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El efecto de la heterogeneidad del ligando en el diagrama de Scatchard

Se realizaron simulaciones por ordenador de estudios de unión en equilibrio de una mezcla de dos
ligandos marcados que se unían competitivamente a una única clase de sitios idénticos e
independientes (receptores) para investigar cómo la heterogeneidad del ligando afecta a los datos
observados en tales estudios. El dato simulado se presenta en las gráficas de Scatchard. La
heterogeneidad de ligandos se encontró generalmente que era indistinguible del caso de un
ligando homogéneo cuando se aplicaban las condiciones experimentales habituales (es decir, las
gráficas de Scatchard de los datos eran rectas). Sin embargo, se identificaron algunos factores que
aumentaron la probabilidad de reconocer la heterogeneidad en el sistema. Se trata de 1) una gran
diferencia entre las constantes de disociación de los dos ligandos, 2) una alta concentración de
receptores con respecto a la constante de asociación del ligando de mayor afinidad, 3) una alta
concentración del ligando de afinidad inferior con respecto a la del Ligando de afinidad más
elevado4), una alta actividad específica del ligando de afinidad inferior con respecto al ligando
de afinidad más alta y 5) falta de error experimental. Cuando la heterogeneidad del ligando (bajo
ciertas condiciones) causó curvilineidad en el Scatchaprldo t, la curva formada fue siempre
cóncava hacia abajo.

Por lo tanto, la heterogeneidad del ligando puede ocasionalmente imitar la cooperatividad

positiva, pero nunca imita la cooperatividad negativa o múltiples clases de sitios de unión. Las
implicaciones de estos hallazgos para estudios de unión de equilibrio que implican lipoproteínas
(que generalmente se aislan como mezclas heterogéneas de partículas) se discuten en detalle.
Estos hallazgos son también relevantes para los estudios de unión de equilibrio usando ligandos
que son mezclas de estereoisómeros o que contienen impurezas químicas o radioquímicas.

·······***************************************************************

* Este trabajo fue apoyado por United States Public HealthService Grant HL 14237
(Arteriosclerosis Specialized Center for Research in Atherosclerosis). Los costos de publicación
de este artículo fueron sufragados en parte por el pago de cargos de página. Este artículo debe por
lo tanto ser marcado "aduertisernent" de acuerdo con 18 U.S.C.

Sección 1734 únicamente para indicar este hecho.

$ Apoyado por la Beca Postdoctoral de Institutos Nacionales de Salud HL 06812. A quién se debe
dirigir la correspondencia.

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Los estudios de equilibrio de la unión de ligandos a receptores han contribuido en gran medida a
nuestra comprensión de cómo las hormonas y otras sustancias bioactivas interactúan con sus
tejidos diana. Los datos de estos estudios se presentan comúnmente en los diagramas de Scatchard
(Scatchard, 1949), donde la relación de ligando unido a ligando libre (ordenada) se representa
frente a un ligando unido (abscisa). Cuando la trama es una línea recta, se considera que los datos
indican la unión de un ligando homogéneo a una única clase de sitios idénticos e independientes;
La intersección en la abscisa representa el número de sitios de unión en el sistema, y la pendiente
representa entonces recíproco e negativo de la constante de disociación (KO) del ligando para su
sitio de unión. Cuando la trama forma una curva cóncava-hacia abajo, generalmente se considera
que los datos indican cooperatividad positiva en el sitio de unión, aunque una serie de artefactos
pueden imitar esto (Rodbard, 1973; Chamness y McGuire, 1975). Cuando la trama forma una
curva cóncava hacia arriba, los datos generalmente se consideran que indican cooperatividad
negativa en el sitio de unión o en múltiples clases de sitios de unión, aunque los artefactos
(Rodbard, 1973) y las definiciones inapropiadas de unión "inespecífica" pueden causar

Esta curvilínea asw ell. Las desviaciones de las propiedades del ligando de la asunción de la teoría
de los equilibrios múltiples también pueden causar una curvilineidad ascendente ncave-hacia
arriba en el diagrama de Scatchard (Laiken y N kmethy, 1971).

