UNIVERSIDAD

NACIONAL
MAYOR DE SAN
MARCOS
(Universidad del Perú, Decana De América)

CURSO : LABORATORIO DE QUIMICA ORGANICA

TEMA :CROMATOGRAFIA DE COMPUESTOS ORGÁNICOS

PROFESOR :Mg. Q.F. FELIX VELIZ Luis Miguel

ALUMNOS :
10170019 Arce Esteban Stefany Lizeth
10170045 Chuqui Torres Carol
10170106 Cubas Gonzales Alexander
10170100 Calderón Villasante Susana
10170050 Zea Rodríguez Rosa

TURNO : 4:00 p.m.-6:00 p.m.

Ciudad Universitaria, noviembre del 2010

PRACTICA N 6 CROMATOGRAFIA DE COMPUESTOS ORGANICOS

INTRODUCCIÓN

La cromatografía, es la técnica de análisis químico utilizada para separar sustancias puras

de mezclas complejas; la cual es aplicada a muchas ramas de la ciencia. Esta técnica
depende del principio de adsorción selectiva (no confundir con absorción), cuyo objetivo
es separar los distintos componentes de una mezcla, permitiendo identificar y determinar
las cantidades de dichos componentes, y así verificar especialmente su pureza.

El primer trabajo en el que se hace pasar una fase móvil gaseosa a través de una
columna data de 1951, dando lugar a la técnica conocida como cromatografía de gases.

Las técnicas cromatográficas son muy variadas, pero en todas ellas hay una fase móvil
que consiste en un fluido (gas, líquido o fluido supercrítico) que arrastra a la muestra a
través de una fase estacionaria que se trata de un sólido o un líquido fijado en un sólido.
En la cromatografía en papel, una muestra líquida fluye por una tira vertical de papel
adsorbente, sobre la cual se van depositando los componentes en lugares específicos.

Existen otras técnicas como cromatografía gas-líquido que permite la separación de

mezclas de compuestos gaseosos o de sustancias susceptibles de vaporizarse por calor.
La mezcla vaporizada es conducida mediante un gas inerte a través de un estrecho tubo
en espiral que contiene una sustancia, por la que los componentes fluyen en diferentes
proporciones, siendo detectados al final del tubo. Otro método es la cromatografía por
infiltración gelatinosa, basado en la acción filtrante de un adsorbente poroso de tamaño
uniforme. Con este método se consigue separar y detectar moléculas de mayor masa
molecular.

La combinación de altas resoluciones, sensibilidad y tiempos de análisis cortos la ha

convertido una técnica de rutina usada en la mayoría de los laboratorios químicos.

El uso de la cromatografía está ampliamente extendido en el análisis de alimentos,

medicinas, sangre, productos petrolíferos y de fisión radiactiva.

En consecuencia, las mejores técnicas de análisis cualitativo son aquéllas que combinan
la capacidad de separación de la cromatografía con la capacidad de la identificación de
técnicas como la espectroscopía de masas (técnicas acopladas).
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I. PRINCIPIOS TEÓRICOS

CROMATOGRAFÍA:

La cromatografía, es la técnica de análisis químico utilizada para separar sustancias

puras de mezclas complejas; la cual es aplicada a muchas ramas de la ciencia. Esta
técnica depende del principio de adsorción selectiva (no confundir con absorción), cuyo
objetivo es separar los distintos componentes de una mezcla, permitiendo identificar y
determinar las cantidades de dichos componentes, y así verificar especialmente su
pureza.

Las técnicas cromatográficas son muy variadas, pero en todas ellas hay una fase móvil
que consiste en un fluido (gas, líquido o fluido supercrítico) que arrastra a la muestra a
través de una fase estacionaria que se trata de un sólido o un líquido fijado en un sólido.

Tipos Fase móvil Fase estacionaria

Cromatografía en Líquido Líquido ( moléculas de agua contenidas en la

papel celulosa del papel )

Cromatografía en capa Líquido Sólido

fina

Cromatografía de Gas Sólido o líquido

gases

Cromatografía líquida Líquido Sólido o líquido

en fase inversa (polar) (menos polar)

Cromatografía líquida Líquido Sólido o líquido

en fase normal (menos (polar)
polar)

Cromatografía líquida Líquido Sólido

de intercambio iónico (polar)

Cromatografía líquida Líquido Sólido

de exclusión

Cromatografía líquida Líquido Sólido

de adsorción

Cromatografía de Líquido Sólido

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fluidos supercríticos

CLASIFICACIÓN:

Las distintas técnicas cromatográficas se pueden dividir según cómo esté dispuesta la
fase estacionaria:

Cromatografía plana. La fase estacionaria se sitúa sobre una placa plana o sobre un
papel. Las principales técnicas son:

➢ Cromatografía en papel
➢ Cromatografía en capa fina

Cromatografía en columna. La fase estacionaria se sitúa dentro de una columna. Según el

fluido empleado como fase móvil se distinguen:

➢ Cromatografía de líquidos
➢ Cromatografía de gases
➢ Cromatografía de fluidos supercríticos

TECNICAS DE SEPARACIÓN:

La cromatografía y métodos de separación clásicos se basa en la separación de

componentes de una muestra. Estas técnicas no son de caracterización propiamente
dicha; las propiedades de los materiales dependen de los componentes y de la proporción
existente entre ellos.

