2017­5­11 Adipocyte Mitochondrial Function Is Reduced in Human Obesity Independent of Fat Cell Size

J Clin Endocrinol Metab. 2014 Feb; 99(2): E209–E216. PMCID: PMC3913808
Published online 2013 Nov 25. doi:  10.1210/jc.2013­3042

Adipocyte Mitochondrial Function Is Reduced in Human Obesity
Independent of Fat Cell Size
Xiao Yin, Ian R. Lanza, James M. Swain, Michael G. Sarr, K. Sreekumaran Nair, and Michael D. Jensen
Endocrine Research Unit (I.R.L., K.S.N., M.D.J.), Mayo Clinic, Rochester, Minnesota 55905; Department of Surgery (J.M.S., M.G.S.), Mayo
Clinic, Rochester, Minnesota 55905; and Department of Endocrinology (X.Y.), Shandong University Affiliated Jinan Central Hospital, Jinan,
250013 China
Corresponding author.
Address all correspondence and requests for reprints to: Michael D. Jensen, MD, Endocrine Research Unit, 200 First Street Southwest, Room 5­
194 Joseph, Rochester, MN 55905. E­mail: jensen@mayo.edu.

Received 2013 Aug 2; Accepted 2013 Nov 12.

Copyright © 2014 by The Endocrine Society

Abstract

Context:
It has been suggested that mitochondrial dysfunction in adipocytes contributes to obesity­related metabolic
complications. However, obesity results in adipocyte hypertrophy, and large and small adipocytes from the
same depot have different characteristics, raising the possibility that obesity­related mitochondrial defects are
an inherent function of large adipocytes.

Objective:
Our goal was to examine whether obesity, independent of fat cell size and fat depot, is associated with
mitochondria dysfunction.

Design:
We compared adipocyte mitochondrial function using a cross­sectional comparison study design.

Setting:
The studies were performed at Mayo Clinic, an academic medical center.

Patients or Other Participants:

Omental and/or abdominal subcutaneous adipose samples were collected from 20 age­matched obese and
nonobese nondiabetic men and women undergoing either elective abdominal surgery or research needle
biopsy.

Intervention:
Interventions were not conducted as part of these studies.

Main Outcome Measures:

https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3913808/?report=printable 1/14
2017­5­11 Adipocyte Mitochondrial Function Is Reduced in Human Obesity Independent of Fat Cell Size

We measured mitochondrial DNA abundance, oxygen consumption rates, and citrate synthase activity from
populations of large and small adipocytes (separated with differential floatation).

Results:
For both omental and subcutaneous adipocytes, at the cell and organelle level, oxygen consumption rates and
citrate synthase activity were significantly reduced in cells from obese compared with nonobese volunteers,
even when matched for cell size by comparing large adipocytes from nonobese and small adipocytes from
obese. Adipocyte mitochondrial content was not significantly different between obese and nonobese
volunteers. Mitochondrial function and content parameters were not different between small and large cells,
omental, and subcutaneous adipocytes from the same person.

Conclusion:
Adipocyte mitochondrial oxidative capacity is reduced in obese compared with nonobese adults and this
difference is not due to cell size differences. Adipocyte mitochondrial dysfunction in obesity is therefore
related to overall adiposity rather than adipocyte hypertrophy.

Although adipocytes are considered to be relatively inert from the perspective of energy metabolism, they
nonetheless require functional mitochondria to generate ATP needed for adipokine synthesis/secretion,
lipogenesis, and lipolysis. Both rodent (1) and human (2) obesity are associated with decreased
mitochondrial content and oxidative capacity, suggesting that mitochondrial dysfunction may contribute to
adipocyte dysfunction. Reduced numbers or function of adipocyte mitochondrial may explain some of the
functional abnormalities of adipose tissue associated with obesity.

Assessments of mitochondrial biogenesis and oxidative capacity of cultured adipocytes (3, 4) and rodent
adipose tissue (1, 5) have been performed. Although cell lines and animal models can be useful tools, they
suffer from the disadvantage that they might not reflect the function of human adipose tissue. In addition,
some investigators assess mitochondrial oxidative capacity by measuring the activities of key mitochondrial
enzymes, whereas measuring oxygen consumption of isolated mitochondria more directly evaluates
adipocyte mitochondrial function (6).

Despite this interest in adipocyte mitochondrial function, relatively little is known about the effects of obesity,
fat cell size, and fat depot of origin on adipocyte mitochondrial capacity for oxidative phosphorylation.
Furthermore, recent studies indicate that large and small adipocytes from the same depot differ with regards
to gene expression (7) and a number of other properties (8,–10). These studies were performed to test the
hypothesis that any decreased oxygen consumption capacity of adipocyte mitochondrial from obese adults is
due to the greater fat cell size of the donor. To test this hypothesis, we measured the oxygen consumption
rates (OCR) of isolated mitochondria harvested from large adipocytes from nonobese adults and small
adipocytes from obese adults to create comparisons where adipocyte size was not different between obese
and nonobese.

