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NOMBRE: JUAN ANTONIO SÁNCHEZ RAMÍREZ

MATERIA: FUNDAMENTOS DE MICROBIOLOGÍA


GRUPO: 1220301
PROFESOR: RICARDO RENE SÁNCHEZ

MATERIAL DE USOS FOTOGRAFÍA COSTO


LABORATORIO
Toallas de Bactericida/Fungicida/Virucida/ $69.00
desinfección Tuberculocida/Levuricida
Perfecto para laboratorios,
hospitales, toma de muestras, uso
doméstico

Liquido de inhibición Solución de inhibición de algas Para $199.00


de algas baños María, aguas de piscina...
Amonio cuaternario, forma un
complejo con calcio, conservante

Contador automático Contador automático de colonias y $32,080.00


de colonias un lector de zonas de inhibición de
ultra AD para la lectura por color de
colonias y de zonas de inhibición. Se
adapta a cualquier tamaño de placas
de Petri y de medios y su sistema de
iluminación garantiza al usuario una
gran comodidad, alta precisión y una
excelente reproducibilidad
Diluidor y sembrador Es un equipo 2 en 1 que permite $43,715.09
automático realizar diluciones seriadas y
siembras automáticamente. Permite
hacer diluciones seriadas de 10-5 y
una siembra automática en 1 placa
de Petri con una sensibilidad de 30
hasta 1x1012 CFU/mL.
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Termoselladora de Garantiza un sellado hermético de $21,049.70


Bolsas Esteriles todo tipo de bolsa (con/sin filtro)
gracias a un excelente cierre
estanco.

Soporte de cajas Petri Asegura una manipulación segura, $185.00


el transporte y el almacenamiento de
las placas de Petri.

Micro pipeta Para verter medios de cultivo $1796.59


líquidos en cualquier recipiente

Diluidor Gravimétrico Se usa para la dilución automática $80,000


de una muestra sólida con el peso
adecuado de diluyente. Sus
características de trazabilidad
permiten registrar todas las
operaciones.
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Tubos de ensayo 10 Tubo de ensayo es un instrumento $220.00


mL de laboratorio que se utiliza
principalmente como contenedor de
líquidos y sólidos a las cuales se les
va a someter a reacciones químicas
u otras pruebas.

Matraz Erlenmeyer Para calentar líquidos cuando hay $353.00


250 mL peligro de pérdida por evaporación

Vaso de precipitados Se utiliza muy comúnmente en el $102.75


250 mL laboratorio, sobre todo, para
preparar o calentar sustancias,
medir o traspasar líquidos

Cajas petri Se utiliza en los laboratorios $53.00


principalmente para cultivar
bacterias y otros microorganismos,
soliéndose cubrir el fondo con
distintos medios de cultivo (por
ejemplo agar, que entonces suele
llamarse placa de agar) según el
microorganismo que se quiera
cultivar.
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Espátula Se utiliza para tomar pequeñas $60.00


cantidades de compuestos que son,
básicamente, polvo. Se suele
clasificar dentro del material de
metal y es común encontrar en
recetas técnicas el término punta
de espátula para referirse a esa
cantidad aproximadamente

Vidrio de reloj Se utiliza en química para evaporar $25.00


líquidos, pesar productos sólidos,
como cubierta de vasos de
precipitados, y para contener
sustancias parcialmente corrosivas.
Es de tamaño medio y muy delicado.

Asa bacteriológica sirve para la realización de frotis $45.00

Agitador de vidrio sirve para mezclar o revolver por $20.00


medio de la agitación de algunas
sustancias. También sirve para
introducir sustancias líquidas de alta
reacción por medio de escurrimiento
y evitar accidentes.
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Mechero bunsen utilizado en laboratorios científicos $99.00


para calentar o esterilizar muestras
o reactivos químicos, proporciona
una llama caliente, constante y sin
humo

Gradillas Para soporte de tubos de ensaye $118.00

Microscopio óptico permite observar en un tamaño $3999.00


aumentado elementos que son
imperceptibles a simple vista.
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Centrifuga Aparato que aplica sobre los tubos $4360.00


una fuerza centrífuga lo que permite
la separación de los distintos
componentes de la muestra
mediante la precipitación en el fondo
del tubo de las partículas en
suspensión.

