INFORME DE GEOLOGIA

FACULTAD DE
INGENIERÍA AMBIENTAL

“AÑO DEL BUEN SERVICIO AL CIUDADANO”

PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO

ASIGNATURA :

MICROBIOLOGIA AMBIENTAL.

DOCENTE :

MERCY PAOLI, ROJAS MORENO.

ESTUDIANTES :

 FERNANDEZ BRAVO, Dayana.

 GARAY ALVAREZ, Kellcy.
 GASPAR PRIALE, Javier.
 GOMEZ ALBERTO, Karen.
 HINOSTROSA ASTUÑAUPA, Charlie.
 MAYTA QUISPE, Estefani.
 ÑAHUI GALA, Luz maría.

SECCION :

4431

HUANCAYO – PERÚ
2017-II

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INDICE
PORTADA

ÍNDICE

INTRODUCCION

MARCO TEÓRICO

1. TEMA

2. PROPOSITO

3. OBJETIVOS

4. DEFINICIONES

5. MATERIALES, EQUIPOS Y REACTIVOS

6. PROCEDIMIENTO

7. RESULTADO

CONCLUSIONES

RECOMENDACIONES

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INTRODUCCION

El presente trabajo de laboratorio se refiere al tema de “PREPARCION DE

MEDIOS DE CULTIVOS” se puede definir como un conjunto de nutrientes, factores de
crecimiento y otros componentes que en concentraciones adecuadas y en condiciones
físicas optimas permiten el crecimiento adecuado de los microorganismos. Cabe recalcar
que una forma muy útil de poder aislar, identificar y conservar los microorganismos es
mediante el uso de medios de cultivo, inicialmente ideados por Pasteur (que como ya
sabemos se considera el padre de la microbiología), quien se dio cuenta que los
microorganismos podían crecer en soluciones que tuvieran azúcar y una fuente de
nitrógeno.

En los laboratorios de microbiología se utilizan diferentes tipos de medios de

cultivo. Lo que comúnmente se utiliza es el MEDIO COMUN que pueden ser preparados
en forma líquida, sólida y semisólida. El medio común es aquel que posee los
componentes mínimos para que pueda producirse el crecimiento de bacterias que no
necesiten requerimientos especiales. La forma más sencilla de clasificar los medios de
cultivo es por su consistencia, entonces aparecen los medios de cultivo sólidos y los
medios de cultivo líquidos o también llamados caldos que ya se mencionaron
anteriormente. En ambos medios debe haber una buena cantidad de nutrientes que
faciliten el crecimiento bacteriano y la diferencia radica en la presencia de una sustancia
que se llama Agar o “Agar-Agar” y que es la encargada de darle la solidez y consistencia
al medio. Esta sustancia proviene, principalmente, de un alga llamada Gelidium, aunque
muchos otros géneros pueden servir como fuente de este polisacárido (es decir, un
azúcar grande formado por la unión de azúcares pequeños).

La ventaja fundamental de usar un medio de cultivo líquido, que se utilizó en la

práctica de laboratorio nos permite que crezcan las bacterias que se encuentran en muy
poca cantidad, es decir, cuya concentración es muy baja en la muestra que estamos
analizando. También es llamado caldo nutritivo, compuesto principalmente de extracto de
carne, peptona y agua. Se utiliza fundamentalmente cuando se pretende la obtención de
una suspensión bacteriana de una determinada concentración. Para el caso del medio de
cultivo sólido, la ventaja radica en que permite detectar los diferentes tipos de bacterias
que puedan encontrarse en una sola muestra, entonces el usar uno u otro medio de

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cultivo dependerá de lo que busquemos o queramos: aislar una bacteria que se encuentre
en cantidades muy pequeñas (medio líquido) o todas las bacterias que puedan haber en
una muestra (medio sólido).

Los medios de cultivo son uno de los sistemas más importantes para la identificación de
microorganismos, pues se trata de observar su crecimiento en sustancias alimenticias
artificiales preparadas en el laboratorio. El material alimenticio en el que crecen los
microorganismos es el medio de cultivo y el crecimiento de los microorganismos es el
cultivo.

Podemos decir que la microbiología empieza su verdadero desarrollo como ciencia en el

momento en que se descubre el microscopio y comienza la observación de los primeros
microorganismos, pero es indudable que la puesta a punto de los medios de cultivo y la
utilización del agar como solidificante, marcan dos importantes puntos de inflexión en su
evolución. La primera noticia de la utilización de medios de cultivo nos llega del micólogo
Brefeld, que consiguió aislar y cultivar esporas de hongos en medios sólidos realizados a
base de gelatina. Sin embargo este sistema no era adecuado para las bacterias (por su
menor tamaño) y no fue hasta el año 1878 cuando Lister popularizó un método enfocado
al cultivo puro basado en diluciones seriadas en un medio líquido. Koch realizó sus
investigaciones utilizando en un primer momento rodajas de patata como soporte nutritivo
sólido, pero no tardó en recurrir al caldo de carne líquido, diseñado por Loeffler, al que,
en 1881, añadió gelatina, logrando un medio sólido transparente ideal para la observación
de la morfología macroscópica de las colonias microbianas.

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MARCO TEORICO

1. TEMA:
“Preparación de medios de cultivo”

2. PROPOSITO:

 Identifica los requerimientos nutricionales de los microorganismos y

prepara diferentes medios de cultivo.

3. OBJETIVOS:

 Preparar adecuadamente medios de cultivo a partir de sus ingredientes.

