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Fluorocromos ou Fluoróforos
PE - ficoeritrina
TR – Texas red
DAPI – 4´,6-diamidino-2-phenylindole
Fluoresceína
λ absorvido: 480-500nm
λ emitido: 510-530nm
Rodamina
λ absorvido: 510-530nm
λ emitido: 560-590nm
Conjugação dos Fluorocromos
Os fluorocromos ligam-se de forma covalente aos atc
que se ligam aos atg, constituindo um meio de
visualizar zonas de reação atc-atg
Diretos
Indiretos
Antigénio avaliado
Intensidade: +, ++, +++
Localização: mesangial, periferal,
membrana basal,…
Padrão: linear ou granular
Extensão: focal, difuso, global ou
segmentar.
Pele
Doenças Imunes
Acumulação na epiderme, membrana basal
e derme de:
Igs, componentes do complemento, fibrina
IgA, IgG, IgM, C3, C1q, Fibrinogénio
Patologia Pele Substância presente Localização
Penfigo IgG (+C3; Fibrin) Epiderme intercelular (L e N)
Tem incorporado:
Fonte de luz UV e visível
Filtros primários para selecionar o λ que
incide sobre a amostra
Filtro secundário que seleciona os λ
emitidos no espectro do visível, deixando
passar a luz emitida pela substância
fluorescente
Controlo de Qualidade
Controlos utilizados semelhantes às técnicas
imunoenzimáticas
Coons et al.
1930 1942 1966 1968 1975 1976 1978 1981 1991 1995
1º estudo IHQ
relatado atc com
FITC
Shi e cols.
Mo atc
César Milstein e
Georges Köhler Envision
dextran
polymer
conjugate
Suportes para lâminas removíeis e inclináveis
Possibilidade de camera húmida e fechada
SEQUENZA Shandon
• Manual
• Até 50 lâminas
• Sistema coverslip
• Aplicação manual de
reagentes
• 90µl por lâmina
• 5 conta-minutos
Cadenza Shandon
Cadenza Shandon
Acoplasistema de recuperação
antigénica
Módulo PT
Autostainer Labvision
Dako
• Separação de resíduos
Não perigosos e Perigosos
Incubação com 100 a 300µl por lâmina
Valor residual de 200µl por recipiente
Desparafinação e Recuperação antigénica
efetuadas previamente (PT ou outro)
Limpeza obrigatória após 240 lâminas
Autostainer Labvision
Dako
T RT
RE
A
Codificação de componentes
Etiqueta para Etiqueta para
reagentes lâminas
Vídeo exemplificativo
Autostainer
Clips
•Facilitam a incubação de
toda a extensão da lâmina.
•Evitam a evaporação dos
reagentes.
•Uniformidade de
marcação.
BOND Max
•Reagentes controlados
•Recipientes para atc de outras
marcas
•Variedade de atc pré-diluídos
BOND III
•Reagentes controlados
•Recipientes para atc de
outras marcas
•Variedade de atc pré-
diluídos
•Tecnologia Covertille
•3 tabuleiros de 10 lâminas
•Automatização da adesão
ao contraste
•IHQ; IF; ISH; FISH
BOND III
• Espaço para 36 reagentes em 4
bandejas
• Protocolos distintos em
simultâneo
• Com múltiplos sistemas de
deteção em simultâneo
BOND III
• Até 50% mais rápido que
modelos anteriores
• Três robôs adicionais para
dispensa de alto volume de
fluido
• Com múltiplos sistemas de
deteção em simultâneo
BOND III
• Gestão eficiente de
reagentes e resíduos em
tempo real
• Software simples e eficaz
BOND III
http://www.leicabiosystems.com/pt/ihc-ish/coloracao-avancada-de-
ihq-e-his/detalhes/product/leica-bond-iii/showcase/
BenchMark
BenchMark XT
• Até 30 lâminas
• Aquecimento individualizado de
cada lâmina (37 a 100oC)
• Programa desde desparafinação
até ao contraste
• Opção de programas automáticos
ou doseamento manual de atc 1o
• 100µl por lâmina
• Metodologia LCS
• Recipiente recolha resíduos com
sensor de nível
Manutenção mensal e trimestral (op)
Manutenção anual (fabricante)
Sistema de “lamela “ (LCS) evita a evaporação dos reagentes e permite menores
quantidades
BenchMark XT
• Aquecimento, desparafinação,
recuperação antigénica
• ICQ (mono, duo ou tripla), ISH, FITC
• 1 PC controla até 8 módulos
• 7 contentores de reagentes com
capacidade de 3 a 6 litros
• 35 posições para reagentes
• Processa até 60 lâminas em 8h
• Simultaneamente mais que uma
metodologia (p ex: ICQ e ISH)
• Programa completamente
automático
• Não necessita bancada
Aquecimento controlado e individualizado das lâminas,
permitindo efectuar o protocolo desde a desparafinação até ao
contraste.
Registo de reagentes
Lote
Prazo de validade
Nº de utilizações
Controlo Qualidade
Chip + Código de
barras
Suporte de reagentes
Lote
Prazo de validade
Nº de utilizações
Código de barras
Dispensador
Contentor cheio pelo
utilizador com atc
distintos
Atc pré-diluidos
Possibilidade de incubação manual
do atc 1º
Protocolos
Placas de lavagem dupla
Agitação
constante da
solução e
renovação do
soluto em
contacto com o
tecido
Reservatórios de reagentes
Resíduos
BenchMark XT
Inventário de reagentes
BenchMark ULTRA
BenchMark ULTRA