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MANUAL PROCEDIMIENTOS

INMUNOHEMATOLOGÍA

Gerente ESE Metrosalud


Martha Cecilia Castrillón Suárez

Subgerente Red de Servicios

Dirección Gestión Clínica y Promoción y Prevención

Fecha aprobación: 16 de Marzo de 2015

Versión 01
Código: MA1251010515
MANUAL DE
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PROCEDIMIENTOS
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INTRODUCCION

El servicio de transfusión debe mantener un stock de los componentes sanguíneos de mayor demanda,
realizar las pruebas pretransfusionales con metodologías exactas y precisas y en el menor tiempo posible,
para entregar oportunamente los componentes, para esto se hace necesario este manual de
procedimientos, donde está documentado todo el quehacer del profesional y el auxiliar en el servicio de
transfusión, que es lo que corresponde a la fase analítica, garantizando que no haya una reacción
postransfusional por incompatibilidad del sistema ABO

No obstante, este proceso al igual que el de laboratorio, tiene tres fases y en cada una de ellas hay unos
responsables del proceso, que también deben garantizar calidad en sus procedimientos, para la seguridad
del paciente. En la fase preanalítica, la orden para la transfusión debe cumplir con ciertos requisitos,
descritos en el presente manual; la correcta identificación del paciente con doble verificación y la
correcta toma y marcación de la muestra, son fundamentales para evitar complicaciones al paciente al
ser transfundido.

En fase postanalítica, la administración de los componentes y seguimiento del paciente durante la


transfusión, son aspectos igualmente importantes en el proceso

No podemos dejar de mencionar a los bancos de sangre, responsables del abastecimiento de los servicios
de transfusión, con el suministro oportuno de los componentes, garantizando calidad en sus procesos,
desde la selección de los donantes, hasta la entrega de los componentes en el servicio de transfusión, con
tecnología y apropiada para realizar las pruebas establecidas a cada unidad de sangre, con los
estándares de calidad definidos y entregar así cada componente con el sello de calidad.

Este manual de procedimientos nos va a permitir una transfusión segura, si cada uno de los actores que
intervienen en el proceso, aseguran la calidad y confiabilidad en todas sus actividades.

Importante resaltar, que la sangre como insumo vital no se consigue fácilmente, debemos crear
conciencia en la población, usuarios y funcionarios, para la donación voluntaria, no solo para contar con
el suministro oportuno sino para transfundir “sangre segura” o mejor, para transfundir vida…

De acuerdo al Decreto 1571 de 1993 las pruebas de compatibilidad se definen como los procedimientos
realizados por los servicios de transfusión o los bancos de sangre, previos a la transfusión, con el fin de
asegurar la selección adecuada de la unidad de sangre o los componentes a transfundir.

Ottenberg (1908) fue el primero en aplicar el descubrimiento de Landsteiner de los grupos sanguíneos a la
práctica transfusional, al comprobar como prueba previa a la transfusión, si el suero del receptor causaba
lisis y o aglutinación de los hematíes del donante.

Las pruebas de compatibilidad incluyen verificación de la hemoclasificación del donante, determinación


del ABO/Rh, rastreo para anticuerpos inesperados en el receptor y la prueba cruzada en fase
antiglobulinica en los casos que aplique.

Las pruebas de compatibilidad deben ser realizadas con muestras de sangre tomadas como máximo 72
horas antes de la transfusión.

La anterior recomendación se hace de manera especial para pacientes que en los últimos tres (3) meses
han recibido transfusiones de sangre total o componentes que contengan glóbulos rojos, mujeres en
embarazo o en aquellos pacientes de quienes no se tiene claridad de estos antecedentes
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El método empleado debe poder demostrar la incompatibilidad ABO y los anticuerpos antieritrocitarios
significativos. Si se identifican o identificaron anticuerpos relevantes, el paciente debe recibir sangre sin los
antígenos correspondientes (aun si los anticuerpos actualmente no son reactivos).

Objetivo:

Este manual tiene como objetivo establecer políticas y estandarizar los procedimientos en
inmunohematología con el fin de obtener resultados óptimos en el menor tiempo posible, para dar
respuesta oportuna a las necesidades de los usuarios, que requieren de una transfusión segura.

Alcance:

Este procedimiento es desde la recepción de la solicitud de los componentes sanguíneos hasta la entrega
de los mismos en el servicio o al funcionario transportador.

Responsables:

Los responsables de la fase analítica son los bacteriólogos del servicio de transfusión y médicos, enfermeras,
son los responsables de la fase preanalítica y postanalítica.

Definición de términos:

Sangre
La sangre es un tejido líquido que recorre el organismo transportando células, y todos los elementos
necesarios para realizar las funciones vitales (respiración, síntesis, defender de agresiones) todo un conjunto
de funciones complejas e importantes para la vida. La cantidad de sangre en una persona está
relacionada con su edad, peso, sexo y estatura, en un adulto se considera que hay entre 4.5 y 6 litros. Todos
los órganos del cuerpo humano funcionan gracias a la sangre, que circula por arterias, venas y capilares.

La sangre está formada por diversos componentes:

• Glóbulos rojos o hematíes

Son las células sanguíneas más numerosas, contienen la hemoglobina y es la responsable de su color rojo.
Se forman en la médula ósea, que se halla dentro de los huesos del esqueleto, desde donde son liberados
al torrente sanguíneo.
Su función es transportar el oxígeno desde los pulmones a los diferentes tejidos del cuerpo para que las
células respiren, y también eliminan los residuos producidos por la actividad celular (p.ej. anhídrido
carbónico).

