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Abstrato
Várias estratégias funcionais mostraram grande potencial em imunoensaios amperométricos ultra-
sensíveis para marcadores tumorais, que promovem a condutividade e a amplificação múltipla de
sinal. A sensibilidade dos imunoensaios amperométricos é significativamente afetada pela
condutividade e área específica da interface sensora, bem como pela atividade eletroquímica das
espécies redox. Assim, essas estratégias são geralmente baseadas na integração de vários materiais
em conjunto e na adoção de sistemas de imunossensibilidade com muitas vantagens, como grande
área específica, alta atividade eletroquímica, boa condutividade, biocompatibilidade e desempenho
catalítico. Devido ao rápido desenvolvimento de materiais funcionais (como híbridos condutores,
híbridos catalíticos, materiais semelhantes a enzimas, espécies altamente eletroquímicas ativas,
nanocompósitos redox, materiais porosos, hidrogéis, e estrutura metal-orgânica) e novas substâncias
bioativas (incluindo novos agentes bloqueadores e receptores como peptídeos e cadeias de
oligonucleótidos), a sensibilidade dos biossensores relacionados é geralmente maior que a dos
tradicionais, o que indica que múltiplas estratégias funcionais são promissoras em imunoensaios
amperométricos. Aqui, fornecemos uma visão geral dos avanços recentes em múltiplas estratégias
funcionais que provaram melhorar drasticamente a sensibilidade dos imunoensaios amperométricos,
que incorporam os seguintes materiais: (1) híbridos condutores de nanomateriais; (2) híbridos
catalíticos de nanomateriais; (3) novos materiais redox; (4) materiais porosos tridimensionais; (5)
novos receptores e agentes de bloqueio
1 . Introdução
Todos os anos, cerca de meio milhão de óbitos ocorrem devido ao câncer e mais de um milhão de
pacientes são diagnosticados com a doença ( Siegel et al., 2016; Torre et al., 2015; Chen et al.,
2016 ). O câncer também é a segunda causa mais comum de morte em crianças menores de 14 anos,
enquanto as taxas de incidência de câncer aumentaram continuamente 0,6% ao ano desde 1975
( Siegel et al., 2016; Ward et al., 2014 ). Devido ao início insidioso, metástase fácil, mau prognóstico
alta mortalidade e taxas de recorrência, o câncer tornou-se uma preocupação importante para a saúde
pública e a segunda principal causa de morte ( Torre et al., 2015). O diagnóstico precoce e o
tratamento médico provaram ser as rotas mais eficazes para prevenir o progresso e a deterioração do
câncer, reduzir o número de pacientes com câncer e aumentar as taxas de sobrevivência. No
diagnóstico precoce, a determinação de marcadores tumorais preparou o caminho para estratégias
diagnósticas mais eficazes ( Siegel et al., 2016; Torre et al., 2015 ), uma vez que servem como
indicadores em fluidos corporais, como soro, plasma, saliva e urina ( Van Rhijn et al., 2005; Hu et
al., 2008; Perkins et al., 2003 ; Bates, 1991 ). Até agora, muitos marcadores tumorais foram
examinados e apresentam alta especificidade para certos tipos de câncer ( Tabela 1 ), incluindo câncer
de próstata, fígado, pulmão e colorretal (Ballehaninna e Chamberlain, 2011; Sturgeon et al.,
2010; Ronkainen e Okon, 2014 ). A ligeira alteração de sua concentração está fortemente relacionada
à ocorrência, desenvolvimento e palindromia do câncer e ao efeito terapêutico ( McShane et al.,
2005 ). Neste caso, o desenvolvimento de métodos eficazes para detectar sensivelmente a ligeira
alteração da concentração de marcadores tumorais foi urgente para o diagnóstico clínico.
Tabela 1 . Casos convencionais de câncer e marcadores tumorais relacionados.
Muitos ensaios imunológicos foram desenvolvidos com sucesso, incluindo fluorescência ( XL Huang
et al., 2016b ), colorimétricos ( Lai et al., 2016 ), luminescência ( Zhang et al., 2012 ), radiométricos
( Tyan et al., 2013 ), piezoelétricos ( Zhou et al., 2013 ), amperométrico ( Tang e Ma, 2016 ),
potenciométrico ( QF Li et al., 2016; Silva et al., 2015 ) e ensaios impedimétricos ( Hou et al., 2014;
Yuan et al. 2012, Pan et al., 2017), que se baseiam na imunorreação específica entre os anticorpos
marcados e os marcadores tumorais. Entre estes métodos, o imunoensaio eletroquímico provou ser
excelente devido às suas vantagens de fabricação fácil, detecção rápida, baixo custo e miniaturização
( Zhang e Ding, 2016 , FY Li et al., 2017 , Lai et al., 2015 ).