Materials and Methods

Participants
This study was approved by the Mayo Clinic Institutional Review Board. Adipose tissue samples (4–6 g)
from the abdominal subcutaneous (periumbilical) region and the peripheral portion of the greater omentum
were collected from a total of 23 patients, 20 (12 female) undergoing elective abdominal surgery and 3
undergoing outpatient needle aspiration biopsy as previously described (11). Entry criteria were age 18 to 75
years old; patients were recruited to have a wide range of body mass index (BMI) values. No patient had
intra­abdominal inflammatory disorders, advanced cancer, or diabetes. Patients taking thiazolidinediones or

https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3913808/?report=printable 2/14
2017­5­11 Adipocyte Mitochondrial Function Is Reduced in Human Obesity Independent of Fat Cell Size

medications that could potentially affect mitochondrial function were excluded. Written, informed consent
was obtained before the procedure.

Adipose tissue digestion
Approximately 3 g of minced adipose tissue was digested in collagenase (type II C­6885; Sigma Chemical
Co) in HEPES buffer (0.1 mol HEPES/L, 0.12 mol NaCl/L, 0.05 mol KCl/L, 0.005 mol glucose/L, 1.5%
[wt:vol] bovine serum albumin, and 1 mmol CaCl2/L [pH 7.4]) in a 37°C water bath shaking at 100–115
rotations per minute. The digestion was typically complete within 20–60 minutes. The resulting cell
suspension was centrifuged for 5 minutes at 300g at room temperature to bring the cells to the top, allowing
us to pipette off the buffer below the cells. These cells were resuspended in 10 mL HEPES.

Adipocytes separation by size
When suspended in an aqueous solution, larger adipocytes float to the surface faster than small adipocytes.
This property allowed us to separate two populations of different size cells. Briefly, 10 mL of the adipocyte
mixture and 40 mL HEPES were carefully added to a 250­cc separation funnel, mixed gently, and allowed
to settle for 60 seconds. At 60 seconds we drained the lower 35 mL from the separation funnel into a beaker
to collect the smaller cells. We then added 35 mL HEPES buffer to the funnel and repeated this operation
three times. The second and third float times were 45 and 30 seconds, respectively. The remaining upper 15
mL of adipocytes­containing buffer contained the large cells. Portions of the large and small cell fractions
were saved at −70°C for DNA extraction.

Measurement of adipocyte size
The size of cells in total tissue, as well as the isolated large and small fat cells, was measured using digital
photomicrographs and an automated software program as previously described (12). We measured an
average of 500 cells per sample to calculate average adipocyte size and to confirm adequate separation by
cell size.

Mitochondria isolation by differential centrifugation

Homogenization buffer A (100 mM KCl, 50 mM Tris, 5 mM MgCl2, 1.8 mM ATP, and 1 mM EDTA) was
added to the suspensions of large and small cells. Cells were homogenized and centrifuged at 2100g for 10
minutes (4 C). The middle layer of the solution was transferred to 6 mL ultracentrifuge tubes and spun at 10
000g for 10 minutes to pellet the mitochondria. The mitochondrial pellets were resuspended in buffer A
(volume 2 mL) and a second high­speed centrifugation was performed at 10 000g for 10 minutes, and the
mitochondrial pellets were gently resuspended in buffer B (225 mM sucrose, 44 mM KH2PO4, 12.5 mM
Mg acetate, and 6 mM EDTA) and were used for OCR and citrate synthase (CS) activity measurements.

Determination of adipocyte number
After homogenization, the top fat layer of the solution was collected and weighed (as described in [11]). The
numbers of adipocytes for each sample used for measurement of OCR and CS activity measurements were
calculated by dividing the fat weight by the mean adipocyte size (μg lipid/cell).

Measurement of oxygen consumption in isolated mitochondria
The function of isolated adipocyte mitochondria was assessed using OCR measurements with high­
resolution respirometry (Oxygraph­2k; Oroboros) as described previously (6, 13). Briefly, a 90­μL aliquot of
the mitochondrial suspension was added to the 2­mL oxygraph chamber filled with respiration medium.
After equilibration, the substrates, including 10 mM glutamate, 2 mM malate, 2.5 mM ADP, and 10 mM
succinate, were then added to the chamber. Oxygen concentration was recorded and respiration rates were

https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3913808/?report=printable 3/14
2017­5­11 Adipocyte Mitochondrial Function Is Reduced in Human Obesity Independent of Fat Cell Size

calculated as the negative time derivative of oxygen concentration (Datlab Version 4.2.1.50; Oroboros
Instruments). The OCR value represents the maximum mitochondrial oxidative capacity with electron flow
through both complexes I and II (6), which we present normalized to both the amount of mitochondrial
protein (organelle level) and the cell number (by using data regarding the number of cells in the large and
small fractions assuming complete recovery of mitochondria) to allow comparison across groups.
Mitochondrial CS activity was measured spectrophotometrically as described previously (13).

Mitochondrial DNA abundance
DNA was extracted from large and small adipocyte samples using a QIAamp DNA mini kit (Qiagen). The
abundance of the mitochondrial DNA (mtDNA)­encoded reduced nicotinamide adenine dinucleotide
dehydrogenase 1 gene was measured using a real­time quantitative PCR system (PE Biosystems). Samples
were run in duplicate and mtDNA content was normalized to 28S ribosomal DNA, as described previously
(14).

