ejecutaron los análisis y el encargado de
control de calidad que verificó los análisis, y
- Las bitácoras manuscritas del analista y del equipo en los que se contengan los
siguientes datos:
a) Identificación de la muestra
b) Fecha del análisis
c) Procedimiento cronológico utilizado
d) Cantidad de muestra utilizada
e) Número de muestras de control de calidad analizadas
f) Trazabilidad de las calibraciones de los instrumentos de medición
g) Evidencia de la aceptación o rechazo de los resultados
h) Además el laboratorio debe mantener la información original reportada por los
equipos en disquetes o en otros respaldos de información.
De tal forma que permita a un evaluador externo reconstruir cada determinación mediante
el seguimiento de la información desde la recepción de la muestra hasta el resultado final.
Cada vez que se adquiera nuevo material volumétrico debe de realizarse la verificación de
la calibración de éste tomando una muestra representativa del lote adquirido.
PROCEDIMIENTO
Mezclar la muestra original a fin de asegurar una distribución homogénea de sólidos

suspendidos a través de todo el cuerpo del líquido.
Colocar la muestra bien mezclada en un cono Imhoff hasta la marca de 1 L. Dejar

sedimentar 45 min, una vez transcurrido este tiempo agitar suavemente los lados del cono
con un agitador o mediante rotación, mantener en reposo 15 min más y registrar el
volumen de sólidos sedimentables del cono como mL/L. Si la materia sedimentable
contiene bolsas de líquido y/o burbujas de aire entre partículas gruesas, evaluar el
volumen de aquellas y restar del volumen de sólidos sedimentados.
En caso de producirse una separación de materiales sedimentables y flotables, no deben

valorarse estos últimos como material sedimentable.

21
CÁLCULOS
Tomar directamente la lectura de sólidos sedimentables del cono Imhoff.
Reportar la lectura obtenida en mL/L.
INTERFERENCIAS
Bolsas de líquido y/o burbujas de aire: Algunas veces pueden formarse bolsas de líquido
y/o burbujas de aire entre partículas gruesas. Tomar en cuenta el volumen de éstas al
hacer la medición.
SEGURIDAD
No ha sido determinada la carcinogenicidad de todos los reactivos con precisión. Por lo

que cada sustancia química debe tratarse como peligro potencial a la salud. La exposición
a estas sustancias debe reducirse al menor nivel posible. Se sugiere que el laboratorio
realice monitoreos de higiene ocupacional de cada reactivo a los que pueda estar
expuesto el analista y que dichos resultados se encuentren a su disposición.
Cuando se trabaje en este método, debe usarse todo el tiempo equipo de seguridad tal
como: guantes de látex y bata de laboratorio.
Este método puede no mencionar todas las precauciones de seguridad asociadas con su
uso. El laboratorio es responsable de mantener un ambiente de trabajo seguro y un
archivo de las normas de seguridad respecto a la exposición y manejo seguro de las
sustancias químicas.
Debe tenerse un archivo de referencia de las hojas de información de seguridad el cual

debe estar disponible a todo el personal involucrado en estos análisis.
MANEJO DE RESIDUOS
Es la responsabilidad del laboratorio cumplir con todos los reglamentos federales,

estatales y locales referente al manejo de residuos, particularmente las reglas de
identificación, almacenamiento y disposición de residuos peligrosos.
Cada laboratorio debe contemplar dentro de su Programa de Control de Calidad el destino

final de los residuos generados durante la determinación.
Todas las muestras que cumplan con la Norma de descarga a alcantarillado pueden
descargarse en el mismo sistema.

22
BIBLIOGRAFÍA
NOM-001-ECOL-1996 Que establece los límites máximos permisibles de contaminantes

en las descargas de aguas residuales en aguas y bienes nacionales, publicada en el
Diario Oficial de la Federación el 6 de enero de 1997.
NOM-008-SCFI-1993 Sistema General de Unidades de Medida, publicada en el Diario

Oficial de la Federación el 14 de octubre de 1993
NMX-AA-003-1980 Aguas residuales.- Muestreo. Declaratoria de vigencia publicada en el

Diario Oficial de la Federación el 25 de marzo de 1980.
NMX-AA-014-1980 Cuerpos receptores.- Muestreo. Declaratoria de vigencia publicada en
el Diario Oficial de la Federación el 5 de septiembre de 1980.
NMX-AA-089/1-1986 Protección al ambiente - Calidad del agua - Vocabulario - Parte 1.

Declaratoria de vigencia publicada en el Diario Oficial de la Federación el 15 de julio de
1986
NMX-AA-115-SCFI-2000 Análisis de agua.- Criterios generales para el control de la

calidad de resultados analíticos.
NMX-AA-116-SCFI-2000 Análisis de agua - Guía de solicitud para la presentación de

métodos alternos.
Criterios Ecológicos de Calidad del Agua publicados en el Diario Oficial de la Federación el

13 de diciembre de 1989.
2540 “Solids”, American Public Health Association, “Standard Methods for The
Examination of Water and Wastewater”, American Public Health Association, United States
of America, Washington, DC 20005, 19th Edition 1995. pp. 2-53 - 2-58.
“Solids”. Enviromental Protection Agency, “Methods for Chemical Analysis of Water

and Wastes”, Environmental Monitoring and Support Laboratory, Office of Research
and Development, Cincinnati, Ohio, 1986.

23
PRÁCTICA No 4
COLIFORMES TOTALES Y FECALES EN AGUA DE CONSUMO

HUMANO
OBJETIVO
Investigar la presencia de bacterias del grupo Coliforme en agua de consumo humano

mediante la técnica del Número Más Probable (NMP), usando tubos de fermentación
múltiple.
INTRODUCCIÓN
La potabilidad del agua es de gran importancia en cuanto a Salud Pública, ya que ésta
puede servir como vehículo de microorganismos patógenos, es decir, productores de
enfermedades llamadas comúnmente "de origen hídrico" tales como Salmonelosis
(Tifoidea y Paratifoidea), Shigelosis, Cólera, Hepatitis, etc. Estos microorganismos son
todos de origen entérico.
Se sabe que los microorganismos patógenos que llegan a los depósitos de agua,
proceden de las descargas intestinales de hombres y animales.
Además, ciertas especies de bacterias, particularmente Escherichia coli, y varios

microorganismos similares, denominados coliformes, Estreptococos fecales (como
Streptococcus faecalis) y Clostridium perfringens, son habitantes normales del intestino
grueso de hombres y animales y en consecuencia siempre están en las materias fecales.
Así pues, la presencia de cualquiera de estas especies en el agua es evidencia de
contaminación fecal y el camino está abierto a los patógenos ya que se encuentran en las
materias fecales.
La evaluación rutinaria del agua en busca de microorganismos patógenos, como

Salmonella spp. y Shigella spp. puede ser difícil de realizar ya que el número de estas
bacterias es relativamente escaso, por lo que se tiene que recurrir a pruebas
bacteriológicas del agua potable que demuestren la presencia de microorganismos
indicadores que siempre estén presentes en materia fecal, fácil de demostrar y que sirva
de guía para conocer el grado de contaminación fecal.
Surge así el concepto de "Indicador de contaminación fecal", el cual será utilizado para la
valoración de la potabilidad bacteriológica de las aguas. De acuerdo con lo anterior, se ha
adoptado con carácter general, el "Grupo Coliforme" como indicador más digno de
confianza.

24
La OMS incluye dentro del grupo coliforme todos los bacilos aerobios y anaerobios
facultativos Gram negativos, no esporulados, que producen ácido y gas al fermentar la
lactosa, a 35 - 37 °C. Las especies clásicas de este grupo son Escherichia coli y
Enterobacter aerogenes. El microorganismo indicador más comúnmente utilizado es
Escherichia coli, considerando la OMS preferible emplear la expresión "Coliforme fecal"
que comprende un número ligeramente mayor de variedades, todas ellas de claro origen
fecal e indicadores de contaminación fecal reciente.
Para los efectos del análisis sanitario del agua, se define el Coliforme fecal como un bacilo
aerobio o anaerobio facultativo, Gram negativo, no esporulado, que fermenta la lactosa
con producción de ácido y gas a 44 °C (±0.5 °C) en menos de 24 horas. El método se
basa en la inoculación de alícuotas de la muestra sin diluir que pueden ser volúmenes de
50, 10 y 1 mL, ó de 10, 1 y 0.1 mL, o diluida en caso necesario, en una serie de tubos por
triplicado o quintuplicado con un medio que contiene lactosa (caldo lactosado o caldo lauril
triptosa).
La valoración del contenido microbiano de una muestra de agua por el método del NMP
supone la utilización de tablas numéricas que tienen en cuenta los volúmenes de agua y
las cantidades de tubos sembrados en una ó más series. Realmente consiste en tratar
estadísticamente el número de tubos de cada serie sembrada que resulten positivos
después de su incubación. En cuanto a la investigación de patógenos en agua, no existe
un método único que permita aislar e identificar todos estos microorganismos. En general,
los métodos con los que se obtienen mejores resultados comprenden una fase de
concentración, seguida de técnicas de enriquecimiento y aislamiento específicas para
cada microorganismo. El procedimiento para la recolección de las muestras de agua para
el análisis bacteriológico, depende del tipo de agua que se desee muestrear. Este se hará
de acuerdo a la normatividad mexicana vigente. Las muestras para el análisis
bacteriológico, se deben tomar en frascos muestreadores que se hayan lavado con
extremo cuidado y esterilizado. En su interior añadir, previo a la esterilización, 0.1 mL de
solución de Na2S2O3 (tiosulfato de sodio) al 10%, por cada 120 mL de muestra con el
propósito de neutralizar la acción del cloro que pudiera contener la muestra, cubriendo
además el tapón del frasco hasta el cuello con papel aluminio.
El análisis bacteriológico de la muestra debe practicarse inmediatamente después de su

recolección. Es por ello que se recomienda que de no efectuarse así el análisis, se inicie
dentro de las dos horas próximas a la recolección de la muestra y en ningún caso, este
lapso debe de exceder de 24 horas para agua potable y de 6 horas para otros tipos de
agua para que sea válido el resultado del análisis. Durante el período que transcurre del
muestreo al análisis, se debe conservar la muestra a 4 °C, con objeto de inhibir la
actividad bacteriana para no obtener resultados falsos o dudosos.
MATERIAL Y SUBSTANCIAS
 Muestras de agua potable de diferente origen (Grifo, purificada y embotellada, tinaco,

cisterna u otro), de un volumen mínimo de 100 mL.
 5 Tubos de 20 x 180 mm con campana Durham en su interior, conteniendo 20 mL de
caldo lactosado ó lauril triptosa estéril de doble concentración.
25
 10 Tubos de 18 x 150 mm campana Durham en su interior, conteniendo 10 mL de

caldo lactosado estéril de simple concentración.
 1 Pipeta de 10 mL graduada en décimas, estéril.
 2 Pipetas de 1 mL graduadas en décimas, estériles.
caldo Lactosa bilis verde brillante (LBVB) estéril de concentración sencilla.
caldo E.C. (Escherichia coli) estéril de concentración sencilla.
 Mechero Bunsen.
 Cerillos ó encendedor.
 Asa bacteriológica.
 Gradillas para tubos de 18 x 150 y de 20 x 200.
 Agitador de tubos Vortex.
 Incubadora a 35 °C.
 Incubadora para C. Fecales a temperatura constante de 44 °C (±0.5 °C).
TÉCNICAS
Descripción de la metodología de análisis:
La técnica del NMP comprende siempre una prueba presuntiva y otra confirmativa.
Esto es así porque una positividad en un tubo de la prueba presuntiva no indica

necesariamente la presencia del grupo bacteriano a determinar (Coliformes Totales,
Coliformes Fecales o Estreptococos Fecales), sino tan solo es una presunción, que habrá
de confirmarse posteriormente.
Sin embargo, una negatividad en la prueba presuntiva permite dictaminar la ausencia de

dicho grupo bacteriano en el agua examinada.
La denominada prueba presuntiva consiste en una metodología de tipo general para

cualquier grupo de bacterias, mientras que la prueba confirmativa es específica.
DESARROLLO (TÉCNICA PRUEBA PRESUNTIVA)
Todas las operaciones deberán efectuarse en absolutas condiciones de asepsia.
1 Preparar tres series sucesivas de 5 tubos con caldo lactosado, una de doble
concentración y las otras dos de concentración sencilla.
2 Etiquetar las series con 10, 1 y 0.1 mL.
3 Agitar vigorosamente la muestra por lo menos 20 veces antes de tomar el volumen
que se va a inocular, a efecto de homogeneizar.
4 Antes y después de realizar las inoculaciones, la boca del frasco de la muestra
deberá ser flameada con objeto de evitar contaminación.
5 Inocular con una pipeta de 10 mL este volumen de muestra en la serie de tubos
con caldo de doble concentración, con otra pipeta de 1 mL para 1 mL de muestra
en la segunda serie de tubos con concentración sencilla. (Fig. 17.1)
26
6 Igualmente con la misma pipeta podrá inocularse la tercera serie de tubos con 0.1
mL de muestra.
7 Normalmente, siempre que no se sospecha que el agua contenga elevada carga
bacteriana, solo se inoculan estas tres primeras series de tubos.
8 En caso contrario, será necesario inocular otras series y por lo tanto, realizar
diluciones de la muestra original.
9 Incubar todos los tubos a una temperatura de 35 °C durante 24-48 horas.
10 Después de 24 horas de incubación efectuar una primera lectura para observar si
hay tubos positivos, es decir, con producción de ácido, si el medio contiene un
indicador de pH, turbidez y producción de gas en la campana Durham.
11 Al hacer esta verificación es importante asegurarse que la producción de gas sea
resultado de la fermentación de la lactosa en cuyo caso se observará turbidez en el
medio de cultivo y no confundir con burbujas de aire.
12 Para evitar este tipo de confusiones es recomendable revisar las campanas
Durham antes de proceder a la inoculación y desechar aquellos que contengan
burbujas de aire ó de alguna manera eliminar éstas y así poder utilizarlos.
13 De los tubos que en esta primera lectura den positivos, ya se pueden hacer las
pruebas confirmatorias para coliformes totales y coliformes fecales.
14 En caso de no apreciarse alguno o todos los cambios mencionados en el resto de
los tubos, continuarán en incubación 24 horas más.
15 Después de 48 horas (±2h) a partir de la inoculación, se hace la lectura final.
16 Si pasadas estas 48 h tampoco se aprecia turbidez ni producción de gas, los tubos
se toman como negativos.
TABLA 17.1: Índice del NMP y límite confiable de 95% para varias combinaciones de resultados positivos y negativos
cuando se usan: 5 tubos con porciones de 10 cm3 en cada uno, 5 con porciones de 1 cm3 y 5 con porciones de 0.1 cm3.
27
INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS
Si el total de tubos son NEGATIVOS: El examen se da por terminado, reportando la

AUSENCIA DE COLIFORMES TOTALES Y FECALES en la muestra analizada.
Todos aquellos tubos que den POSITIVOS para prueba presuntiva se anotarán
convenientemente y se procederá a realizar la PRUEBA CONFIRMATORIA para
Coliformes Totales y Fecales.
PRUEBA CONFIRMATORIA PARA COLIFORMES TOTALES:
A partir de cada uno de los tubos que han resultado positivos en la prueba presuntiva,
agitándolos previamente para homogeneizar, inocular con tres asadas tubos conteniendo
caldo Lactosa Bilis Verde Brillante (LBVB). (Fig. 17.2)
Incubar durante 48 ± 3 h a 35 ± 0.5 °C.
Después de la incubación observar la presencia de turbidez y de gas.
INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS (COLIFORMES TOTALES)
Si se observa turbidez y producción de gas:
La prueba se considera POSITIVA, debiendo anotar el número de tubos positivos para

posteriormente hacer el cálculo del NMP.