Balanza La balanza es un instrumento que $10,499.00


sirve para medir la masa. La balanza
analítica es una clase de balanza
utilizada principalmente para medir
pequeñas masas. Este tipo de
balanza es uno de los instrumentos
de medida más usados en
laboratorio y de la cual dependen
básicamente todos los resultados
analíticos.
Potenciómetro El pH-metro es un sensor utilizado $5,450.00
en el método electroquímico para
medir el pH de una disolución. La
determinación de pH consiste en
medir el potencial que se desarrolla
a través de una fina membrana de
vidrio que separa dos soluciones
con diferente concentración de
protones
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Pipeta de vidrio La pipeta es un instrumento $245.18


volumétrico de laboratorio que
permite medir la alícuota de un
líquido con mucha precisión. Suelen
ser de vidrio o plástico.

MEDIOS DE CULTIVO

MICROORGANISMO QUE
MEDIO DE CULTIVO FOTOGRAFÍA
PUEDE CRECER

TODOS LOS
C.S. AGAR NUTRITIVO MICROORGANISMOS YA
QUE STOS
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C.S. BASE AGAR

AGAR INFUSION
CEREBRO
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Brucella,
Corynebacterium,
Listeria,
AGAR SANGRE
Neisseria y
Vibrio.

AGAR CHOCOLATE Haemophilus influenzae


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Ciertos microorganismos
entéricos fermentan con
mayor facilidad la sacarosa
que la lactosa3. BD EMB
AGAR EOSINA AZUL DE Agar, Modified contiene
METILENO
colorantes de azul
de metileno yeosina Y, que
inhiben las bacterias gram-
positivas en cierto grado.

Bacterias que no fermenten


la lactosa como lo
son Salmonella, Proteus y
Shigella utilizaran peptona en
AGAR MACCONKEY su lugar, formando amoníaco,
lo cual incrementa el pH del
agar,
formando colonias blancas
o incoloras.

PARA LA ESTERILIZACION DE MEDIOS DE CULTIVO, SE TRABAJO EN CONJUNTO CON LA


MATERIA DE ANALISIS DE BIOPROCESOS, PARA REALIZAR LA PRACTICA PERTINENTE
DENTRO DEL LABORATORIO DE BIOTECNOLOGIA EL DIA 13/FEB/19, SE OBTUVIERON LOS
SIGUIENTES RESULTADOS
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MÉTODO DE ESTERILIZACIÓN PARA LA PREPARACIÓN DE


MEDIOS DE CULTIVO
AUTOR:
SÁNCHEZ RAMÍREZ JUAN ANTONIO
Universidad Politécnica del Valle de México, División de Ingeniería en Biotecnología
Contacto: q.antonio_sanchez@outlook.com
Entrega: 15 / Feb / 2019

RESUMEN:
La esterilización es una operación destinada a soya y agar a 120°C durante 15 minutos, para
destruir todos los microorganismos de un la erradicación de microorganismos
objeto de forma duradera. El objetivo de la presentes. Después de esterilizar todo el
esterilización es doble: controlar los material se almacenó en refrigeración.
microorganismos y prevenir una eventual
PALABRAS CLAVE: Esterilización,
contaminación. microorganismos, controlar, prevenir,
resultados, autoclave.
La esterilización es importante en todos los
experimentos de laboratorio ya que con esto
ABSTRACT:
podemos contar con resultados confiables,
pues la presencia de microorganismos Sterilization is an operation designed to

alteraría nuestras reacciones y resultados. destroy all microorganisms of an object