As múltiplas estratégias funcionais são de grande potencial para amplificar a sensibilidade dos
imunossensores eletroquímicos ( Fig. 1 ). Geralmente, essas estratégias multifuncionais se
comportam como sinal ou condutividade de corrente de multi-amplificação ( Tang et al., 2017b; Dong
et al., 2016; Fang et al., 2014 ). Neste caso, tais imunoensaios amperométricos geralmente possuem
altas sensibilidades. Várias pesquisas sugeriram que os imunossensores amperométricos construídos
com diferentes nanomateriais funcionam de forma mais eficaz e possuem boa condutividade,
estabilidade e hidrofilicidade, atividade catalítica, alta capacidade de adsorção e uma grande área de
imunossensao ( Shi et al., 2014; Vilela et al., 2014 ; Tang et al., 2017b; ZF Wang et al., 2014). Para
amplificar efetivamente a sensibilidade, pesquisas recentes realizaram algumas estratégias
multifuncionais através da síntese de novos materiais condutores ( Liu et al., 2014; Xu et al., 2015 ),
encontrando novos materiais para enriquecer as espécies redox ( Rong et al., 2015; Li et al., 2014;
Wang et al., 2015a ), e produzindo novos materiais redox ( Wang et al., 2016b, ZM Liu et al.,
2015 ). Além disso, algumas estratégias se concentraram em elevar toda a estrutura do imunoensaio
usando novos receptores para reconhecimento específico de marcadores tumorais e empregando
novas substâncias como agentes bloqueadores para substituir a albumina de soro bovino (BSA) ( Xia
et al., 2017b; Lin et al 2015, Zhao e Ma, 2017, Shan e Ma, 2016). As sensibilidades desses
imunoensaios com base em estratégias multifuncionais são várias vezes maiores que as de outros
imunoensaios amperométricos relatados, indicando seu grande valor na amplificação de sensibilidade
para imunoensaios eletroquímicos e imunossurizados ( Tabela 2 ).
Anticorpos de captura (Ab1), anticorpos marcados (Ab2), Nanopartículas (NPs), nanoflowers (NFs),
nanotubos (NT), nanoclustes (NCs), folhas de grafeno (GS); nanopartículas de coordenação cadmio-
orgânica (CdOP); poli (N, N'-difenil- p- fenildiamina) (PPPD); factor de crescimento epidérmico
(EGF); polieterimida (PEI), β-ciclodextrinas (CD); ácido adamantina-1-carboxílico (ADA); alginato
(Alg)
Aqui, fornecemos uma visão geral de múltiplas estratégias funcionais para aumentar a sensibilidade
do imunoensaio amperimétrico, que incluem: (1) híbridos condutores de nanomateriais; (2) híbridos
catalíticos de nanomateriais; (3) novos materiais redox; (4) materiais tridimensionais (3D) porosos; e
(5) novos receptores e agentes de bloqueio.