28
Si en ninguno de los tubos se observa producción de gas, aun cuando se observe

turbidez:
Se consideran negativos, estableciéndose el Código 0,0,0 para efecto del cálculo del
NMP.
PRUEBA CONFIRMATORIA PARA COLIFORMES FECALES:
A partir de cada uno de los tubos que han resultado positivos en la prueba presuntiva,
agitándolos para homogeneizar, inocular con tres asadas tubos conteniendo caldo E.C.
(Escherichia coli). (Fig. 17.3)
Incubar durante 24 horas a 44 °C (±0.5 °C), observar presencia de turbidez y gas. (Fig.
17.4)

29
INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS (COLIFORMES FECALES)

Si no se observa producción de gas, aun cuando se observe turbidez: Se reporta la

AUSENCIA DE COLIFORMES FECALES.
CÁLCULOS.
De acuerdo a los tubos positivos en las pruebas confirmativas para Coliformes Totales y
Fecales:
Establecer los códigos correspondientes para calcular por referencia en la tabla estadística
correspondiente (Tablas 17.1 - 17.4), el NMP de Coliformes Totales y Fecales en 100 mL
de agua.
En caso de no encontrar en las tablas la combinación de tubos adecuada, emplear para

los cálculos la siguiente ecuación:

30
ELABORACIÓN Y PRESENTACIÓN DE RESULTADOS.
Los resultados se elaboran de la siguiente manera:
 Si únicamente se inoculan tres series de cinco tubos cada una con 10, 1 y 0.1 mL de
muestra, la lectura de los resultados nos permite tener dos códigos de valores uno
para coliformes totales y otro para coliformes fecales los cuales leídos en la tabla del
NMP nos dará el valor de bacterias correspondientes en 100 mL de muestra, de
manera directa.
 Si se han realizado diluciones, se ha de obtener una serie final con valor cero.
 A continuación se establece el triplete de valores correspondiente a las tres series

anteriores a la del valor cero que podrá ser leída en la tabla del NMP.
 Para efectos de expresar el valor obtenido basándose en 100 mL de muestra habrá de

dividirse el resultado de la tabla por el volumen real de muestra inoculada en cada tubo
de la serie central de cada triplete escogido.
 Se tendrá un triplete de valores para cada tipo de determinación.
En general se tiene:
Los resultados obtenidos se expresarán de la siguiente manera:
NMP DE COLIFORMES TOTALES: / 100 mL

NMP DE COLIFORMES FECALES: / 100 mL
EJEMPLOS:
1) La lectura de los resultados obtenidos en el análisis del agua de un grifo es la

siguiente:
Volumen de Denominación de Tubos positivos Tubos positivos Tubos positivos en

muestra la serie de 5 en la prueba en la prueba la prueba
inoculada. tubos. presuntiva para confirmativa para confirmativa para

31
(mL) coliformes totales coliformes totales. coliformes fecales.

y fecales.
10 1 - CT.CF 5 4 2
1 2 - CT.CF 3 2 1
0.1 3 - CT.CF 2 1 0
Con estos datos consultando la tabla del NMP correspondiente tenemos:
Para coliformes totales los resultados obtenidos finalmente en la prueba confirmativa son:
4,2,1 que en la tabla nos indica un valor de 26 es decir el resultado será:
NMP DE COLIFORMES TOTALES: 26/100 mL.
Para coliformes fecales el triplete de valores obtenido es: 2,1,0 y consultando la tabla del
NMP se tiene el valor de 7.
El resultado se expresará:
NMP DE COLIFORMES FECALES: 7/100 mL
2) La lectura de los resultados obtenidos en el análisis de un agua de la que fue

necesario hacer diluciones, es la siguiente:
Volumen de Denominación de Tubos positivos Tubos positivos Tubos positivos en

muestra la serie de 5 en la prueba en la prueba la prueba
inoculada. tubos. presuntiva para confirmativa para confirmativa para
(mL) coliformes totales coliformes totales. coliformes fecales.
y fecales.
0.1 3 - CT.CF 4 3 2
0.01 4 - CT.CF 2 1 1
0.001 5 - CT.CF 1 1 0
Para coliformes totales se establece el código del triplete: 3,1,1 y consultando la tabla del
NMP se observa un valor de 14, por lo tanto se tiene:
14 / 0.01 = 14 x 100 = 1400.
NMP DE COLIFORMES TOTALES: 1400/100 mL

Para coliformes fecales con el mismo razonamiento se establece el código: 2,1,0 que en
las tablas del NMP correspondientes se observa un valor de 7, por lo tanto se tiene:
7 / 0.01 = 7 x 100 = 700

32
NMP DE COLIFORMES FECALES: 700/100 mL
CONFIABILIDAD:
El procedimiento de fermentación en tubos múltiples es el método más usado por su

facilidad y economía.
El resultado de esta prueba se expresa por "el número más probable" (NMP), pero debe
entenderse que este método no es exacto ya que sólo nos da la probable densidad de
bacterias coliformes totales o fecales de una muestra determinada.
La confiabilidad está dada por los niveles superiores o inferiores del límite de confianza al
95% establecidos en las tablas para cada NMP/100 mL, no obstante, es una indicación
importante para evaluar la calidad sanitaria del agua.
CUESTIONARIO
1 Mostrar los cálculos realizados para obtener el NMP de Coliformes Totales y

Fecales en el agua analizada.
2 ¿Cuáles son las características que debe reunir un Microorganismo Indicador?
3 ¿Por qué el número de Coliformes Totales es siempre mayor que el de Coliformes

Fecales?
4 De acuerdo a la normatividad mexicana vigente ¿Cuáles son los límites permisibles

en cuanto a Coliformes Totales y Coliformes Fecales en el agua para consumo
humano? Dar los números de las Normas Oficiales Mexicanas correspondientes.
5 ¿Por qué aun cuando los microorganismos patógenos se encuentran en poca

concentración en un agua éstos pueden causar enfermedad?

33
TABLAS DE INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS.
TABLA 17.1: Índice del NMP y límite confiable de 95% para varias combinaciones de
resultados positivos y negativos cuando se usan: 5 tubos con porciones de 10 cm3
en cada uno, 5 con porciones de 1 cm3 y 5 con porciones de 0.1 cm3.
No. De tubos con reacciones Índice Límite confiable de No. De tubos con reacciones Índice Límite confiable de
positivas del 95%. positivas. del 95%.
. NMP NMP
5 tubos 5 tubos 5 tubos por 100 Inferior Superior 5 tubos 5 tubos 5 tubos por 100 Inferior Superior
con 10 con 1 con 0.1 cm3. con 10 con 1 con 0.1 cm3.
cm3. cm3. cm3. cm3. cm3. cm3.
0 0 0 <2
0 0 1 2 < 0.5 7 4 2 1 26 9 78
0 1 0 2 < 0.5 7 4 3 0 27 9 80
0 2 0 4 < 0.5 11 44 34 10 33 34 11 12 93 93
0 0 2 < 0.5 7
0 1 4 < 0.5 11 5 0 0 23 7 70
1 0 4 < 0.5 11 5 0 1 31 11 89
1 1 6 < 0.5 15 5 0 2 43 15 110
2 0 6 < 0.5 15 55 11 01 33 46 11 16 93 120
2 0 0 5 < 0.5 13 5 1 2 63 21 150

2 0 1 7 1 17
2 1 0 7 1 17 5 2 0 49 17 130
2 1 1 9 2 21 5 2 1 70 23 170
2 2 0 9 2 21 5 2 2 94 28 220
2 3 0 12 3 28 55 33 01 79 110 25 31 190 250
3 0 0 8 1 19 5 3 2 140 37 340
3 0 1 11 2 25
3 1 0 11 2 25 5 3 3 180 44 500
3 1 1 14 4 34 5 4 0 130 35 300
3 2 0 14 4 34 5 4 1 170 43 490
3 2 1 17 5 46 5 4 2 220 57 700
3 3 0 17 5 46 55 44 34 280 350 90 120 850 1000
4 0 0 13 3 31 5 5 0 240 68 750
4 0 1 17 5 46 5 5 1 350 120 1000
4 1 0 17 5 46 5 5 2 540 180 1400
4 1 1 21 7 63 5 5 3 920 300 3200
4 1 2 26 9 78 5 5 4 1600 640 5800
4 2 0 22 7 67 5 5 5 >2400
Tomado de NOM-AA-42-1987

34
TABLA 17.2: Índice del límite confiable de 95% para varias combinaciones de
resultados positivos y negativos cuando se usan: 1 tubo con porciones de 50 cm 3, 5
tubos con porciones de 10 cm3 y 5 tubos con porciones de 10 cm3.
No. de tubos con Índice del Límite confiable de No. de tubos con Índice del Límite confiable de
reacciones positivas NMP por _ 95% reacciones positivas. NMP por 95%
1 tubo 5 tubos 5 tubos 100 cm3 Inferior Superior 1 tubo 5 tubos 5 tubos 100 cm3 Inferior Superior
con 50 con 10 con 1 con 50 con 10 con 1
cm3 cm3 cm3 cm3 cm3 cm3
0 0 0 <1
0 0 1 1 < 0.5 4 2 1 7 1 17
0 0 2 2 < 0.5 6 2 2 10 3 23
0 1 0 1 < 0.5 4 2 3 12 3 28
0 1 1 2 < 0.5 6 3 0 8 2 19
0 1 2 3 < 0.5 8 3 1 11 3 26
0 2 0 2 < 0.5 6 3 2 14 4 34
0 2 1 3 < 0.5 8 3 3 18 5 53
0 2 2 4 < 0.5 11 3 4 21 6 66
0 3 0 3 < 0.5 8 4 0 13 4 31
0 3 1 5 < 0.5 13 4 1 17 5 47
0 4 0 5 < 0.5 13
4 2 22 7 69
0 0 1 < 0.5 4 4 3 28 9 85
0 1 3 < 0.5 8 4 4 35 12 100
0 2 4 < 0.5 11 4 5 43 15 120
0 3 6 < 0.5 15 5 0 24 8 75
1 0 3 < 0.5 8
5 1 35 12 100
1 1 5 < 0.5 13 5 2 54 18 140
1 2 7 1 17 5 3 92 27 220
1 3 9 2 21 5 4 160 39 450
2 0 5 < 0.5 13 5 5 240
TABLA 17.3 Índice del NMP y límite confiable de 95% para varias combinaciones de
resultados positivos y negativos cuando se usan: 5 tubos con porciones de 50 cm3,
5 tubos con porciones de 10 cm3 y 5 tubos con porciones de 1 cm3.
. NMP NMP
5 tubos 5 tubos 5 tubos Inferior Superior 5 tubos 5 tubos 5 tubos Inferior Superior
con 50 con 10 con 1 por A n n con 50 con 10 con 1 por A n n
3 3 3 100 3 3 3 100
cm . cm . cm . cm . cm . cm .
cm3. cm3.
0 0 0 <1
0 0 1 < 0.5 2 4 1 1 4 1 9
0 1 0 < 0.5 2 4 1 2 4 1 9
0 1 1 < 0.5 2 4 2 0 4 1 9

35
0 2 0 < 0.5 2 4 2 1 4 1 9
0 3 0 < 0.5 2 4 2 2 5 2 12
4 3 0 5 2 12
0 0 < 0.5 2
0 1 < 0.5 2 4 3 1 5 2 12
1 0 < 0.5 2 4 3 2 6 2 14
1 1 < 0.5 2 4 4 0 6 2 14
2 0 < 0.5 2 4 4 1 7 3 17
2 1 2 < 0.5 4 4 5 0 7 3 17
3 0 2 < 0.5 4 4 5 1 8 3 19
2 0 0 1 < 0.5 2 5 0 0 4 1 9
2 0 1 1 < 0.5 2 5 0 1 4 1 9
2 1 0 1 < 0.5 2 5 0 2 6 2 14
2 1 1 2 < 0.5 4 5 1 0 5 2 12
2 2 0 2 < 0.5 4 5 1 1 6 2 14
2 2 1 2 < 0.5 4
5 1 2 7 3 17
2 3 0 2 < 0.5 4 5 2 0 6 2 14
2 3 1 3 1 7 5 2 1 8 3 19
2 4 0 3 1 7 5 2 2 10 4 23
5 2 3 12 4 28
3 0 0 2 < 0.5 4
3 0 1 2 < 0.5 4 5 3 0 9 3 21
3 1 0 2 < 0.5 4 5 3 1 11 4 26
3 1 1 2 < 0.5 4 5 3 2 14 5 34
3 1 2 3 1 7 5 3 3 18 6 53
3 2 0 3 1 7 5 4 0 13 6 31
3 2 1 3 1 7 5 4 1 17 6 47
3 2 2 4 1 9 5 4 2 22 7 70
3 3 0 3 1 7 5 4 3 28 9 85
3 3 1 4 1 9 5 4 4 35 11 100
3 4 0 4 1 9 5 5 0 24 8 75
3 4 1 4 1 9
5 5 1 35 11 100
4 0 0 2 < 0.5 4 5 5 2 54 18 140
4 0 1 3 1 7 5 5 3 92 27 220
4 0 2 3 1 7 5 5 4 160 39 420
4 1 0 3 1 7 5 5 5 > 240
TABLA 17.4: Índice del NMP y límite confiable de 95% para varias combinaciones de
resultados positivos y negativos cuando se usan: 3 tubos con porciones de 10 cm3,
3 con porciones de 1 cm3 y 3 con porciones de 0.1 cm3.
. NMP NMP
36
5 tubos 5 tubos 5 tubos Inferior Superior 5 tubos 5 tubos 5 tubos Inferior Superior
con 50 con 10 con 1 por A n n con 50 con 10 con 1 por A n n

3 3 3 100 3 3 3 100
cm . cm . cm . cm . cm . cm .
cm3. cm3.
0 0 0 <3 0 0 0 <3
0 0 1 3 < 0.5 9 0 0 1 3 < 0.5 9
0 1 0 3 < 0.5 13 0 1 0 3 < 0.5 13
0 0 4 < 0.5 20 0 0 4 < 0.5 20
0 1 7 1 21 0 1 7 1 21
1 0 7 1 23 1 0 7 1 23
1 1 11 3 36 1 1 11 3 36
2 0 11 3 36 2 0 11 3 36
2 0 0 9 1 36 2 0 0 9 1 36
2 0 1 14 3 37 2 0 1 14 3 37
2 1 0 15 3 44 2 1 0 15 3 44
2 1 1 20 7 89 2 1 1 20 7 89
2 2 0 21 4 47 2 2 0 21 4 47
2 2 1 28 10 150 2 2 1 28 10 150
3 0 0 23 4 120 3 0 0 23 4 120
3 0 1 39 7 130 3 0 1 39 7 130
3 0 2 64 15 380 3 0 2 64 15 380
3 1 0 43 7 210 3 1 0 43 7 210
3 1 1 75 14 230 3 1 1 75 14 230
3 1 2 120 30 380 3 1 2 120 30 380
3 2 0 93 15 380 3 2 0 93 15 380
3 2 1 150 30 440 3 2 1 150 30 440
3 2 2 210 35 470 3 2 2 210 35 470
3 3 0 240 36 1300 3 3 0 240 36 1300
3 3 1 460 71 2400 3 3 1 460 71 2400
3 3 2 1100 150 4800 3 3 2 1100 150 4800
3 3 3 > 2400 3 3 3 > 2400
0 0 0 <3 0 0 0 <3

37
PRÁCTICA No 5
DETERMINACIÓN DE COLIFORMES TOTALES Y FECALES EN

AGUA RESIDUAL
OBJETIVO:
Determinar la presencia de coliformes totales y fecales en agua residual por el método del
Número Más Probable, utilizando la técnica de tubos de fermentación múltiple.
INTRODUCCIÓN
Debido a que las aguas residuales son de composición variada provenientes de descargas
de usos municipales, industriales, comerciales, de servicios, agrícolas, pecuarios,
domésticos, incluyendo fraccionamientos y en general de cualquier uso, así como la
mezcla de ellas, contienen diferentes tipos de microorganismos contaminantes y las
diferentes concentraciones, dependiendo de su fuente.
La variada población de microorganismos en esta agua, proviene del suelo y de origen

intestinal, incluyen aerobios y anaerobios estrictos y facultativos así como también
numerosos virus como: Poliovirus y virus de la hepatitis. Igualmente pueden contener
formas parasitarias variables como quistes de Protozoarios y huevecillos de Helmintos
(Metazoarios).
Asimismo, existe en nuestro país el grave problema de contaminación de ríos, lagos

acuíferos y costas debido a que estos son utilizados como depósito de todos los desechos
generados por las actividades humanas. Estos microorganismos pueden sobrevivir al
tratamiento, por lo que su rehúso p.ej., en riego agrícola, actividades recreativas:
Aguas de piscinas, baños de hidromasaje, aguas potables naturales, actividades

piscícolas y aguas marinas superficiales (playas), representan un riesgo potencial a la
salud pública.
Por todo lo anterior, además del estudio de las características fisicoquímicas del agua se
requiere de un estudio microbiológico. Para este propósito se deberán obtener muestras
representativas usando los procedimientos de toma de muestras establecidos en las
Normas Oficiales Mexicanas.
Para la determinación del NMP de Coliformes Totales y Fecales en este tipo de aguas, es
necesario proceder a preparar diluciones decimales de la muestra, debido a que se espera
que la concentración de coliformes sea superior en éstas que en un agua potable.