Statistical analyses
Data were analyzed using Stata 10.0 (StataCorp). All values are expressed as mean ± SD. We performed
nonpaired t­tests to compare mitochondrial function and mass values between nonobese and obese, large and
small adipocyte groups. We also compared the adipocyte mitochondrial function and mass between different
depots by using data from a subset of volunteers for whom we had measured mitochondrial function (n = 14)
and mass (n = 16) data in both omental and subcutaneous depots using paired t­tests. Univariate linear
regression analysis was used to analyze the relationships of mitochondrial function and mass values with
BMI, sex, age and cell size. P values of <.05 were considered statistically significant.

Results

Volunteer characteristics
The demographic information of the participants is provided in Table 1. We collected omental and abdominal
subcutaneous adipose tissue from 19 and 20 patients, respectively. The participants were 25 to 75 years old
and their BMI values ranged from 17.8 to 58.0 kg/m2. The nonobese and obese groups were well­matched
for age, with similar numbers of men and women.

As expected, omental and abdominal subcutaneous adipocytes from obese volunteers were significantly
larger than those from nonobese volunteers. Subcutaneous adipocytes were larger than omental adipocytes
(0.66 ± 0.43 vs 0.51 ± 0.32 μg lipid/cells, P < .05).

Adipocyte fractionation
The floatation separation method allowed us to create two populations of adipocytes of different sizes from
each sample. For both groups and both depots, we were able to obtain small and large cells of significantly
different sizes (Table 1). This separation by size allowed us to investigate whether mtDNA content and
function were different in cells of different sizes within the same adipose depot. We were also able to
examine whether the mitochondria harvested from large abdominal subcutaneous adipocyte obtained from
nonobese patients functioned differently than mitochondrial from small abdominal subcutaneous adipocytes
from obese patients when fat cell size was not different (0.85 ± 0.18 vs 0.61 ± 0.16 μg lipid/cell, lean vs
obese, respectively, P = .20). Similarly, we compared mitochondria from large omental adipocytes from
nonobese patients and small omental adipocytes from obese patients matched for fat cell size (0.50 ± 0.21 vs
0.46 ± 0.09 μg lipid/cell, lean vs obese, respectively, P = .85).

Adipocyte mitochondria content

https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3913808/?report=printable 4/14
2017­5­11 Adipocyte Mitochondrial Function Is Reduced in Human Obesity Independent of Fat Cell Size

We used the mtDNA­encoded reduced nicotinamide adenine dinucleotide dehydrogenase 1 (ND1) gene
expression, normalized to the 28S nuclear gene, to examine mitochondrial content relative to cell number.
The data are summarized in Table 2. By this measure, the mitochondrial content of large adipocytes from
nonobese volunteer and small adipocytes from obese volunteers (both depots) was not statistically different.
The ND1 copy number was not significantly different between omental and subcutaneous adipocytes from
the same person, nor was it different between large and small cells from same person and same depot.
Although there was a trend for lesser adipocyte mtDNA content with greater BMI (Figure 1), the negative
relationship was statistically significant only for subcutaneous large cells (r = −0.51, P = .03). We did not
find any statistically significant associations between adipocyte mtDNA copy number and age for small cells
or large cells in omental or abdominal subcutaneous fat. Likewise, we detected no differences between men
and women with respect to mtDNA.

Adipocyte mitochondria function—effects of obesity and fat cell size
The OCR and CS activities were normalized to mitochondrial protein concentration (organelle parameter)
and cell number to allow both options for examining the data. At the cell and organelle level, adipocyte
mitochondria OCR and CS activity were twice as great in cells from nonobese volunteers as obese
volunteers (P < .01). Comparing large adipocytes from nonobese volunteers and small adipocytes from
obese volunteers, for both omental and subcutaneous adipocytes, mitochondrial OCR values and CS activity
were greater in cells from nonobese than in cells from obese volunteers, at both the cell and the organelle
level (P < .01, Table 2).

For adipocytes from the same person and same depot, there were no significant differences in OCR values
and CS activities between large and small adipocytes at either the organelle or the cell level. At both the cell
and the organelle levels, there were no significant differences in mitochondrial OCR and CS activities
between omental and abdominal subcutaneous adipocytes collected from the same person.

We found negative correlations between OCR values (Figure 2A), CS­specific activity (Figure 3A), and
BMI at the organelle level for the large and small adipocytes from both omental and abdominal subcutaneous
depots. Similar negative correlations between OCR, CS­specific activity, and BMI at the cell level were also
observed (Figures 2B and 3B). These findings are in agreement with the nonpaired comparisons of OCR
and CS between nonobese and obese groups (Table 2).

We examined whether parameters of mitochondrial function varied as a function of fat cell size in both fat
depots in obese and nonobese patients; the results are provided in Table 3. At both the cell and the organelle
levels, the fat cell size (μg lipid/cell) of large omental adipocytes was negatively correlated with
mitochondrial OCR values and CS­specific activity (P < .01). We also found a negative correlation between
fat cell size and OCR values at the organelle level for omental small and subcutaneous large cells (P < .05).