2 . Múltiplas estratégias funcionais em imunoensaio amperimétrico
2.1 . Nanomateriais condutores
Embora a amplificação do sinal seja o método mais comum para aumentar a sensibilidade,
nanotecnologias e nanomateriais prepararam uma nova direção para aumentar ainda mais
a sensibilidade ao imunoensaio ( Chikkaveeraiah et al., 2012; Zhu et al., 2014 ). Os
nanomateriais, como nanopartículas de ouro (AuNPs), nanopartículas de sílica,
nanopartículas de platina (PtNPs), nanopartículas de carbono, folhas de grafeno,
nanotubos de carbono multi-paredes (MWCNTs) e pontos quânticos (QDs) foram
amplamente aplicados em imunoensaios amperométricos ( Yin et al. , 2014; Gao et al.,
2014, 2013; Feng et al., 2014a ). Esse imunoensaio exibiu frequentemente um sinal de
corrente mais forte e maior sensibilidade em comparação com aqueles que utilizam
anticorpos marcados com moléculas redox ( Ahirwal et al., 2010 ; Song et al., 2011 ;Lai
et al., 2014 ). Essas propriedades aprimoradas são atribuídas principalmente aos
nanomateriais que possuem grande área superficial específica e permitem o
enriquecimento e impedem a ligação de espécies redox com anticorpos, dos quais a
bioatividade é mantida. Além disso, nanomateriais condutores também foram aplicados,
resultando em amplificação de sinal atual que é benéfica para a transferência de elétrons
na interface de imunossensibilidade ( Huang et al., 2015 ). Tang e Ma (2017) relataram
uma plataforma de imunoensenção redox baseada em iões metálicos para CEA com base
em um eletrodo de carbono vítreo modificado com polidopamina-Pb 2+ / quitosano-
AuNP (Chit-AuNPs / PDA-Pb 2+ / GCE) ( Fig. 2 ). Devido à alta capacidade de adsorção
do PDA condutor para Pb2+ , PDA-Pb 2+ produziu um sinal de corrente forte, e chitosan-
AuNPs foram empregados para amplificar o sinal atual e forneceu sites ativos para ligar
anti-CEA. Devido à sua alta atividade eletroquímica e boa condutividade, a sensibilidade
desta plataforma de imunossensão para CEA atingiu 9,95 μA [log 10 c CEA ] -1 ,
indicando o grande potencial de nanomateriais redox à base de íons metálicos para
imunoensaios ultra-sensíveis.
O grafeno é um material 2D que atrai muita atenção devido às suas propriedades ópticas
e elétricas interessantes e é amplamente utilizado na análise eletroquímica ( Chen et al.,
2012; Piro e Reisberg, 2017 ). No entanto, sua fraca hidrofilicidade e fácil agregação
limitam seriamente seu desempenho em sensores eletroquímicos. Embora o óxido de
grafeno (GO) tenha enriquecido grupos carboxilo e hidroxilo e possa ser facilmente
disperso na água, a sua condutividade não está satisfeita. Algumas estratégias foram
desenvolvidas para efetivamente melhorar a condutividade ( Wang et al., 2010 ),
incluindo a preparação de GO parcialmente reduzida, síntese de GO dopada com N ( WR
Li et al., 2016 ), hibridização de GO com materiais condutores ( YT Li et al., 2016) e
modificação de GO com materiais carregados positivamente ( Miao et al., 2017; Kavosi
et al., 2014 ). Recentemente, Liu e Ma (2014) desenvolveram um líquido iónico condutor
(por exemplo, cloreto de 1-aminopropil-3-metilimidazólio) para modificar GO (IL-GO)
e aplicou-o com sucesso em um imunoensaio amperométrico ultra-sensível para CEA
( Fig. 3 ). Em seu trabalho, GO foi parcialmente reduzido pelo líquido iónico, o que
resultou em maior intensidade de condutividade, enquanto o AuNPs foi empregado para
melhorar a condutividade de IL-GO / GCE e imobilizar anti-CEA. A faixa linear de
detetive para CEA foi determinada na faixa de 100 ng mL -1 a 1 fg mL -1 com uma
sensibilidade de cerca de 4 μA [log 10 c CEA ] -1 . O trabalho de Liu e Ma fornece uma
maneira simples e eficaz de preparar grafeno condutor, modificável, ultra-fino e altamente
disperso, que já foi amplamente aplicado em análises eletroquímicas.
O método camada por camada é um dos métodos mais eficazes para sintetizar híbridos
multifuncionais de nanomateriais 3D ( Ge et al., 2013; Yan et al., 2016; Li et al.,
2013 ). Em comparação com o sistema de HRP / hidroperóxido, híbridos de policristalino
Ag-PdNCs-submicrométrica Fe 3 O 4 esferas (Fe 3 O 4 @ Ag-Pd) mostram actividade
electrocatalítica mais robusta ( Zheng et al., 2014 ) ( Fig. 10 ), que é principalmente
atribuível à grande área superficial de híbridos Fe 3 O 4 @ Ag-Pd, boa condutividade de
Ag-PdNCs e interação catalítica cooperativa entre Fe 3 O 4e Ag-PdNCs. Além disso, o
citosensor usando Fe 3 O 4 @ Ag-Pd modificado com aptamer como sondas exibiu uma
ampla faixa de detecção de 50 a 1 × 10 7 células mL -1 . Estes resultados indicam que
uma estrutura porosa e condutora é essencial para o desempenho catalítico de um
catalisador.