38
El número de diluciones varía mucho, dependiendo del origen de la muestra a tratar. Por
lo demás, para su análisis de procede en la misma forma que para una muestra de agua
potable.
MATERIAL Y SUBSTANCIAS
 Muestra de agua de diferente naturaleza.

 Mechero Bunsen.
 Cerillos ó encendedor.
 tubos de 18 x 150 mm conteniendo 9 mL de agua de dilución estéril.
 Pipetas de 1 mL estériles.
 tubos de 18 x 150 mm con campana Durham, conteniendo caldo lactosado estéril
de concentración sencilla.
 15 tubos de 18 x 150 mm con campana Durham, conteniendo Caldo Lactosa Bilis
Verde Brillante estéril.
 10 tubos de 18 x 150 mm con campana Durham, conteniendo caldo E.C. estéril.
 2 Cajas de Petri conteniendo Agar Endo estéril.
 5 Tubos de 18 x 150 mm conteniendo agar nutritivo inclinado estéril.
 Agitador de tubos Vortex.
 Gradillas para tubos de 18 x 150 y de 13 x 100 mm.
 Asa Bacteriológica.
 Incubadora a 35 °C.
 Incubadora a una temperatura constante de 44 °C (±0.5 °C).
DESARROLLO (TÉCNICA PRUEBA PRESUNTIVA)
Todas las operaciones deberán efectuarse en absolutas condiciones de asepsia.
1 Agitar vigorosamente la muestra por lo menos 20 veces para lograr una distribución
uniforme de los microorganismos.
2 Dependiendo del origen de la muestra y el contenido bacteriano esperado, preparar

diluciones.
3 Para preparar las diluciones, con una pipeta estéril tomar una alícuota de 1 mL de
la muestra original y llevarlo a uno de los tubos conteniendo 9 mL de agua de
dilución estéril, obteniendo de esta manera una dilución de 10-1. (Fig. 18.1)
4 Agitar el tubo de la dilución 10-1 y con otra pipeta estéril tomar una alícuota de 1
mL y llevarlo a otro tubo con 9 mL de agua de dilución estéril para obtener una
dilución de 10-2.
5 Proceder de la misma manera hasta obtener una dilución de 10-3 o hasta donde
sea necesario.

39
6 Inocular asépticamente con 1 mL de muestra por quintuplicado, tubos de

fermentación conteniendo caldo lactosado o caldo lauril triptosa, a partir de las
últimas 3 diluciones y conservar todas las anteriores en refrigeración por si se
requiere su utilización posterior.
7 Incubar todos los tubos a una temperatura de 35 °C durante 24-48 horas.
8 Después de 24 horas de incubación efectuar una primera lectura para observar si

hay tubos positivos, es decir, con producción de ácido, si el medio contiene un
indicador de pH, turbidez y producción de gas en el interior de la campana Durham.
9 Al hacer esta verificación es importante asegurarse que la producción de gas sea

resultado de la fermentación de la lactosa, en cuyo caso se observará turbidez en
el medio de cultivo, y no confundir con burbujas de aire.
10 Para evitar este tipo de confusiones es recomendable revisar las campanas

Durham antes de proceder a la inoculación y desechar aquellos tubos cuyas
campanas contengan burbujas de aire ó de alguna manera eliminar éstas y así
poder utilizarlos.
11 De los tubos que en la primera lectura den positivos, ya se pueden hacer las
pruebas confirmatorias para coliformes totales y coliformes fecales.
12 En caso de no apreciarse crecimiento en el resto de los tubos, continuarán en

incubación 24 horas más.
13 Después de 48 horas (±2h) a partir de la inoculación, se hace la lectura final.
14 Si pasadas 48 h tampoco se aprecia crecimiento ni producción de gas, los tubos se

toman como negativos.
INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS:
Si el total de tubos son NEGATIVOS: El examen se da por terminado, reportando la

AUSENCIA DE COLIFORMES TOTALES Y FECALES en la muestra analizada.
Todos aquellos tubos que den POSITIVOS para prueba presuntiva se anotarán
convenientemente y se procederá a realizar la PRUEBA CONFIRMATORIA para
Coliformes Totales y Fecales.
PRUEBA CONFIRMATORIA PARA COLIFORMES TOTALES:
1 A partir de cada uno de los tubos que han resultado positivos en la prueba
presuntiva, agitándolos para homogeneizar, inocular con tres asadas tubos
conteniendo caldo Lactosa Bilis Verde Brillante (LBVB).

40
2 Incubar durante 48 ± 3 h a 35 ± 0.5 °C.
3 Después de la incubación observar la presencia de turbidez y de gas.

Si en ninguno de los tubos se observa producción de gas, aun cuando se observe

turbidez:
Se consideran NEGATIVOS, estableciéndose el Código 0,0,0 para efecto del cálculo del
NMP
Si todos los tubos dan negativos ó todos dan positivos, con base en los grados de
dilución analizados, considerar la necesidad de repetir el análisis a partir de grados de
dilución menores (mayores volúmenes de muestra) ó mayores (menores volúmenes de
muestra), respectivamente.
PRUEBA CONFIRMATORIA PARA COLIFORMES FECALES:
1 A partir de cada uno de los tubos que han resultado positivos en la prueba presuntiva,
agitándolos para homogeneizar, inocular con tres asadas tubos conteniendo caldo
E.C. (Escherichia coli).
2 Incubar durante 24 horas a 44.5 ± 0.2 °C. y después de este período, observar
presencia de turbidez y gas.
La prueba se considera POSITIVA, debiendo anotar el número de tubos positivos y

establecer el código para posteriormente hacer el cálculo del NMP, (Figs. 18.2 y 18.3)
Si no se observa producción de gas, aun cuando se observe turbidez:

Se consideran negativos, estableciéndose el Código 0,0,0 para efecto del cálculo del
NMP.
Si todos los tubos dan negativos ó todos dan positivos, con base en los grados de
dilución analizados, considerar la necesidad de repetir el análisis a partir de grados de

41
dilución menores (mayores volúmenes de muestra) ó mayores (menores volúmenes de

muestra), respectivamente.
CÁLCULOS
De acuerdo a los tubos positivos en las pruebas confirmativas para Coliformes Totales y
Fecales, establecer los códigos correspondientes para calcular por referencia en las tablas
estadísticas (Tablas 17.1-17.4) el NMP de Coliformes Totales y Fecales en 100 mL de
agua.
En caso de no encontrar en las tablas la combinación de tubos adecuada, emplear para

los cálculos la siguiente ecuación:
ELABORACIÓN Y PRESENTACIÓN DE RESULTADOS.
Los resultados se elaboran de la siguiente manera:
 Si se han realizado diluciones, se ha de obtener una serie final con valor cero.
 A continuación se establece el triplete de valores correspondiente a las tres series

anteriores a la del valor cero que podrá ser leída en la tabla del NMP.
 Para efectos de expresar el valor obtenido basándose en 100 mL de muestra habrá de

dividirse el resultado de la tabla por el volumen real de muestra inoculada en cada tubo
de la serie central de cada triplete escogido. Ver ejemplo (2) de la práctica anterior.
En general se tiene:
Los resultados obtenidos se expresarán de la siguiente manera:
NMP DE COLIFORMES TOTALES:_ / 100 mL

NMP DE COLIFORMES FECALES: / 100 mL
CUESTIONARIO

42
1 ¿Cuáles son los límites máximos permisibles de C. Fecales para las descargas de
aguas residuales vertidas a aguas y bienes nacionales así como a suelo?
2 Mencionar 5 enfermedades transmitidas por el agua, indicando el agente etiológico

correspondiente.
3 Además de representar un riesgo para la salud pública el vertido de aguas

residuales tratadas inadecuadamente o sin tratar a los depósitos naturales, ¿Qué
otros efectos indeseables puede representar?
4 ¿Cuáles son los límites máximos permisibles de Coliformes Fecales en aguas

residuales tratadas que se rehúsan en servicios al público? Indicar la NOM.

43

44

45
PRÁCTICA No 6
DETERMINACIÓN DE LA DEMANDA BIOQUÍMICA DE OXÍGENO

EN AGUAS NATURALES, RESIDUALES (DBO5) Y RESIDUALES
TRATADAS - MÉTODO DE PRUEBA
OBJETIVO
Determinar los requerimientos relativos de oxígeno en aguas residuales, domésticas,

industriales, aguas superficiales y efluentes provenientes de plantas de tratamiento de
aguas.
INTRODUCCIÓN
La demanda bioquímica de oxígeno (DBO) es una prueba usada para la determinación de

los requerimientos de oxígeno para la degradación bioquímica de la materia orgánica en
las aguas municipales, industriales y en general residuales; su aplicación permite calcular
los efectos de las descargas de los efluentes domésticos e industriales sobre la calidad de
las aguas de los cuerpos receptores. Los datos de la prueba de la DBO se utilizan en
ingeniería para diseñar las plantas de tratamiento de aguas residuales.
La prueba de la DBO es un procedimiento experimental, tipo bioensayo, que mide el

oxígeno requerido por los organismos en sus procesos metabólicos al consumir la materia
orgánica presente en las aguas residuales o naturales. Las condiciones estándar del
ensayo incluyen incubación en la oscuridad a 20ºC por un tiempo determinado,
generalmente cinco días. Las condiciones naturales de temperatura, población biológica,
movimiento del agua, luz solar y la concentración de oxígeno no pueden ser reproducidas
en el laboratorio. Los resultados obtenidos deben tomar en cuenta los factores anteriores
para lograr una adecuada interpretación.
Las muestras de agua residual o una dilución conveniente de las mismas, se incuban por
cinco días a 20ºC en la oscuridad. La disminución de la concentración de oxígeno disuelto
(OD), medida por el método Winkler o una modificación del mismo, durante el periodo de
incubación, produce una medida de la DBO.
Existen numerosos factores que afectan la prueba de la DBO, entre ellos la relación de la
materia orgánica soluble a la materia orgánica suspendida, los sólidos sedimentables, los
flotables, la presencia de hierro en su forma oxidada o reducida, la presencia de
compuestos azufrados y las aguas no bien mezcladas. Al momento no existe una forma de
corregir o ajustar los efectos de estos factores.
46
DBO carbonácea contra nitrogenácea. La oxidación de las formas reducidas del nitrógeno
como amoniaco y nitrógeno orgánico, mediada por los microorganismos, ejercen una
demanda nitrogenácea, que ha sido considerada como una interferencia en la prueba; sin
embargo, esta puede ser eliminada con la adición de inhibidores químicos. Cuando se
inhiba la demanda nitrogenácea de oxígeno, reportar los resultados como demanda
bioquímica de oxígeno carbonácea (DBOC5); cuando no se inhiba, reportar los resultados
como DBO5.
Requerimientos de dilución. Si el agua de dilución es de baja calidad, su DBO aparecerá

como DBO de la muestra, efecto que será amplificado por el factor de dilución, y el
resultado tendrá una desviación positiva. El método de análisis debe incluir agua de
dilución de verificación y agua de dilución como blanco para establecer su calidad,
mediante la medición del consumo de oxígeno con una mezcla orgánica conocida,
generalmente glucosa y ácido glutámico. La fuente del agua de dilución puede ser:
destilada a partir del agua de grifo, o agua libre de sustancias orgánicas biodegradables o
bioinhibitorias tales como cloro o metales pesados. El agua destilada puede contener
amoniaco o compuestos orgánicos volátiles; el agua desionizada también puede estar
contaminada con compuestos orgánicos solubles lixiviados del lecho de la resina; el uso
de destiladores con conductos o accesorios de cobre en las líneas de agua destilada
pueden producir agua con cantidades excesivas de cobre, que actúa como biocida.
Las muestras para determinación de la DBO se deben analizar con prontitud; si no es

posible, refrigerarlas a una temperatura cercana al punto de congelación, ya que se
pueden degradar durante el almacenamiento, dando como resultado valores bajos. Sin
embargo, es necesario mantenerlas el mínimo tiempo posible en almacenamiento, incluso
si se llevan a bajas temperaturas. Antes del análisis calentarlas a 20ºC.
Muestras simples. Si el análisis se emprende en el intervalo de 2 h después de la

recolección no es necesario refrigerarlas; de lo contrario, guardar la muestra a 4ºC o
menos; reportar junto con los resultados el tiempo y la temperatura de almacenamiento.
Bajo ningún concepto iniciar el análisis después de 24 h de haber tomado la muestra; las
muestras empleadas en la evaluación de las tasas retributivas o en otros instrumentos
normativos, deben ser analizadas antes de que transcurran 6 h a partir del momento de la
toma.
Muestras compuestas. Mantener las muestras a 4ºC o menos durante el proceso de

composición, que se debe limitar a 24 h. Aplicar los mismos criterios que para las
muestras sencillas, contando el tiempo transcurrido desde el final del período de
composición. Especificar el tiempo y las condiciones de almacenamiento como parte de
los resultados.
MATERIAL Y EQUIPO

47
Botellas de incubación para la DBO, de 250 a 300 mL de capacidad. Lavarlas con

detergente, enjuagarlas varias veces, y escurrirlas antes de su uso. Para evitar la entrada
de aire en la botella de dilución durante la incubación, se debe utilizar un sello de agua,
que se puede lograr satisfactoriamente invirtiendo las botellas en un baño de agua o
adicionando agua en el reborde cóncavo de la boca de las botellas especiales para la
DBO. Colocar una copa de papel o plástica o un capuchón metálico sobre la boca de la
botella para reducir la evaporación del sello de agua durante la incubación.
Incubadora de aire o baño de agua, controlada termostáticamente a 20 1ºC; excluir

cualquier fuente luminosa para eliminar el proceso de producción fotosintética de OD.
Equipo de aireación con difusor
Incubador: Controlado por termostato a 20ºC ± 1ºC. Eliminar toda la luz para evitar la
posibilidad de producción fotosintética de oxígeno disuelto.
Balanza analítica con precisión de 0,1 mg
Medidor de oxígeno disuelto
Todo el material usado en la determinación debe ser exclusivo para este procedimiento.
Para el lavado del material remojar durante 1 h en una disolución de ácido sulfúrico al 10
% y enjuagar con agua. Los detergentes con base de amoniaco no deben usarse para la
limpieza del material.
Los contenedores de las muestras deben lavarse con disolución de detergente no iónico,
libre de metales, enjuagarse con agua, remojarse en ácido toda la noche y volver a
enjuagarse con agua libre de metales.
Para el material de cuarzo, politetrafloroetileno o material de vidrio debe dejarse

remojando de 12 h a 24 h con HNO3 (1:1), HCl (1:1) o con agua regia (3 partes de HCl
concentrado + 1 parte de HNO3 concentrado) a 70 ºC solo en los casos que presente
material adherido, después debe ser enjuagado con agua libre de metales.
En los casos de que el material presente grasas, enjuagar con acetona y/o hexano.
Botellas Winkler de vidrio para incubación con capacidad de 300 mL de aforo total y con
boca estrecha, reborde y tapón de vidrio esmerilado, de forma cónica.
Contratapa de politetrafloroetileno u otro material plástico para botella Winkler
Bureta
REACTIVOS

48
Todos los productos químicos usados en este método deben ser grado reactivo, a menos
que se indique otro grado.
Agua: Debe entenderse agua que cumpla con las siguientes características:
a) Resistividad, megohm-cm a 25°C: 0,2 min.;

b) Conductividad, µS/cm a 25°C: 5,0 máx.
c) pH: 5,0 a 8,0.
1 Solución tampón de fosfato: Disolver 8,5 g de KH2PO4, 21,75 g de K2HPO4, 33,4 g de