Adipocyte mitochondria function—effects of age and sex
We tested whether there was a relationship between age and adipocyte mitochondrial OCR and CS,
normalized to cell number and mitochondrial protein content, respectively. At cell level, there was negative
correlation between age and CS activity for small subcutaneous cells (r = 0.56, P = .016). Similarly, there
was moderate correlation between age and OCR for small subcutaneous cells (r = 0.45, P = .058). We found
no significant relationships between age and OCR or CS activity for omental adipocytes or subcutaneous
large cells. At the organelle level, there was no significant relationship between mitochondrial OCR or CS­
specific activity and age. We also examined whether, when analyzing samples from men vs women, there
were differences in mitochondrial OCR or CS parameters; no differences were found.

Discussion

https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3913808/?report=printable 5/14
2017­5­11 Adipocyte Mitochondrial Function Is Reduced in Human Obesity Independent of Fat Cell Size

These studies were designed to understand whether adipocyte mitochondrial content and function are
reduced in obesity independent of fat cell size. By using a differential floatation method, we were able
compare mitochondria from adipocytes of comparable size isolated from nonobese and obese humans. We
also examined whether mitochondrial content and function varied as between depots (visceral vs
subcutaneous) and characteristics such as BMI, age, and sex. We found a modest and largely nonsignificant
trend for reduced mtDNA in adipocytes from obese individuals, but clear evidence of reduced mitochondrial
aerobic capacity and CS­specific activity in adipocytes from obese adults, independent of fat cell size. Of
note, there were no significant differences in mitochondrial OCR or CS between small and large adipocytes
from the same person or between omental and abdominal subcutaneous adipocytes. These findings indicate
that something about the obese state results in impaired adipocyte mitochondrial function irrespective of fat
cell size or location.

Several investigators have shown that adipocyte mitochondrial DNA content and genes encoding
mitochondrial proteins are decreased in obese db/db mice (1) and ob/ob mice (15). Some authors have
reported increased mtDNA content in adipocytes from morbidly obese humans (16, 17), whereas our
findings are more in accordance with Yehuda­Shnaidman et al (18), who found no statistically significant
differences in adipocyte mitochondrial content between obese and nonobese humans. The same group
demonstrated that adipocytes from obese donors had a lesser OCR response to β­adrenergic stimulation (18),
again consistent with our data. However, Yehuda­Shnaidman et al (18) could not discern whether the
decreased mitochondrial function in obesity was related merely to increased fat cell size. Our results clearly
indicate that mitochondrial oxidative capacity in adipocyte from obese humans cannot be attributed to
adipocyte hypertrophy. This observation leads us to propose that the reduced oxidative capacity per
mitochondria is the primary contributor to the compromised mitochondrial function in adipocytes from obese
humans.

We were particularly interested in the question of whether adipocyte mitochondrial oxidative capacity and
content are altered as a result of adipocyte hypertrophy vs obesity itself, because a number of adipocyte
characteristics vary as a function of cell size (19,–24). If cell enlargement per se decreases mitochondrial
oxidative capacity, that could explain some of the relationships between obesity and adipocyte dysfunction.
Our observation that even small adipocytes from obese humans have decreased OCR compared with
nonobese controls suggests that obesity itself, not adipocyte hypertrophy, is the cause of mitochondrial
dysfunction. In addition, the nature of the continuous associations shown in Figures 2 and 3 suggests that
much of the decline in function occurs between a BMI of 20 and 30 kg/m2.

Although many differences have been described between visceral and subcutaneous fat (25,–27), we were
surprised that the measures of mitochondrial function we used were not different between omental and
abdominal subcutaneous fat from either obese or nonobese adults. Likewise, large and small cells from the
same depot from the same person were similar. Obesity had a much greater effect on mitochondrial function
than either cell size or depot of origin. Perhaps the energy requirements for basic functions are sufficiently
similar that, absent obesity, the adipocyte need for ATP from mitochondria is very similar irrespective of site
or cell size.

There are several potential explanations for mitochondrial dysfunction in obesity. One is that increased
mitochondrial substrate load from overnutrition results in greater activity in the electron transport chain,
reactive oxygen species production (28), and oxidative stress (29). Excess lipid storage might also cause
functional abnormalities of the endoplasmic reticulum (ER). The ER actively participates in the lipid storage
steps of synthesizing of fatty acids into triglycerides and bundling of triglycerides into lipid droplets; these
pathways must respond to challenges of excess nutrient supply. If adipocytes suffer ER stress, accumulation
of unfolded proteins may result, which generate high levels of reactive oxygen species (30) and disrupt the
functional relationship between the mitochondrial and the ER (31). Finally, the chronic proinflammatory
process in adipose tissue may compromise mitochondrial function in human obesity (32). In this case, the
nonfat cells of adipose tissue, rather than fat cells, may be the main source of inflammatory cytokines
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3913808/?report=printable 6/14
2017­5­11 Adipocyte Mitochondrial Function Is Reduced in Human Obesity Independent of Fat Cell Size

produced by fat (33, 34). The present study did not address which, if any, of these factors contributed to the
decreased adipocyte mitochondrial oxidative capacity.

We also examined whether some mitochondrial parameters relate to adipocyte size. Mitochondrial content, as
measured by mtDNA copy number, was somewhat greater in large than small cells in samples from the
nonobese group (Table 2), but not in the obese group. This may indicate that larger adipocytes in nonobese
humans require/have more mitochondria to meet the ATP of larger cells. When the total adiposity reaches a
critical level, there appears to be no further increase in mitochondrial content with larger adipocytes. This
compromised adipocyte mitochondrial function might impair glucose and lipid metabolism at cellular level
(35).

