Facultad de Ciencias Exactas y Naturales

Escuela de Ciencias Biológicas

Carrera de Microbiología

Carrera de Microbiología
BACTERIOLOGÍA
Docente: Mgtr. Sonia M. Estrella V.

Práctica No. 2

Tema: PRUEBAS DE ESTERILIDAD

MARCO TEÓRICO

Para evaluar los procesos de esterilización, se realizan varias pruebas de esterilidad mediante el uso de
diferentes técnicas microbiológicas que permiten evaluar materiales por utilizar o lugares y ambientes de
trabajo. La importancia de estos procedimientos radica en la verificación de resultados obtenidos en métodos
experimentales y la detección de focos de contaminación bacteriana que a más de alterar el desarrollo de las
pruebas microbiológicas puede presentar un riesgo potencial para la salud de analistas y su entorno.
En el laboratorio de Microbiología es necesario que las zonas de siembra se mantengan estériles (Mediante la
siembra alrededor de la llama del mechero Bunsen, cuartos de siembra, cámaras de flujo, etc., que dependerá
del nivel de bioseguridad necesario) para evitar contaminaciones en las inoculaciones realizadas.
Los medios de cultivo utilizados para realizar este tipo de pruebas deben ser enriquecidos para permitir el
crecimiento de la mayor cantidad de microorganismos posibles.
La prueba de esterilidad es positiva, es decir, el material está estéril, cuando no hay crecimiento de
microorganismos.

MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPOS

- Cajas Petri con agar nutritivo.

- Cajas Petri vacías estériles.
- Cajas Petri vacías no estériles.
- Pipetas Pasteur estériles.
- Tubos de agua destilada estéril.
- Recipientes con agua no estéril.
- Tubos con agar nutritivo fundido.
- Marcador permanente y lápiz dermográfico.
- Incubadora.
- Gradillas.
- Parafilm.
- Hipoclorito de sodio 3 %.
- Etanol 70 %
- Baño María

PROCEDIMIENTO

1. Pruebas de esterilidad para medios de cultivo.

a. Rotular debidamente una caja Petri con agar nutritivo estéril.

b. Colocar parafilm alrededor de la caja.
c. Incubar la caja Petri invertida a 37 °C por 48 horas.
d. Observar y registrar los resultados a las 24 y 48 horas.
2. Prueba de esterilidad para medio ambiente.

a. Rotular debidamente una caja Petri con agar nutritivo estéril.

b. Destapar la caja y exponer al ambiente entre 15 y 30 minutos.
c. Incubar la caja Petri invertida a 37 °C por 48 horas.
d. Observar y registrar los resultados a las 24 y 48 horas.

3. Prueba de esterilidad para aguas.

a. Rotular debidamente una caja Petri estéril vacía con la etiqueta “agua estéril” y otra con “agua no
estéril).
b. Trabajar alrededor de la llama del mechero.
c. Tomar un tubo de ensayo que contiene 1 mL de agua destilada estéril.
d. Verter el agua estéril dentro de la caja Petri correspondiente.
e. Colocar con una Pipeta Pasteur estéril 1 mL de agua no estéril en la caja correspondiente.
f. Destapar parcialmente cada una de las cajas y adicionar 20 mL del agar nutritivo estéril fundido a 45 °C
aproximadamente en cada caja.
g. Tapar la caja y homogenizar el medio haciendo movimientos en forma de ocho con la caja sobre la
mesa, de una manera suave y ágil. Cuidar que el medio no se riegue.
h. Dejar solidificar el medio y llevar a incubar las dos cajas invertidas a 37 °C por 48 horas.
i. Observar y registrar los resultados a las 24 y 48 horas.

4. Prueba de esterilidad de dedos.

a. Dividir con un marcador y una regla la base de una caja de agar nutritivo estéril en cuatro cuadrantes.
b. Marcar cada cuadrante con el nombre de cada estudiante y el nombre del dedo que se va a inocular.
c. Presionar sobre la superficie del medio, el dedo índice izquierdo y derecho de cada estudiante, como si
fuera una huella digital. Asegúrese de utilizar la sección marcada con su nombre.
d. Incubar la caja Petri invertida a 37 °C por 48 horas.
e. Observar y registrar los resultados a las 24 y 48 horas.

RESULTADOS

1. Realizar las lecturas de las diferentes pruebas finalizados los tiempos de incubación, utilizando la
siguiente tabla:

PRUEBAS DE ESPERADO OBSERVADO

ESTERILIDAD
Medios de cultivo Estéril +
Medio ambiente No estéril -
Agua Estéril +
No estéril -
Dedos No estéril -
 2. Escoger 2 o 3 colonias que hayan crecido en alguna de las pruebas.
3. Describir macroscópicamente las colonias, según la siguiente tabla:

MORFOLOGÍA DE LAS COLONIAS

Forma

Elevación

Margen
(Borde)

Recuperado de: http://projectomartin.blogspot.com/2012/12/practica-8_9.html

4. Rotular 4 placas portaobjetos con un marcador o lápiz dermográfico (que no se borre con la tinción) y
realizar frotis de las colonias descritas.
5. Fijarlas con la llama del mechero.
6. Guardarlas para realizar tinciones la siguiente semana.

BIBLIOGRAFÍA

Vanegas, M. (2015). Guías para el laboratorio de Bacteriología. Bogotá, Colombia: Ediciones Uniandes