• Glóbulos blancos o leucocitos


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Son los encargados de proteger al organismo contra los diferentes tipos de microorganismos. Cuando hay
una infección aumenta su número para mejorar las defensas. Unos se forman en la médula ósea y otros en
el sistema linfático (bazo, ganglios).

• Plaquetas

Son las células sanguíneas más pequeñas. Se producen también en la médula ósea y viven unos 6-7 días.
Intervienen cuando se produce ruptura, se adhieren rápidamente en ese lugar para que cese la
hemorragia, dando tiempo a la formación del coágulo definitivo.
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• Plasma

Es un líquido compuesto de agua, proteínas, sales minerales y otras sustancias necesarias para el
funcionamiento normal del organismo y es donde se encuentran "nadando" las células sanguíneas.
Entre las sustancias de importancia que transporta el plasma están las siguientes.
 La Albúmina. Es una proteína que ayuda a mantener el agua del plasma en una proporción
equilibrada.

 Las Globulinas. Son los anticuerpos encargados de la defensa de nuestro organismo frente a las
infecciones. Su disminución acarreará una disminución de las defensas.

 Factores de Coagulación. Son imprescindibles para evitar las hemorragias. La ausencia de un factor
de coagulación puede ocasionar trastornos hemorrágicos ya que se dificulta la formación del
coágulo.

 Otras proteínas transportan sustancias necesarias (grasas, azúcares, minerales, entre otras) para el
normal funcionamiento de las células

Inmunoglobulinas. Los anticuerpos séricos, que incluyen IgG, IgM, IgA, IgE e IgD.

Avidez: aglutinación de los eritrocitos del tipo correspondiente se inicie en el tiempo máximo que se
específica para cada subgrupo, contados a partir del momento en que se ponen en contacto suero y
eritrocitos y el tamaño de los cúmulos aglutinados no debe ser menor a 1mm de diámetro.

Potencia: El titulo mínimo de los reactivos hemoclasificadores aceptable para cada grupo o subgrupo de
eritrocitos por prueba

Aglutinación: forma de reacción antígeno-anticuerpo en la cual son necesarios anticuerpos solubles


divalentes o polivalentes y antígenos celulares o particulados

Anticuerpo. Molécula producida por los animales como respuesta a un antígeno, que tiene la propiedad
de combinarse específicamente con el antígeno que indujo su producción.

Antígeno. Molécula que reacciona con un anticuerpo formado previamente en los receptores específicos
de las células T y B.
Autoanticuerpo. Anticuerpo generado, que reacciona contra antígenos del huésped donde fue generado
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Autocontrol. Es una prueba adicional que se realiza paralelamente para la detección de autoanticuerpos.
Detecta anormalidades séricas, presencia de rouleaux.

Compatibilidad. Permite conocer si existe afinidad serológica entre la sangre de una persona donante y la
del receptor.

Donantes universales. Son los que tienen el grupo sanguíneo “O” Negativo, sus glóbulos rojos no tienen
antígenos, por lo que los anticuerpos del receptor no pueden reaccionar.

Receptor Universal. Grupo “AB” no poseen anticuerpos, por lo tanto no rechazan la sangre transfundida.

Leucorreducción o leucodepleción: Proceso utilizado para eliminar leucocitos de los componentes


sanguíneos antes de la transfusión.

Prueba de compatibilidad: Técnica realizada antes de la transfusión para garantizar la compatibilidad


inmunológica entre la sangre alogénica y la del receptor.

Reacción a la transfusión Cualquier reacción que se considere que está relacionada con una transfusión
sanguínea.

Reacción adversa: Resultado inesperado y no deseado de un tratamiento que provoca un trastorno


considerable que incluso puede hacer peligrar la vida del paciente

Reacción adversa grave: Una respuesta inesperada del donante o del paciente, relacionada con la
extracción o la transfusión de sangre o de sus componentes, que pueda poner en peligro la vida, causar
minusvalía o discapacidad, o requerir o prolongar la hospitalización.

Reacción alérgica Uno o más de los siguientes requisitos: erupción cutánea, disnea, angioedema, prurito
generalizado, urticaria, sin hipotensión en un plazo de 24 horas tras la transfusión.

CRITERIOS A TENER EN CUENTA EN EL SERVICIO DE TRANSFUSION

Las pruebas de compatibilidad son una parte crítica para la transfusión segura, pero hay otros aspectos
igualmente importantes para garantizar seguridad en el proceso:

• Orden médica para la transfusión completamente diligenciada aportando los detalles clínicos del
paciente, la identificación completa y la Hemoclasificación sanguínea si ya la tiene. Especificar si
es urgente.
• Especificar claramente en la orden el o los componentes solicitados y el número o la cantidad de
los mismos.
• Solicitar Rastreo de Anticuerpos y pruebas cruzadas; este último es igual al número de unidades a
transfundir.
• Realizar una correcta identificación del receptor al momento de tomar la muestra para las pruebas
cruzadas, realizar la doble verificación. En este procedimiento debe estar presente el bacteriologo.
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• Muestras de sangre correctamente identificadas con el nombre completo del paciente y el número
de identificación.
• Dar prioridad al servicio de transfusión cuando se comparte el bacteriólogo con el laboratorio.
• En el momento de realizar pruebas cruzadas, la dedicación del bacteriólogo es exclusiva para el
servicio de transfusión.
• Registrar la hora de recepción de la solicitud de la transfusión y entrega de componentes.
• El tiempo máximo de proceso para urgencias es de 1 hora.
• Cuando la reserva de glóbulos rojos se hace el mismo día de la cirugía se convierte en urgencia.
• El servicio de Transfusión debe mantener un stock de componentes sanguíneos de acuerdo a la
demanda del servicio. El stock actual esta compuesto por dos unidades de glóbulos rojos “o”
positivos y dos unidades de glóbulos rojos “A” positivo.
• Tener en cuenta que a los menores de seis (6) meses se recomienda aplicar sangre fresca (menor
de ocho días de recolectada.
• El stock de urgencias se debe reponer cada que se utilice (una unidad de glóbulos rojos “o”
negativo reclasificado e identificado o una unidad de glóbulos rojos “o” positivo.
• Cualquier reacción adversa en el momento de la transfusión, se debe informar inmediatamente al
servicio de transfusión para la verificación, registro y seguimiento.
• Solicitar oportunamente los componentes a los bancos de sangre, cuando se requiera y, estar
pendientes del envío en el tiempo acordado.
• Realizar cada actividad del proceso de acuerdo a lo documentado en el presente manual.
• Cuando un paciente presenta reacción con varias unidades chequeadas, se informa al médico
tratante, quien debe definir qué hacer.
• Las unidades o componentes despachados a los servicios y no transfundidos, deben regresar al
servicio de transfusión y allí se evalúa si se descartan o no, de acuerdo al tiempo que estuvieron por
fuera y a la temperatura en que permanecieron.
• Al plasma y a las plaquetas no se le realizan pruebas cruzadas.
• Los desechos de las unidades transfundidas se descartan en cada servicio.