Además, se ha afirmado ampliamente (pero usualmente no se hace referencia) que los estudios de
equilibrio de la unión de ligandos heterogéneos a una sola clase de sitios idénticos e
independientes producen parcelas no lineales de Scatchard (Cuatrecasas et al., 1975, Taylor
Molinoff et al , 1979, Innerarity et al., 1980). Además, suele implicarse que estos patrones no
lineales de Scatchard serán cóncavos hacia arriba, imitando así la cooperatividad negativa o
múltiples clases de sitios de unión. Dado que la mayoría de los receptores biológicos tienen
requisitos estructurales muy específicos para la unión, es probable que casi todas las diferencias
estructurales entre los ligandos causen la aparición de un ligando heterogéneo Para ser vistos
como heterogéneos por el receptor.)

Recientemente se han utilizado estudios de unión a equilibrio para evaluar las interacciones de
las lipoproteínas con sus receptores de superficie celular (Goldstein y Brown, 1974, Oram et al.,
1983). Las lipoproteínas para estos estudios se aislaron a partir de suero o plasma en las
densidades de leche y ultracentrifugación (Have1 et al., 1955) y luego se radioyodaron (Bilheimer
et al., 1972). Ahora se ha reconocido cada vez más que las lipoproteínas ultracentrifugamente
aisladas consisten realmente en mezclas de partículas de diversos tamaños y características
funcionales (Gianturco et al., 1980, Weisgraber y Mahley, 1980, Krauss y Burke, 1982, McVicar
et al., 1984). Cuando estas lipoproteínas ultracentrifugamente aisladas son radioyodadas, el
radioyodo presumiblemente se distribuye a lo largo de la mezcla, aunque no se pueden obtener
datos sobre este punto y la distribución puede no ser uniforme.

Recientemente se estudió la unión de una subclase ultracentrífuga aislada de lipoproteínas de alta

densidad humana (HDL2), HDLB (densidad 1.125-1.210 g / cm3), a una fracción de membrana
cruda preparada a partir de hígado bovino. Se encontró que HDL3 contenía varias partículas que
se unen al receptor de HDL con afinidades muy diferentes (medida por sus capacidades
PAGUINA_2
Heterogeneidad del ligando

Para desplazar 125 I-HDL3 del receptor), sin embargo, la unión de 125I-HDL3, en su conjunto,
produjo una gráfica lineal de Scatchard? Debido a que este hallazgo era contrario a las
afirmaciones de la literatura de que una mezcla de ligandos heterogéneos que se unen a una
sola clase de sitios idénticos e independientes debería producir una gráfica curvilínea
Scatchard, decidimos realizar un análisis detallado de los efectos de la heterogeneidad del
ligando en los resultados De los estudios de unión de equilibrio. En términos generales,
nuestra pregunta es: ¿la unión en equilibrio de ligandos heterogéneos etiquetados
competidores a una sola clase de sitios idénticos e independientes produce datos que se
desvían de los esperados de un ligando homogéneo que se une a los mismos sitios? Y si es así,
¿en qué dirección se desvían los datos?

Para responder a esta pregunta, hemos realizado simulaciones por ordenador de los estudios
de equilibrio vinculante de una mezcla de dos ligandos marcados vinculante competitivamente
a una sola clase de sitios idénticos e independientes. Se examinó el grado de curvilineidad en
el gráfico de Scatchard (es decir, la desviación de los datos del paradigma esperado de un
ligando homogéneo que se une a una sola clase de sitios idénticos e independientes) causada
por la heterogeneidad del ligando en función de cinco factores: ) La diferencia entre las
constantes de disociación (valores KD) de los dos ligandos; (2) la concentración de receptores
relativa a la KD del ligando de afinidad más alta; (3) la relación de las concentraciones totales
de los dos ligandos; (4) la relación de las actividades específicas de los dos ligandos (incluyendo
el caso especial en el que un ligando no está marcado); Y (5) la cantidad de error experimental.

