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OBJETIVOS
Reconocer los diferentes procesos metabólicos que llevan a cabo las bacterias usando como
modelo la columna de Winogradsky.
Identificar como se integran los diferentes productos y subproductos del metabolismo para permitir
el desarrollo de diferentes comunidades microbianas.
Identificar diferentes morfologías bacterianas y asociarlas con géneros característicos de bacterias
implicadas en el ciclo del azufre.
1. INTRODUCCIÓN
El metabolismo se refiere a todas las reacciones bioquímicas que se producen en una célula u
organismo. El estudio del metabolismo bacteriano se centra en la diversidad química de las
oxidaciones del sustrato y las reacciones de disimilación (reacciones por las que se descomponen las
moléculas del sustrato), que normalmente funcionan en las bacterias para generar energía. También
dentro del alcance del metabolismo bacteriano está el estudio de la captación y utilización de los
compuestos inorgánicos u orgánicos requeridos para el crecimiento y mantenimiento de un estado
estacionario celular (reacciones de asimilación). Estas reacciones exergónicas (energéticas) y
endergónicas (que requieren energía) son catalizadas dentro de la célula bacteriana viva por sistemas
enzimáticos integrados, siendo el resultado final la auto-replicación de la célula. La capacidad de las
células microbianas para vivir, funcionar y replicarse en un medio químico apropiado (tal como un
medio de cultivo) y los cambios químicos que resultan durante esta transformación constituyen el
alcance del metabolismo bacteriano.
2. CONSULTAS PRELIMINARES
Lectura Obligatoria: Hao T, Xiang P, Mackey H, Chi K, Lu H, Chui H, van Loosdrecht M, Chen G. A
review of biological sulfate conversions in wastewater treatment. Water research 2014; 65, 1 – 21
3. FUNDAMENTO TEÓRICO
La célula es un transformador de energía altamente especializado. La energía química generada por
las oxidaciones del substrato se conserva mediante la formación de compuestos de alta energía tales
como adenosina difosfato (ADP) y adenosina trifosfato (ATP) o compuestos que contienen el enlace
tioéster ADP y ATP representan adenosina monofosfato (AMP) más uno y dos de alta energía; la
energía se almacena en estos compuestos como enlaces de fosfato de alta energía. En presencia de
sistemas enzimáticos apropiados, estos compuestos pueden utilizarse como fuentes de energía para
sintetizar los nuevos compuestos orgánicos complejos necesarios para la célula. Todas las células
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vivas deben mantener reacciones bioquímicas en estado estacionario para la formación y el uso de
tales compuestos de alta energía.
Kluyver y Donker reconocieron que los microorganismos, independientemente de las especies, eran
en muchos aspectos químicamente similares a todas las demás células vivas. Por ejemplo, estos
investigadores reconocieron que la transferencia de hidrógeno es una característica común y
fundamental de todos los procesos metabólicos. Las bacterias, como las células de mamíferos y de
plantas, usan ATP o el enlace de fosfato de alta energía (~ P) como fuente de energía química primaria.
Las bacterias también requieren las vitaminas del complejo B como coenzimas funcionales para
muchas reacciones de oxidación-reducción necesarias para el crecimiento y la transformación de
energía. Un organismo como Thiobacillus thiooxidans, que crece en un medio que contiene solo azufre
y sales inorgánicas, sintetiza grandes cantidades de tiamina, riboflavina, ácido nicotínico, ácido
pantoténico, piridoxina y biotina. Por lo tanto, Kluyver propuso la teoría de la unidad de la bioquímica,
que establece que todas las reacciones enzimáticas básicas que soportan y mantienen procesos
vitales dentro de las células de los organismos, tenían más similitudes que diferencias. Este concepto
de unidad bioquímica estimuló a muchos investigadores a usar bacterias como sistemas modelo para
estudiar reacciones bioquímicas eucariotas, vegetales y animales relacionadas que son esencialmente
"idénticas" a nivel molecular.