LISTA DE CHEQUEO DEL PROCESO PARA LA REALIZACIÓN DE PRUEBAS CRUZADAS

1. Revisar la orden de solicitud de los componentes que esté completamente diligenciada, número de
componentes y Hemoclasificación del paciente.

2. Verificar que la muestra este bien marcada con nombres y apellidos completos y número de
identificación y que corresponda a la orden de solicitud de los componentes.

3. Realizar la Hemoclasificación del receptor, en placa

4. Verificar la existencia de los componentes o solicitarlos al banco de sangre en caso de ser


necesario, llamar a la Cruz Roja o al Hospital General, instituciones con las que se tiene contrato
actualmente.

5. Realizar clasificación directa del receptor, previa dilución según procedimiento.


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6. Realizar la clasificación inversa, con plasma del receptor.

7. Realizar clasificación directa de los glóbulos rojos del donante, previa dilución según procedimiento.

8. Preparar la dilución para el autocontrol (Coombs directo), según procedimiento.

9. Preparar la dilución para realizar las pruebas cruzadas, de acuerdo al procedimiento.

10. Realizar pruebas cruzadas y rastreo de anticuerpos irregulares con células I y II (Coombs indirecto)
según procedimiento.

11. Realizar Lectura e interpretación del procedimiento.

12. Diligenciar formatos del servicio de transfusión.

13. Llevar los componentes al servicio correspondiente y si es de otra sede, informar para que los
recojan.
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TECNICAS DEL SERVICIO DE TRANSFUSIÓN

Tecnica 1 Grupo Sanguíneo ABO Automatizado

Principio:

La determinación de los grupos sanguíneos se realiza mediante una reacción antígeno-anticuerpo.


El sistema de grupos sanguíneos ABO es único en cuanto a que una persona que carezca de los antígenos
A y/o B en los eritrocitos, regularmente tiene anticuerpos en el suero dirigidos al antígeno o antígenos
faltantes.
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Sistema de Grupo Sanguíneo ABO

GRUPO SANGUÍNEO ANTIGENOS PRESENTES EN ANTICUERPOS PRESENTES


LOS GLOBULOS ROJOS EN SUERO
O Ninguno Anti - A y Anti - B
A A Anti - B
B B Anti - A
AB AyB Ninguno

Para realizar el grupo sanguíneo de una persona se prueban directamente los eritrocitos con reactivo Anti-
A, y Anti-B (prueba con eritrocitos o prueba directa). La confirmación de los resultados se hace utilizando
eritrocitos de grupo A y B ( prueba sérica o prueba inversa ). Algunas pruebas adicionales facilitan la
identificación de subgrupos por ejemplo: La distinción serológica de las células A1 y A2 utilizan lectina de
las semillas de Dolichos biflorus.
En la dilución apropiada, esta lectina reacciona como Anti-A1 y aglutina los eritrocitos A1, pero no los A2. El
80% de los individuos del grupo A o AB posee glóbulos- rojos que se aglutinan en presencia de anti-A1 y, por
lo tanto, se clasifica como A1 o A1 B. El 20% restante, con eritrocitos que se aglutinan en presencia de Anti-
A, pero no de anti-A1, se clasifican como A2 o A2 B.

Principio RH

La presencia o ausencia del antígeno D en la membrana del eritrocito se determina haciendo reaccionar
los glóbulos rojos con el Anti-D. Si las células aglutinan, significa que poseen el antígeno D. Si no aglutinan,
significa que carecen de dicho antígeno o que está presente en forma débil (Du).

Prueba Globular (Directa): Es un método sencillo que consiste en hacer reaccionar los glóbulos rojos del
paciente con los antisueros A y B buscando aglutinación visible, lo cual indica que las células poseen el
antígeno contra el que está dirigido el anticuerpo.