A limitation of the present study is that we did not examine the relationship between adipocyte mitochondrial
function and insulin sensitivity of the donors. Obesity is a high risk factor for insulin resistance. The
mechanism or mechanisms by which excessive energy intake and weight gain cause insulin resistance have
not completely been elucidated. Mitochondrial dysfunction is thought to be involved in accumulation of fatty
acids in liver (36) and muscle (37,–39), leading to insulin resistance of these organs; however, findings on
mitochondrial function in relation to insulin resistance are inconsistent in human subjects (40), and few have
focused on the relation between mitochondrial function and insulin resistance in adipocytes. Whether
reduced mitochondrial function in adipocyte is causally related to insulin resistance remains to be elucidated,
and further studies may clarify this issue.

In summary, the present study suggested that adipocyte mitochondrial oxidative capacity measured in vitro is
decreased in obese compared with lean adults and the difference cannot be attributed merely to differences in
fat cell size. There was no difference in mtDNA content and oxidative capacity between adipocytes from
omental and subcutaneous depots and of different fat cell sizes in the same person. The results lead us to
propose that obesity per se is a greater factor than adipocyte hypertrophy as a cause of mitochondrial
dysfunction. Adipocyte hypertrophy and decreased mitochondrial function may mutually amplify each other
during overnutrition and the metabolic imbalance in obesity. We also propose that reduced oxidative capacity
per mitochondria is the primary contributor to the compromised mitochondrial function in adipocytes from
obese humans.

Acknowledgments
We thank Deborah Harteneck and Jill Schimke for technical assistance with the analyses for these studies.

This work was supported by 1 UL1 RR024150 from the National Center for Research Resources, by Grants
DK40484, DK45343, RO1DK41973, and DK50456 from the U.S. Public Health Service, and by the Mayo
Foundation.

Disclosure Summary: The authors have nothing to disclose.

Footnotes
Abbreviations:

BMI body mass index 
CS citrate synthase 
ER endoplasmic reticulum 
mtDNA mitochondrial DNA 
ND1 nicotinamide adenine dinucleotide dehydrogenase 1 
OCR oxygen consumption rates. 

References
1. Koh EH, Park JY, Park HS, et al. Essential role of mitochondrial function in adiponectin synthesis in
adipocytes. Diabetes. 2007;56:2973–2981 [PubMed: 17827403]
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3913808/?report=printable 7/14
2017­5­11 Adipocyte Mitochondrial Function Is Reduced in Human Obesity Independent of Fat Cell Size

2. Heilbronn LK, Gan SK, Turner N, Campbell LV, Chisholm DJ. Markers of mitochondrial biogenesis and
metabolism are lower in overweight and obese insulin­resistant subjects. J Clin Endocrinol Metab.
2007;92:1467–1473 [PubMed: 17244782]

3. Wilson­Fritch L, Burkart A, Bell G, et al. Mitochondrial biogenesis and remodeling during adipogenesis
and in response to the insulin sensitizer rosiglitazone. Mol Cell Biol. 2003;23:1085–1094
[PMCID: PMC140688] [PubMed: 12529412]

4. Newton BW, Cologna SM, Moya C, Russell DH, Russell WK, Jayaraman A. Proteomic analysis of 3T3–
L1 adipocyte mitochondria during differentiation and enlargement. J Proteome Res. 2011;10:4692–4702
[PubMed: 21815628]

5. Deveaud C, Beauvoit B, Salin B, Schaeffer J, Rigoulet M. Regional differences in oxidative capacity of
rat white adipose tissue are linked to the mitochondrial content of mature adipocytes. Mol Cell Biochem.
2004;267:157–166 [PubMed: 15663197]

6. Lanza IR, Nair KS. Functional assessment of isolated mitochondria in vitro. Methods Enzymol.
2009;457:349–372 [PMCID: PMC2782617] [PubMed: 19426878]

7. Jernås M, Palming J, Sjöholm K, et al. Separation of human adipocytes by size: hypertrophic fat cells
display distinct gene expression. FASEB J. 2006;20:1540–1542 [PubMed: 16754744]

8. Farnier C, Krief S, Blache M, et al. Adipocyte functions are modulated by cell size change: potential
involvement of an integrin/ERK signalling pathway. Int J Obes Relat Metab Disord. 2003;27:1178–1186
[PubMed: 14513065]

9. Wueest S, Rapold RA, Rytka JM, Schoenle EJ, Konrad D. Basal lipolysis, not the degree of insulin
resistance, differentiates large from small isolated adipocytes in high­fat fed mice. Diabetologia.
2009;52:541–546 [PubMed: 19048227]

10. Laurencikiene J, Skurk T, Kulyté A, et al. Regulation of lipolysis in small and large fat cells of the same
subject. J Clin Endocrinol Metab. 2011;96:E2045–E2049 [PubMed: 21994963]

11. Tchoukalova YD, Koutsari C, Karpyak MV, Votruba SB, Wendland E, Jensen MD. Subcutaneous
adipocyte size and body fat distribution. Am J Clin Nutr. 2008;87:56–63 [PubMed: 18175737]