Na2HPO4.7H2O, y 1,7 g de NH4Cl en aproximadamente 500 mL de agua destilada y
diluir a 1 L. El pH debe ser 7,2 sin posteriores ajustes. Si se presenta alguna señal de
crecimiento biológico, descartar este o cualquiera de los otros reactivos.
2 Solución de sulfato de magnesio: Disolver 22,5 g de MgSO4.7H2O en agua destilada y

diluir a 1 L.
3 Solución de cloruro de calcio: Disolver 27,5 g de CaCl2 en agua destilada y diluir a 1L.
4 Solución de cloruro férrico: Disolver 0,25g de FeCl3.6H2O en agua destilada, diluir a 1L
5 Soluciones ácida y alcalina, 1 N, para neutralización de muestras cáusticas o ácidas.
a) Acido. A un volumen apropiado de agua destilada agregar muy lentamente y

mientras se agita, 28 mL de ácido sulfúrico concentrado; diluir a 1 L.
b) Alcali. Disolver 40 g de hidróxido de sodio en agua destilada y diluir a 1 L.
6 Solución de sulfito de sodio: Disolver 1,575 g de Na2SO3 en 1000 mL de agua

destilada. Esta solución no es estable y se debe preparar diariamente.
7 Inhibidor de nitrificación: 2-cloro-6-(triclorometil) piridina.
8 Solución de glucosa-ácido glutámico: Secar a 103ºC por 1 h glucosa y ácido glutámico

grado reactivo. Disolver 150 mg de glucosa y 150 mg de ácido glutámico en agua
destilada y diluir a 1 L. Preparar inmediatamente antes de su uso.
9 Solución de cloruro de amonio: Disolver 1,15 g de NH4Cl en 500 mL de agua

destilada, ajustar el pH a 7,2 con solución de NaOH, y diluir a 1 L. La solución contiene
0,3 mg de N/mL.
PROCEDIMIENTO
El laboratorio debe mantener los siguientes registros:

49
control de calidad que verifica los análisis.
siguientes datos:
a) Identificación de la muestra;
b) Fecha del análisis;
c) Procedimiento cronológico utilizado;
d) Cantidad de muestra utilizada;
e) Número de muestras de control de calidad analizadas;
f) Trazabilidad de las calibraciones de los instrumentos de medición;
g) Evidencia de la aceptación o rechazo de los resultados, y
h) Además el laboratorio debe mantener la información original reportada por los equipos
en disquetes o en otros respaldos de información.
PREPARACIÓN DEL AGUA DE DILUCIÓN1
La prueba de DBO requiere la utilización de agua de muy alta calidad para las muestras
de dilución. El agua no debe contener sustancias tóxicas, tales como pequeñas cantidades
de cloro, cobre y mercurio ni sustancias orgánicas. Si existen sustancias orgánicas en el
agua de dilución, se producirá una demanda de oxígeno.
La manera más práctica de producir agua con bajo contenido orgánico en una base
consistente es la destilación de permanganato alcalino (permanganato de potasio y
pastillas de hidróxido de sodio). Se dispone de soluciones tampón comerciales que
producen automáticamente agua destilada de alta calidad.
Colocar el volumen requerido de agua en un frasco y añadir por cada litro de agua 1 mL
de cada una de las siguientes disoluciones: disolución de sulfato de magnesio (ver lista de
reactivos), disolución de cloruro de calcio (ver reactivos), disolución de cloruro férrico (ver
lista de reactivos) y disolución amortiguadora de fosfatos (ver reactivos). Preparar el agua
de dilución diariamente.
Analizar y almacenar el agua de dilución como se describe en los incisos 4.2, 4.2.1 y 4.3,
de tal forma que siempre tenga a mano agua de calidad garantizada. Antes de usar el
agua de dilución debe ponerse a una temperatura aproximada de 20°C. Saturar con
oxígeno aireando con aire filtrado, libre de materia orgánica durante 1 h por lo menos.
1 Nota: La absorción de OD en 5 días a 20°C no debe exceder 0,2 mg/l.

50
Si la muestra presenta alto contenido de biocidas como cloro o se sabe de su bajo

contenido de materia orgánica, es necesario inocular la muestra.
Si se requiere, sembrar el agua de dilución como se indica en el inciso 4.4.1.
4.2 Control del agua de dilución
4.2.1 Utilizar este procedimiento como una comprobación aproximada de la calidad del
agua de dilución. Si la disminución de oxígeno disuelto del agua excede de 0,2 mg/L,
obtener agua de mejor calidad mejorando la purificación o usar agua de otra fuente.
Alternativamente si se requiere inhibir la nitrificación, almacenar el agua de dilución
sembrada en una habitación oscura a temperatura ambiente hasta que la captación de
oxígeno disuelto se haya reducido lo suficiente para cumplir los criterios de comprobación
del agua de dilución. No se recomienda su almacenamiento cuando la DBO5 se va a
determinar sin inhibir la nitrificación ya que pueden desarrollarse microorganismos
nitrificantes durante ese tiempo. Si el agua de dilución no ha sido almacenada para
mejorar su calidad, añadir suficiente inóculo como para un consumo de OD de 0,05 mg/L a
0,1 mg/L en cinco días a 20°C. Al Incubar en un frasco Winkler lleno de agua de dilución
durante cinco días a 20°C, el consumo no debe ser mayor a 0,2 mg/L y preferiblemente no
menor a 0,1 mg/L.
4.3 Control de la glucosa-ácido glutámico.
Comprobar en cada lote analítico la calidad del agua de dilución, la efectividad del inóculo
y la técnica analítica mediante determinaciones de la DBO5 en muestras estándar de
concentración conocida. Utilizar la disolución de glucosa-ácido glutámico (ver reactivos)
como disolución madre de control. La glucosa tiene una tasa excepcionalmente alta y
variable de oxidación, pero cuando se utiliza con ácido glutámico, dicha tasa se estabiliza
y es similar a la obtenida en muchas aguas residuales municipales. Alternativamente, si un
agua residual particular contiene un componente principal identificable que contribuya a la
DBO5, utilizar este compuesto en lugar de la glucosa-ácido glutámico. Determinar la
DBO5 de una disolución al 2 % de la disolución de control patrón de glucosa-ácido
glutámico utilizando las técnicas expuestas en los incisos 4.4 a 4.10.
4.4 Inóculo
4.4.1 Fuente de la siembra
4.4.1.1 Es necesario contar con una población de microorganismos capaces de oxidar la

materia orgánica biodegradable de la muestra. El agua residual doméstica, los efluentes
no clorados o sin desinfección, los efluentes de las plantas de tratamiento de desechos
biológicos y las aguas superficiales que reciben las descargas de aguas residuales que
contienen poblaciones microbianas satisfactorias. Algunas muestras no contienen una
población microbiana suficiente (por ejemplo, algunos residuos industriales no tratados,
residuos desinfectados, residuos de alta temperatura o con valores de pH extremos).
Para tales residuos, sembrar el agua de dilución añadiendo una población de
microorganismos. La mejor siembra es la que proviene del efluente de un sistema de
tratamiento biológico de aguas residuales. Cuando se usa como siembra el efluente de
51
tratamiento biológico de sistema de aguas residuales se recomienda la inhibición de la

nitrificación. Cuando no se disponga de ésta, utilizar el sobrenadante del agua residual
doméstica después de dejarlo reposar a temperatura ambiente durante al menos 1 h, pero
no más de 36 h. Determinar si la población existente es satisfactoria haciendo la prueba
de la siembra en una muestra para DBO5. El incremento del valor de la DBO5 indica una
siembra exitosa.
4.5 Control del inóculo
Determinar la DBO5 del material de siembra como para cualquier otra muestra. Esto es
una siembra control. A partir de este valor y de uno conocido de la dilución del material de
siembra (en el agua de dilución) determinar el consumo de OD de la siembra. Lo ideal es
hacer disoluciones tales de la siembra que la mayor cantidad de los resultados presenten
una disminución de al menos el 50 % del OD. La representación de la disminución del OD
(mg/L) con respecto a los mililitros de siembra, tiene que ser una línea recta cuya
pendiente corresponde a la disminución de OD por mililitro del inóculo. La intersección del
eje de las abscisas (OD) representa el consumo del oxígeno causado por el agua de
dilución y debe ser inferior a 0,1 mg/L (ver inciso 4.8). Para determinar el consumo de OD
de una muestra, se resta el consumo de OD de la siembra, del consumo de OD total. La
captación de OD total del agua de dilución sembrada debe oscilar entre 0,6 mg/L y 1,0
mg/L.
4.6 Pretratamiento de la muestra
4.6.1 Muestras con pH ácidos o básicos
4.6.1.1 Neutralizar las muestras a un pH entre 6,5 y 7,5 con ácido sulfúrico o hidróxido de
sodio de concentración tal que la cantidad de reactivo no diluya la muestra en más del 0,5
%. El pH del agua de dilución sembrada no debe verse afectado por la dilución de la
muestra.
4.6.2. Muestras que contienen cloro residual
4.6.2.1 Si es posible, evitar las muestras que contengan cloro residual, tomándolas antes
del proceso de cloración. Si la muestra ha sido clorada pero no hay residuo detectable de
cloro, sembrar el agua de dilución. Si hay cloro residual, eliminar el cloro de la muestra y
sembrar con inóculo (ver inciso 4.4). No se deben analizar las muestras cloradas sin
sembrar el agua de dilución. En algunas muestras, el cloro desaparece en el lapso de 1 h
a 2 h después de su exposición a la luz. Esto suele ocurrir durante el transporte o la
manipulación de la muestra. Para las muestras en las que el residuo de cloro no se disipe
en un tiempo razonablemente corto, eliminar el cloro residual añadiendo disolución de
sulfito de sodio.
Determinar el volumen requerido de disolución de sulfito de sodio cuantificando el cloro

residual total. Añadir a la muestra neutralizada el volumen relativo de la disolución de
sulfito de sodio determinada por la prueba anterior, mezclar y después de 4 min a 20 min,
comprobar el cloro residual de la muestra.

52
4.6.2.2 La determinación de cloro residual se realiza de acuerdo a lo establecido en la

norma mexicana NMX-AA-100.
4.6.3 Muestras sobresaturadas con OD
4.6.3.1 En aguas frías o en aguas donde se produce la fotosíntesis (aguas de embalses),

es posible encontrar muestras que contienen más de 9,0 mg OD/L a 20°C. Para evitar la
pérdida de oxígeno durante la incubación de tales muestras, reducir el OD por saturación,
calentando la muestra aproximadamente a 20°C en frascos parcialmente llenos mientras
se agitan con fuerza o se airean con aire limpio, filtrado y comprimido.
4.6.4 Ajustar la temperatura de la muestra a 20°C ± 1°C antes de hacer diluciones.
4.6.5 Inhibición de la nitrificación
4.6.5.1 Si se requiere inhibir la nitrificación adicionar 3,0 mg de 2-cloro-6 (triclorometil)

piridina (ver inciso 5.11) a cada uno de los frascos antes de recolectar o bien adicionar la
cantidad suficiente de agua para tener una concentración de 10 mg/L aproximadamente.
4.6.5.2 Entre las muestras que requieren inhibición de la nitrificación se incluyen, los
efluentes tratados biológicamente, las muestras sembradas con efluentes tratados
biológicamente y las aguas superficiales entre otras. Debe hacerse la observación del uso
de inhibición del nitrógeno cuando se presente el informe de los resultados.
4.7 Técnica de dilución
4.7.1 Las diluciones que dan lugar a un OD residual mayor de 1 mg/L y una captación de
OD de al menos 2 mg/L después de 5 días de incubación, producen los resultados más
confiables. Hacer varias diluciones (al menos 3) por duplicado de la muestra preparada
para obtener una captación de OD en dicho intervalo. La experimentación con una
muestra concreta permite el uso de un número menor de diluciones. Un análisis más
rápido tal como la DQO, presenta una correlación aproximada con la DBO5 y sirve como
una guía para seleccionar las diluciones. En ausencia de datos previos, utilizar las
siguientes diluciones: de 0 % a 1 % para los residuos industriales fuertes, de 1 % a 5 %
para las aguas residuales sedimentadas y crudas, del 5 % al 25 % para el efluente tratado
biológicamente y del 25 % al 100 % para las aguas superficiales contaminadas.
4.7.2 Diluciones preparadas directamente en frascos tipo Winkler. Utilizando una pipeta
volumétrica, añadir el volumen de muestra deseado a frascos Winkler individuales de 300
mL. Añadir cantidades adecuadas del material de siembra a los frascos tipo Winkler o al
agua de dilución. Llenar los frascos con suficiente agua de dilución, sembrada si es
necesario, de forma que la inserción del tapón desplace todo el aire, sin dejar burbujas. No
realizar diluciones mayores de 1:300 (1 mL de la muestra en un frasco). Determinar el OD
inicial en uno de los frascos de cada una de las diferentes diluciones. En los frascos de los
duplicados de cada una de las diluciones, Ajustar herméticamente el tapón, poner un sello
hidraúlico y la contratapa e incubar durante 5 días a 20°C.
4.8 Determinación del OD inicial

53
4.8.1 Método yodométrico: La determinación del OD inicial se realiza por medio del
método yodométrico de azida modificado, de acuerdo a lo establecido en la norma
mexicana NMX-AA-012-SCFI (ver 2 Referencias).
4.8.2 Método electrométrico: La determinación del OD inicial se realiza por medio del
método electrométrico con electrodo de membrana, de acuerdo a lo establecido en la
norma mexicana NMX-AA-012-SCFI (ver 2 Referencias). Los aceites, grasas o cualquier
sustancia que se adhiera a la membrana puede ser causa de baja respuesta en el
electrodo.
4.9 Blanco del agua de dilución. Emplear un blanco del agua de dilución como un
control aproximado de la calidad del agua de dilución no sembrada y de la limpieza de los
frascos de incubación. Junto con cada lote de muestras, incubar un frasco de agua de
dilución no sembrada. Determinar el OD inicial y final como se especifica en los incisos 4.7
y 4.10. El consumo de OD no debe ser mayor de 0,2 mg/L y preferentemente no menor a
0,1 mg/L.
4.10 Incubación
Incubar a 20°C ± 1°C las botellas de DBO5 que contengan las muestras con las diluciones
deseadas, los controles de siembra, los blancos de agua de dilución y el control de
glucosa-ácido glutámico. En caso de no contar con contratapas, diariamente se debe
verificar que el sello hidraúlico esté intacto en cada botella incubada, agregar agua si es
necesario.
4.11 Determinación del OD final
Después de 5 días de incubación determinar el OD en las diluciones de la muestra, en los

controles y en los blancos. La medición del OD debe ser realizada inmediatamente
después de destapar la botella de Winkler, para evitar la absorción de oxígeno del aire por
la muestra.
CÁLCULOS
Calcular la DBO5
Cuando no se utilice inóculo ni diluciones:
DBO5 (mg/L) = ODi mg/L - OD5 mg/L

Donde:
ODi mg/L es el oxígeno disuelto inicial, y
OD5 mg/L es el oxígeno disuelto al quinto día.

