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ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS juegan papeles cruciales como cofactores

BIOLÓGICAS IPN enzimáticos, transportadores electrónicos,


pigmentos que absorben la luz, anclas hidrofóbicas
LABORATORIO DE BIOQUÍMICA. para proteínas, hormonas y mensajeros
intracelulares.
PROFESORA: Verónica Alcántara Farfán
Objetivos:
PRÁCTICA: SEPARACIÒN DE FOSFOLÍPIDOS -Aplicar la técnica de cromatografía en capa fina
POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA Y para la separación de fosfolípidos de la yema de
DETERMINACIÓN DE COLESTEROL EN LA huevo
YEMA DE HUEVO. -Determinar la concentración de colesterol en la
yema de huevo, por el método de Lieberman-
Introducción: Burchard.
Huevo
de
Resultados:
Gallina
.
YODO MOLIBDATO NINHIDRINA BISMUTO
LN 5.85 Rf Rf Rf Rf
FE 3.8 3.8 YODO MOLIBDATO NINHIDRINA BISMUTO
FS 2.35 2.3 2.2 0.84
FB 3.55 0.64 0.64
FC 2.9 2.8 2.8 0.33 0.32 0.3
EM 1.7 1.7 1.8 0.61
LFC 1.2 1.2 1.2 0.43 0.43 0.41
FRENTE 0.25 0.25 0.25
DEL 0.19 0.19 0.18
SOLV. 6.5 6.5 6.4 6.5
Huevo de
guajolote
YODO MOLIBDATO NINHIDRINA BISMUTO
LN 5.5
FE 4.2 4.2
FS 2.15 2.1 1.95
FB 3.9
FC 2.8 2.8 2.7
EM 1.65 1.65 1.65
LFC 1.25 1.25 1.2
FRENTE Rf Rf Rf
DEL Rf YODO MOLIBDATO NINHIDRINA BISMUTO
SOLV. 6.5 6.5 6.4 6.5 0.9
Los lípidos biológicos constituyen un grupo 0.58 0.58
químicamente diverso de compuestos cuya 0.36 0.35 0.34
característica común es su insolubilidad en agua. 0.55
Las funciones de los lípidos son igualmente 0.45 0.43 0.43
diversas. En muchos organismos, las grasas y los 0.26 0.26 0.28
aceites son las formas principales de
0.18 0.18 0.18
almacenamiento energético, mientras que los
fosfolípidos y los esteroles constituyen los
principales elementos estructurales de las
membranas biológicas. Otros lípidos, aun estando
presentes en cantidades relativamente pequeñas,
*Se anexa Curva Tipo
Conclusiones:
TUBO ABSORBENCIA [COLESTEROL
] ● Utilizamos cloroformo-metanol, un solvente
B 0.044 0 muy polar y muy no polar para obtener la
1 0.070 20 mayor cantidad de fosfolípidos posibles.
2 0.183 40 ● Se obtuvo un Rf similar en aquellas placas
3 0.307 60 con identificadores diferentes, pero que
4 0.182 80 teníamos los mismos fosfolípidos en las
5 0.475 100 placas.
Aceite 0.293 78.55 ● Dependiendo del identificador, son los
Manteca 0.050 13.40 fosfolípidos que se revelaran en la placa.
Huevo 0.137 36.73 ● A Rf mayor, fosfolípido más no polar; a Rf
blanco menor, fosfolípido más polar
Huevo 0.202 54.15 ● Los lípidos neutros son los más NO polares.
rojo La lisofosfatidilcolina es el más polar de los
fosfolípidos estudiados.
Para Colesterol:
● El solvente utilizado fue cloroformo, un
Discusión:
solvente no polar debido al tipo de enlace
Utilizamos cloroformo-metanol, un solvente muy
en los lípidos utilizados.
polar y muy no polar para obtener la mayor
● La reacción que se lleva a cabo al adicionar
cantidad de fosfolípidos posibles.
el Ácido Sulfúrico concentrado es muy
Se obtuvo un Rf similar en aquellas placas con
inestable, por lo que se tuvo que leer la
identificadores diferentes, pero que teníamos los
absorbencia en los tubos antes de los 20
mismos fosfolípidos en las placas.
min para que el producto leído fuera el
Dependiendo del identificador, son los fosfolípidos
correcto.
que se revelaran en la placa.
● Algunos resultados obtenidos no
A Rf mayor, fosfolípido más no polar; a Rf menor,
concordaron con bibliografías.
fosfolípido más polar
Los lípidos neutros son los más NO polares. La
lisofosfatidilcolina es el más polar de los
fosfolípidos estudiados.
Para el caso de colesterol:
Los primeros tubos (1 a 5) se utilizaron para
realizar la curva tipo que se utilizaría para el
cálculo de colesterol en nuestros tubos problemas.
De acuerdo con los resultados, existe una
diferencia de 0.65 de contenido de colesterol entre Bibliografía:
los huevos problema, dando que el huevo rojo H. Sengel, biochemical Calculation. Nueva york,
contiene una cantidad mayor a la del huevo blanco, 1968.
sin embargo, los estudios sugieren que eso no es Conn, E., Stumpf P.K., Bruening G. “Bioquimica
verdad dado que ambos son huevos de gallina y IMAGEN
Fundamental”. 1 “CROMATOGRAFÍA
Ed. Limusa. México. DE
deberían tener lo mismo. FOSFOLÍPIDOS”
De la misma forma, la manteca de cerdo en
bibliografías consultadas contiene 95mg en 100g
de colesterol en su composición, una gran
diferencia a lo que obtuvimos experimentalmente.
Esto arroja que la manteca estudiada podría no ser
pura de cerdo (manteca diluida) ya que tiene una
composición muy diferente a la real.
En el caso del aceite, dependiendo del tipo de
aceite se tiene una cantidad diferente de colesterol
por lo que no podría decir si es correcto el dato,
pero aproximadamente se obtuvo la cantidad
correcta de colesterol.