Prueba Sérica (Inversa): En este método se utiliza el suero del paciente el cual se hace reaccionar con
celulas A1, celulas A2 y celulas B. La aglutinación indica la presencia de Anti-A y/ó Anti-B en el suero.
Para que el grupo sea determinado, las pruebas directa e inversa deben ser correspondientes

Interpretación y Resultados

Resultado o reacción negativa:


La formación de botón o hematíes completamente sedimentados en el fondo de la cámara, significa que
no hubo reacción o el resultado es negativo

Resultado o reacción positiva:


Si hay aglutinación, se forma una banda en la parte superior de la columna y, esto significa, presencia de
reacción o resultado positivo. La aglutinación puede variar entre 1+ y 4+ asi:
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La interpretación se realiza según el siguiente cuadro:

CLASIFICACION DIRECTA E INVERSA

CAMARA DE GRUPO
A B D CONTROL A1 B
REACCION SANGUINEO
- - - - + + “O”
NEGATIVO
- - + - + + “O”
POSITIVO
AGLUTINACION + - - - - + “A”
NEGATIVO
+ - + - - + “A” POSITIVO
- + - - + - “B”
NEGATIVO
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- + + - + - “B” POSITIVO
+ + - - - - “AB”
NEGATIVO
+ + + - - - “AB”
POSITIVO

Otra combinación de resultados se interpreta como incongruente y se debe evaluar el procedimiento.

Prueba de Coombs
Directa e indirecta, se refiere al procedimiento que investiga un tipo de globulina gama denominada
anticuerpos incompletos, utilizando un antisuero conseguido en un conejo inmunizado frente a la
inmunoglobulina humana.

La reacción de Antiglobulina, fue descrita por Moreshi. En 1908, y fue aplicado por Coombs y sus
colaboradores en 1945 en la serología de grupos sanguíneos. Cuando se utiliza el suero de animales
inmunizados con proteína humana en la detección de los llamados anticuerpos incompletos.

La prueba de antiglobulina Coombs es un procedimiento importante para la detección de


inmunoglobulina y/o complemento unido a los glóbulos rojos. La prueba de antiglobulina directa se utiliza
para demostrar los anticuerpos y/o complemento unido a los glóbulos rojos in vivo, y la prueba de
antiglobulina indirecta después de la incubación del suero y los glóbulos rojos, demuestran los anticuerpos
y/o complemento unido in vitro.

Cuando los anticuerpos incompletos (usualmente IgG) entran en contacto con los glóbulos rojos que
poseen los antígenos apropiados, éstos se unirán a la superficie de las células y permanecerán unidos
durante la serie de lavados con solución salina fisiológica 0.9% para eliminar la proteína humana unida. Se
puede detectar entonces la presencia de la proteína resultante a través de una prueba de lavado de
células con un reactivo hecho de suero de conejo inmunizado con la proteína humana adecuada, o de
anticuerpos monoclonales secretados por hibridomas derivadasde ratón inmunizado y de un cultivo medio
fluido.
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La aglutinación de glóbulos rojos por Anti-IgG en la prueba de antiglobulina directa e indirecta, indica que
las células están cubiertas con anticuerpos.

Algunos reportes sugieren que el IgG puede fallar ocasionalmente en la detección de anticuerpos que se
demuestren por el uso de un reactivo de antiglobulina humana poli específica y los anticuerpos no
detectados por Anti-IgG pueden ser clínicamente significativos en algunos casos. El usuario debe ser
consiente que la información científica actual no es completamente un soporte para el uso excesivo de
Anti-IgG para pruebas de rastreo de anticuerpos y para pruebas de compatibilidad.

Rastreo de Anticuerpos Irregulares:

Por anticuerpos regulares debemos identificar a los que existen en todos los individuos y que éstos tendrán
durante toda su vida. Los anticuerpos irregulares son los que no están de esa manera, aunque en el caso
de los naturales no se conoce a ciencia cierta qué o cómo se induce su producción.

El uso de gamma LO-ION, en lugar de las soluciones de albúmina bovina para los procedimientos de
anticuerpos, crea un ambiente de baja fuerza iónica que incrementa la proporción del anticuerpo
captado durante la incubación y así es mayor la reactividad, ya sea como hemoaglutinación directa o en
pruebas de antiglobulina indirecta. Al mismo tiempo, la incorporación de compuestos de alto peso
molecular incrementa la habilidad de muchos anticuerpos para dar reacciones de aglutinación directas
con las células que posean el antígeno apropiado.

Este estudio consiste en el rastreo que permite identificar a los pacientes que presentan en su suero
anticuerpos antieritrocitarios dirigidos contra antígenos que no son del sistema ABO.

Esta prueba está indicada como parte de las pruebas de compatibilidad sanguínea pretransfusional, en
mujeres Rh negativo, como parte del estudio de la EHRN, en estudios de la anemia hemolítica autoinmune,
entre otras.

FUNDAMENTO DE LA TÉCNICA AGLUTINACION EN GEL

La técnica utilizada es “gel-centrifugación” desarrollada por el Dr. Yves Lapierre (Lyon-Francia) se utiliza de
una matriz de gel (SEPHADEX) en microtubos para atrapar aglutinados (glóbulos rojos aglutinados)
producidos por la reacción entre antígenos de la membrana eritrocitaria y anticuerpos anti-eritrocitarios,
después de una centrifugación en baja rotación.
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El Gel test de Diamed proporciona una tarjeta plástica, la cual tiene incorporados seis (6) microtubos.
Cada microtubo contiene 35 ml de SEPHADEX G100 superfino, y otros elementos preservantes. Se pueden
encontrar tres (3) presentaciones básicas, de acuerdo con los tests ofrecidos por el ID Micro Typing System:

• Gel Neutro: Sin Antisuero Específico


• Gel Especifico: Mezcla de Gel – Antisuero
• Gel Antiglobulina: Mezcla de Gel – Antiglobulina Humana

Parte Superior

Parte Intermedia

Parte Inferior

 La Parte Superior es Amplia, para permitir la incubación de los reactivos y muestras por encima del
Gel.
 La Parte Intermedia que contiene el Gel, es larga y estrecha, para asegurar un contacto
prolongado de los Hematíes con el Gel durante la Centrifugación.
 La Parte Inferior es cónica para que los Hematíes, que atravesaron el Gel después de la
Centrifugación, formen el botón en el fondo del tubo, facilitando la lectura.

