Anexo 2: Cálculos para el ensamblaje de la PCR

Tabla 1.- Información sobre los volúmenes de reacción del ensayo

Concentración Concentración Volumen Master Mix
Reactivos
Stock (Cs) inicial (Ci) Inicial (Vi) (____Rx)
Buffer GoTaq 5X 1X
dNTPs 20mM 0,4mM
MgCl2 25mM 1,5mM
Primer Forward 30μM 0,3μM
Primer Reverse 30μM 0,3μM
Taq Polimerasa 5U/μL 1,25U/μL
Agua ultra pura ---- ----
ADN 15ng/μL 1,5ng/μL
Vf= 50 μL VMM=_______

Calcular los Volúmenes por reacción con la fórmula:

𝐶𝑠 ∗ 𝑉𝑓 = 𝐶𝑖 ∗ 𝑉𝑖

Figura 1.- Distribución de volúmenes por reacción

Tabla 2.- Programa para el termociclador

Temperatura (°C) Tiempo (min) Ciclos

Denaturación Inicial 94 4 1
Denaturación 94 1
Annealing 63 1 40
Extensión 72 1
Extensión Final 72 4 1
Conservación 4 ∞ 1