lastingly. The goal of sterilization is twofold: to
El presente método de esta práctica
control microorganisms and prevent possible
comprende en la esterilización, la cual se llevó
contamination.
a cabo con el manejo del autoclave (recipiente
Sterilization is important in all laboratory
cilíndrico que genera presión con un cierre
experiments since with this we can count on
hermético), se esteriliza toda la
reliable results, because the presence of
instrumentación a utilizar, como cajas Petri,
microorganisms would alter our reactions and
tubos de ensayo, pipetas, caldo peptona de
results.
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The present method of this practice includes vapor de agua saturado, a una presión de 15
in sterilization, which was carried out with the libras lo que permite que la cámara alcance
use of the autoclave (cylindrical container that una temperatura de 121ºC. El tiempo de
generates pressure with a hermetic seal), esterilización usualmente es de 15 minutos,
sterilizes all the instrumentation to be used, sin embargo, en algunas oportunidades,
such as Petri dishes, test tubes, pipettes, dadas las características del material, es
peptone soy broth and agar at 120 ° C for 15 necesario variar el tiempo de esterilización. Al
minutes, for the eradication of microorganisms aplicar a un determinado material vapor de
present. After sterilizing all the material was agua a una presión de 15 lb (121ºC) por un
stored in refrigeration tiempo determinado, se produce la
destrucción total de los microorganismos
KEY WORDS: Sterilization, microorganisms, viables presentes en el mismo.
control, prevent, results, autoclave.
1.- ¿POR QUÉ DEBEMOS SEGUIR EL
INTRODUCCIÓN REGLAMENTO DE SEGURIDAD E HIGIENE
DENTRO DEL LABORATORIO DE
El calor húmedo destruye los
MICROBIOLOGÍA EXPERIMENTAL?
microorganismos por coagulación de sus
proteínas celulares. El principal método de
esterilización que emplea calor húmedo es Tenemos la obligación de conocer cuáles son

la esterilización por vapor a presión (método las normas de seguridad a seguir en el

del autoclave). laboratorio de manera tal, que el trabajo se


realice con un riesgo mínimo de exposición,
tanto para las personas que lo ejecutan como
Existen otros métodos de descontaminación
para el medio ambiente
que emplean este tipo de calor los cuales,
aunque no permiten la destrucción total de los
2.- ¿CREES QUE LAS MEDIDAS DE
microorganismos, disminuyen la carga
SEGURIDAD E HIGIENE QUE SE APLICAN
microbiana que posee un material. La
EN EL LABORATORIO DE
esterilización por vapor a presión se lleva a
MICROBIOLOGÍA EXPERIMENTAL SON
cabo en un autoclave. Estos equipos emplean
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LAS ADECUADAS PARA EL TRABAJO Durante la elaboración de la práctica se


PRÁCTICO? notaron las siguientes anomalías:

No, por la falta de material que nos puede El movernos de manera brusca y derramar
ayudar a hacer un accidente menos grave, reactivos, al igual que hablar demasiado
por el tiempo de exposición, como el mal mientras realizamos las prácticas.
funcionamiento de las regaderas de
emergencia, lavado de ojos, material Tener mayor cuidado, ser más cautelosos a la
caducado o en mal estado y la falta de hora de manejar los reactivos y hablar menos
suministros tanto de material como de (Gas, mientras ejercemos la práctica
electricidad, agua, drenaje). correspondiente.

3.- ¿CUÁL CREES QUE SEA LA OBJETIVOS


IMPORTANCIA A NIVEL PERSONAL DE
CUMPLIR CON LAS REGLAS DE GENERALES
SEGURIDAD E HIGIENE? 1. Aprender a limpiar y preparar el material
empleado en el laboratorio de microbiología.
Mantener nuestra salud e integridad 2. Conocer los diferentes tipos de
resguardada, de contraer alguna enfermedad esterilización de material del laboratorio.
a causa de agentes biopeligrosos, derrame de
sustancias corrosivas o nocivas para la salud. ESPECÍFICOS
1. Identificar el material de laboratorio, su
4.- ¿QUÉ MEDIDAS DE SEGURIDAD E función y su método de desinfección, al igual
HIGIENE CREES QUE NO SE CUMPLEN EN que el del área de trabajo.
LAS INSTALACIONES DEL LABORATORIO 2. Aprender a preparar el material para su
DE MICROBIOLOGÍA EXPERIMENTAL? esterilización por medio de calor húmedo.
¿CÓMO PODRÍAS MEJORARLAS? 3. Aprender a preparar el material para su
esterilización por medio de calor seco.