OBTENCIÓN Y LECTURAS DE AGLUTINACIÓN EN EL GEL TEST


• La aglutinación ocurre en los microtubos durante el proceso de centrifugación.
• Los Glóbulos, que son más densos que el gel, tienden atravesarlo, mientras que el medio en el cual
están suspendidos permanece encima del gel, en función del gradiente especifico de Centrifugación.
• Cuando los Glóbulos no son aglutinados por anticuerpos, se sedimentan en el fondo del microtubo.
• Cuando se aglutinan, por la acción de los anticuerpos, los glóbulos son retenidos por el gel durante la
centrifugación, pudiendo presentarse patrones de aglutinaciones desde débiles (week) a cuatro (4)
cruces.
• En el Gel especifico, la aglutinación y la captura de los glóbulos por el gel suceden de inmediato, al
inicio de la centrifugación.
• En el Gel Antiglobulina, los glóbulos son sensibilizados por anticuerpos durante la fase de incubación y
retenidos por la Antiglobulina Humana en el gel, durante la centrifugación
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TIPO DE MUESTRA
Para un resultado óptimo, la determinación debe realizarse con una muestra recién extraída, y siguiendo
los estándares mencionados Manual Técnico de la “American Association of Blood Banks” – “AABB”, en lo
que respecta al aspecto, antigüedad y almacenamiento de la muestra. Preferiblemente, las muestras de
sangre deben recogerse utilizando EDTA como anticoagulante. También es posible utilizar muestras
recogidas en tubos sin anticoagulante.

Las muestras de sangre deben ser tomadas hasta 72 horas antes de la transfusión.

Cuando sea necesario emplear suero en lugar de plasma, el suero debe someterse a una centrifugación a
1500 g (5000 rpm) durante 10 minutos antes de su uso, para evitar la presencia de residuos de fibrina que
podrían interferir con el patrón de reacción.

REACTIVOS NECESARIOS

• La tarjeta ID ˝DiaClon ABO/D + Reverse Grouping˝ contiene anti-A monoclonal [línea celular A5],
anti-B [línea celular G½] y anti-D [líneas celulares LHM 59 / 20 (LDM3) + 175-2], en la matriz de gel. El
microtubo (ctl) es el control negativo. La tarjeta-ID contiene también dos microtubos con gel neutro
que sirven para la prueba inversa del grupo sanguíneo con hematíes A1 y B. Conservante: < 0,1%
NaN3.
• Tarjeta ID-Card ˝LISS/Coombs˝ con 6 microtubos que contienen AGH poliespecífica (anti-IgG de
conejo y anti-C3d monoclonal, línea celular C139-9) en la matriz de gel. Conservante: < 0,1% NaN3.
• ID-Diluent 2: Solución LISS modificada para suspensiones de eritrocitos.
• ID-DiaCell ABO en una suspensión al 0,8%, en viales de 10 ml, listos para su uso.
• ID-DiaCell I-II-III en una suspensión al 0,8%, en viales de 10 ml, listos para su uso.
• Antisueros A, B y D.

PROCEDIMIENTO

1. Utilizar todos los implementos de bioseguridad requeridos para el proceso, bata de laboratorio,
guantes, entre otros

2. Evaluar la calidad de la muestra recibida y su concordancia con los soportes documentales.

3. Ingresar al software y revisar el historial del receptor en busca de hallazgos y realización de pruebas
(ABO + Rh y RAI).

4. Identificar la tarjeta “DiaClon ABO/D + Reverse Grouping” para la clasificación sanguínea con el
nombre del paciente, la tarjeta tiene seis microtubos, en los cuatro primeros microtubos se realiza la
prueba directa y en los otros dos microtubos se realiza la prueba inversa del paciente con células A1,
B; ejemplo:
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5. En la tarjeta de “LISS/Coombs” se marca con el nombre del paciente y los microtubos se marcan de
la siguiente manera:

• Microtubo 1 Células I
• Microtubo 2 Células II
• Microtubo 3 Células III

6. Marcar el tubo plástico “ID-Tubes” (nuevo) con el nombre o iniciales del paciente para la
clasificación directa.

7. Para la dilución de células del paciente en la tarjeta de “DiaClon ABO/D + Reverse Grouping”
dispensar en el tubo plástico identificado 500 µL de “ID- Diluent 2 - LISS Modificado para suspensión
de células rojas”.

8. Tomar las células “ID-DiaCell ABO” A1 y B homogenizar por inversión suavemente hasta que no se
evidencie sedimento del paquete globular en el fondo del frasco, si en el gotero hay restos de células
oprimió y aflojo suavemente la válvula dispensadora hasta desocuparla en su totalidad.

9. Con un ángulo de 45° depositar una gota con el gotero de cada frasco “ID-DiaCell ABO” A1 y B en
el microtubo correspondiente.

10. Tomar las células “ID-DiaCell I-II-III” homogenizar por inversión suavemente hasta que no se evidencie
sedimento del paquete globular en el fondo del frasco, si en el gotero hay restos de células oprimió y
aflojo suavemente la válvula dispensadora hasta desocuparla en su totalidad.

11. Con un ángulo de 45° depositar una gota con el gotero de cada frasco “ID-DiaCell I-II-III” en el
microtubo correspondiente.
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12. Tomar el tubo identificado con los 500 µL de “ID- Diluent 2 - LISS Modificado para suspensión de
células rojas” tomar una punta y agregar 25 µL del paquete globular suspensión al 5%. Para obtener
la muestra de paquete globular, se recomienda deslizarse suavemente por las paredes del tubo, para
no mezclar la muestra y enjuagar la muestra en la solución de LISS. (no botar la punta dejarla en el
tubo con la suspensión).

