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a) Cromatografía en columna
La fase estacionaria es un sólido finamente dividido sostenido en un estrecho tubo de
vidrio o un metal. La fase móvil, que puede ser un líquido o un gas, se obliga a pasar
a través del sólido bajo presión o bien se deja percolar por efecto de la gravedad.
b) Cromatografía plana
La fase estacionaria puede ser un papel poroso o un sólido finamente dividido que se
aplica sobre una placa de vidrio. En este caso la fase móvil se desplaza a través del
sólido ya sea por acción capilar o bajo la influencia de la gravedad.
Instrumentación y Análisis Cromatografía gas-
líquido
CROMATOGRAFIA GAS-LIQUIDO
En la cromatografía gaseosa los componentes de una muestra vaporizada se
fraccionan como consecuencia de la partición entre una fase móvil y una fase
estacionaria mantenida en una columna. La cromatografía gas-sólido (CGS)
representa una subclasificación en la que la fase fija es un sólido; el proceso de
partición supone entonces equilibrios de adsorción gaseosa. En la cromatografía gas
- líquido(CGL) la fase estacionaria es un líquido sostenido sobre una matriz sólida
inerte; aquí son importantes los equilibrios gas-líquido.
APARATOS
Existen diferentes cromatógrafos de gases de diferente grado de complejidad.
Columnas
En este tipo de cromatografía se utilizan dos tipos de columnas:
a) Capilares.
Fabricadas de tubos capilares con diámetro interno entre 0,3 a 0,5 nm, cuya
superficie
interna está cubierta con una película muy m) de fase líquida. Presentan
delgada ( 1 una
caída de presión despreciable, por lo que pueden tener de 10 a 100 m o más; la
relación
VS/VM varía de 100 a 300, lo que explica en parte sus elevadas eficiencias. Se han
descrito
columnas de varios cientos de miles de platos teóricos. La capacidad para la
muestra es baja
(<0,01 L), lo que se puede aumentar recubriendo la superficie interior del tubo
con un
material poroso como el grafito, un óxido metálico o un silicato. Así se
aumenta la
superficie interna para soportar mayor cantidad de fase estacionaria (líquido); como
también
la capacidad de la columna.
b) Empacadas.
Se construyen de tubos metálicos o de vidrio de 1 a 8 mm de diámetro interno,
diseñadas
para sostener empaques sólidos desde 2 hasta 20 m de longitud. Los tubos están
plegados o
enrollados de modo que se puedan acomodar en forma adecuada dentro de un
termostato del
instrumento. Son comunes las columnas que poseen relaciones de V S/VM de 15
a 20 y
contienen de 30 a 300 platos teóricos por decímetro. Las mejor empacadas
poseen un total
de 20000 platos teóricos o más.
Fase líquida.
Las propiedades deseables para la fase líquida en una columna cromatográfica
gas-líquido son 1) baja volatilidad: idealmente, su punto de ebullición debe ser
por lo menos 200 superior a la temperatura máxima de operación para la
columna; 2) estabilidad térmica; 3) inercia química y 4) características de
disolvente de tal naturaleza que los valores de y k', para los solutos que han de
resolverse, se encuentren dentro de límites apropiados.
Termostatización de la columna.
La temperatura de la columna es una variable importante por lo que para el trabajo
de precisión debe ser controlada dentro de las décimas de grado. Por tal motivo está
dentro de un horno termostatizado. La temperatura óptima de la columna depende
del punto de ebullición de la muestra y del grado de separación requerido.
En general, la resolución óptima se asocia con la temperatura mínima; pero esto
incrementa el tiempo de elución y de término de un análisis.
Sistema de detección
Los aparatos de detección de un cromatógrafo gas -líquido deben responder rápida y
reproduciblemente a las bajas concentraciones de los solutos emitidos por la
columna. Dado que la concentración del soluto en el gas portador en cualquier
instante es sólo unas pocas partes por mil, el detector debe responder a
concentraciones uno o dos órdenes de magnitud menores (o más); además el paso
de un pico por el detector puede durar un segundo o menos, el detector debe en tal
breve período responder adecuadamente.
Catarómetro.