12. Tchoukalova YD, Harteneck DA, Karwoski RA, Tarara J, Jensen MD. A quick, reliable, and automated
method for fat cell sizing. J Lipid Res. 2003;44:1795–1801 [PubMed: 12777477]

13. Lanza IR, Zabielski P, Klaus KA, et al. Chronic caloric restriction preserves mitochondrial function in
senescence without increasing mitochondrial biogenesis. Cell Metab. 2012;16:777–788
[PMCID: PMC3544078] [PubMed: 23217257]

14. Short KR, Bigelow ML, Kahl J, et al. Decline in skeletal muscle mitochondrial function with aging in
humans. Proc Natl Acad Sci USA. 2005;102:5618–5623 [PMCID: PMC556267] [PubMed: 15800038]

15. Wilson­Fritch L, Nicoloro S, Chouinard M, et al. Mitochondrial remodeling in adipose tissue associated
with obesity and treatment with rosiglitazone. J Clin Invest. 2004;114:1281–1289 [PMCID: PMC524228]
[PubMed: 15520860]

16. De Naeyer H, Ouwens DM, Van Nieuwenhove Y, et al. Combined gene and protein expression of
hormone­sensitive lipase and adipose triglyceride lipase, mitochondrial content, and adipocyte size in
subcutaneous and visceral adipose tissue of morbidly obese men. Obes Facts. 2011;4:407–416
[PubMed: 22166762]

17. Lindinger A, Peterli R, Peters T, et al. Mitochondrial DNA content in human omental adipose tissue.
Obes Surg. 2010;20:84–92 [PubMed: 19826890]

https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3913808/?report=printable 8/14
2017­5­11 Adipocyte Mitochondrial Function Is Reduced in Human Obesity Independent of Fat Cell Size

18. Yehuda­Shnaidman E, Buehrer B, Pi J, Kumar N, Collins S. Acute stimulation of white adipocyte
respiration by PKA­induced lipolysis. Diabetes. 2010;59:2474–2483 [PMCID: PMC3279548]
[PubMed: 20682684]

19. Allred CC, Krennmayr T, Koutsari C, Zhou L, Ali AH, Jensen MD. A novel ELISA for measuring
CD36 protein in human adipose tissue. J Lipid Res. 2011;52:408–415 [PMCID: PMC3023563]
[PubMed: 21115967]

20. Rebuffe­Scrive M, Guy­Grand B. Lipogenesis in human adipose tissue in vitro: effect of fat cell size on
some enzymatic activities. Diabetes Metab. 1979;5:129–133

21. Arner P, Ostman J. Relationship between the tissue level of cyclic AMP and the fat cell size of human
adipose tissue. J Lipid Res. 1978;19:613–618 [PubMed: 209114]

22. Fried SK, Kral JG. Sex differences in regional distribution of fat cell size and lipoprotein lipase activity
in morbidly obese patients. Int J Obes. 1987;11:129–140 [PubMed: 3610466]

23. Elbers JM, de Jong S, Teerlink T, Asscheman H, Seidell JC, Gooren LJ. Changes in fat cell size and in
vitro lipolytic activity of abdominal and gluteal adipocytes after a one­year cross­sex hormone administration
in transsexuals. Metabolism. 1999;48:1371–1377 [PubMed: 10582544]

24. Jacobsson B, Smith U. Effect of cell size on lipolysis and antilipolytic action of insulin in human fat cells.
J Lipid Res. 1972;13:651–656 [PubMed: 5075509]

25. Hellmér J, Marcus C, Sonnenfeld T, Arner P. Mechanisms for differences in lipolysis between human
subcutaneous and omental fat cells. J Clin Endocrinol Metab. 1992;75:15–20 [PubMed: 1320047]

26. Leibel RL, Hirsch J. Site­ and sex­related differences in adrenoreceptor status of human adipose tissue. J
Clin Endocrinol Metab. 1987;64:1205–1210 [PubMed: 3571424]

27. Ali AH, Koutsari C, Mundi M, et al. Free fatty acid storage in human visceral and subcutaneous adipose
tissue: role of adipocyte proteins. Diabetes. 2011;60:2300–2307 [PMCID: PMC3161316]
[PubMed: 21810594]

28. Subauste AR, Burant CF. Role of FoxO1 in FFA­induced oxidative stress in adipocytes. Am J Physiol
Endocrinol Metab. 2007;293:E159–E164 [PubMed: 17374693]

29. Curtis JM, Grimsrud PA, Wright WS, et al. Downregulation of adipose glutathione S­transferase A4
leads to increased protein carbonylation, oxidative stress, and mitochondrial dysfunction. Diabetes.
2010;59:1132–1142 [PMCID: PMC2857893] [PubMed: 20150287]

30. Lim JH, Lee HJ, Ho Jung M, Song J. Coupling mitochondrial dysfunction to endoplasmic reticulum
stress response: a molecular mechanism leading to hepatic insulin resistance. Cell Signal. 2009;21:169–177
[PubMed: 18950706]

31. Rieusset J. Mitochondria and endoplasmic reticulum: mitochondria­endoplasmic reticulum interplay in
type 2 diabetes pathophysiology. Int J Biochem Cell Biol. 2011;43:1257–1262 [PubMed: 21605696]