Desde el punto de vista nutricional o metabólico, existen tres tipos fisiológicos de miccroroganismo:
los heterótrofos (quimioorganotróficos), los autótrofos (quimiolitotróficos) y las bacterias fotosintéticas
(fototróficas)
Metabolismo Heterótrofo
Los compuestos intermedios del ciclo de Krebs sirven como moléculas precursoras (bloques de
construcción) para la biosíntesis que requiere energía de compuestos orgánicos complejos. Las
reacciones de degradación que producen simultáneamente energía y generan moléculas precursoras
para la biosíntesis de nuevos constituyentes celulares se denominan anfibólicas.
estudiar las bacterias del ácido láctico) o los hidrocarburos (para estudiar los organismos que oxidan
los hidrocarburos).
Respiración
La glucosa es el sustrato más común usado para estudiar el metabolismo heterotrófico. La mayoría de
los organismos aeróbicos oxidan completamente la glucosa mediante la siguiente ecuación de
reacción:
C6 H12 O6 + 6O2 → 6CO2 + 6H2 O + Energía
Esta ecuación expresa el proceso de oxidación celular llamado respiración. La respiración ocurre
dentro de las células vegetales y animales, generando normalmente 38 moléculas de ATP (como
energía) a partir de la oxidación de 1 molécula de glucosa. Esto produce aproximadamente 380.000
calorías (cal) por unidad de glucosa (ATP ~ 10.000 cal / mol).
La respiración tiene lugar cuando cualquier compuesto orgánico (generalmente hidratos de carbono)
se oxida completamente a CO2 y H2O. En la respiración aeróbica, el O2 molecular es el receptor
terminal de los electrones. Para la respiración anaeróbica, el NO3-, SO42-, CO2 o fumarato pueden
servir como receptores de electrones terminales (en lugar de O2), dependiendo del microorganismo.
El resultado final del proceso respiratorio es la oxidación completa de la molécula del sustrato orgánico
y los productos finales formados son principalmente CO 2 y H2O. El amoníaco se forma también si la
proteína (o aminoácido) es el sustrato oxidado.
Metabólicamente, las bacterias son las únicas que a diferencia de las cianobacterias (algas verde-
azuladas) y otras células eucariotas pueden llevar la oxidación de la glucosa por más de una vía. En
las bacterias, la glucólisis representa una de varias vías por las cuales pueden atacar catabólicamente
la glucosa. La vía glicolítica se asocia más comúnmente con el metabolismo anaeróbico o fermentativo
en bacterias y levaduras. En bacterias, también existen otras vías heterofermentativas menores, tales
como la vía de fosfocetolasa.
Además, se encuentran otras dos vías de catabolización de la glucosa en las bacterias: la vía oxidativa
de pentosa fosfato (derivación de hexosa monofosfato) y la vía de Entner-Doudoroff, que se encuentra
casi exclusivamente en bacterias aeróbicas obligada. El género Azotobacter es altamente oxidativo y
la mayoría de las especies de Pseudomonas, por ejemplo, utilizan el camino de Entner-Doudoroff para
catabolismo de glucosa, porque estos organismos carecen de la enzima fosfofructoquinasa y por lo
tanto no pueden sintetizar fructosa 1,6-difosfato, un compuesto intermedio clave en la vía glicolítica.
(La fosfo-fructoquinasa es también sensible al O 2 molecular y no funciona en aerobios obligatorios).
Otras bacterias, que carecen de aldolasa (que divide la fructosa-1,6-difosfato en dos trifosfatos),
tampoco pueden tener una vía glicolítica funcional. Aunque el camino de Entner-Doudoroff se asocia
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generalmente con las bacterias aerobias obligatorias, está presente en el metabolismo anaerobio
facultativo de Zymomonas mobilis.
Fermentación
A finales de la década de 1850, Pasteur demostró que la fermentación es un proceso vital asociado al
crecimiento de microorganismos específicos y que cada tipo de fermentación puede definirse por el
producto final orgánico principal formado (ácido láctico, etanol, ácido acético o ácido butírico). Sus
estudios sobre la fermentación con ácido butírico condujeron directamente al descubrimiento de
microorganismos anaerobios. Pasteur concluyó que el oxígeno inhibía a los microorganismos
responsables de la fermentación del ácido butírico debido a que la movilidad bacteriana y la formación
de ácido butírico cesaron cuando se burbujeó aire en la mezcla de fermentación. Pasteur también
introdujo los términos aeróbico y anaeróbico. Sus puntos de vista sobre la fermentación se desprenden
de sus estudios microbiológicos sobre la producción de cerveza.
