Alat dan Bahan

1. Alat: 2. Bahan
- Mikroskop cahaya - Larutan garam fisiologis
- Kaca benda untuk mencit (NaCl
- Kaca penutup 0,9%)
- Pipet tetes - Aquadest
- Papan seksi - Larutan garam dapur
- Alat seksi dengan konsentrasi 3%,
- Gelas piala 2%, 1%, 0%, 0,9%, 0,7%,
- Pipa/tabung mikrohematokrit 0,5%, 0,3%, 0,1%
- Centrifuge - Antikoagulan
- Syringe 1 ml
- Kain lab lembut
- Mencit
Prosedur
1. Prosedur Koleksi Darah
a. Retro-orbital

diberikan sedikit tekanan

diletakkan mikrohematokrit
dengan memutar tabung
ke bagian medial canthus darah mengalir dan disiapkan
hematokrit, hal tersebut akan
mata dan dimiringkan secara tabung 1,5 ml untung
melukai membran
kaudal hingga membentuk menampung darah
konjungtiva dan pleksus
sudut 30-45º terhadap hidung
okular

bila darah sudah cukup

dihindari menekan terlalu
ditampung, dihentikan
sekali darah mengalir, keras saat memasukkan
pendarahan dengan cara
tekanan dijaga supaya mata mikrohematokrit agar tidak
melepas mikrohematokrit dan
tetap menonjol mengenai tulang belakang
dikembalikan mata pada
rongga okular
posisi normal
 b. Vena Lateral
dipanjangkan/diluruskan
dibasuh ekor dengan air
ekor, kemudian bagian
hangat untuk menghilangkan
paling ujung ekor (0,5-1
debris dan menyebabkan
mm) dipotong menggunakan
vasodilatasi
pisau skapel
c. Jantung
dibuka bagian abdomen,
dislokasi leher mencit dan perlakan digunting
diafragma secara hati-hati
2. Memisahkan Komponen Darah
darah dibagi dalam dua
dimiringkan darah dan
tabung 1,5 ml (tabung
didiamkan selama kurang
satunya untuk pengamatan
lebih 30 menit
hemolisis dan krenasi)
diukur volume supernatan
dan endapan
dihapus darah pertama yang
keluar dari ekor, lalu diurut
ekor secara perlahan mulai
daribagian pangkal sampai
ujung
ditampung darah yang
menetes dalam tabung 1,5 ml
jantung ditususk sedikit
dengan menggunakan
syringe, apabila darah
sudah memasuki syringe,
ditarik perlahan hingga
darah tersedot
ditampung darah dalam
tabung mikrohematokrit 1,5
ml
centrifuge darah pada
kecepatan 2500 selama 15
menit
diamati bagian-bagian yang
terbentuk pada tabung
3. Mengetahui Kecepatan Hemolisis dan Krenasi

disiapkan kaca benda, diamati dibawah mikroskop

ditampung darah dari mencit
diteteskan larutan NaCl 0,9% cahaya dengan hati-hati,
(yang telah dikoleksi dari
pada kaca benda kemudian dihitung waktu menggunakan
retro orbital, vena lateral,
dilarutkan sedikit tetesan stopwatch kapan telah
atau jantung) dalam tabung
darah mencit kepada tetesan nampak terjadi
1,5 ml
NaCl hemolisis,dicatat waktunya

untuk mengetahui kecepatan

dilakukan hal yang sama
terjadinya krenasi, dilakukan
dicatat hasil dan dibuat untuk larutan 0,5% NaCl,
hal yang sama menggunkaan
kesimpulannya 0,3% NaCl, 0,1% NaCl dan
larutan NaCl yang lebih
aquadest.
pekat dari pada 0,7%

dicatat hasil dan dibuat

kesimpulannya

4. Menghitung Presentase Hemolisis

ditampung 2-5 ml sampel

mencit didislokasi leher,
lalu dibedah sehingga
nampak jantung dan
pembuluh darah besar
ditusuk salah satu
darah dalam tabung
pembuluh darah besar
mikrohematokrit 1,5 ml
dengan digunakan syringe
yang telah diberi anti
hingga darah keluar
koagulan

ditambahkan kepada darah

sampel pada tabung reaksi
darah didiamkan dalam dengan larutan NaCl: disiapkan 10 tabung dan
tabung 10 menit, lalu di tabung 1 (2ml 0,7% masing-masing diisi
centrifuge selama 5 menit NaCl), tabung 2 (2ml 0,5 dengan 0,1 ml sampel
dengan kecepatan 3.000 NaCl), tabung 3 (2ml darah, diberi label pada
rpm 0,3% NaCl), tabung 4 tabung
(2ml 0,1% NaCl), tabung
5 (2ml aquadest)

diamati warna dan volume

supernatan dan endapan
eritrosit
Hasil pengamatan
1. Sampling DarahHematokrit
Volume Supernatan Volume Endapan Perbandingan
0,15 ml 0,1 ml 0,15
= 1,5 atau 3 : 2
0,1

2. Kecepatan Hemolisis dan Krenasi

Konsentrasi Pelarut Waktu (s) Keterangan (Hemolisis/Krenasi)
Aquadest 0% 31 Hemolisis
NaCl 0,1% 35,59 Hemolisis
NaCl 0,3% 37,79 Hemolisis
NaCl 0,5% 42,34 Hemolisis
NaCl 0,7% 47,23 Hemolisis
NaCl 0,9% - Isotonik
NaCl 1% 50,52 Krenasi
NaCl 2% 40 Krenasi
NaCl 3% 33,75 Krenasi

3. Presentase Hemolisis
Warna Volume
Larutan Darah
Supernatan Endapan Supernatan (ml) Endapan (ml)
Aquadest 0% Merah terang Merah pekat 0,4 0,1
NaCl 0,1 % Merah terang Merah pekat 0,7 0,5
NaCl 0,3% Merah bening Merah pekat 0,5 0,2
NaCl 0,5% Merah Merah pekat 1 0,8
NaCl 0,7% Merah cerah Merah pekat 1 0,5
NaCl 0,9% Merah Merah pekat 1 0,5
NaCl 1% Merah terang Merah pekat 0,7 0,5
NaCl 2% Merah terang Merah pekat 0,8 0,2
NaCl 3% Merah terang Merah pekat 0,975 0,25