32. Bondia­Pons I, Ryan L, Martinez JA. Oxidative stress and inflammation interactions in human obesity. J
Physiol Chem. 2012;68:701–711

33. Fain JN, Tagele BM, Cheema P, Madan AK, Tichansky DS. Release of 12 adipokines by adipose tissue,
nonfat cells, and fat cells from obese women. Obesity. 2010;18:890–896 [PubMed: 19834460]

34. Gustafson B, Gogg S, Hedjazifar S, Jenndahl L, Hammarstedt A, Smith U. Inflammation and impaired
adipogenesis in hypertrophic obesity in man. Am J Phyiol Endocrinol Metab. 2009;297:E999–E1003

https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3913808/?report=printable 9/14
2017­5­11 Adipocyte Mitochondrial Function Is Reduced in Human Obesity Independent of Fat Cell Size

35. Brookheart RT, Michel CI, Schaffer JE. As a matter of fat. Cell Metab. 2009;10:9–12
[PMCID: PMC2751821] [PubMed: 19583949]

36. Lee HJ, Chung K, Lee H, Lee K, Lim JH, Song J. Downregulation of mitochondrial lon protease
impairs mitochondrial function and causes hepatic insulin resistance in human liver SK­HEP­1 cells.
Diabetologia. 2011;54:1437–1446 [PubMed: 21347624]

37. Martins AR, Nachbar RT, Gorjao R, et al. Mechanisms underlying skeletal muscle insulin resistance
induced by fatty acids: importance of the mitochondrial function. Lipids Health Dis. 2012;11:30.
[PMCID: PMC3312873] [PubMed: 22360800]

38. Zheng J, Chen LL, Zhang HH, Hu X, Kong W, Hu D. Resveratrol improves insulin resistance of catch­
up growth by increasing mitochondrial complexes and antioxidant function in skeletal muscle. Metabolism.
2012;61:954–965 [PubMed: 22209670]

39. Fleischman A, Kron M, Systrom DM, Hrovat M, Grinspoon SK. Mitochondrial function and insulin
resistance in overweight and normal­weight children. J Clin Endocrinol Metab. 2009;94:4923–4930
[PMCID: PMC2795647] [PubMed: 19846731]

40. Brands M, van Raalte DH, João Ferraz M, et al. No difference in glycosphingolipid metabolism and
mitochondrial function in glucocorticoid­induced insulin resistance in healthy men. J Clin Endocrinol Metab.
2013;98:1219–1225 [PubMed: 23386653]

Figures and Tables

Table 1.
Demographic Characteristics of the Volunteers

Group N Sex (F) Age BMI Cell Size (μg lipid/cell)

All Cells Large Cells Small Cells

Omental
a
    Nonobese 9 5 53 ± 10 23.8 ± 3.3 0.37 ± 0.24 0.50 ± 0.21 0.23 ± 0.27
a
    Obese 10 5 53 ± 9 42.0 ± 7.8 0.73 ± 0.31 0.99 ± 0.20 0.46 ± 0.09
Abdominal subcutaneous
a
    Nonobese 10 5 45 ± 14 24.9 ± 3.2 0.61 ± 0.42 0.85 ± 0.18 0.37 ± 0.25
a
    Obese 10 5 42 ± 10 36.9 ± 4.1 0.96 ± 0.46 1.29 ± 0.39 0.61 ± 0.16

Data show as mean ± SD for continuous variables.
a
P < .05 compared with small cells.

Table 2.
Adipocyte Mitochondria Content and Function

Group ND1/28SnDNA Citrate Synthase Oxygen Citrate Synthase Oxygen

(μmol/mL/min/mg Consumption Rate (μmol/mL/min/cell) Consumption
protein) (pmol/[smL]/mg Rate
protein) (pmol/[smL]/cell)
Nonobese

https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3913808/?report=printable 10/14
2017­5­11 Adipocyte Mitochondrial Function Is Reduced in Human Obesity Independent of Fat Cell Size