13. Re suspender esta suspensión suavemente.

14. Con la misma punta dispensar 10uL de la suspensión al 5% en las determinaciones anti “A”, anti “B”,
anti “D” y el microtubo de control.

15. Tomar una punta nueva y dispensar 50 µL de plasma y/o suero del paciente en los microtubos A1 y B
de la tarjeta “DiaClon ABO/D + Reverse Grouping”, y con la misma punta nueva 25 µL de plasma
para adicionar a los pozos de la tarjeta de “LISS/Coombs” a los pozos de las células I II III.

(USO LA MISMA PUNTA PARA LA DILUCIÓN (USO LA MISMA PUNTA PARA SERVIR INVERSA
Y PARA SERVIR LOS POZOS Y PARA SERVIR LA DIRECTA) EL RASTREO PUNTA NUEVA)

MUESTRA SUSPENSIÓN

16. Después de terminado el montaje en la tarjeta “DiaClon ABO/D + Reverse Grouping” se puede
centrifugar inmediatamente después de añadidas las células y el plasma y/o suero, durante 10
minutos en la “ID- Centrifuge”. Lo anterior teniendo en cuenta que la determinación del sistema ABO
se utiliza para evidenciar presencia de anticuerpos tipo IgM. En algunos casos es necesario realizar
incubaciones a temperatura ambiente durante 10 minutos, con el fin de promover la aglutinación
con anticuerpos que se encuentren en bajo titulo.

17. Después de terminado el montaje en la tarjeta “LISS/Coombs”, se llevan a incubar las tarjetas por 15
minutos a 37°C en la ID- Incubator”.
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18. Finalizada la incubación se centrífuga por 10 minutos en la “ID- Centrifuge” y posteriormente se


realiza las lecturas de las reacciones en las tarjetas de “DiaClon ABO/D + Reverse Grouping” y la
tarjeta “LISS/Coombs”, en el banjo o de forma manual según aplique (ver manual de usuario del
equipo), en lo que respecta al grupo sanguíneo ABO y Rh D del paciente y el resultado del rastreo de
anticuerpos irregulares.

19. Cargar en el sistema los resultados obtenidos y las observaciones pertinentes.

20. La muestra analizada debe almacenarse de 2 a 8°C de forma ordenada en su correspondiente


casilla a espera de la solicitud de transfusión.

21. En caso de solicitud de glóbulos para transfusión se debe buscar la muestra almacenada por orden
de llegado y verificar el ABO y Rh del receptor y de las unidades seleccionadas para transfundir en
lámina al momento de la solicitud.

NOTAS DE INTERES INSERTOS DE TARJETAS

Tarjeta “DiaClon ABO/D + Reverse Grouping”

Observaciones
1. El control negativo ctl debe siempre presentar una reacción negativa. Si la reacción es positiva,
proceder de la siguiente manera:
• Lavar primero los hematíes con solución fisiológica salina antes de preparar la suspensión de hematíes al
5%.
• Continuar como está descrito en la Preparación de muestras de sangre.
• Si el control negativo da un resultado negativo, las reacciones obtenidas pueden ser interpretadas
• Si el control negativo persiste dando una reacción positiva, se deberá invalidar el resultado de la
determinación ABO/Rh, en estos casos se recomienda realizar estudios adicionales, siguiendo técnicas
autorizadas, que permitan identificar la causa antes de la validación del resultado, asegurando así la
tipificación antigénica ABO/Rh.g
2. Si se presenta el caso de grupo “A” en la directa y en la inversa aglutine en A1 se debe montar una
prueba cruzada en fase antiglobulinica.
3. Si obtenemos en el receptor un resultado en la fase directa “AB” y en la inversa “O”, se deben lavar
los glóbulos rojos con solución salina pre calentada al menos tres veces, esto con el objetivo de
limpiar los glóbulos rojos y evidenciar el grupo real del receptor.
4. En caso de discrepancia hemático sérica en la determinación del sistema de grupo ABO, se
recomienda consultar la tabla ˝DiaMed ABO discrepancy chart˝ para disponer de información
adicional para la interpretación de los resultados obtenidos.
5. Una determinación completa del grupo sanguíneo ABO requiere incluir antisueros anti-A, -B, -AB
para el grupo hemático y hematíes A1, A2, B y O para el grupo sérico. La ID-Card ˝DiaClon ABO/D +
Reverse Grouping˝ no contiene anti-AB y permite solamente la utilización de hematíes A1 y B. El test
deberá utilizarse para confirmar la determinación de grupos sanguíneos de muestras ya analizadas
y cuando se requiera deberá ampliarse el estudio según los estándares o recomendaciones
nacionales o locales para la determinación del grupo sanguíneo.
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6. En el grupo inverso o grupo sérico, una incubación de al menos 10 minutos a temperatura ambiente
(18-25 °C) antes de centrifugar, favorece la reacción y minimiza el número de repeticiones por
presencia de isoaglutininas débiles.

Limitaciones

a) Las ID-Tarjetas que muestren burbujas de aire en el gel o gotas en la parte superior de los microtubos y /
o de la lámina de sellado, deben ser centrifugadas antes de usarlas.
b) Contaminaciones bacteriana o de otro índole de los materiales utilizados, pueden provocar resultados
falsamente positivos o falsamente negativos.
c) Los restos de fibrina en la suspensión de eritrocitos puede aprisionar algunas células no aglutinadas,
formando así una fina línea rosada sobre la superficie del gel, mientras que después de la centrifugación la
mayor parte de los hematíes forman un sedimento compacto en el fondo del microtubo.
d) La observación estricta de los métodos y la utilización del equipo recomendado es imprescindible. El
equipo debe ser controlado regularmente según las normativa de buenas prácticas de laboratorio (˝Good
Labor Practice˝ GLP).
e) La utilización de diluyentes distintos al ID-Diluent 2 para las suspensiones de hematíes puede modificar los
resultados.
f) Suspensiones de hematíes muy concentradas o muy diluidas pueden causar resultados anómalos.