MATERIALES Y MÉTODOS
Se consideró el caso de dos ligandos marcados en equilibrio que se unían competitivamente a
una sola clase de sitios idénticos e independientes (receptores). Las condiciones del análisis
fueron que la relación de las concentraciones totales de los dos ligandos permaneció
constante a lo largo de cada estudio de unión (como si el investigador no estuviera al tanto de
la existencia de más de un ligando marcado) y que los dos ligandos no podían ser distinguido;
Es decir, sólo se pudieron determinar las concentraciones de ligando unido total y de ligando
libre total (este último mediante la sustracción del ligando unido del total
Ligando). Por la Ley de Acción Masiva, las ecuaciones que describen la unión competitiva de
dos ligandos a una única clase de sitios idénticos e independientes en equilibrio son

Donde B1 y B2 son las concentraciones del ligando 1 unido y del ligando 2 unido, R es la
concentración de sitios de unión libres, L1 y L2 son las concentraciones del ligando libre 1 y
ligando libre 2 y KD1 y KD2 son la disociación Constantes del ligando 1 y ligando 2 para los
sitios de unión. Debido a que sólo se supuso que la concentración total de sitios de unión, n, y
las concentraciones totales de ligandos, L1T y L2T, eran conocidas, las ecuaciones de
conservación adicionales

Fueron necesarios para determinar las concentraciones libres desconocidas, R, L1 y L2, a partir
de las ecuaciones no lineales

……(3)

Obtenido mediante la combinación de las ecuaciones 1 y 2. Para realizar los estudios de unión
simulada, se utilizó el método de Gauss-Newton para resolver la ecuación 3 para valores dados
de KD1, KD2, n,

L1T y L2T de manera que para cualquier par (L1T, L2T) se calcularon las concentraciones
totales de ligando unido (B1 + B2) y de ligando libre (L1 + L2) a partir de las Ecuaciones 1 y 2. A
lo largo de cada estudio, L1T y L2T Se mantuvieron en una proporción constante; Los valores
de L1T variaron de 0,05 K D1 a 15 K D 2 uniformemente espaciados en una escala logarítmica
(el ligando 1 siempre se tomó como teniendo la afinidad más alta para los sitios de unión). Las
unidades de medida se consideraron en términos de molaridad.
Cuando se variaron las actividades específicas de los ligandos 1 y 2, SA1 y SAP, la actividad
específica observable experimentalmente, SA, se expresó como la relación de la concentración
del ligando marcado total (* L1T + * L2Tto) que del total Nlabeled ligando y asignado un valor
de 1, a saber

Dividiendo por L1T y expresando (SA) 2 como (SA) 1, (SA) 2 / (SA) 1 tenemos
De manera que para una proporción dada de actividades específicas, (SA) 2 / (SA) 1, el total
observado L y B se calcularon como

Cuando se introdujo error experimental aleatorio en los datos simulados, se realizó mediante
una mezcla de ruido gaussiano cuyo coeficiente de variación se refiere a B1 + B2; Se suponía
que L1T + L2T era sin error.
Después de cada estudio de unión simulado se realizó (es decir, después de B1 + B2 y L1 + L2
se calcularon para un rango de pares (L1T, L2T)), los datos fueron analizados por el método de
mínimos cuadrados no lineales para determinar el aparente ny el KD aparente (como si sólo
estuviera presente un ligando) de la función...

Donde B = B1 + B2 y L = L1 + L2. Los datos se graficaron entonces en un gráfico de Scatchard

con la mejor recta en línea recta (un número de puntos de datos se omitieron generalmente
de la representación gráfica porque se unieron en el eje x). El análisis posterior del grado de
curvilineidad en la gráfica de Scatchard fue sólo cualitativo.