54
Cuando se emplea una dilución:
𝐎𝐃𝐢 𝐦𝐠/𝐋 − 𝐎𝐃𝟓 𝐦𝐠/𝐋

𝐃𝐁𝐎𝟓 (𝐦𝐠/𝐋) =
% 𝐝𝐞 𝐝𝐢𝐥𝐮𝐜𝐢ó𝐧 𝐞𝐱𝐩𝐫𝐞𝐬𝐚𝐝𝐨 𝐞𝐧 𝐝𝐞𝐜𝐢𝐦𝐚𝐥𝐞𝐬
Cuando se utiliza inóculo
Sin dilución:
𝐦𝐠 𝐦𝐠 𝐂𝟏 (𝐁𝟏 − 𝐁𝟐 ) (𝐕𝐭 )
𝐃𝐁𝐎𝟓 (𝐦𝐠/𝐋) = (𝐎𝐃𝐢 − 𝐎𝐃𝟓 −
𝐋 𝐋 𝐂𝟐(𝐕𝐦)
Con dilución:
𝐦𝐠 𝐦𝐠 𝐂𝟏 (𝐁𝟏 − 𝐁𝟐 ) (𝐕𝐭 )
𝐃𝐁𝐎𝟓 (𝐦𝐠/𝐋) = (𝐎𝐃𝐢 − 𝐎𝐃𝟓 −
𝐋 𝐋 𝐂𝟐(𝐕𝐦)
Donde:
B1 es el OD del inóculo antes de la incubación, en mg/L;

B2 es el OD del inóculo después de la incubación, en mg/L;
C1 es el volumen de inóculo en la muestra;
C2 es el volumen de inóculo en el inóculo control;
Vt es el volumen total del frasco Winkler, y
Vm es el volumen de muestra sembrada.
Expresar los resultados como CDBO5 sí se inhibe la nitrificación.
Reportar los resultados en mg/L de DBO5 con dos cifras significativas con la precisión
(media, desviación estándar) correspondiente.
SEGURIDAD
No ha sido determinada la carcinogenicidad de todos los reactivos, por lo que cada

sustancia química debe tratarse como peligro potencial a la salud. La exposición a estas
sustancias debe reducirse al menor nivel posible. Se sugiere que el laboratorio realice
inspecciones de higiene ocupacional de cada reactivo a los que pueda estar expuesto el
analista y que dichos resultados estén a su disposición.
substancias químicas especificadas en éste método. Debe tenerse un archivo de
55
referencia de las hojas de información de seguridad el cual debe estar disponible a todo el
personal involucrado en estos análisis.
Cuando se trabaje con cualquiera de los compuestos químicos descritos en este método,
debe usar todo el tiempo equipo de seguridad, tal como: batas, guantes de látex y lentes
de seguridad.
La preparación de todos los reactivos usados en este método debe efectuarse bajo una
campana de extracción. Consulte las hojas de seguridad sobre manipulación y disposición
de éstos.
El ácido sulfúrico es un compuesto químico debe manejarse con extremo cuidado. El

adicionar ácido sulfúrico concentrado al agua produce una fuerte reacción exotérmica por
lo cual esto debe realizarse muy lentamente con agitación y enfriamiento externo.

56
BIBLIOGRAFÍA
NOM-001-ECOL-1996 Que establece los límites máximos permisibles de contaminantes

en las descargas de aguas residuales en aguas y bienes nacionales, publicada en el
Diario Oficial de la Federación el 6 de enero de 1997.
NOM-008-SCFI-1993 Sistema General de Unidades de Medida, publicada en el Diario

Oficial de la Federación el 14 de octubre de 1993.
NMX-AA-003-1980 Aguas residuales - Muestreo. Declaratoria de vigencia publicada en el

Diario Oficial de la Federación el 25 de marzo de 1980.
NMX-AA-014-1980 Cuerpos receptores - Muestreo. Declaratoria de vigencia publicada en

el Diario Oficial de la Federación el 5 de septiembre de 1980.
NMX-AA-089/1-1986 Protección al ambiente - Calidad del agua - Vocabulario - Parte 1.

Declaratoria de vigencia publicada en el Diario Oficial de la Federación el 15 de julio de
1986.
NMX-AA-089/2-1992 Protección al ambiente - Calidad del agua - Vocabulario. Parte 2.

Declaratoria de vigencia publicada en el Diario Oficial de la Federación el 24 de marzo de
1992.
NMX-AA-108-1992 Calidad del agua - Determinación de cloro libre y cloro total - Método
volumétrico de la DPD ferrosa. Declaratoria de vigencia publicada en el Diario Oficial de la
Federación el 24 de marzo de 1992.
PROY-NMX-AA-115-SCFI-2001 Análisis de agua - Criterios generales para el control de la

calidad de resultados analíticos. Aviso de consulta pública publicado en el Diario Oficial de
la Federación el 2 de noviembre de 1999.
PROY-NMX-AA-116-SCFI-2001 Análisis de agua - Guía de solicitud para la presentación

de métodos alternos. Aviso de consulta pública publicado en el Diario Oficial de la
Federación el 2 de noviembre de 1999.
AWWA Método-5210 B “Biochemical Oxigen Demand (BOD)”, Standard Methods for

Examination of Water and Wastewater, American Public Health Association (APHA),
American Water Works Association (AWWA), Water Pollution Control Federation (WPCF),
19a Ed. Criterios Ecológicos de Calidad del Agua, publicados en el Diario Oficial de la
Federación el 13 de diciembre de 1989.
Sawyer, C.N. y P.L. McCarty, “Chemistry for Environmental Engineering”, McGraw-Hill

Tokio, 1978.

57
PRÁCTICA No 7
DEMANDA QUÍMICA DE OXIGENO (D.Q.O.) MÉTODO DE REFLUJO

ABIERTO
INTRODUCCIÓN
La demanda química de oxígeno (DQO) determina la cantidad de oxígeno requerido para

oxidar la materia orgánica en una muestra de agua residual, bajo condiciones específicas
de agente oxidante, temperatura y tiempo.
Las sustancias orgánicas e inorgánicas oxidables presentes en la muestra, se oxidan

mediante reflujo en solución fuertemente ácida (H2SO4) con un exceso conocido de
dicromato de potasio (K2Cr2O7) en presencia de sulfato de plata (AgSO4) que actúa como
agente catalizador, y de sulfato mercúrico (HgSO4) adicionado para remover la
interferencia de los cloruros. Después de la digestión, el remanente de K2Cr2O7 sin reducir
se titula con sulfato ferroso de amonio; se usa como indicador de punto final el complejo
ferroso de ortofenantrolina (ferroina). La materia orgánica oxidable se calcula en términos
de oxígeno equivalente.
Para muestras de un origen específico, la DQO se puede relacionar empíricamente con la

DBO, el carbono orgánico o la materia orgánica; la prueba se usa para controlar y
monitorear después que se ha establecido la correlación.
El método es aplicable a muestras de aguas residuales domésticas e industriales que

tengan DBO superiores a 50 mg O2/L. Para concentraciones más bajas, tales como
muestras de aguas superficiales, se puede usar el método modificado para bajo nivel en
un intervalo entre 5 y 50 mg O2/L. Cuando la concentración de cloruro en la muestra es
mayor de 2 000 mg/L, se requiere el método modificado para las aguas salinas.
Los compuestos alifáticos volátiles de cadena lineal no se oxidan en cantidad apreciable,
en parte debido a que están presentes en la fase de vapor y no entran en contacto con el
líquido oxidante; tales compuestos se oxidan más efectivamente cuando se agrega
Ag2SO4 como catalizador. Sin embargo, éste reacciona con los iones cloruro, bromuro y
yoduro produciendo precipitados que son oxidados parcialmente.
Las dificultades causadas por la presencia de los haluros pueden superarse en buena
parte, aunque no completamente, por acomplejamiento antes del proceso de reflujo con
sulfato de mercurio (HgSO4), que forma el haluro mercúrico correspondiente, muy poco
soluble en medio acuoso. Si bien se especifica 1 g de HgSO4 para 50 mL de muestra, se
puede usar una menor cantidad cuando la concentración de cloruro sea menor de 2 000
mg/L, mientras se mantenga una relación HgSO4:Cl– de 10:1. La técnica no se debe usar

58
para muestras que contengan más de 2 000 mg de Cl–/L; existen otros procedimientos
diseñados para determinar la DQO en aguas salinas.
El nitrito (NO2–) tiene una DQO de 1,1 mg de O2/mg de NO2–-N, y como las
concentraciones de NO2– en aguas rara vez son mayores de 1 o 2 mg NO2–-N/L, esta
interferencia es considerada insignificante y usualmente se ignora. Para evitar una
interferencia significante debida al NO2–, agregar 10 mg de ácido sulfámico por cada mg
de NO2–-N presente en el volumen de muestra usado; agregar la misma cantidad de
ácido sulfámico al blanco de agua destilada.
Las especies inorgánicas reducidas, tales como iones ferroso, sulfuro, manganoso, etc.,
se oxidan cuantitativamente bajo las condiciones de la prueba; para concentraciones altas
de estas especies, se pueden hacer las correcciones al valor de DQO obtenido, según los
cálculos estequiométricos en caso de conocer su concentración inicial.
Colectar las muestras en botellas de vidrio preferiblemente; el uso de envases plásticos es

permisible si se asegura la ausencia de contaminantes orgánicos.
Si la muestra tiene materia orgánica biológicamente activa, el análisis debe realizarse

inmediatamente, aunque preservada a pH  2 por adición de H2SO4 concentración
(generalmente 2 mL de H2SO4 conc./L de muestra) puede analizarse hasta siete días
después.
Las muestras que contengan sólidos sedimentables deben mezclarse con un

homogeneizador para obtener una muestra representativa.
En el análisis de aguas residuales con alta DQO deben hacerse diluciones preliminares,
para reducir el error inherente en la medida de pequeños volúmenes de muestra.
EQUIPO
Equipo de reflujo, constituido por balones o tubos de digestión de 500 o 250 mL de

capacidad con boca 24/40 de vidrio esmerilado y condensador Liebig, West, Friedrichs,
Allihn o equivalente, de 300 mm, con unión 24/40 de vidrio esmerilado, y una plancha de
calentamiento con regulador de temperatura y potencia suficiente para producir al menos
1,4 W/cm2 de superficie de calentamiento, o su equivalente.
REACTIVOS
Solución estándar de dicromato de potasio, 0,0417M. Disolver 12,259 g de

K2Cr2O7, grado estándar primario previamente secado durante 2 h a 103ºC, en
agua destilada y diluir a 1 000 mL en un balón volumétrico clase A.
59
Reactivo de ácido sulfúrico. Agregar con cuidado Ag2SO4 grado reactivo o técnico, en
cristales o en polvo, sobre H2SO4 concentrado en proporción de 5,5g de Ag2SO4/Kg de
H2SO4. Dejar en reposo 1 o 2 días para la disolución del Ag2SO4.
Solución indicadora de ferroina. Disolver 1,485 g de 1,10-fenantrolina monohidratada y

695 mg de FeSO4·7H2O en agua destilada y diluir a 100 mL. Esta solución también se
puede adquirir comercialmente.
Sulfato ferroso de amonio (FAS), 0,25 M. Disolver 98 g de Fe(NH4)2(SO4)2·6H2O en agua

destilada; agregar 20 mL de H2SO4 concentrado, enfriar y diluir a 1000 mL. Estandarizar
esta solución diariamente con una solución estándar de K2Cr2O7 así:
Diluir 10,0 mL de la solución estándar de K2Cr2O7 a aproximadamente 100 mL; agregar 30

mL de H2SO4 concentrado y enfriar. Titular con FAS en presencia de 0,10 a 0,15 mL (2 o 3
gotas) de indicador de ferroina.
Volumen de K2Cr2O7 0.0417 M titulado, mL

Molaridad del FAS = ∗ 0.25
2𝑎Volumen del FAS empleado, mL
Sulfato mercúrico, HgSO4, en cristales o en polvo.
Acido sulfámico. Requerido solamente para eliminar la interferencia de nitritos.
Ftalato de potasio e hidrógeno estándar (biftalato de potasio, KHP). Triturar ligeramente y

secar el biftalato de potasio (HOOCC6H4COOK) hasta peso constante a 120ºC; disolver
425 mg en agua destilada y diluir a 1 000 mL. La solución es estable por más de tres
meses si se conserva refrigerada; se debe verificar la presencia o ausencia de crecimiento
biológico, y en caso afirmativo descartarla. El biftalato tiene una DQO teórica de 1,176 mg
O2/mg y la solución tiene una DQO teórica de 500 g O2/mL.
PROCEDIMIENTO
Tratamiento de muestras con DQO > 50 mg O2/L: Colocar 50,0 mL de muestra en un

balón de reflujo de 500-mL (para muestras con DQO > 900 mg O2/L, usar una porción más
pequeña de muestra y diluirla a 50,0 mL); agregar 1 g de HgSO 4, en presencia de perlas
de vidrio para controlar la ebullición, y muy lentamente agregar 5,0 mL del reactivo de
ácido sulfúrico, mientras se agita para disolver el HgSO4. Enfriar y agitar para evitar la
posible pérdida de materiales volátiles; agregar 25 mL de solución de K2Cr2O7 0,0417 M y
mezclar. Acoplar el balón al condensador y abrir el flujo de agua refrigerante; agregar el
remanente del reactivo de ácido sulfúrico (70 mL) a través del extremo superior del
condensador. Continuar la agitación mientras se agrega el reactivo de ácido sulfúrico.
PRECAUCIÓN: Agitar muy bien la mezcla de reflujo antes de suministrar calor para
prevenir el sobrecalentamiento en el fondo del balón y la formación de espuma.

60
Cubrir el extremo superior del condensador con un vaso pequeño para prevenir la entrada
de materiales extraños a la mezcla y dejar en reflujo durante 2 h. Enfriar y enjuagar el
condensador desde la parte superior con agua destilada; desconectar el condensador y
diluir la muestra al doble de su volumen con agua destilada. Enfriar hasta temperatura
ambiente y valorar el exceso de K2Cr2O7 con FAS en presencia de 0,10 a 0,15 mL (2 o 3
gotas) de indicador de ferroina; aunque la cantidad de ferroina no es crítica, usar el mismo
volumen para todas las titulaciones. Tomar como punto final de la titulación el primer
cambio nítido de color azul-verdoso a café-rojizo; el color azul-verdoso puede reaparecer.
El cambio de color no es tan marcado como en la titulación del blanco de reactivos debido
a la mayor concentración de ácido en la muestra. De la misma manera, someter a reflujo y
titular un blanco que contenga los reactivos y un volumen de agua destilada igual al
volumen de muestra.
Procedimiento alternativo para muestras con DQO-bajo: Seguir el procedimiento anterior,

con dos excepciones: (i) usar K2Cr2O7 estándar 0,00417 M, y (ii) titular con FAS 0,025 M.
Tener cuidado extremo, ya que cualquier traza de materia orgánica en la vidriería o
deposiciones desde la atmósfera pueden causar errores. Si se requiere un mayor aumento
de la sensibilidad, concentrar un mayor volumen de muestra antes de la digestión por
reflujo, de la siguiente manera: Agregar todos los reactivos a la muestra y reducir el
volumen total a 150 mL mediante ebullición en el balón de reflujo abierto a la atmósfera
(sin acoplar el condensador). Calcular la cantidad de HgSO4 a ser adicionada (antes de la
concentración por ebullición), basada en una relación de peso HgSO4:Cl– de 10:1, según
la cantidad de Cl– presente en el volumen de muestra original. Hacer un blanco de
reactivos mediante el mismo procedimiento. Esta técnica tiene la ventaja de concentrar la
muestra sin pérdidas significativas de materiales volátiles fácilmente digestibles; los
materiales volátiles difíciles de digerir, tales como ácidos volátiles, se pierden pero se
consigue una mejoría frente a métodos de concentración por evaporación ordinarios.
Determinación de la solución estándar. Evaluar la técnica y la calidad de reactivos

realizando la prueba con una solución estándar de ftalato ácido de potasio.
CÁLCULOS
DQO como mg de O2/lt = (A-B) x M x 8000/mL de Muestra
Donde:
A = mL FAS usados para el blanco
B = mL FAS usados para la muestra, y
M = molaridad del FAS

61
PRECISIÓN
Un grupo de muestras sintéticas preparadas con ftalato ácido de potasio y NaCl se

analizaron en 74 laboratorios. Para los valores de la DQO de 200 mg O2/L en ausencia de
Cl–, la desviación estándar obtenida fue ±13 mg/L (coef. de variación 6,5 %); para los
valores de la DQO de 160 mg O2/L y 100 mg Cl–/L, la desviación estándar obtenida fue de
±14 mg/L (coef. variación, 10,8%).
REFERENCIAS
Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater. American Public Health
Association, American Water Works Association, Water Pollution Control Federation. 19
ed., New York, 1995. pp 5-12 a 5-16.
Methods for Chemical Analysis of Water and Wastes. United States Environmental
Protection Agency. Cincinnati, 1983.
BIBLIOGRAFÍA
RODIER, J. Análisis de Aguas: aguas naturales, aguas residuales, agua de mar. Omega,
Barcelona, 1981.
SAWYER, C.; McCARTY, P. Chemistry for Environmental Engineering. McGraw Hill, New
York, 1996
GARAY, J., PANIZZO, L., LESMES, L., RAMIREZ, G., SANCHEZ, J. Manual de Técnicas
Analíticas de Parámetros Físico-químicos y Contaminantes Marinos. Tercera edición.
Centro de Investigaciones Oceanográficas e Hidrográficas. Cartagena, 1993