Se basa en los cambios de conductividad térmica de la corriente de gas; el sensor
consiste en un elemento calentado eléctricamente cuya temperatura, a una potencia
eléctrica constante, depende de la conductividad térmica del gas circundante. El
elemento calentado puede ser un hilo fino de platino, oro o tungsteno, o tambien, un
termistor semiconductor. La resistencia del hilo o del termistor da una medida de la
conductividad térmica del gas; a diferencia del detector de hilo, el termistor tiene un
coeficiente de temperatura negativo
En los instrumentos para cromatografía se utilizan dos detectores gemelos uno
delante (entrada) de la columna y otro detrás (salida); así sus resistencias
incorporadas en un puente de Wheatstone se comparan para eliminar la
conductividad del gas portador y reducir al mínimo los efectos de la variación de la
velocidad de flujo y la presión en la columna, así como de la energía eléctrica.
Las conductividades térmicas del hidrógeno y del helio son seis a diez veces mayores
que las de la mayoría de compuestos orgánicos. Así la presencia de pequeñas
cantidades de tales materiales reducen la conductividad térmica del gas efluente y el
detector registra una elevación de la temperatura.
Instrumentación y Análisis Cromatografía
gas-líquido
AVANCES EN CG
LA NOMENCLATURA EN CROMATOGRAFÍA DE GASES
Análisis de muestras
La cromatografía de gases es el método de elección para separar y analizar
compuestos orgánicos con puntos de ebullición inferiores a 250°C y los gases fijos;
ambos grupos tienen presión de vapor suficientemente altas de manera que pueden
ser transportados por la fase móvil gaseosa. Sin embargo, no es la presión de vapor
baja lo que impide el uso de la cromatografía de gases, sino la descomposición.
Cuando se separan materiales de alto punto
Columnas
La elección de diámetro, longitud y fase estacionaria dependen en un principio de
que se realice cromatografía en columna o capilar. En la tabla 4.1 se mencionan
algunas cifras de mérito para columnas empacadas y columnas capilares. La elección
de fase estacionaria para la mayor parte de las muestras se realiza basándose en
información específica (por ejemplo, la polaridad) de cada tipo de fases estacionaria
y en las condiciones específicas para diversos tipos de muestras, que se encuentran
en los catálogos de los fabricantes y en manuales.
0,3
DI de la columna 3 – 6 mm 0,10 – 0,53 mm 2 – 0,53 mm
3
Longitud de la columna 1– 3 m 30 – 50 m 0 – 50 m
Diámetro de partícula (dp) 120 – 185μm -- --
1
Grosor del recubrimiento -- 0,1 – 0,5 μm 2 – 25 μm
Platos teóricos/m 1 000 – 5 000 1 000 – 8 000 1 000 – 8 000
Número típico de platos 25 000 – 200 2
teóricos 1 000 – 5 000 000 5 000 – 200 000
totales (N)
Capacidad total 0,0
(μg/componente) 100 0,05 – 5 5 –5
Área superficial de la
fase 0,2 10-6 – 10-7 10-6 – 10-7
estacionaria (m2)
Gasto volumétrico (mL/min) 20 – 100 0,5 – 5 5 – 10
5
Gasto lineal (cm/s) 10 – 50 20 – 50 0 - 100
En CGL otro factor que se puede modificar es la cantidad de fase líquida presente.
Así, el hecho de usar más fase líquida tiene un efecto doble: primero, la capacidad
aumenta, de modo que se pueden usar cantidades de muestra más grandes. Una
mayor cantidad de muestra conduce en general a mejor cuantificación, mejor límite
de detección y mayor intervalo medible de las concentraciones de analito en la
muestra. Sin embargo, a medida que se dispone de más fase estacionaria y los
analitos pasan más tiempo disueltos en ella, el tiempo de retención aumenta, de modo
que es necesario balancear la capacidad con el tiempo de análisis. En columnas
capilares, el diámetro de la columna y el espesor de la capa de fase estacionaria son
críticos para determinar que tan bien se establece el equilibrio entre la fase
estacionaria y la fase móvil y, por tanto, la calidad de la separación. La fase líquida de
las columnas empacadas se mide por el porcentaje de carga, que es la medida en
peso/peso de fase estacionaria comparado con el peso total del empaque. La cantidad
de fase estacionaria
disponible también está en función del diámetro de las partículas. Los diámetros de
las partículas se expresan en términos de tamaño de malla del empaque. Este
número define el tamaño de los huecos de mallas estándar que se emplean para
filtración de polvos. A medida que el número es más alto, hay más líneas en la malla
y las partículas de empaque serán más pequeñas. Por ejemplo, las partículas de
“malla 80/100” pueden atravesar la malla “80”, pero quedan atrapadas en la malla
“100”, y tienen un diámetro aproximado de 150 a 175 μm.