RESULTADOS
El grado de curvilineidad en el diagrama de Scatchard causado por la heterogeneidad del
ligando aumentó a medida que aumentaba la diferencia entre los valores de KD de los dos
ligandos para el receptor (Fig. 1). De particular importancia fue el hallazgo de que la curva,
cuando era aparente, era cóncava -hacia abajo. Esto es similar a lo que se puede ver en la
cooperatividad positiva, donde la curvatura se debe a una aparente disminución de KD a
medida que aumenta la ocupación del sitio.

El grado de curvilineidad en el diagrama de Scatchard también aumentó a medida que la

concentración de receptores aumentó en relación con el KD del ligando de afinidad más alta
(Figura 2) y como trío de las concentraciones totales de los ligandos de afinidad menor a
ligandos de alta intensidad aumentó (Fig. 3). De nuevo, la curvatura, cuando era aparente, era
cóncava-hacia abajo. Esta observación se mantuvo para todas las situaciones que examinamos,
incluyendo las siguientes. La relación de KD2 a KD1, se fijó en 100 en estas simulaciones (y en
las siguientes) con el fin de maximizar la cantidad de curvilinearidad en el diagrama de
Scatchard y para hacer con ello cualquier efecto observado de las otras variables más
aparente. Aunque el establecimiento de n a 10 K D1, también causó una gran cantidad de
curvilinearidad en el diagrama de Scatchard, no se realizaron simulaciones adicionales en n >>
KD1 porque esto representa una situación experimental improbable (véase "Discusión").
Debido a que las actividades específicas de los ligandos etiquetados como parte de

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FIG. 1. El efecto sobre el gráfico de Scatchard de la diferencia entre las constantes de

disociación de dos ligandos presentes en una mezcla, cuando los dos ligandos no pueden
distinguirse. Las variables utilizadas en cada simulación por ordenador se muestran en la mitad
izquierda de cada gráfico y los parámetros determinados (por mínimos cuadrados, el mejor
ajuste de los datos simulados) se muestran en la mitad derecha. La variable ilustrativa se
muestra en negrita. KO1 = constante de disociación del ligando 1, KD2 = constante de
disociación del ligando 2, n = concentración de receptores, LIT / LT = relación de las
concentraciones totales del ligando 1 (el ligando de afinidad más alta) y ligando 2 y KD =
constante de disociación aparente.

Debido a que las actividades específicas de los ligandos etiquetados como parte de Debido a
que las actividades específicas de los ligandos marcados como parte de una mezcla pueden no
ser todas idénticas, también se consideraron los efectos de las diferencias en las actividades
específicas relativas de los ligandos. El grado de curvilineidad en el diagrama de Scatchard se
incrementó cuando la actividad específica del ligando de afinidad menor fue mayor que la del
ligando de afinidad más elevada (Fig. 4, A y B), pero este aumento fue algo contrarrestado
cuando el ligando de mayor- El ligando de afinidad estaba presente en una concentración
mayor que el ligando de afinidad inferior (Fig. 4, C y D)

Consideramos además el caso especial de diferencias en las actividades específicas relativas de

ligandos que se produce cuando los ligandos marcados y no marcados tienen diferentes
afinidades para el receptor y no todo el ligando está marcado. Para examinar este caso,
fijamos la proporción de las actividades específicas de los dos ligandos en 1.000.000

. Cuando el ligando no marcado tenía la afinidad más alta para el receptor, se aumentó la
cantidad de curvilineidad en el gráfico de Scatchard, y viceversa (figura 5). Aunque existe una
gran curvilineidad en la gráfica de Scatchard mostrada en la figura 5B (donde el ligando no
marcado tenía la afinidad más baja para el receptor), debe resaltarse que este grado de
curvilidad está presente sólo porque la relación de los valores de Kd De los ligandos no
etiquetados y marcados se fijó en 100. Es improbable que tal diferencia en los valores de KO
entre ligandos por lo demás idénticos existiera en una situación real; Si lo hiciera,
probablemente invalidaría cualquier conclusión biológica derivada del estudio del ligando
marcado. También se analizaron los efectos del error experimental sobre el grado de
curvilineidad en el diagrama de Scatchard causado por ligandos heterogéneos. Con un
coeficiente de variación en los datos simulados del 5%, la curvilineidad previamente aparente
fue oscurecida (Fig. 6).
HIGO. 2. El efecto sobre la gráfica de Scatchard de la concentración de receptores con relación
al KD del ligando de afinidad más alta, cuando están presentes dos ligandos y no se pueden
distinguir. Las abreviaturas y el diseño son los mismos que para la Fig. 1.

