PRÁCTICAS BIOLOGÍA COLEGIO MARAVILLAS Miguel Conesa 3

ed. ©

PRÁCTICA 10

OBSERVACION DE CROMOSOMAS y CELULAS EN

MITOSIS EN MERISTEMOS TERMINALES DE RAICES
DE ALIUM CEPA (L.)

Materiales:
Microscopio

Portaobjetos y cubreobjetos

Bisturí

Vidrio de de reloj o pozillos de porcelana.

CIH.0.1N.

Orceina acética

Mechero de alcohol. Pinzas de madera

Papel de filtro

Raices de cebollas, ajos etc.

Método:

Poner las cebollas en agua durante varios días hasta que se desarrollen
las raíces, para conseguirlo se colocan las cebollas sobre un vaso, de tal
forma que el agua toque la parte inferior del bulbo. Es necesario que los
vegetales se mantengan a 10°-12° C. y a oscuras, (un frigorífico casero
reúne perfectamente estas condiciones).
Cuando las raíces tengan 7 o más milímetros de longitud se cortan con
una tijera solamente la parte apica1 de unos 4 mm. de longitud
aproximadamente.
Las raíces así obtenidas se colocan en un vidrio de reloj que contenga
orceina acética al 2%.

Calentar suavemente el vidrio de reloj con las raicillas a la llama de un

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mechero de alcohol hasta la emisión de vapores pero cuidando de que no
llegue a hervir (antes de empezar a calentar añadir al vidrio unas gotas de
CIH.0.1N). Posteriormente se deja reposar en la mesa de 10 a 15
minutos. Esta operación se (antes de empezar a calentar añadir al vidrio
unas gotas de CIH.0.1N). Posteriormente se deja reposar en la mesa de
10 a 15 minutos. Esta operación se (repite tres o cuatro veces, después
del último calentamiento dejar reposar durante quince minutos. Seguida-
mente se toma con las pinzas los dos primeros milímetros de las raíces,
separando previamente la cofia de consistencia más dura. A continuación
se realiza un "SQUASH" aplastando el cubreobjetos contra el
portaobjetos. Generalmente se utiliza la punta de un lápiz de grafito
golpeando suavemente y describiendo espirales. De esta forma se
eliminarán las burbujas de aire que entorpecen la realización de la
práctica.
Limpiar el exceso de colorante con papel de filtro y observar al
microscopio por encima de los 500X.

Resultados:

Se observan los ápices las raíces extendidos, en ellos se destacan las

células más o menos rectangulares según su proximidad a la punta. En
la mayor parte de las células del ápice se pueden observar los
cromosomas fuertemente teñidos, a modo de pequeños filamentos más o
menos nítidos e individualmente perfilados, según la fase del ciclo
mitótico en la que se encuentren.
Describir mediante un dibujo y las explicaciones pertinentes cada una de
las fases observadas dentro del ciclo celular.
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Duración del ciclo mitótico.

Se observarán cinco campos microscópicos por alumno a 800X

contabilizando al menos 100 células, los resultados se utilizan para
completar el cuadro adjunto:

INTER PROF META ANA TELO

Nº1

Nº2

Nº3

Realizar en un diagrama de sectores el porcentaje de 360º que tendría cada

una de las fases de la mitosis.

Identifica el estado en el que se

encuentran estas células fotografiadas
en el Laboratorio de Biología del
Colegio Maravillas.
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REACCION DE FEULGEN :

Esta reacción es específica de los núcleos celulares y de los cromosomas, por esta
razón se ha utilizado en estudios cualitativos y cuantitativos.

Fundamento:

Se basa .en la capacidad de los monosacáridos (en este caso desoxirribosa, presente
en el A.D.N.) para reducir el reactivo se Schiff que en estado normal es incoloro. El
azúcar tiene que deshacerse de la correspondiente base nitrogenada, para ello
sometemos la preparación a una suave hidrólisis con CIH. Una vez que el A.D.N. se ha
liberado de los grupos nitrogenados quedan tantos radicales aldehídicos libres como
bases se hallan eliminado, estos grupos aldehídicos son los que se reducen dando el
color rojo-magenta típico de la reacción.
Cuando se ensaya sobre A.R.N. la reacción es negativa ya que la hidrólisis de este
ácido provoca una degradación a nucleótidos directamente no liberando los grupos
aldehídicos responsables de la reacción.

Materiales:

Raíces de cebolla

Fijador Carnoy (Alcohol y ácido acético 3:1) Agua destilada

C1H 5N.
Reactivo de Schiff
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Agua sulfurosa Acido acético 50%.

Microscopio
Portaobjetos y cubreobjetos.

Los tejidos se mantendrán una hora en el fijador Carnoy lavándose cuidadosamente una vez
transcurrido el tiempo. Las raíces se introducen en un vidrio de reloj con CIH 5N. durante 30
minutos, agitándose constantemente, una vez tratada con el ácido se lavan cuidadosamente con
el agua destilada. A continuación se depositan las raíces en el reactivo de Schiff en un recipiente
cerrado herméticamente (a oscuras) durante 20 minutos y agitando de vez en cuando. Una vez
pasado el tiempo se lavan las raíces en agua sulfurosa para eliminar el reactivo no utilizado.
Después se lava en agua corriente y se preparan las raíces para el "Squash". La observación
microscópica se hará por encima de los 500X.
A continuación se depositan las raíces en el reactivo de Schiff en un recipiente cerrado
herméticamente (a oscuras) durante 20 minutos y agitando de vez en cuando. Una vez pasado
el tiempo se lavan las raíces en agua sulfurosa para eliminar el reactivo no utilizado. Después se
lava en agua corriente y se preparan las raíces para el "Squash". La observación microscópica
se hará por encima de los 500X.

Resultados: Expresar gráficamente y comentar los campos observados al microscopio.

Reactivo de Schiff:
0.5 gr. de Fuschina básica + 100 m!. de agua desionizada + 1 gr. de metabisulfi to sódico + 10
m!. de C1H 1N., introducir en agitador magnético durante 2h. hasta que se decolore la solución,
añadir carbón activo durante los últimos diez minutos
de agitación; filtrar. El reactivo debe observarse incoloro. (agua sulfurosa:10ml. de.CIH 1N. +
10 ml·de metabisulfito sódico al 5% + 180 mI. de agua destilada. Esta preparación no puede
conservarse y ha de prepararse de nuevo para ser utilizada).