MARCO TEÓRICO
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ESTERILIZACIÓN el término esterilización y los métodos


Esterilización se define como la destrucción químicos en el concepto de desinfección.
completa o eliminación total de los
microorganismos patógenos y saprófitos que El método escogido para esterilizar un
se encuentran en el interior o en la superficie producto depende fundamentalmente de su
de objetos y sustancias. El criterio práctico de naturaleza y estabilidad frente al calor u otros
la esterilidad es la ausencia de crecimiento agentes esterilizantes.
microbiano en un medio adecuado.
ESTERILIZACIÓN FÍSICA: Este tipo de
LA IMPORTANCIA DE LA ESTERILIZACIÓN esterilización suele llevarse a cabo mediante
Buena parte de los experimentos realizados la aplicación de altas temperaturas. Puede ser
en laboratorios involucra la mezcla de por calor húmedo o calor seco
sustancias y sus correspondientes
reacciones. Para que estas reacciones sean MÉTODOS FÍSICOS
favorables o controladas se utilizan
cantidades específicas de sustancias 1. Calor seco (estufa u horno)
compatibles. 2. Calor Húmedo (autoclave)
Si el material de laboratorio cuenta con los 3. Radiaciones ionizantes (gamma, beta y
requerimientos de limpieza los experimentos ultravioleta)
son exitosos. Por el contrario, la presencia de 4. Ondas supersónicas (microondas
bacterias, virus o microorganismos puede odontológico)
alterar las reacciones y modificar los 5. Filtración
resultados. Para evitar esto, es necesario 6. Ebullición
aplicar algún método de esterilización al 7. Flameo
material de laboratorio. 8. Micro esferas de vidrio

MÉTODOS DE ESTERILIZACIÓN ESTERILIZACIÓN QUÍMICA. Para llevar a


La eliminación de los microorganismos puede cabo la esterilización química se utilizan
efectuarse mediante procesos físicos o sustancias, llamadas germicidas o biocidas.
químicos. Los métodos físicos se incluyen en Estas sustancias debilitan la membrana
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celular de los virus y bacterias atacándolos INDICADORES O CONTROLES


directamente. Los neutralizan y eliminan las QUÍMICOS. Son productos comerciales
condiciones favorables para su desarrollo. consistentes en sustancias químicas que
cambian de color (indicadores colorimétricos)
MÉTODOS QUÍMICOS: si se cumple un elemento clave del proceso
1. Óxido de etileno de esterilización, como por ejemplo la
2. Plasma de peróxido de hidrógeno temperatura necesaria.
3. Pastillas de formol
4. Soluciones químicas Algunos indicadores requieren más de un
parámetro, como cierto tiempo de exposición
MÉTODOS COMPROBATORIOS DE LA y humedad, para cambiar de color.
ESTERILIZACIÓN
MANEJO DEL AUTOCLAVE
INDICADORES O CONTROLES FÍSICOS. El
control de la esterilización mediante I. Debe haber suficiente agua destilada
indicadores físicos se lleva a cabo mediante en el fondo del autoclave.
su colocación en el interior del paquete a fin II. Colocar el material convenientemente
de comprobar la temperatura, el tiempo de tapado (algodón hidrófobo, gasa,
esterilización y la presión en un equipo papel kraft) en un cesto metálico.
determinado y para lo cual estos III. Cerrar herméticamente la tapa.
indicadores son calibrados a fin de detectar IV. Encender el sistema calórico y abrir la
cualquier fallo, mediante la incorporación de llave de escape para eliminar el aire
termómetros, manómetros, sensores de (que es desplazado por el propio
carga, etc., los cuales son de gran utilidad vapor), ya que si éste permanece en
pero no constituyen un medio eficaz para el interior alterará la relación
comprobar la esterilización y para lo cual se temperatura – presión.
hace necesario usar como V. Asegurarse que salga todo el aire
complemento controles biológicos y demás residual (hasta que comience a salir
métodos de control. vapor de agua).
VI. Inmediatamente cerrar la llave de
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escape de vapor. Figura 1.- Autoclave de laboratorio