Se puede observar que en el caso de ligandos heterogéneos e indistinguibles, el KO aparente

del ligando para el receptor es un promedio ponderado de los valores de KO de cada uno de
los diferentes ligandos. La función de ponderación favorece fuertemente el ligando de mayor
afinidad.

Esto puede entenderse intuitivamente cuando se reconoce que un ligando (en una mezcla de
dos ligandos) no se une al receptor en absoluto, ya lo largo de todo el estudio de unión tiene
una concentración libre igual a la del ligando que se une, entonces el aparente KO de la mezcla
será el doble del KD del ligando que se une. Por lo tanto, en nuestras simulaciones el KD
aparente de los ligandos heterogéneos para el receptor estaba cerca de la KO del ligando de
mayor afinidad, excepto cuando el ligando de baja afinidad estaba presente en una
concentración mucho mayor que el ligando de mayor afinidad o cuando la concentración de
Receptores fue alta en relación con la KD del ligando de mayor afinidad. También puede verse
a partir de las estimaciones de parámetros mostradas en las gráficas que en el caso de ligandos
heterogéneos e indistinguibles, el número de receptores se estima con precisión a menos que
las actividades específicas de los dos ligandos sean muy diferentes.
HIGO. 3. El efecto sobre la gráfica de Scatchard de la relación de la concentración total de dos
ligandos presenta una mezcla i, cuando los dos ligandos no pueden ser distinguidos. Las
abreviaturas y la disposición son las mismas que para la figura 1. El ligando 1 es el ligando de
afinidad más alta. La Fig. 1 C también debe considerarse parte de esta serie, situándose entre 3.
A y E.

HIGO. 4. El efecto sobre la gráfica de Scatchard de la relación de las actividades específicas de

dos ligandos presentes en una mezcla, cuando no se pueden distinguir los dos ligandos,
Abreviaturas y disposición son las mismas que para la Fig. 1. El ligando 1 es el compuesto de
mayor- Ligando de afinidad. SAJSAZ = relación de las actividades específicas del ligando 1 y el
ligando 2. La Fig. 1C (donde SA1 / SAz = 1) también debe considerarse parte de esta serie,
cayendo entre 4, A y E.
HIGO. 5. El efecto sobre el diagrama de Scatchard cuando la relación de las actividades
específicas de dos ligandos presentes en una mezcla es 1.000.000 (Le. Cuando un ligando no está
marcado). Las abreviaturas y el diseño son los mismos que en la figura 4.

HIGO. 6. Efecto del error experimental en la curvilineidad en la gráfica de Scatchard causada por
la heterogeneidad del ligando. Se programó un coeficiente de variación (CV) del 5% en los datos
simulados. Los puntos de datos variaron con cada simulación, y este es un gráfico representativo.
Las variables utilizadas para esta simulación por ordenador son las mismas que las de la Fig. 1 C,
y este gráfico debe compararse con la Fig. 1 C. Las abreviaturas y el diseño son los mismos que
para la Fig. 1.