Temperatura
La temperatura es crucial para las separaciones en cromatografía de gases, por
lo cual es conveniente lograr un control de ±0,5° C. La temperatura afecta las
posiciones de los equilibrios de distribución de los analitos entre el gas de arrastre
móvil y la fase estacionaria y así como la rapidez con que se establecen los
equilibrios. Cuando se aumenta la temperatura de la columna se acelera la elusión y
se alcanza más rápido el equilibrio entre la fase móvil y la estacionaria. La
temperatura óptima se determina teniendo en cuenta la resolución necesaria y el
deseo de reducir el tiempo de separación. Para lograr resultados óptimos, la
separación se verifica a temperatura constante (separación isotérmica) o con
programación de aumento de temperatura. El aumento de temperatura en el curso de
la separación se llama gradiente de temperatura. En cromatografía de gases un
gradiente de elución implica un gradiente de temperatura. El gradiente puede tener
diversas formas. Hay rampas lineales de temperatura o se puede proceder por
diversas rampas o mesetas. Este aumento de temperatura permite analizar con
puntos de ebullición y características muy variables en periodos más breves. Observe
que el gradiente de temperatura es una variación de temperatura con el tiempo, dT/dt;
no es un gradiente de temperatura a lo largo de la columna. La temperatura más alta
en el curso de la separación no sólo depende de la descomposición de la muestra
que se mencionó con anterioridad, sino que también hay que tener la estabilidad y la
presión de vapor de las fases estacionarias líquidas. La fase estacionaria líquida en
sí puede vaporizarse, descomponerse, o ambas cosas, y el material será expulsado
de la columna. Esto se llama sangrado de la columna, lo cual constituye una
descripción gráfica. Para efectuar una separación específica, el extremo inferior del
intervalo de temperatura se determina por las propiedades de la fase estacionaria y
los analitos componentes. En el caso extremo, a temperaturas excesivamente bajas,
todos los compuestos inyectados se quedan simplemente en la entrada de la columna
o en la parte superior de la fase estacionaria y dejan de desplazarse. A temperaturas
un poco más altas, pero aun demasiado bajas el proceso de adsorción y deserción
es lento y los picos se ensanchan.
Gasto de la fase móvil
En la tabla 4.1 se indican los gastos característicos de diversas columnas de
cromatografía de gases. Mientras que las columnas empacadas generalmente se
operan con gastos de décimas de mililitros por minuto (en algunos casos de hasta
200 mL/min), las columnas capilares normalmente operan con gastos desde menos
de 1mL/min hasta un pico de aproximadamente 5 mL/min. El incremento del gasto a
menudo acelera la elusión sin ejercer ningún efecto importante en la resolución.
Detectores
En cromatografía de gases se dispone de diversos detectores que indican los
cambios en la composición del eluyente. En la tabla 4.2 se mencionan los más
Instrumentación y Análisis Cromatografía gas-
líquido
Con el término cromatografía se engloba una serie de técnicas en las que los
componentes de una muestra son transportados por una fase móvil (gas ó líquido), a
través de una fase estacionaria (líquida ó sólida) que los retiene selectivamente
haciendo que eluyan a tiempos distintos, permitiendo su detección individual.
Esto origina que pese a ser técnicas parecidas, sean útiles en la solución de
problemas distintos, convirtiéndose más bien en técnicas complementarias. Así,
mientras que por Cromatografía de gases (CG) analizamos compuestos volátiles, con
la cromatografía líquida separamos aquellos compuestos polares y no polares de baja
volatilidad.