VII. Comienza a acumularse el vapor
(indicado en el manómetro) y a CALDO TRIPTICASA SOYA
aumentar la temperatura. El caldo de soya tríptico se utiliza para el
VIII. Cuando se llegue a la temperatura y cultivo de una amplia variedad de
presión deseada (120°C), se debe microorganismos en un entorno de
regular el gas para mantener estos laboratorio. El caldo de soya tríptico no está
valores constantes. Si es una destinado a ser utilizado en el diagnóstico de
autoclave eléctrica se regula enfermedades u otras condiciones en
automáticamente mediante un humanos. El caldo de soya tríptico cumple
termorregulador. con los requisitos armonizados de las
IX. Transcurrido el tiempo necesario (15 USP/EP/JP.
a 20 minutos) se corta la fuente El caldo de soya tríptico, un medio de uso
calórica. general, se denomina comúnmente como
X. La llave de escape de vapor se abre agar de digerido de caseína-soya, y se
ligeramente para evacuar lentamente abrevia como TSB. Los clostridios y
el vapor de la autoclave. anaerobios no esporulados crecen
XI. Cuando a presión marque cero, se exuberantemente en este caldo cuando se
puede abrir el autoclave y retirar el incuban en condiciones anaerobias. El TSB
material para evitar un se recomienda para pruebas de
sobrecalentamiento. contaminantes bacterianos en cosméticos y
cumple con las normas establecidas en la
industria alimentaria.
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COMPOSICIÓN DEL CALDO CASOY El agar nutritivo, modificado mediante la


(CASEÍNA SOYA) incorporación de 4-metilumbeliferil-β-D-
FÓRMULA LITRO glucurónido (MUG), se utiliza para la
Digerido enzimático de caseína 17 g detección fluorogénica de Escherichia coli.
Digerido enzimático de harina de 3g
soya El agar nutritivo cumple con los métodos
Cloruro de sodio 5g estándar de la APHA y la Asociación de
Fosfato dipotásico 2.5 g
Dextrosa 2.5 g Químicos Analíticos Oficiales (AOAC). El agar
pH final: 7.3 ± 0.2 a 25°C nutritivo se especifica en muchos métodos
La fórmula se puede ajustar y/o complementar
según sea necesario para cumplir con las estándar para pruebas de alimentos, agua y
especificaciones de rendimiento.5 otros materiales.
Tabla 1.- Contenido energético del caldo
caseína soya.
COMPOSICIÓN DEL AGAR NUTRITIVO
AGAR NUTRITIVO FÓRMULA LITRO
El agar nutritivo se utiliza para el cultivo de Digerido enzimático de 5g
una variedad de microorganismos en un gelatina
entorno de laboratorio. El agar nutritivo no Extracto de carne de res 3g
está destinado a ser utilizado en el Agar 15 g
diagnóstico de enfermedades u otras pH final: 6.8 ± 0.2 a 25°C
condiciones en humanos. La fórmula se puede ajustar y/o
complementar según sea necesario
A principios de los 1900, la Asociación para cumplir con las especificaciones de
Americana de Salud Pública (APHA) sugirió la rendimiento
fórmula del agar nutritivo como un medio de Tabla 2.- Contenido energético del agar
cultivo estándar utilizado en las pruebas de nutritivo
agua. El agar nutritivo sigue siendo un medio
de uso general ampliamente utilizado para el MATERIAL:
cultivo de microorganismos no fastidiosos. Si  2 cajas de Petri de vidrio.
es necesario, se pueden agregar  3 tubos de ensayo de 16 x 150 con
enriquecimientos a este medio. rosca
 1 pipeta.
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 1 matraz Erlenmeyer de 500ml con nutritivo y/o agar (10ml) c/u y