62
PRÁCTICA No 8
DETERMINACIÓN DE DUREZA.
INTRODUCCIÓN
El ácido dietilenamino tetraacético y su sal disódico forman un complejo quelado soluble

cuando se adicionan a una solución de ciertos catiónes metálicos. Si se adiciona una
pequeña cantidad del indicador negro de eriocromo T a una solución que contiene los
iones calcio y magnesio en un pH de 10, la solución toma un color similar al del vino rojo.
Si se adiciona EDTA como titulante los iones calcio y magnesio serán completados
paulatinamente hasta que la solución adquiere un color azul, lo que indica el final de la
titulación. Las reacciones que se llevan a cabo son:
INTERFERENCIAS

63
Tabla XXXII. Interferencias en la determinación de dureza
MATERIAL
2 matraces volumétricos de 1000 ml
2 matraces volumetricos de 100 ml
1 cápsula de porcelana
1 soporte con pinzas para bureta
2 matraces Erlenmayer de 125 ml
1 pipeta de 10 ml
2 frascos goteros de 100 ml
REACTIVOS
Solución buffer pH 10: Disolver 6.56 gr. de NH4Cl y 57 ml de NH4OH en agua destilada y
aforar a 100 ml.
Indicador negro de eriocromo T: Disolver 0.5 g de Eriocromo negro T y 4.5 gr. de

clorhidrato de hidroxilamina en 100 ml de etanol.
Solución de EDTA (sal disódica): Disolver 2 gr de EDTA (sal disódica) más 0.05 gr de
MgCl2.6H2O en agua destilada y
aforar a 1000 ml.
Solución de CaCl2 0.01 N: Disolver 0.5 gr de CaCO3 secado a 110 ° centígrados durante
2 horas y disolverlo en 10 ml de HCl 3N y aforar a 1000 ml con agua destilada.
64
ESTANDARIZACIÓN
La estandarización del EDTA (sal disódica) se hace de la siguiente manera: colocar 5 ml

de solución de CaCl2 en un matraz Erlenmayer de 125 ml, se añaden 5 gotas de solución
buffer de pH 10 y 3 gotas de indicador de Eriocromo negro T, aparece un color púrpura en
presencia de iones de calcio y magnesio, y se procede a titular con la solución de EDTA
cuya normalidad se desea conocer, se termina hasta la aparición de un color azul.
La Normalidad del EDTA se calcula así:
Donde:
N2 = Normalidad del EDTA
V1 = ml de solución de CaCl2
N1 = normalidad de la solución de CaCl2
V2 = ml gastados de EDTA
PROCEDIMIENTO
1 Colocar 5 ml de la muestra de agua en un matraz Erlenmayer de 125 ml
2 Agregar 5 gotas de buffer pH 10
3 Adicionar 3 gotas de negro eriocromo T
4 Titular con EDTA (sal disódica) 0.01 N
5 Vire de púrpura a azul
CÁLCULOS
Cálculos para dureza total expresada como ppm de CaCO3

65
A=mL de solución de EDTA utilizados
B=mg de CaCO3 equivalentes a 1 mL de titulante EDTA
PROCEDIMIENTO (RESUMEN)

66
PRÁCTICA No 9
DETERMINACIÓN DE LA ALCALINIDAD TOTAL
INTRODUCCIÓN
Definimos la alcalinidad total como la capacidad del agua para neutralizar ácidos y
representa la suma de las bases que pueden ser tituladas. Dado que la alcalinidad de
aguas superficiales está determinada generalmente por el contenido de carbonatos,
bicarbonatos e hidróxidos, ésta se toma como un indicador de dichas especies iónicas. No
sólo representa el principal sistema amortiguador (tampón, buffer) del agua dulce, sino que
también desempeña un rol principal en la productividad de cuerpos de agua naturales,
sirviendo como una fuente de reserva de CO2 para la fotosíntesis (fig. 1).
Internacionalmente es aceptada una alcalinidad mínima de 20 mg de CaCO3/L para

mantener la vida acuática. Cuando las aguas tienen alcalinidades inferiores se vuelven
muy sensibles a la contaminación, ya que no tienen capacidad para oponerse a las
modificaciones que generen disminuciones del pH (acidificación).
Se han propuesto clasificaciones de las aguas según su capacidad amortiguadora

(alcalinidad), lo que permite manejar descriptores categóricos sencillos a ser utilizados en
el análisis de calidad de agua (tabla 1).
Tabla 1.- Clasificación de los cuerpos de agua^ según su alcalinidad total
Descriptor Alcalinidad (mg/L)

Mínimo aceptable 20
Pobremente amortiguadas <25
Moderadamente amortiguadas 25-75
Muy amortiguadas >75
Valores típicos de lagunas de agua
50-80
dulce de Maldonado
Valores típicos de lagunas de agua
20-30
dulce de Rocha (Aguas dulces)

67
METODOLOGÍA
La alcalinidad se determina por titulación con una solución estándar de un ácido mineral
fuerte a los puntos sucesivos de equivalencia del bicarbonato y el ácido carbónico (pH ~
4,5-4,3) (fig.1).
Para determinar la Alcalinidad total se emplea una mezcla de reactivos indicadores

(anaranjado de metilo/verde bromocresol).
Se recomienda realizar la determinación en el laboratorio. No olvide utilizar recipientes

bien limpios para tomar y acarrear las muestras de agua (preferentemente lávelos
previamente y enjuáguelos con agua destilada). Conserve las muestras refrigeradas para
su transporte. La determinación debe ser realizada preferentemente dentro de las
primeras 24 horas a partir de la colecta, ya que pueden modificarse por interacción con el
anhídrido carbónico atmosférico (CO2).
Guía para la utilización de las Valijas Viajeras – Alcalinidad
CO2 + H2O--- H2CO3

H2CO3 HCO3+ H+
HCO3- CO3-2 + H+
Fig. 1.- Equilibrio ácido carbónico-bicarbonato-carbonato

68
MATERIALES:
Reactivo Indicador acuoso: anaranjado de metilo/verde de bromocresol (4:5).
Matraz aforado de 50 Ml
Erlenmeyer de 250 mL
Bureta y soporte
Solución de ácido sulfúrico 0.02 N
Agua destilada
Lentes de seguridad
PRECAUCIONES Y CONSEJOS SEGURIDAD
Si bien se trabajará con una solución diluida de ácido sulfúrico, debe tenerse en cuenta
que la misma es corrosiva e irritante por contacto y tóxica por ingestión. El docente
encargado debe planificar la actividad con el fin de disminuir los riesgos asociados a la
utilización de esta sustancia.
Utilícese protección para los ojos. En caso de contacto con la piel o los ojos lávese
prontamente con agua en abundancia y acúdase inmediatamente al médico.
PROCEDIMIENTO:
1. Mida 50 mL de muestra en el matraz aforado. Para esto, añada la muestra hasta que
falte aproximadamente un centímetro para el aforo (marca de enrase) y complete con
un gotero. El enrase se considera bien realizado cuando el menisco que forma el
líquido queda tangente, por encima, al aforo (fig.2).

69
Fig. 2.- a) Matraz aforado. b) La marca de aforo sobre el vidrio se representa con una línea naranja. El menisco cóncavo
representa la superficie del líquido.
2. Vierta los 50 mL en el erlenmeyer de 250 mL (fig.2.a) y agregue agitando unas pocas

gotas de reactivo indicador, hasta que note una coloración leve (el color exacto
dependerá del pH de la muestra y el color aparente del agua).
3. Titular bajo bureta con solución de ácido sulfúrico, agitando y añadiendo gota a gota
hasta el viraje a color púrpura. Determine el volumen de ácido gastado (fig. 2).
4. La alcalinidad de la muestra se calcula multiplicando por 20 el gasto en mL de la

solución de ácido (fig.3.b). Esto permite expresar la suma de las bases presentes en la
muestra como si fueran solamente carbonato de calcio. Debe expresarse entonces
como alcalinidad total equivalente a “x” mg de CaCO3 por litro (mg CaCO3/L) o su
equivalente, partes por millón (ppm).
5. Alternativamente la variación de pH puede monitorearse con un pHmetro.
6. Registre los resultados

70
Fig. 3.- a) El cambio de color indica el punto final de la titulación. b) Determinación del
gasto de ácido sulfúrico en la titulación.

71
PRÁCTICA No 10
DETERMINACIÓN DE CONDUCTIVIDAD.
INTRODUCCIÓN
La conductividad eléctrica de una muestra de agua es la expresión numérica de su

capacidad para transportar una corriente eléctrica. Esta capacidad depende de la
presencia de iones en el agua, de su concentración total, de su movilidad, de su carga o
valencia y de las concentraciones relativas, así como de la temperatura a la cual se realiza
la medición.
De los muchos factores que afectan el comportamiento de los iones en solución, las
atracciones y repulsiones eléctricas entre iones y la agitación térmica, son quizá los más
importantes. Estos
efectos se expresan a través de un parámetro conocido como la "fuerza iónica" de la
solución, :
µ= 1 / 2  Ci x Zi2
‘’
En donde "Ci" y "Zi" representan la concentración y la carga iónica del componente "i".
Las soluciones de la mayoría de los ácidos, bases y sales inorgánicas son relativamente "buenos
conductores" de la corriente eléctrica. Inversamente, las soluciones acuosas de solutos orgánicos, que
no se disocian o que se disocian muy poco en el agua, poseen conductividades eléctricas muy bajas o
similares a las del agua pura.
En la mayoría de las soluciones acuosas, cuanto mayor es la concentración de las sales disueltas,
mayor es su conductividad eléctrica. Este efecto continúa hasta el punto de saturación de la sal o hasta
que la solución se halla tan concentrada en iones que la restricción del movimiento, causada por un
aumento posterior en la concentración, disminuye la conductividad eléctrica del sistema.
Puesto que a mayor temperatura menor viscosidad y a menor viscosidad mayor libertad de movimiento,
la temperatura también tiene una marcada influencia sobre la conductividad eléctrica de un sistema
acuoso. Si bien el incremento de la conductividad eléctrica con la temperatura puede variar de un ión a
otro, en general, se acepta que ésta aumenta en promedio un 3% por cada grado centígrado que
aumente la temperatura.
Un equipo para la medición de la conductividad eléctrica en muestras de agua es un equipo que consta
de un "sensor" o par de placas metálicas y de una parte electrónica desde donde se envía una señal
eléctrica hacia las placas durante cada medición. Atado a este sistema, se halla una termocupla que
registra la temperatura a la cual se realizan las mediciones.
El equipo cuenta además con un traductor y corrector electrónico de la señal, que referencia las
corrientes eléctricas leídas a una temperatura determinada y que las traduce a valores aproximados
del contenido en sólidos disueltos, TDS, tomando como referencia el NaCl.
Los conductímetros miden la "resistencia" de una solución (sistema acuoso) al paso de una corriente
eléctrica y convierten estos valores en unidades inversas de "conductividad eléctrica".
72
Como la resistencia de un cuerpo es inversamente proporcional a su sección transversal y

directamente proporcional a su longitud, se ha adoptado como unidad estándar de
comparación, la resistencia al paso de la corriente que ofrece un cubo de 1 cm de lado,
construido del material que se examina. El recíproco de esta medida es la "conductividad
específica".

73
[KCl] a 25 ºC
0,0001 M 0,0005 M 0,001 M 0,005 M 0,01 M 0,02 M 0,05 M
0,1 M 0,5 M
FIGURA 8.1 CONDUCTÍMETRO DE CAMPO Y DATOS DE CALIBRACIÓN.
C.E. S/cm mg/l KCl

15 74 7,5
147 718 37,3 74,5
1413 2767 6668 372,8 745,5 1491
12900 58640 3727,5 7455,0
37275,0
En el sistema internacional de unidades, la unidad de conductividad eléctrica, en trabajos

de aguas, es el micro Siemens por centímetro, normalmente abreviado como S/cm. Un
S/cm en conductividad eléctrica equivale a 10.000 Ohm x m, en términos de resistividad.
Otra unidad frecuente, especialmente en aguas salobres, es el mS/m. Un mS/m = 10
S/cm = 1.000 Ohm x m.
En síntesis, y desde el punto de vista físico, un S/cm es una medida de la mayor o menor
facilidad con que una corriente eléctrica puede pasar a través de un material de forma
cúbica, de un centímetro de arista.
REACTIVOS
Agua desmineralizada. Se utiliza para el lavado del electrodo antes y después de cada
medida. Es necesario realizar un control diario de la conductividad del agua obtenida
después del paso por la resina de intercambio iónico y establecer que su conductividad se
encuentre por debajo de 5 S/cm.
Cloruro de potasio, secado a 105 °C.
Solución 0,1 N de Cloruro de potasio (KCl). Pese 7,4365 g y lleve a 1 litro. Patrón de
Conductividad Eléctrica, Rango alto.
Solución 0,01 N. de KCl. Pese 0,7440 g y lleve a 1 litro o diluya 1:10 la anterior solución.
Patrón de conductividad eléctrica medio.
ACADEMIA DE INGENIERÍA AMBIENTAL 74

MATERIAL
 Conductímetro
 Vasos de precipitados.
 Frasco lavador.
MEDICIONES EN CAMPO
La conductividad eléctrica de una muestra de agua es un parámetro más o menos estable

en el tiempo, de tal suerte que las mediciones en campo y en el laboratorio no muestran
variaciones significativas. Pese a ello, se acostumbra a medir la conductividad eléctrica
del agua en campo, debido a que sus variaciones de un punto a otro, constituyen
generalmente una valiosa herramienta de interpretación preliminar, particularmente en
estudios de evaluación ambiental.
Los valores de conductividad eléctrica, orientan y direccionan el muestreo en campo y

constituyen una pieza clave para la toma rápida de decisiones, especialmente cuando se
observan resultados inesperados o anómalos en campo.
NOTA: Es muy importante enjuagar el electrodo de un conductímetro con cierta periodicidad, antes y después
de cada medición, con agua desmineralizada, no sólo para evitar que la salinidad de una muestra altere la
medición de la siguiente, sino también para evitar el deterioro del electrodo por formación de depósitos de
sales en las placas.
PROCEDIMIENTO:
En esta práctica de laboratorio, cada grupo de estudiantes deberá realizar las siguientes
mediciones:
1. Medir el pH de varias muestras coloreadas utilizando un pHmetro. Realizar sobre

estas muestras pequeñas adiciones de NaCl y medir nuevamente el pH. Realizar
ahora pequeñas adiciones de CaCl2 y medir nuevamente el pH de las muestras.
2. Utilizando porciones frescas de las mismas muestras anteriores, mida los valores de
pH, primero con adiciones de FeCl3 y luego con adiciones de Na2CO3.
3. Preparar las soluciones a-, b-, c- y d- y, a partir de cada una de ellas preparar las
siguientes diluciones: 0,10 M; 0,05 M; 0,01 M; 0,005 M; 0,001 M; 0,0005 M y 0,0001
M.
4. Solución a-. Un litro de solución de cloruro de potasio de concentración, 0,10 M,

valorada por duplicado frente a una solución patrón de nitrato de plata.
5. Solución b-. Un litro de solución de sulfato de magnesio de concentración, 0,10 M,

valorada por duplicado frente a una solución patrón de EDTA.

6. Solución c-. Un litro de solución de cloruro de calcio de concentración, 0,10 M,

valorada por duplicado frente a una solución patrón de EDTA.
7. Solución d-. Mezclar y homogeneizar 50 mililitros de cada una de las soluciones a-, b-
y c- de concentración 0,10 M y medir su conductividad eléctrica para contrastar con el
valor que se puede predecir a partir de las gráficas de concentración "vs"
conductividad eléctrica.
8. Medir las conductividades eléctricas en cada una de las series a-, b-, c- y d- y
establecer una correlación entre la conductividad eléctrica y la concentración de
sólidos disueltos, en mg/l, a partir de la construcción de curvas antes mencionadas.
9. Medir el pH y la conductividad eléctrica de las muestras de trabajo.
Esquema operativo para las mediciones de pH, turbidez y conductividad eléctrica.