Tarjeta “LISS/Coombs”

Observaciones

Como en todos los procedimientos según las normas de buenas prácticas del laboratorio, la sensibilidad de
los procedimientos anteriores debe validarse utilizando anticuerpos de potencia conocida.
El reactivo de referencia DiaMed Anti-D permite realizar controles periódicos para todos los procedimientos
de detección de anticuerpos.

Limitaciones
a) Las ID-Tarjetas que muestren burbujas de aire o gotas de gel en la parte superior de los microtubos y/o
de la lámina de sellado, deben ser centrifugadas antes de usarlas.
b) Se sabe que algunos fármacos dan lugar a reacciones positivas en pruebas con antiglobulina humana.
c) También se ha referido que algunos estados patológicos pueden provocar reacciones positivas en este
tipo de pruebas.
d) Los eritrocitos que hayan pasado a ser poliaglutinables debido a una exposición de un criptoantígeno,
por ejemplo antígeno T, tanto in vivo como in vitro, pueden reaccionar con todos los sueros humanos. Estas
reacciones deben investigarse adicionalmente.
e) La contaminación bacteriana o de otro tipo de los materiales empleados, puede provocar reacciones
falsamente positivas o falsamente negativas.
f) Los restos de fibrina en la suspensión de eritrocitos pueden atrapar los hematíes no aglutinados, de modo
que aparezca una fina línea rosada en la parte superior del gel mientras que la mayoría de los eritrocitos se
encuentran en el fondo del microtubo tras el centrifugado.
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LECTURA MANUAL E INTERPRETACION DE RESULTADOS

1. Reporte las reacciones positivas en cruces, según la aglutinación sobre el gel o en medio de este,
esta aglutinación va desde week hasta 4+. El resultado es negativo si se observa un solo botón en el
fondo del pozo, en caso de obtener rastreo de anticuerpos irregulares positivo se debe identificar el
anticuerpo presente y realizar fenotipificación al paciente y a las unidades.
2. El tubo de lectura se debe dividir en tres cuadrantes asi:

NEGATIVO WEEK + ++ +++ ++++

3. Un RAI negativo no garantiza que el suero esté libre de anticuerpos, solo indica que no posee
anticuerpos contra los antígenos eritrocitarios de las células I, II y III.
4. EL precalentamiento es una técnica que puede ser útil en la determinación e identificación de
anticuerpos séricos que se unen al antígeno eritrocitario solo a 37°C, sobre todo en pacientes que
tienen autoanticuerpos que reaccionan en frío y que enmascaran la presencia simultánea de
anticuerpos de significancia clínica. Para el uso de esta técnica se debe precalentar todos los
reactivos que se vayan a necesitar, desde la solución salina, las células, el suero del paciente, el
potenciador; además procure apagar el aire acondicionado durante el procedimiento y siga lo
descrito en el protocolo.

PROCEDIMIENTO (TÉCNICA EN TUBO)

TIPO DE MUESTRA

Plasma y glóbulos rojos anticoagulados del paciente ó receptor.

1. Verifique que el nombre de las muestras corresponda al que se indica en la orden de transfusión.
2. Determine el grupo sanguíneo y Rh del paciente (directa e inversa) y consígnelo en el protocolo
correspondiente.
3. Rechequee el grupo y Rh de manera manual de las unidades a cruzar.
4. Marque los tubos de esta manera: un tubo para células I, otro para células II y otro para células III
con el nombre o las iniciales del paciente; un tubo para autocontrol también con el nombre del
paciente; un tubo para cada unidad que se le va a cruzar marcado con él numero de unidad y
con el nombre o iniciales del paciente.
5. En los tubos marcados para las células I y II coloque 1 gota de cada una de ellas en su respectivo
tubo. En el tubo del autocontrol añada 1 gota de los glóbulos rojos del paciente o receptor y haga
una suspensión del 3-5% con solución salina 0.9%. En los tubos dispuestos para las unidades agregue
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1 gota de los glóbulos rojos del piloto que corresponda a la unidad que indica el tubo y resuspenda
del 3-5% con solución salina 0.9%.
6. Decante las anteriores suspensiones (tanto autocontrol como unidades a cruzar) dejando en los
tubos 1 gota ó 50 ul de la suspensión.
7. Agregue a cada tubo, incluyendo los tubos del rastreo, dos gotas (100 ul) de suero del paciente o
receptor.
8. Centrifugue a 3400 RPM por 30” ó 1 minuto a 1000 RPM y lea sobre un fondo luminoso (fase salina).
9. Adicione el potenciador que sé este utilizando, él numero de gotas según indicaciones del
fabricante.
10. Incube en baño maría a 37° C, el tiempo de incubación depende del potenciador utilizado.
11. Finalizada la incubación, centrifugue a 3400 RPM por 30” ó 1 minuto a 1000 RPM y lea sobre fondo
luminoso (fase potenciador).
12. Lave 3 veces con solución salina 0.9% en forma manual o automática todos los tubos.
13. Añada suero de coombs, las gotas según indique el fabricante y centrifugue a 3400 RPM por 30” ó 1
minuto a 1000 RPM y lea sobre fondo luminoso (fase de coombs).
14. Observe presencia de aglutinaciones o hemólisis en los tubos, si están negativos confirme
observándolos cada uno al microscopio.
15. Agregue 1 gota de células control de coombs a los tubos negativos y centrifugue a 3400 RPM por
30” ó 1 minuto a 1000 RPM. Debe haber aglutinación en todos los tubos, de lo contrario repita el
procedimiento.