El ciclo de Krebs
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También llamado ciclo de los ácidos tricarboxílicos o ciclo de ácido cítrico) funciona oxidativamente en
la respiración y es el proceso metabólico mediante el cual el piruvato o acetil-SCoA se descarboxila
completamente a CO 2. En bacterias, esta reacción se produce a través de acetil-SCoA, que es el
primer producto en la descarboxilación oxidativa de piruvato por la enzima piruvato deshidrogenasa.
El ciclo de Krebs es por lo tanto otra etapa preparatoria en el proceso respiratorio. Si 1 molécula de
piruvato se oxida completamente a 3 moléculas de CO 2, generando 15 moléculas de ATP, la oxidación
de 1 molécula de glucosa producirá hasta 38 moléculas de ATP, siempre que la glucosa sea disimilada
por el glucólisis y el ciclo de Krebs. Las reacciones de transporte de electrones o fosforilación oxidativa
son bioenergéticamente idénticas a las de las mitocondrias eucarióticas.
Respiración Anaerobia
Autotrofía
Las bacterias que crecen únicamente a expensas de compuestos inorgánicos (iones minerales), sin
utilizar la luz solar como fuente de energía, se llaman autótrofos, quimiotróficos, quimioautótrofos o
quimiolitotróficos. Al igual que los organismos fotosintéticos, todos los autótrofos utilizan CO 2 como
fuente de carbono para el crecimiento. Curiosamente, la fuente de energía para tales organismos es
la oxidación de compuestos inorgánicos específicos. El compuesto inorgánico que se oxida depende
de los microorganismos en cuestión. Muchos autótrofos no crecen en medios que contienen materia
orgánica, incluso agar.
También se encuentran entre los microorganismos autotróficos las bacterias oxidantes de azufre u
oxidantes de compuestos de azufre, que rara vez exhiben un modo de metabolismo estrictamente
autotrófico como las bacterias nitrificantes obligatorias. Los compuestos de azufre representativos
oxidados por tales bacterias son H2S, S2 y S2O3. Entre las bacterias del azufre se encuentran dos
organismos muy interesantes; Thiobacillus ferrooxidans, que obtiene su energía para el crecimiento
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autotrófico oxidando el azufre elemental o el hierro ferroso, y T. denitrificans, que obtiene su energía
oxidando S2O3 de forma anaeróbica, utilizando NO3- como el único aceptor terminal de electrones.
Todas las bacterias autotróficas deben asimilar el CO2, que se reduce a la glucosa a partir de la cual
se sintetiza la materia celular orgánica. La energía para este proceso biosintético se deriva de la
oxidación de compuestos inorgánicos discutida en el párrafo anterior. Obsérvese que todas las
bacterias autotróficas y fototróficas poseen esencialmente los mismos constituyentes celulares
orgánicos que se encuentran en las bacterias heterotróficas; Desde el punto de vista nutricional, sin
embargo, el modo autotrófico del metabolismo es único, ocurriendo sólo en bacterias.
• Bata de laboratorio.
• Guantes de nitrilo.
• Gafas de seguridad.
Mantener los elementos personales de seguridad identificados y en buen estado. Está prohibido su
intercambio con los demás compañeros de laboratorio.
Tanto por razones de seguridad como por respeto al medio ambiente, es importante disponer los
residuos generados en las prácticas del laboratorio de química en forma adecuada. Por ello el
estudiante debe:
Emplear los recipientes destinados para eliminar los residuos o desechos de laboratorio, los cuales
están debidamente identificados según el tipo de sustancia a desechar.
No arrojar por el desagüe los desechos o residuos químicos obtenidos durante el desarrollo de la
práctica. Si tiene alguna inquietud al respecto comuníquela al responsable del laboratorio, quien le
indicará la forma correcta de hacerlo.
5. PROCEDIMIENTO
5.1 MATERIALES
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5.2 REACTIVOS
5.3 EQUIPOS
5.4 SOLUCIONES
Tabla 4. Listado de soluciones que requieren estar listas para el día de la práctica:
6. BIBLIOGRAFÍA
Brock T.D. Madigan M.T. Martenko J.J. y Parker J. (Eds) Biología de los microorganismos. 13ª
Edición. Prentice Hall International. (2014).
Hao T, Xiang P, Mackey H, Chi K, Lu H, Chui H, van Loosdrecht M, Chen G. A review of biological
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