PRÁCTICA No 11
DETERMINACIÓN DE NITRÓGENO TOTAL KJELDAHL.
INTRODUCCIÓN
Los compuestos nitrogenados se encuentran ampliamente distribuidos en la naturaleza.

Las fuentes de nitrógeno incluyen además de la degradación natural de la materia
orgánica, fertilizantes, productos de limpieza y tratamiento de aguas potables.
Debido a que el nitrógeno es un nutriente esencial para organismos fotosintéticos, es

importante el monitoreo y control de descargas del mismo al ambiente.
En el método Kjeldahl los compuestos nitrogenados de la muestra se descomponen con

ácido sulfúrico concentrado en caliente, transformándose el nitrógeno de la mayoría de los
grupos funcionales orgánicos en amonio. Cuando la descomposición se ha completado la
disolución se enfría, se diluye y se alcaliniza con hidróxido de sodio concentrado. El
amoniaco liberado se destila y se adsorbe en una disolución de concentración conocida
de ácido bórico.
Los grupos amino y amido se convierten cuantitativamente a ión amonio. Sin embargo los
grupos nitro, azo o azoxi generan en las mismas condiciones, otros productos
nitrogenados (N2 u óxidos de nitrógeno).
REACTIVOS
a) Resistividad, megohm-cm a 25ºC: 0,2 min;

b) Conductividad, μS/cm a 25ºC: 5,0 máx., y
c) pH: 5,0 a 8,0.
Tetraborato de sodio decahidratado (Na2B4O7 •10H2O)
Hidróxido de sodio (NaOH)
Ácido sulfúrico concentrado (H2SO4)
Ácido bórico (H3BO3)
Indicador de rojo de metilo
Indicador de azul de metileno

Alcohol etílico (CH3CH2OH)
Sulfato de cobre (II) anhidro (CuSO4)
Sulfato de potasio (K2SO4)
Tiosulfato de sodio pentahidratado (Na2S2O3•5H2O)
Carbonato de sodio anhidro (Na2CO3), patrón primario
Cloruro de amonio (NH4Cl) patrón primario
Disolución indicadora de ácido bórico. Secar aproximadamente 30 g de ácido bórico en un

desecador que contenga sílica gel como desecante por 24 h. Pesar aproximadamente
20,0 g de ácido bórico seco disolver en 500 mL agua, agregar 10 mL de la mezcla de
indicadores y diluir a 1 L. Guardar la disolución en un envase de plástico o en un
contenedor libre de boro, preparar mensualmente.
Disolución de tetraborato de sodio (0,025M). Pesar aproximadamente pero con precisión

9,50 g de tetraborato de sodio decahidratado en 50 mL de agua y llevar a 1 L con agua
posteriormente.
Disolución amortiguadora de boratos. Añada 88 mL de la disolución de NaOH 0,10 N a

500 mL de disolución de tetraborato de sodio 0,025 M (ver inciso 4.14) y diluya a 1 L en
un matraz aforado.
Disolución de hidróxido de sodio (0,10 N). Pesar aproximadamente 4,0 g de hidróxido de

sodio y disolver en 500 mL de agua, dejar enfriar a temperatura ambiente y llevar a 1 L.
Disolución valorada de ácido sulfúrico (0,02 N). Preparar una disolución de ácido sulfúrico
aproximadamente 0,1 N diluyendo 3 mL de ácido sulfúrico concentrado en 1 L de agua.
Diluir 200 mL de esta disolución en 1 L de agua. Titular el ácido sulfúrico
aproximadamente 0,02 N con carbonato de sodio, pesando aproximadamente y con
precisión 0,031 8 g de carbonato de sodio anhídro, secado en horno a 140°C. Calcular la
normalidad exacta de la disolución (1 mL = 0,28 mg de N-amoniacal).
Mezcla de indicadores. Pesar aproximadamente 200,0 mg de indicador rojo de metilo

aforar a 100 mL con alcohol etílico. Pesar aproximadamente 100,0 mg de indicador azul
de metileno y aforar a 50 mL con alcohol etílico. Mezclar las dos disoluciones en un frasco
de vidrio. Preparar mensualmente.
Reactivo para la digestión. Pesar aproximadamente y con precisión 134,0 g de sulfato de

potasio y 7,3 g de sulfato de cobre (II) anhidro disolver en 800 mL de agua destilada libre
de amoniaco, agregar cuidadosamente 134 mL de ácido sulfúrico concentrado. Dejar
enfriar a temperatura ambiente y diluir la mezcla a 1 L con agua. Almacenar la disolución
a una temperatura de 20ºC para evitar la cristalización.
Disolución reactivo de hidróxido - tiosulfato de sodio. Pesar aproximadamente y con

precisión 500,0 g de hidróxido de sodio y 25,0 g de tiosulfato de sodio pentahidratado
disolver en agua libre de amoniaco y llevar a 1 L.

Disolución de hidróxido de sodio (6 N). Pesar aproximadamente 240,0 g de hidróxido de

sodio y llevar a 1 L con agua libre de amoniaco.
Disolución madre de amonio (1 mL = 1,0 mg de nitrógeno amoniacal). Pesar

aproximadamente y con precisión 3,819 g de cloruro de amonio y aforar a 1 L con agua.
Disolución patrón de amonio (1,0 mL = 0,01 mg de nitrógeno amoniacal). Tomar una

alícuota de 10,0 mL de la disolución madre de amonio y aforar a 1 L con agua.
MATERIAL Y EQUIPO
EQUIPO
 Sólo se mencionan los equipos y materiales que son de relevancia para el presente
método.
 Para determinación de nitrógeno tipo Kjeldahl que consta de: Digestor con sistema de
extracción de humos y destilador con sistema de condensación para mantener la
temperatura por abajo de 29°C.
 Potenciómetro para medición de pH reproducible hasta 0,02 unidades de pH, con

compensador de la temperatura y sus respectivos electrodos.
 Balanza analítica con precisión de 0,1 mg
 Balanza granataria con precisión de 0,1 g
MATERIALES
 Todo el material usado en esta determinación debe ser exclusivo para este
procedimiento. Para el lavado del material remojar durante 1 h en una disolución de
ácido sulfúrico al 10 % y enjuagar con agua desionizada. Los detergentes con base de
hidróxido de amonio o amoniaco no deben usarse para la limpieza del material. Su
uso debe restringirse dentro del laboratorio.
 Todo el material volumétrico utilizado en este método debe ser clase A con certificado
 en su caso debe estar calibrado.
 Frasco de polietileno o vidrio con tapa de 2 L de capacidad
 Matraz tipo Kjeldahl de 800 mL
 Bureta
RECOLECCIÓN, PRESERVACIÓN Y ALMACENAMIENTO DE MUESTRAS
 Deben tomarse un mínimo de 2,0 L de muestra en un envase de polietileno. Pueden

utilizarse muestras compuestas o simples.

 Debe preservarse la muestra con ácido sulfúrico a un pH de 1,5 a 2,0.
 Posteriormente mantener a 4ºC hasta su análisis.
 El tiempo máximo de almacenamiento previo al análisis es de 7 días.
PROCEDIMIENTO
Limpiar el equipo de destilación antes de utilizarlo, destilando una mezcla (1:1) agua-
disolución hidróxido - tiosulfato de sodio (ver inciso 4.20) hasta que el destilado esté libre
de amonio. Repetir esta operación cada vez que el equipo se vaya a utilizar, si no se
emplea en intervalos de menos de 4 h también se requiere realizar esta operación.
Selección de volumen de muestra: Determinar el volumen de la muestra de acuerdo a la

tabla 1, si es necesario, ajustar el volumen aproximadamente 500 mL y neutralizar a pH 7.
Colocar la muestra medida en un matraz Kjeldahl de 800 mL.
TABLA 1.- Selección del volumen de muestra
NITRÓGENO AMONIACAL
Tomar una muestra dependiendo de las concentraciones esperadas, de acuerdo a la tabla

1 diluir con agua hasta 500 mL. Preparar un blanco con 500 mL de agua y darle el mismo
tratamiento que a la muestra como sigue:
Añadir 25 mL de la disolución amortiguadora de boratos y ajustar el pH a 9,5 con

disolución de hidróxido de sodio 6 N utilizando potenciómetro o papel indicador para
verificar. Transferir la disolución a un matraz Kjeldahl y añadir unas cuentas de vidrio o
perlas de ebullición.
Conectar el matraz Kjeldahl al bulbo del aparato de destilación, destilar la muestra

cuidando que la temperatura del condensador no pase de 302 K (29°C), recolectando el
condensado con la punta del tubo del refrigerante sumergido en 50 mL de la disolución
amortiguadora de boratos.
La destilación se completa cuando se hayan recolectado 300 mL de destilado

aproximadamente, incluyendo los 50 mL de la disolución amortiguadora de Boratos con
la disolución mezcla de indicadores.

Retirar el matraz colector y titular con solución de ácido sulfúrico 0,02 N hasta que la
solución vire de un verde esmeralda a morado.
Nitrógeno orgánico Enfriar el residuo contenido en el matraz Kjeldahl. Digestión:

Adicionar cuidadosamente 50 mL de reactivo para la digestión al matraz de destilación y
mezclar perfectamente. Añadir unas cuentas de vidrio o piedras de ebullición. Si se
encuentran presentes grandes cantidades de materia orgánica libre de nitrógeno adicionar
50 mL de reactivo de digestión por cada gramo de materia sólida en la muestra.
Mezclar y calentar a ebullición bajo una campana de extracción, (eliminar los vapores de
SO3) hasta que el volumen de la disolución se reduzca aproximadamente entre 25 mL y
50 mL y se observe gran desprendimiento de vapores blancos (estos vapores pueden
oscurecerse cuando la muestra presenta grandes cantidades de materia orgánica).
Continuar la digestión durante 30 min más. En este período, la disolución cambia de turbia
hasta ser transparente e incolora o con una ligera coloración amarillo pálido. Durante la
digestión el matraz Kjeldahl debe permanecer inclinado. Enfriar el matraz y su contenido,
diluir a 300 mL con agua y mezclar.
Cuidadosamente añadir 50 mL de la disolución de hidróxido-tiosulfato de sodio (ver inciso

4.20), para formar una capa alcalina en el fondo del matraz, conectar el matraz a un
equipo de destilación y sumergir la punta del condensador en un matraz que contenga 50
mL de disolución de ácido bórico (ver inciso 4.13) y la mezcla de indicadores por abajo del
nivel de esta disolución. Agitar hasta asegurarse que está completamente mezclado, el
pH de la disolución debe ser mayor a 11,0.
Destilación: Destilar y colectar aproximadamente 200 mL de destilado, no permitir que la

temperatura en el condensador suba por arriba de 29ºC. Cuando se alcance un volumen
aproximado de 250 mL en el matraz colector del destilado, sacar la punta del
condensador del destilado sin retirarlo del matraz y continuar la destilación durante 1 min
o 2 min para limpiar el condensador.
Titulación del destilado: Titular el volumen destilado con disolución valorada de ácido
sulfúrico 0,02 N hasta el cambio del indicador de verde esmeralda a morado.
Blanco
Llevar un blanco durante todos los pasos del método.
CÁLCULOS
Usar la siguiente ecuación para calcular la concentración de nitrógeno total

Donde:
A son los mL de ácido sulfúrico gastados en la titulación de la muestra;

B son los mL de ácido sulfúrico gastados en el blanco;
N es la normalidad del ácido sulfúrico;
V son los mL de muestra, y
14 es el peso equivalente del nitrógeno.

PRÁCTICA NO 12
DETERMINACIÓN DE NITRITOS EN AGUAS NATURALES Y

RESIDUALES -MÉTODOS DE PRUEBA
INTRODUCCIÓN
El nitrito considerado como una etapa intermedia en el ciclo del nitrógeno puede estar
presente en el agua como resultado de la descomposición biológica de materiales
protéicos. En aguas superficiales crudas, las huellas de nitritos indican contaminación.
También se puede producir el nitrito en las plantas de tratamiento o en los sistemas de
distribución de agua, como resultado de la acción de bacterias sobre el nitrógeno
amoniacal.
El nitrito puede entrar en un sistema de abastecimiento a través de su uso como inhibidor

de corrosión en agua de proceso industrial. El nitrito es un agente etiológico potencial de
metahemoglobinemia. El ácido nitroso, que se forma de nitritos en solución ácida, puede
reaccionar con aminas secundarias ( RR'-NH ) para formar nitrosaminas ( RR'-N-N=0 )
muchas de las cuales son conocidas por ser potentes agentes carcinogénicos.
El nitrógeno de nitritos rara vez aparece en concentraciones mayores a 1 mg/L aún en

efluentes de plantas de tratamiento municipales. Su concentración en aguas superficiales
y subterraneas es normalmente más baja de 0,1 mg/L Debido a que el nitrógeno es un
nutriente esencial para organismos fotosintéticos, es importante el monitoreo y control de
descargas del mismo al ambiente.
El principio del método consiste en que los nitritos presentes reaccionan en medio ácido
(pH = 1,9 a 2,5), para formar ácido nitroso que reacciona con la sulfanilamida por una
reacción de diazoación para formar una sal de diazonio, la cual por copulación con el
diclorhidrato de N-(1-Naftil ) etilendiamina forma un colorante azóico de color purpura
rojizo que se mide espectrofotométricamente a 543 nm.
El sistema de unidades utilizado en la presente norma debe cumplir con lo establecido en

la norma oficial mexicana NOM-008-SCFI (ver 2 Referencias).
OBJETIVO:
El estudiante conocerá un método de prueba espectrofotométrico para la determinación

de nitrógeno de nitritos, en agua natural, residual y residual tratada, en un intervalo de
0,01 mg/L a 1 mg/L de N-N02
PATRONES

Resistividad: megohm-cm a 25 ºC: 0,2 Mín.
Conductividad: μS/cm a 25 ºC: 5,0 Máx.
pH: 5,0 a 8,0
Hidróxido de amonio (NH4OH) concentrado.
Suspensión clarificadora de hidróxido de aluminio: Disolver 125 g de sulfato de

aluminio y potasio (AlK(SO4).12H2O) ó de sulfato de aluminio y amonio
(AlNH4(sO4)2.12H2O) en 1 L de agua. Calentar a 60 °C y adicionar 5 mL de NH4OH
concentrado lentamente con agitación, dejar que la mezcla repose 3 h y decantar. Lavar
el precipitado con adiciones sucesivas de agua destilada con mezclado manual y
decantación hasta que se encuentre libre de olores amoniacales. Decantar la mayor
cantidad posible de agua y almacenar la suspensión concentrada, en un frasco
herméticamente cerrado.
Disolución de Ácido sulfúrico (H2SO4) 1N: Diluir 30 mL de H2SO4 concentrado y llevar a

volumen de 1 000 mL con agua.
Disolución de hidróxido de sodio (NaOH) 1N: Pesar 40 g de NaOH, disolverlos y llevar

a volumen de 1 000 mL con agua.
Ácido clorhídrico. (HCl) concentrado: Disolución de sulfanilamida (NH2C6H4SO2NH2); 4

aminobencensulfonamida Disolver 5,0 g de sulfanilamida en una mezcla de 50 mL de HCl
y 300 mL de agua, y llevar a volumen de 500 mL con agua.
La disolución es estable por varios meses debe de almacenarse en frasco ambar y en

refrigeración a 4°C ± 2ºC.
Disolución de diclorhidrato de N-(1-naftil) etilendiamina (C10H7NH-CH2

NH2.2HCl),NEDA Disolver 500 mg de NEDA y llevar a volumen de 500 mL con agua,
almacenar en frasco ámbar y poner en refrigeración a 4°C ± 2ºC. Renovar la disolución
mensualmente o si aparece un color café intenso.
“Precaución: este reactivo es tóxico. Debe evitarse su ingestión o contacto con la piel.”
Ácido sulfúrico concentrado (H2SO4)
Disolución de oxalato de sodio (Na2C2O4) 0,05 N (Patrón primario): Secar

aproximadamente 6 g de (Na2C2O4) a 105ºC por lo menos 1 h; pesar 3,35 g disolver y
llevar al volumen de 1 000 mL con agua.
Disolución de permanganato de potasio (KMnO4) 0,05 N: Disolver 1,60 g (de KMnO4) y

llevar al volumen de 1 000 mL con agua, almacenarlo en frasco ámbar.