DISCUSIÓN
La unión de ligandos heterogéneos marcados a una única clase de sitios idénticos e
independientes puede, pero normalmente no, proporcionar datos que se desvían de los
esperados de un ligando homogéneo que se une a los mismos sitios (es decir, puede, pero No
suele producir un gráfico curvilíneo de Scatchard). Cuando la curvilineidad en el diagrama de
Scatchard es causada por la heterogeneidad del ligando, la curva formada es siempre cóncava
hacia abajo. Por lo tanto, un diagrama de Scatchard de tales datos podría interpretarse
erróneamente como indicativo de cooperatividad positiva, pero nunca se interpretaría como
indicando cooperatividad negativa o múltiples clases de sitios de unión. Los factores que
aumentan el grado de curvilineidad en el diagrama de Scatchard causado por la heterogeneidad
del ligando son: 1) una gran diferencia entre los valores de KO de los dos ligandos; 2) una
concentración elevada de receptores con relación al KO del ligando de alta potencia; 3) una alta
concentración del ligando de afinidad inferior con relación al ligando de afinidad más alta; 4) una
alta actividad específica del ligando de afinidad inferior con relación al ligando de afinidad más
alta; Y 5) falta de error experimental.

Puede verse intuitivamente que cada uno de estos cuatro factores actúa aumentando la
discrepancia entre la concentración medida de ligando libre (Ll + Lz) y la concentración del
ligando libre de afinidad más alta.

El hallazgo principal de este estudio, sin embargo, es que bajo Condiciones heterogéneas
habituales, la heterogeneidad del ligando no causa desviaciones reconocibles de la linealidad en
la gráfica de Scatchard y no puede distinguirse del caso de un ligando homogéneo. Es decir, la
curvilineidad en el diagrama de Scatchard causada por la heterogeneidad del ligando es evidente
solamente bajo ciertas condiciones, y entonces solamente en ausencia de error experimental. Una
posible excepción a esto podría ser la situación donde n >> Kn, pero no exploramos esta
posibilidad con gran detalle porque n >> KO representa una situación experimental que
usualmente se evita (Hulme et al., 1978).

En un nivel práctico, este estudio indica que 1) si los estudios de unión de equilibrio se llevan a
cabo con una mezcla de ligandos que se unen competitivamente al mismo sitio, la
heterogeneidad normalmente no será evidente; 2) si se observa experimentalmente un
diagrama de Scatchard curvilıneo cóncavo-hacia abajo, la heterogeneidad del ligando como
causa puede ser excluida repitiendo el estudio a una concentración de receptor por debajo del
KO aparente del ligando para su receptor; Y 3) una gráfica de Scatchard curvilínea cóncava hacia
arriba no se puede interpretar como indicativa de heterogeneidad de ligandos. Por supuesto, si
diferentes ligandos marcados presentes en una mezcla interactúan en diferentes receptores,
entonces los datos indicarán múltiples clases de sitios de unión, y el diagrama de Scatchard será
curvilíneo con una forma cóncava hacia arriba.

Un estudio previo de Builder y Segel (1978) examinó los efectos de las impurezas químicas y
radioquímicas sobre los datos de unión y llegó a conclusiones esencialmente similares a las
nuestras, aunque su análisis fue menos detallado y se concentraron en la situación donde n >>
KD. Otro estudio previo examinó el caso especial de heterogeneidad de ligando que implicaba
estereoisómeros que tenían afinidades muy diferentes para el receptor (Burgisser et al., 1981).
Ese estudio destacó que las discrepancias en los datos de los esperados de un ligando
homogéneo se producen principalmente cuando la concentración de receptores es alta en
relación con el KD del ligando de mayor afinidad, de acuerdo con este estudio. Otro estudio
anterior examinó los efectos de la heterogeneidad del receptor en los datos de unión y
concluyó que la heterogeneidad del receptor podría a menudo ser indistinguible del caso de
una sola clase de receptores idénticos e independientes (Minton, 1979).