4. FUNDAMENTO:

 La preparación adecuada de un medio de cultivo nos permite disponer de

los nutrientes y condiciones necesarias para favorecer el crecimiento de
los microorganismos en el laboratorio.

5. DEFINICIONES:

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6. MATERIALES, EQUIPOS Y REACTIVOS

a. EQUIPO

CANT. EQUIPO CARACTERISTICA IMAGEN

01 Hornilla
eléctrica

01 Balanza De presión de 3 ejes.

eléctrica

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b. MATERIALES

CANT. EQUIPO CARACTERISTICA IMAGEN

01 Probeta 100mL
graduada

01 Varilla de Ayuda a homogenizar

vidrio

01 Vaso 600mL
precipitado

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C. EQUIPOS
CANT. EQUIPO CARACTERISTICA IMAGEN
01 Frasco de 100mL
Peptona

01 Frasco de Ayuda a
extracto homogenizar
de carne

01 Frasco de 600mL
NaCl

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01 Cintas de Se utilizó para saber

pH el pH del caldo
nutritivo.

01 Frascos Se utilizó para

NaOH alcanzar un pH 7
0.1N

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7. PROCEDIMIENTO
a. Primero pesamos los ingredientes según la cantidad requerida por los
medios a preparar. A continuación se explica detalladamente:

Cloruro de sodio: 0,125g/mL Extracto de carne: 0,25g/mL

Peptona: 0,25g/mL

b. Colocar la cantidad pesada en el matraz Erlenmeyer (con excepción del

agar granulado que se adiciona en caliente), adicionar agua destilada en
la proporción requerida. Homogenizar la mezcla mediante la varilla de
vidrio.

Mezcla homogénea de peptona,

extracto de carne y cloruro de sodio.

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c. Calentamos la muestra (mezcla), empleando la cocina eléctrica, hasta

lograr la total disolución de los ingredientes.

d. Después de la disolución total de los ingredientes, enfriar a 50-55°C y

luego ajustamos el pH a 7,0 – 7,2 con NaOH 0.1 N.

En la imagen se observa que a la

solución se incrementa NaOH 0.1 N para
ajustar el pH, al final se obtuvo un pH igual
a 7.

e. Esterilizar a la autoclave a 15 Ib de presión (121 ° C) por 15 minutos.

Terminado el tiempo de esterilización, esperar que la aguja del manómetro
descienda y extraer los medios.
f. Los medios sólidos sometidos al proceso de esterilización y enfriados a
50-55°C, deben de repartirse en alícuotas de 12 a 15 mL en 1-2 placas
Petri en condiciones asépticas; para ello se tendrá que seguir las
siguientes indicaciones:

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No destapar las cajas de petri, sino hasta el momento que vayan a ser
utilizadas. Es conveniente colocarse un cubre bocas la persona que va a
realizar el vaciado y evitar hablar en todo momento para no contaminar el
medio de cultivo.
 Es conveniente mantener el mechero encendido y trabajar cerca
del área estéril al momento del vaciado en las cajas de petri.
Levantar la tapadera de la caja petri con la mano izquierda, sin
soltarla y sin retirarla demasiado de la base de la misma caja
mientras que con la mano derecha tomar el matraz que contiene el
medio de cultivo y realizar el vaciado de aproximadamente 15 ml a
20 ml de Agar por placa procurando que no se forman burbujas, se
procede a tapar la caja inmediatamente.
 Si se forman burbujas, tomar el mechero, flamear el medio de
cultivo sobre la superficie de la caja de petri y de manera rápida.
Se procede a tapar la caja. Esperar a que el medio solidifique.
 Se rotulan los medios de cultivo, anotando la fecha y con iniciales
el tipo de medio de cultivo. Si las placas no se van a utilizar el
mismo día se sujetan con cinta y se colocan en el refrigerador de
manera invertida para evitar que el vapor condensado caiga sobre
el medio de cultivo y lo pueda contaminar.
 Cuando se vayan a utilizar los medios de cultivo preparados, será
necesario secar las placas invertidas en estufa a 37 °C por 24 h,
para control de esterilidad.

g. Si se desea añadir medio sólido en tubos, entonces se esterilizará el Agar

directamente en los tubos a 121·C durante 15 minutos tapados con
algodón, gasa y papel estraza. Si desea que solidifiquen inclinados,
colocarlos en una superficie lisa inclinándolos en un ángulo de 20° a 30°
sobre una varilla de vidrio.

8. RESULTADOS

 En la práctica de laboratorio se realizó un medio de cultivo (CALDO

NUTRITIVO) en la cual se midió el pH con ayuda del papel tornasol,
enseguida se evidencio un pH resultante igual a 5, el cual no favorece al

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crecimiento de microrganismos ya que el pH adecuado para un medio de

cultivo varía entre 7- 7,2.

En la imagen se observa que la solución

diluida tiene un pH igual a 5.

 Después se agregó a la solución una base “NaOH 0.1 N” de tres a cuatro

gotas para ajustar el pH y luego se obtuvo un pH igual a 7, como bien
sabemos para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de
cultivo debe reunir una serie de condiciones entre ellas un pH adecuado o
un grado correcto de acidez o alcalinidad, cabe recalcar que la mayoría de
ellos se desarrollan mejor en medios con un pH neutro.
Se observa que el pH neutro.

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 Al final se obtuvo un medio de cultivo óptimo para el crecimiento de las

bacterias.

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