Valoración de la disolución. Medir 25 mL de la disolución de oxalato de sodio (5.9)

agregar 10 mL de (H2SO4) concentrado (5.8) calentar a 80ºC, titular con la disolución de
(KMnO4) hasta la obtención de un color rosa tenue estable por 30 s.
Calcular la concentración de (KMnO4) (N1) con la siguiente ecuación:
Donde:
V1 = volumen de la disolución de (KMnO4) gastado en la titulación, en mL;
V2 = volumen de la disolución de (Na2C2O4) (0,05N) empleado para la titulación, en mL,
N2 = la concentración de la disolución ( Na2C2O4) (0,05N).
NOTA.- Para simplicidad de los cálculos, la concentración de las disoluciones se expresa como normalidad
(N); la equivalencia con la concentración molar ( mol/L ) empleada en el Sistema Internacional de Unidades
debe involucrar la estequiometría de la reacción de óxido-reducción que se realiza.
+ -2 + -2
2 MnO4 + 5 C2O4 + 16 H ------> 2 Mn + 10CO2 + 8 H2O
Disolución madre de nitritos ( 250 mg/L ): Secar aproximadamente 5 g de nitrito de

sodio (NaNO2) por lo menos 2 h a 105ºC; pesar 1,232 0 g de este reactivo, disolverlo y
llevar a volumen de 1 000 mL con agua. Preservar con 1 mL de cloroformo. 1,0 mL = 250
μg de N-NO2.
Valoración de la disolución. Tomar 50 mL de la disolución de (KMnO4) (5.10); transferir

a un matraz erlenmeyer de 250 mL, agregar 5 mL de H2SO4 concentrado (5.8) y 50 mL
de la disolución madre de nitritos de tal forma que la pipeta descargue bajo la superficie
de la disolución en el matraz, agitar y calentar hasta 80 ºC, titular con la disolución de
oxalato de sodio (5.9) hasta decoloración, retitular el exceso de oxalato con la disolución
de KMnO4 (5.10) hasta la obtención de un color rosa tenue estable por 30 s. Calcular la
concentración de la disolución madre de nitritos (Co) en mg/L con la siguiente ecuación:
Donde:
N1 es la concentración de la disolución de KMnO4 (0,05N);
N2 es la concentración de la disolución de Na2C2O4 (0,05N);

V1 es el volumen de la disolución de KMnO4 adicionado para la valoración de 50 mL más

el volumen empleado en la retitilación;
V2 es el volumen de la disolución de Na2C2O4 gastado en la valoración en mL;
V3 es el volumen de la disolución madre de nitritos que se valora ( 50 mL);
7 es el peso equivalente del nitrógeno, y
1 000 es el factor de conversión.
Disolución intermedia de nitritos ( 50 mg/L)
Calcular el volumen (V) de la disolución madre de nitritos de manera que la alicuota

contenga 12,5 mg de nitrógeno de nitritos, requerido para la disolución intermedia por
medio de la siguiente ecuación.
donde :
Co es la concentración de la disolución madre de nitritos en mg/L.
Medir el volumen calculado (V) (aproximadamente 50 mL) de la disolución madre de

nitritos (5.11), diluir y llevar a volumen de 250 mL con agua. 1mL = 50 μg de N-N02.
Disolución patrón de nitritos ( 0,5 mg/L.): Diluir 10 mL de la disolución intermedia de

nitritos (5.12) y llevar a volumen de 1 000 mL con agua.
1 mL = 0,5 μg de N-N02
NOTA.- Esta disolución debe ser preparada momentos antes de utilizarse.
MATERIAL Y EQUIPO
Espectrofotómetro o fotocolorimetro con filtro para leer a 543 nm, con celdas de paso de
luz de 1 cm a 10 cm.
Balanza analítica con precisión de 0,1 mg.
Balanza granataria con precisión de 0,1 g.
pHmetro.
Todo el material volumétrico utilizado en este método debe ser clase A.

Frasco de polietileno o vidrio con tapa de 2 L de capacidad.
Membrana filtrante de 0,45 μm.
Filtros de fibra de vidrio con diámetro de poro de 0,7 μm
Papel filtro de poro medio.
Electrodo combinado de vidrio.
CONTROL DE CALIDAD
Cada laboratorio que utilice este método está obligado a operar un programa de control
de calidad (CC) formal.
Es obligatorio para el laboratorio mantener los siguientes registros:
control de calidad que verificó los análisis.
siguientes datos:
a) Identificación de la muestra
b) Fecha del análisis
c) Procedimiento cronológico utilizado
d) Cantidad de muestra utilizada
e) Número de muestras de control de calidad analizadas
f) Trazabilidad de las calibraciones de los instrumentos de medición
g) Evidencia de la aceptación o rechazo de los resultados
h) Además el laboratorio debe mantener la información original reportada por los

equipos en disquetes o en otros respaldos de información.
PROCEDIMIENTO
1 Pre tratamiento de la muestra: La muestra debe estar libre de turbiedad y color, para
lograr esto, filtrarla a tráves de membranas de 0,45 μm de poro, filtros de fibra de
vidrio de 0,7 μm de poro o adicionar 2 mL o la cantidad necesaria de suspensión
clarificadora (5.2) según sea el caso, a aproximadamente 100 mL de muestra con

agitación y filtrarla a través de papel de poro medio. Si existe color en la muestra

continuar con el procedimiento y efectuar la corrección por color establecida en el
punto 9.
2 Neutralizar el filtrado a un pH aproximado de 7,0 con H2S04 1N o Na0H 1N
3 Porción de muestra: De la disolución obtenida en 10.1 tomar una porción de

muestra, dependiendo del contenido esperado de nitritos según la tabla No. 1
TABLA 1.- Selección del volumen de muestra
4 Con una pipeta volumétrica tomar 50 mL de la muestra o lo que indica la tabla y

transferirla a un matraz Erlenmeyer o tubo Nessler. En caso de realizar diluciones,
tomar el volumen de muestra con pipeta volumétrica y depositarlo en un matraz
volumétrico de 50 mL, llevar a la marca de aforo con agua y posteriormente vertir el
contenido en un matraz Erlenmeyer o tubo Nessler. En donde se llevará al cabo el
desarrollo del color.
5 Adicionar 1 mL de la disolución de sulfanilamida (5.6), y agitar varias veces. Permitir

que la mezcla reaccione de 2 min a 8 min.
6 Adicionar 1 mL de NEDA (5.7), y agitar varias veces, revisar que el pH esté entre 1,9 y
2,5
7 Dejar reposar por lo menos 10 min pero no más de 1 h, la presencia de nitritos

desarrolla una coloración púrpura.
8 Leer la absorbancia a 543 nm.
9 Corrección por color. Si el color de la muestra pretratada persiste, puede interferir

con la medición de la absorbancia. Tratar otro volumen igual de muestra como se
describe en 10.2. En lugar de agregar las soluciones de sulfanilamida y NEDA,
adicionar 1 mL de HCl al 10 % y leer la absorbancia.
10 Corregir la absorbancia de la muestra por medio de la ecuación :

donde :
A es la absorbancia corregida;
Am es la absorbancia de la muestra determinada;
Ab es la absorbancia del blanco, y
Ac es la absorbancia de la muestra empleada para corrección, de color. En caso de

muestras incoloras Ac=0.
11 Curva de calibración: En matraces volumétricos de 50 mL preparar una serie de al

menos cinco patrones que contengan 1,0 μg de N-N02, 2,0 μg de N-N02, 3,0 μg de N-
N02, 4,0 μg de N-N02, 5,0, μg de N-N02 a partir de la disolución patrón de nitritos
(5.13) llevar a la marca con agua y proseguir como en (10.4, 10.5, 10.6 y 10.7)
12 Blanco: Llevar un blanco durante todos los pasos del método ya sea cuando se
prepare curva de calibración o cuando se analicen muestras.
CÁLCULOS
Calcular la concentración de la muestra por medio de la ecuación de la recta que se

obtiene de las curvas de calibración empleando la siguiente ecuación:
y = mX + b
donde :
y es la absorbancia de la muestra;
m es la pendiente, y
b es la ordenada al origen.
Despejar X que serán μg de N-N02 . Para calcular la concentración de la muestra tomar

en cuenta los factores de dilución que se realicen.
Reportar los resultados como mg/L de N-N02.
INTERFERENCIAS
Por su propiedad de precipitación en las condiciones de la prueba interfieren los iones

siguientes: férrico (Fe3+), mercuroso (Hg+), plata (Ag+), bismuto (Bi+), antimonioso
(Sb3+), plomo (Pb2+), aúrico (Au3+),hexacloroplatinato (PtCl62-) y metavanadato
(VO32+). Interfieren el método ciertas sustancias frecuentemente encontradas en
muestras de agua, principalmente: cloraminas, tiosulfatos, polifosfatos de sodio, entre
otras.
NOTA.- Se recomienda emplear matrices fortificadas para verificar las interferencias.

SEGURIDAD
substancias químicas especificadas en éste método. Debe tenerse un archivo de
referencia de las hojas de información de seguridad el cual debe estar disponible a todo el
personal involucrado en estos análisis.
Los ácidos y bases concentradas empleados en este método pueden causar severas
quemaduras e irritaciones en la piel, por lo que debe utilizarse ropa protectora tal como:
batas, guantes y lentes de seguridad cuando se manejan estos compuestos químicos.
El hidróxido de sodio en contacto con los ojos o piel, puede causar severa irritación o
quemaduras. La inhalación de vapores puede causar tos, dolor en el pecho, dificultad
para respirar o estado de inconsciencia.
La preparación de todos los reactivos usados en este método debe realizarse bajo una
campana de extracción. Consultar las hojas de seguridad sobre manipulación y
disposición de éstos.
Cuando se trabaje con cualquiera de los compuestos químicos descritos en este método,
debe usarse todo el tiempo equipo de seguridad tal como: guantes de látex, bata de
laboratorio así como anteojos de seguridad.
MANEJO DE RESIDUOS
Es la responsabilidad del laboratorio cumplir con todos los reglamentos federales,

estatales y locales referente al manejo de residuos, particularmente las reglas de
identificación, almacenamiento y disposición de residuos peligrosos.
Cada laboratorio debe contemplar dentro de su Programa de Control de Calidad el destino

final de los residuos generados durante la determinación.
Los desechos ácidos se deben neutralizar para su posterior desecho.
Todas las muestras que cumplan con la Norma de descarga a alcantarillado pueden
descargarse en el mismo sistema.

BIBLIOGRAFÍA
Ley Aguas Nacionales, publicada en el Diario Oficial de la Federación el 1° de diciembre

de 1992.
NOM-001-SEMARNAT-1996 Que establece los límites máximos permisibles de

contaminantes en las descargas de aguas residuales en aguas y bienes nacionales.,
publicada en el Diario Oficial de la Federación el 6 de enero de 1997.
NMX-AA-099-1987 Protección al ambiente - Calidad del agua - Determinación de

nitrógeno de nitritos en agua. Declaratoria de vigencia publicada en el Diario Oficial de la
Federación el 11 de febrero de 1987.
NMX-Z-013/1-1977 Guía para la Redacción, Estructuración y Presentación de las Normas

Mexicanas. Declaratoria de vigencia publicada en el Diario Oficial de la Federación el 31
de octubre de 1977.
Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater 20th Edition 1998, 4500-
NO2- B Colorimetric Method.

Manual de Prácticas Iamb

Uploaded by

Document Information

Original Title

Copyright

Available Formats

Share this document

Share or Embed Document

Sharing Options

Did you find this document useful?

Is this content inappropriate?

Copyright:

Available Formats

Manual de Prácticas Iamb

Uploaded by

Copyright:

Available Formats

MANUAL DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO DE INGENIERÍA AMBIENTAL I ITSM

ACADEMIA DE INGENIERÍA AMBIENTAL

Introducción al laboratorio y selección de la bitácora………………………….. 4

Determinación de sólidos sedimentables.……………….………………………. 20

Coliformes totales y fecales en agua de consumo humano….……………………… 24

Coliformes, coliformes totales y fecales en agua residual………………..…………. 38

Determinación de la Demanda Bioquímica de Oxígeno (DBO5) …………………… 46

Determinación de la Demanda Química de Oxígeno……………………………….. 58

Determinación de Dureza. …………………………………………………………... 63

Determinación de Alcalinidad Total………………………………………………….. 67

Determinación de Nitrógeno Total Kjeldahl………………………………………….. 77

Determinación de Nitritos en Aguas Naturales y Residuales……………………….. 83

ACADEMIA DE INGENIERÍA AMBIENTAL

Con la colaboración de la Ingeniera Ambiental Graciela G. Jiménez Guinto y el Ingeniero

Contar con un manual de consulta que permita el desarrollo, individual y colectivo de

 Reforzar el conocimiento sobre los problemas ambientales en los aspectos de

 Impulsar la investigación sobre los problemas ambientales en los aspectos de agua

 Brindar un servicio serio y profesional de análisis de agua, suelo y aire a

ACADEMIA DE INGENIERÍA AMBIENTAL

INTRODUCCIÓN AL LABORATORIO Y SELECCIÓN DEL LIBRO DE

El libro de bitácora es el diario de trabajo donde se describen las acciones cotidianas de la

La investigación bibliográfica es una compilación de los hallazgos precedentes que sobre

ACADEMIA DE INGENIERÍA AMBIENTAL

DISEÑO DE PROTOCOLOS Y REPORTES.

En la Metodología se deben describir en detalle escrupuloso los métodos, los materiales,

ACADEMIA DE INGENIERÍA AMBIENTAL

Otro aspecto a considerar es la forma o tipo de cuaderno, libro o libreta en la que se

ACADEMIA DE INGENIERÍA AMBIENTAL

LA REDACCIÓN DE LAS NOTAS

ACADEMIA DE INGENIERÍA AMBIENTAL

Una vez seleccionados el libro de bitácora y el instrumento de escritura, se puede

Una característica común de la redacción técnica y científica, que también la distingue de

Otra propiedad de la redacción de un escrito técnico es el manejo de los tiempos. Si se

Lo primero a escribir en una bitácora de trabajo, son los datos de identificación de la

ACADEMIA DE INGENIERÍA AMBIENTAL

de trabajo, domicilio y teléfono institucionales y/o particulares. Esto último es fundamental

Otra información que debe encontrarse en el libro de bitácora es la relacionada con la

El primer capítulo en las anotaciones de un trabajo en el libro de bitácora y en el informe

Lo que caracteriza a cualquier trabajo científico o tecnológico, y que lo distingue de otras

En la Metodología se debe describir en detalle escrupuloso los métodos, los materiales, el

Finalmente, las anotaciones del trabajo de laboratorio se acompañan con Comentarios

Seguridad, en este caso se refiere fundamentalmente a la previsión, la precaución y el

El ácido sulfúrico concentrado, por ejemplo, representa un riesgo en potencia. Cuando es

Algo indispensable para toda persona que se encuentre desarrollando trabajos en

MATERIAL CON QUE DEBE CONTAR TODO EL SEMESTRE.

 Gogles o anteojos neutros de policarbonato o vidrio endurecido con protección

ACADEMIA DE INGENIERÍA AMBIENTAL

 Cinco frascos de vidrio de ~100 ml con tapa metálica (jugo Gerber)*

 Anteojos de policarbonato o monogogles

ACADEMIA DE INGENIERÍA AMBIENTAL

 Revise que las llaves de aire comprimido estén cerradas

1 Revise que la campana de extracción esté encendida.

Neutralice lentamente los residuos ácidos (ver Forma de desechar)

LAVE Y ENJUAGUE EL MATERIAL

ACADEMIA DE INGENIERÍA AMBIENTAL

1 Seque el material con papel o con franela

1 Realice una investigación sobre medidas de Seguridad química.

 Cole-Parmer 97-98. Cole-Parmer Instrument Company, Vernon Hills, IL. 1996.

ACADEMIA DE INGENIERÍA AMBIENTAL

El principio básico de la medida electrométrica del pH se fundamenta en el registro

La fuerza electromotriz (fem) producida por el sistema electroquímico varía linealmente

El método es aplicable a aguas potables, superficiales, y salinas, aguas residuales

El electrodo de vidrio está libre de interferencias debidas a color, turbidez, material