rosca. cerrarlos perfectamente.
 Papel Kraft. III. Envolver las cajas Petri, la pipeta y
 Cinta maskin. los tubos de ensayo con papel kraft y
 Agua destilada. asegurarlos con cinta maskin.
 Alcohol etílico. IV. Identificar todo el material con el
 Plumones indelebles. plumón indeleble (Equipo, fecha y
 Caldo tripticasa de soya. grupo)
 Agar. V. Poner todo el material dentro de la
 Autoclave. autoclave.
VI. Esterilizar a 120°C x 15 minutos.
VII. Después de esterilizar, almacenar en
PREPARACIÓN DEL CALDO CASOY: refrigeración.
I. Pesar 15 g del caldo caseína soya
II. Disolver en 500 mL de Agua RESULTADOS:
Se logra llevar con éxito la metodología,
III. Mezclar homogéneamente
cumpliendo los objetivos antes mencionados
IV. Identificar la solución
1. Aprender a limpiar y preparar el material
empleado en el laboratorio de microbiología.
PREPARACIÓN AGAR:
2. Conocer los diferentes tipos de
esterilización de material del laboratorio.
I. Pesar 10 g de agar nutritivo
3. Identificar el material de laboratorio, su
II. Disolver en 500 mL de Agua
función y su método de desinfección, al igual
III. Mezclar homogéneamente
que el del área de trabajo.
IV. Identificar la solución
4. Aprender a preparar el material para su
esterilización por medio de calor húmedo.
METODOLOGÍA:

ANÁLISIS DE RESULTADOS
I. Lavar, enjuagar y dejar secar el
material. En esta práctica no se obtuvieron resultados
II. Llenar los tubos de ensayo con caldo tangibles, ya que no hubo una verificación de
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la esterilización. Sin embargo, se espera que fue correcto, logrando así la eficiente
el material haya quedado totalmente libre de esterilización de los instrumentos
todas las formas de vida (incluyendo esporas representativos, se manifiesta satisfactorio el
bacterianas), tanto por el método de calor proceso, y el método utilizado, obteniendo así
húmedo como por el de calor seco. Por los resultados esperados en la realización de
consiguiente, se espera que, de realizarse esta práctica. Resaltamos, además, la
una prueba para la comprobación de la importancia de la limpieza que se le tiene que
esterilidad del equipo, ésta revelara la dar al espacio de trabajo en donde se
ausencia de microorganismos. Si tal prueba preparan los materiales para la esterilización,
mostrara crecimiento de cualquier tipo de así como el manejo de éste después de pasar
microorganismo, esto indicaría una falla en la por el autoclave o estufa de esterilización.
programación o el funcionamiento del aparato Materiales como el papel craft, exista
o una contaminación posterior a la oportunidad de contaminación, es decir, que
esterilización como consecuencia de una sirven como barreras contra la contaminación.
mala preparación del material o un mal
manejo de este una vez terminado el proceso.
BIBLIOGRAFÍA:
En ausencia de una verificación de la
esterilización, sólo podemos mencionar, en
Acciaresi, M. (s.f). “Control del proceso de
relación a los objetivos, que se preparó
esterilización: Indicadores”. Recuperado de
completa y correctamente el material para
www.bioingenieria.edu.ar/grupos/geic/cieer07/
esterilizarlo por ambos métodos, es decir, con
presentaciones/Ind-Est-Acciaresi.PDF
tapones de algodón y papel kraft para el
material de calor húmedo.
Gutiérrez de Gamboa, Sófia. (2001). “Métodos
de esterilización”. Universidad Católica de
CONCLUSIÓN:
Venezuela. Recuperado de

Reiterando los parámetros (120ºC x 15min) el http://www.ucv.ve/fileadmin/user_upload/f

tiempo establecido a la temperatura señalada, acultad_farmacia/catedraMicro/10_M%C3%A

y efectuando el análisis pertinente. Cabe 9todos_de_esterilizaci%C3%B3n.pdf

destacar que el funcionamiento del autoclave


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Pommerville, J.C. (2007). Alcamo’s


Fundamentals of Microbiology. 8a Ed.
Massachusets: Jones and Barlett Publishers.

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