Debe hacerse hincapié en que nuestro análisis de los efectos de la heterogeneidad de ligando
en el diagrama de Scatchard se llevó a cabo para el caso en el que los ligandos se mantienen
en una proporción constante a lo largo del estudio de unión y no puede distinguirse. Esta es la
situación que se produciría si el investigador desconocía la presencia de heterogeneidad en el
ligando. Los efectos de otros tipos de heterogeneidad de ligando en el análisis de unión y en el
diagrama de Scatchard se han examinado en otra parte. Taylor (1975) discutió el caso de un
estudio de unión de equilibrio que se realizó añadiendo cantidades crecientes

De ligando no marcado a una concentración constante de ligando marcado. Él demostró que si

el ligando marcado tiene una afinidad más baja para el receptor que el ligando no marcado, el
diagrama de Scatchard tendrá una curvidad lineal cóncavo-hacia abajo, y viceversa. Nichol et
al. (1969) analizaron el caso en el que la polimerización del ligando se produce de una manera
dependiente de la concentración. Ellos mostraron que el efecto de tal polimerización sobre la
curva de unión depende de las afinidades relativas para el receptor del polímero (s) y el
monómero. Y, por supuesto, existe la situación bien descrita en la que la preparación del
receptor está contaminada con ligando. Una gráfica de Scatchard de los datos será entonces
una línea recta (con una estimación correcta del número de receptores de la intersección x),
pero la pendiente (y por lo tanto la afinidad aparente del ligando para el receptor) se reducirá.

Debe hacerse hincapié en que nuestro análisis de los efectos de la heterogeneidad de ligando
en el diagrama de Scatchard se llevó a cabo para el caso en el que los ligandos se mantienen
en una proporción constante a lo largo del estudio de unión y no puede distinguirse. Esta es la
situación que se produciría si el investigador desconocía la presencia de heterogeneidad en el
ligando. Los efectos de otros tipos de heterogeneidad de ligando en el análisis de unión y en el
diagrama de Scatchard se han examinado en otra parte. Taylor (1975) discutió el caso de un
estudio de unión de equilibrio que se realizó añadiendo cantidades crecientes

De ligando no marcado a una concentración constante de ligando marcado. Él demostró que si

el ligando marcado tiene una afinidad más baja para el receptor que el ligando no marcado, el
diagrama de Scatchard tendrá una curvidad lineal cóncavo-hacia abajo, y viceversa. Nichol et
al. (1969) analizaron el caso en el que la polimerización del ligando se produce de una manera
dependiente de la concentración. Ellos mostraron que el efecto de tal polimerización sobre la
curva de unión depende de las afinidades relativas para el receptor del polímero (s) y el
monómero. Y, por supuesto, existe la situación bien descrita en la que la preparación del
receptor está contaminada con ligando. Una gráfica de Scatchard de los datos será entonces
una línea recta (con una estimación correcta del número de receptores de la intersección x),
pero la pendiente (y por lo tanto la afinidad aparente del ligando para el receptor) se reducirá

Hemos emprendido esta investigación porque el interés reciente en la unión de las

lipoproteínas a sus receptores de la superficie celular ha sido acompañado por la realización

Que muchas lipoproteínas aisladas consisten realmente en mezclas de partículas

heterogéneas. En algunos casos, esta heterogeneidad puede aplicarse solamente al tamaño,
mientras que en otros se extiende aparentemente a las características funcionales (Gianturco
et al., 1980, Weisgraber y Mahley, 1980, Krauss y Burke, 1982, McVicar et al., 1984). En la
mayoría de los casos, los estudios de la unión de las lipoproteínas a sus receptores han dado
parcelas lineales de Scatchard, aunque también se han reportado parcelas de Scatchard curvas
y cóncavas hacia arriba (Innerarity et al., 1980). A partir de los datos presentados en esta
comunicación, debería ser evidente que las gráficas lineales de Scatchard informadas para la
unión de las lipoproteínas a sus receptores son totalmente coherentes con las observaciones
recientes de que las lipoproteínas ultracentrifugalmente aisladas son realmente mezclas de
partículas heterogéneas. También debería ser evidente que las gráficas de Scatchard curvas
cóncavas hacia arriba, informadas para la unión de las lipoproteínas a sus receptores, no
deben ser explicadas en base a la heterogeneidad del ligando. Y debería ser evidente que los
valores de KD publicados de las lipoproteínas para sus receptores probablemente representan
promedios ponderados de los valores de Ku de las diferentes partículas que componen cada
mezcla.