Group ND1/28SnDNA Citrate Synthase Oxygen Citrate Synthase Oxygen

(μmol/mL/min/mg Consumption Rate (μmol/mL/min/cell) Consumption
protein) (pmol/[smL]/mg Rate
protein) (pmol/[smL]/cell)
a a a
     0.97 ± 0.71 (8) 1.0 ± 0.43 (9) 118 ± 56 (9) 1.97 ± 1.09 (5) 263 ± 141 (5)
Omental
large
b b b a
     1.11 ± 0.53 (9) 1.2 ± 0.58 (10) 134 ± 69 (10) 2.29 ± 0.77 (9) 290 ± 160 (9)
Subcutaneous
large
     0.79 ± 0.47 (10) 1.05 ± 0.36 (9) 120 ± 57 (9) 1.32 ± 0.30 (6) 169 ± 48 (6)
Omental
small
     1.04 ± 0.57 (8) 1.10 ± 0.53 (10) 126 ± 67 (10) 1.52 ± 0.85 (9) 169 ± 63 (9)
Subcutaneous
small
Obese
d c d c
     0.52 ± 0.18 (10) 0.52 ± 0.21 (10) 66 ± 30 (10) 0.49 ± 0.20 (6) 61.2 ± 30 (6)
Omental
large
d d d c
     0.79 ± 0.50 (9) 0.50 ± 0.13 (11) 62 ± 38 (11) 1.14 ± 0.58 (8) 119 ± 64 (8)
Subcutaneous
large
d c d c
     0.44 ± 0.20 (8) 0.67 ± 0.36 (10) 69 ± 27 (10) 0.58 ± 0.32 (4) 79 ± 46 (4)
Omental
small
d d
     0.80 ± 0.30 (5) 0.56 ± 0.19 (11) 63 ± 24 (11) 1.02 ± 0.58 (9) 123 ± 79 (9)
Subcutaneous
small
e
Omental 0.63 ± 0.30 (14) 0.75 ± 0.41 (16) 91 ± 55 (16) 1.03 ± 0.57 (10) 136 ± 98 (10)
Subcutaneous 0.76 ± 0.31 (14) 0.88 ± 0.50 (16) 97 ± 62 (16) 1.23 ± 0.63 (10) 146 ± 71 (10)
e
Large cells 0.88 ± 0.56 (29) 0.79 ± 0.47 (40) 94 ± 59 (40) 1.50 ± 0.99 (27) 186 ± 147 (27)
Small cells 0.77 ± 0.45 (29) 0.83 ± 0.43 (40) 93 ± 58 (40) 1.18 ± 0.67 (27) 138 ± 70 (27)

Results are means ± SD (n). CS­specific activities and ND1 copy numbers were measured in triplicate; OCR was measured
duplicate as described in Methods.
a
P < .05;
b
P < .01, compared with the same subgroup in obese small cells.
c
P < .05;
d
P < 0.01, compared with the same subgroup vs non­obese.
e
These are the comparisons using only paired data from omental and abdominal subcutaneous adipocyte from the same
individuals or large and small cells were from the same individuals, same adipose tissue depots as described in Methods.

Figure 1.

https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3913808/?report=printable 11/14
2017­5­11 Adipocyte Mitochondrial Function Is Reduced in Human Obesity Independent of Fat Cell Size

Correlations between BMI and mtDNA. mtDNA content values are plotted vs BMI. Correlation coefficients were r = −0.33,
P = .18 in omental large cells; r = −0.37, P = .128 in omental small cells; r = −0.51, P = .028 in subcutaneous large cells; r =
−.26, P = .39 in subcutaneous small cell group.

Figure 2.

Correlation between BMI and oxidative capacity. OCR values were normalized by mitochondrial protein concentration (A)
and cell numbers (B), respectively. OCR values were plotted against BMI. Correlation coefficients were r = −0.50, P = .03 in

https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3913808/?report=printable 12/14
2017­5­11 Adipocyte Mitochondrial Function Is Reduced in Human Obesity Independent of Fat Cell Size

the omental large cell group; r = −0.47, P = .04 in the omental small group; r = −0.57, P = .007 in the subcutaneous large cell
group; r = −0.53; P = .013 in the subcutaneous small cell group for OCR per milligram mitochondrial protein (A).
Correlation coefficients were r = −0.83, P = .001 in the omental large cell group; r = −0.86, P = .0011 in the omental small
cell group; r = −0.72, P = .001 in the subcutaneous large cell group; r = −0.51; P = .032 in the subcutaneous small cell group
for OCR per cell (B). We were unable to calculate the cell number for all individuals, including two with BMI >50; thus, the
x­axis for B is different than A.

Figure 3.

Correlations between BMI and CS­specific activity of adipocytes. CS activities were normalized by mitochondrial protein
(A) and cell number (B), respectively. Correlation coefficients were r = −0.57 P = .01 in the omental large cell group; r =
−0.19 P = .43 in the omental small cell group; r = −0.58 P = .005 in the subcutaneous large cell group; r = −0.52; P = .016 in
the subcutaneous small cell group for CS activity per milligram mitochondrial protein (A). Correlation coefficients were r =
−0.80, P = .003 in the omental large cell group; r = −0.69, P = .027 in the omental small cell group; r = −0.81, P = .0001in
the subcutaneous large cell group; r = −0.35; P = .15 in the subcutaneous small cell group for CS activity per cell (B). We
were unable to calculate the cell number for all individuals, including two with BMI >50; thus, the x­axis for B is different
than A.

Table 3.
Correlations Between Cell Size and Mitochondrial Oxidative Capacity, Specific Activity of Citrate Synthase

Group OCR (pmol/[s · CS OCR (pmol/[s · mL]/mg CS (μmol/mL/min/mg

mL]/cell) (μmol/mL/min/cell) protein) protein)

n r n r n r n r
a a a a
Omental large 11 −0.84 11 −0.77 19 −0.59 19 −0.56
b
Omental small 10 −0.07 10 −0.32 19 −0.47 19 −0.40
b
Subcutaneous 17 −0.30 17 −0.13 21 −0.45 21 −0.38
large
Subcutaneous 18 −0.08 18 −0.21 21 −0.30 21 −0.14
small

a
P < .01;
b
P < .05.
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3913808/?report=printable 13/14
2017­5­11 Adipocyte Mitochondrial Function Is Reduced in Human Obesity Independent of Fat Cell Size

Articles from The Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism are provided here courtesy of The
Endocrine Society

https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3913808/?report=printable 14/14