pigmentos que absorben la luz, anclas hidrofóbicas LABORATORIO DE BIOQUÍMICA. para proteínas, hormonas y mensajeros intracelulares. PROFESORA: Verónica Alcántara Farfán Objetivos: PRÁCTICA: SEPARACIÒN DE FOSFOLÍPIDOS -Aplicar la técnica de cromatografía en capa fina POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA Y para la separación de fosfolípidos de la yema de DETERMINACIÓN DE COLESTEROL EN LA huevo YEMA DE HUEVO. -Determinar la concentración de colesterol en la yema de huevo, por el método de Lieberman- Introducción: Burchard. Huevo de Resultados: Gallina . YODO MOLIBDATO NINHIDRINA BISMUTO LN 5.85 Rf Rf Rf Rf FE 3.8 3.8 YODO MOLIBDATO NINHIDRINA BISMUTO FS 2.35 2.3 2.2 0.84 FB 3.55 0.64 0.64 FC 2.9 2.8 2.8 0.33 0.32 0.3 EM 1.7 1.7 1.8 0.61 LFC 1.2 1.2 1.2 0.43 0.43 0.41 FRENTE 0.25 0.25 0.25 DEL 0.19 0.19 0.18 SOLV. 6.5 6.5 6.4 6.5 Huevo de guajolote YODO MOLIBDATO NINHIDRINA BISMUTO LN 5.5 FE 4.2 4.2 FS 2.15 2.1 1.95 FB 3.9 FC 2.8 2.8 2.7 EM 1.65 1.65 1.65 LFC 1.25 1.25 1.2 FRENTE Rf Rf Rf DEL Rf YODO MOLIBDATO NINHIDRINA BISMUTO SOLV. 6.5 6.5 6.4 6.5 0.9 Los lípidos biológicos constituyen un grupo 0.58 0.58 químicamente diverso de compuestos cuya 0.36 0.35 0.34 característica común es su insolubilidad en agua. 0.55 Las funciones de los lípidos son igualmente 0.45 0.43 0.43 diversas. En muchos organismos, las grasas y los 0.26 0.26 0.28 aceites son las formas principales de 0.18 0.18 0.18 almacenamiento energético, mientras que los fosfolípidos y los esteroles constituyen los principales elementos estructurales de las membranas biológicas. Otros lípidos, aun estando presentes en cantidades relativamente pequeñas, *Se anexa Curva Tipo Conclusiones: TUBO ABSORBENCIA [COLESTEROL ] ● Utilizamos cloroformo-metanol, un solvente B 0.044 0 muy polar y muy no polar para obtener la 1 0.070 20 mayor cantidad de fosfolípidos posibles. 2 0.183 40 ● Se obtuvo un Rf similar en aquellas placas 3 0.307 60 con identificadores diferentes, pero que 4 0.182 80 teníamos los mismos fosfolípidos en las 5 0.475 100 placas. Aceite 0.293 78.55 ● Dependiendo del identificador, son los Manteca 0.050 13.40 fosfolípidos que se revelaran en la placa. Huevo 0.137 36.73 ● A Rf mayor, fosfolípido más no polar; a Rf blanco menor, fosfolípido más polar Huevo 0.202 54.15 ● Los lípidos neutros son los más NO polares. rojo La lisofosfatidilcolina es el más polar de los fosfolípidos estudiados. Para Colesterol: ● El solvente utilizado fue cloroformo, un Discusión: solvente no polar debido al tipo de enlace Utilizamos cloroformo-metanol, un solvente muy en los lípidos utilizados. polar y muy no polar para obtener la mayor ● La reacción que se lleva a cabo al adicionar cantidad de fosfolípidos posibles. el Ácido Sulfúrico concentrado es muy Se obtuvo un Rf similar en aquellas placas con inestable, por lo que se tuvo que leer la identificadores diferentes, pero que teníamos los absorbencia en los tubos antes de los 20 mismos fosfolípidos en las placas. min para que el producto leído fuera el Dependiendo del identificador, son los fosfolípidos correcto. que se revelaran en la placa. ● Algunos resultados obtenidos no A Rf mayor, fosfolípido más no polar; a Rf menor, concordaron con bibliografías. fosfolípido más polar Los lípidos neutros son los más NO polares. La lisofosfatidilcolina es el más polar de los fosfolípidos estudiados. Para el caso de colesterol: Los primeros tubos (1 a 5) se utilizaron para realizar la curva tipo que se utilizaría para el cálculo de colesterol en nuestros tubos problemas. De acuerdo con los resultados, existe una diferencia de 0.65 de contenido de colesterol entre Bibliografía: los huevos problema, dando que el huevo rojo H. Sengel, biochemical Calculation. Nueva york, contiene una cantidad mayor a la del huevo blanco, 1968. sin embargo, los estudios sugieren que eso no es Conn, E., Stumpf P.K., Bruening G. “Bioquimica verdad dado que ambos son huevos de gallina y IMAGEN Fundamental”. 1 “CROMATOGRAFÍA Ed. Limusa. México. DE deberían tener lo mismo. FOSFOLÍPIDOS” De la misma forma, la manteca de cerdo en bibliografías consultadas contiene 95mg en 100g de colesterol en su composición, una gran diferencia a lo que obtuvimos experimentalmente. Esto arroja que la manteca estudiada podría no ser pura de cerdo (manteca diluida) ya que tiene una composición muy diferente a la real. En el caso del aceite, dependiendo del tipo de aceite se tiene una cantidad diferente de colesterol por lo que no podría decir si es correcto el dato, pero aproximadamente se obtuvo la cantidad correcta de colesterol.