PROTOCOLO PARA APLICACIÓN EN EL SERVICIO TRANSFUSIONAL EN CASO DE UNA REACCION ADVERSA

1. Rectificar la identificación del paciente, de la unidad despachada y de cada uno de los


procedimientos realizados como pruebas pretransfusionales.
2. Si hay errores de identificación (marcaje de los tubos, confusión de muestras) el médico debe ser
notificado inmediatamente y evaluar la posibilidad de que otro paciente esté en riesgo.
3. Inspección visual de hemólisis en el suero o plasma post-reacción y comparar con la muestra pre-
reacción.
4. Las coloraciones rosa en la muestra pueden sugerir hemólisis y liberación de hemoglobina libre. Con
solo 5 – 10 mL de eritrocitos hemolizados se presenta hemoglobinemia visible. La destrucción puede
ser secundaria a reacciones inmunes del paciente o a desviaciones en los procesos de
administración de los eritrocitos: hemólisis mecánica, calentamiento inapropiado, Otras causas
pueden incluir mioglobinemia en pacientes con trauma severo y lesión muscular. Si la muestra se
toma 5 – 7 horas después de la reacción hemolítica, el plasma puede aparecer ictérico (presencia
de bilirrubinas).
5. El incremento en la prueba de bilirrubinas se presenta al cabo de 1 hora post-reacción, alcanza un
pico a las 5 – 7 horas y desaparece al cabo de 24 horas.
6. En el análisis de la muestra de orina es clave diferenciar presión excesiva entre hematuria,
hemoglobinuria y mioglobinuria. En las RAT hemolíticas agudas, se presenta hemoglobinuria.
7. Realizar prueba de antiglobulina directa (Coombs directo) en la muestra del tubo anticoagulado. Si
la reacción es positiva, repetir el Coombs directo en la muestra pretransfusional y comparar. Si se
transfundieron eritrocitos incompatibles, el resultado será francamente positivo. La aglutinación en
campo mixto se observa en casos de una destrucción no inmediata. Las hemólisis no inmunes dan
resultados negativos (daño mecánico, calentamiento).
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8. Realizar las pruebas ABO y Rh en las muestras pre y postreacción del paciente y en la sangre de la
unidad o de sus segmentos. Si no hay coincidencia, ha habido un error en la prueba o en la
identificación de la muestra o la bolsa.
9. Realizar las pruebas de anticuerpos pre y post-reacción. Si se detecta un anticuerpo que antes no
había sido detectado, éste se debe identificar. Las razones de lo anterior pueden ser: 1) error en la
identificación de la muestra; 2) producción anamnésica de anticuerpos después de una transfusión
reciente; 3) menos probable, transferencia pasiva de anticuerpos de una transfusión reciente.
10. Repetir las pruebas cruzadas en Coombs. Una prueba cruzada incompatible con prueba de
tamización de anticuerpos negativa puede indicar la presencia de anticuerpos dirigidos contra
antígenos de baja frecuencia.
11. Realizar pruebas de Coombs directo y de detección de anticuerpos en intervalos de tiempo
posteriores a la transfusión. Una primera muestra obtenida inmediatamente después de la reacción
puede tener niveles indetectables de aloanticuerpos, en especial si éstos se han unido
completamente a las células incompatibles.
12. Realizar hemogramas seriados para evidenciar el incremento o decremento en los valores de
hemoglobina o hematocrito.
13. Es deseable la realización de marcadores serológicos de hemólisis, que incluyen hemoglobina libre,
LDH, bilirrubinas y haptoglobina.
14. Examinar la sangre remanente en la unidad para evidenciar hemólisis.
15. En casos de reacciones anafilácticas, es deseable la investigación de la presencia de anticuerpos
anti-IgA.
16. Examinar la unidad devuelta al servicio de transfusión para anormalidades en la apariencia, como
coágulos, opacidades.
17. Si la presentación clínica sugiere sepsis bacteriana postransfusional, se debe realizar una tinción de
Gram y cultivo.
18. En casos sospechosos de TRALI es deseable la realización de anticuerpos anti-HLA.
19. Si cualquiera de las pruebas mencionadas arriba es positiva, se debe sospechar una reacción
hemolítica aguda. Aún, si las pruebas de compatibilidad no muestran errores, la posibilidad de la
reacción hemolítica aguda se debe seguir considerando si la clínica del paciente es consistente
con esta reacción.
20. Registrar los datos clínicos y resultados de las pruebas en el formato de reacciones adversas a la
transfusión.
21. Adjuntar al registro de RAT los resultados de las pruebas realizadas y toda la información disponible
en medio físico.
22. El médico tratante o del servicio de medicina transfusional seguirá todo el proceso de investigación
y conclusión del caso, la cuál será enviada al comité de la clínica o servicio.

RECOMENDACIÓN USO DE SANGRE FRESCA:

Exanguinotransfusión
Fracción pediátrica
Cirugía de cardio
UCI (politransfundidios)
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RECOMENDACIÓN USO DE
FILTROS:
Embarazadas
Oncológicos
Pacientes candidatos de transplante
Pacientes con anemias adquiridas y de origen genético
Insuficiencia renal crónica
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MANUAL INMUNOHEMATOLOGIA

ELABORADO POR
CONSUELO GIRALDO JIMENEZ
LIDER PROGRAMA

E.S.E. METROSALUD
MEDELLIN
2015

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