Estas técnicas no dan información de la naturaleza de los componentes, para eso se

necesitan otros métodos de análisis.
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1. Mecanismos de Separación:

a) Separación por adsorción (cromatografía de adsorción):

Diferente afinidad de los componentes de la muestra sobre la superficie de un sólido
activo (componentes con polaridad baja o media).
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b) Separación por reparto (cromatografía de reparto):

Diferente solubilidad en fases estacionaria y móvil (Componentes con polaridad
media o alta).

c) Separación por tamaño molecular (Cromatografía de permeación de gel, de

tamiz molecular o de exclusión por tamaños):
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Parámetros de columna

➢ Intervalo de trabajo: intervalo de M que pueden ser separados

➢ Límite de exclusión: M mínimo a partir del cual las macromoléculas no
experimentan retención.

Las moléculas pequeñas penetran en los poros de las partículas de gel, por lo que
necesitan más tiempo para salir al final de la columna. Las moléculas grandes, en
cambio, al no penetrar en las partículas de gel se mueven con el disolvente a una
velocidad mayor de elución y salen antes de la columna. Por tanto, a mayor masa
molecular menor tiempo de elución. Este método permite separar por tamaños
moleculares siendo posible obtener incluso distribuciones de masas moleculares a
distintos tiempos de elución.

d) Separación por Intercambio iónico:

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La separación se basa principalmente en la diferente afinidad para el intercambio de iones

de los componentes de la muestra.

Las especies cargadas negativamente se unen a la matriz sólida cargada

positivamente y son retenidas, mientras que las especies positivas son
rechazadas. De esta manera en función de la carga las especies se eluyen a
distintos tiempos dando lugar a la correspondiente separación.

La elución de las especies retenidas se consigue cambiando el pH del disolvente

hasta igualarlo a su punto isoeléctrico o hasta invertir su carganeta.

“Una separación puede estar basada en la conjunción de diversos mecanismos”

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2. Métodos de análisis cromatográfico:

a) Análisis por desarrollo (cromatografía en papel o capa fina).

b) Análisis por elución (cromatografía de gases, cromatografía líquida).
c) Análisis frontal.
d) Análisis por desplazamiento.

Análisis por desarrollo

Análisis por elución

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Análisis por desarrollo

3. Clasificación de acuerdo con la forma del lecho cromatográfico:

a) Cromatografía en columna.
a. Columna empaquetada.
b. Columna tubular abierta.
b) Cromatografía plana (o de lecho abierto).
a. Cromatografía en pape.
b. Cromatografía en capa fina (TLC).

4. Clasificación de acuerdo con el estado físico de la fase móvil:

a) Técnicas cromatográficas.
➢ GLC
➢ GSC
➢ LLC
➢ LSC
b) Cromatografía de gases (siempre en columna).
c) Cromatografía Líquida (en columna o sobre plano).
➢ Cromatografía Líquida de Alta Eficacia o de Alta Presión, HPLC.
d) Cromatografía con fluido supercrítico.
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5. Técnicas especiales:

a) Cromatografía con fase invertida

b) Cromatografía con fase normal
c) Análisis isocrático (composición F. móvil constante)
d) Elución con gradiente (Composición F. móvil cambia de forma continua)
e) Elución en etapas o escalonada (Composición F. móvil cambia de forma
escalonada)
f) Cromatografía bidimensional (etapas adicionales de separación)

II. PROCEDIMIENTOS:

1. CROMATOGRAFIA EN PAPEL DE COMPUESTOS COLOREADOS

PROCEDIMIENTOS:

1. Con un lápiz trazar una línea de tal manera que esta divida en dos a la tira de papel. Trace
otra línea perpendicular a la línea que dividió en papel por la mitad 1cm del extremo de este. De la
misma forma trazar otra línea perpendicular a 10cm de la primera línea trazada (frente de
solvente).
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2. En el punto de origen aplique 4 veces la solución acuosa de la muestra problema (1ml

aproximadamente), tratando de secarla en cada aplicación para evitar la difusión de la muestra
sobre el papel.

3. en un tubo de ensayo vierta 1ml de solvente(propanona, acetona, agua, en proporciones

de 4:1:1), colocarlo en la gradilla y en un lugar estable

4. Colocar un soporte en el papel filtro inerte a la altura

del frente solvente.

RESULTADOS:
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1. Luego de de introducir el papel filtro con al muestra problema dentro del tubo de ensayo
se observa que los colores de las respectivas sustancias se desplazan ascendentemente formando
distintas intensidades de colores por la línea trazada en el medio del papel hasta llegar
aproximadamente a l frente del solvente en tonos cada vez mas claros.

2. Una de las sustancias viaja mas rápida que las demás debido a que dicha sustancia tiene
mas afinidad al solvente propanona, cetona, agua en proporción 4:1:1).

Calculo de la relación de flujo.

Rf = 4.8/10=0.48

2. CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA DE COMPUESTOS INCOLOROS:

Reactivos y materiales:

● Soporte: Silicagel G activado

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● Sistema de solvente: Bz-AcOEt (2:1)

● Sustancias: Acido acetil salicílico

● Revelador: Vapores de iodo metálico, en la práctica se usó el revelado por luz UV.

Técnica operatoria:

● A 1 cm del borde inferior del portaobjeto (cromatograma) marcar dos puntos

equidistantes entre sí con un lápiz.
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● Con un capilar aplicar en un punto el acido acetil salicílico patrón (químicamente puro) y
el acido acetil salicílico extraído en las practicas anteriores de, 3 a 5 veces, teniendo la precaución
de dejar secar después de cada aplicación.

● Introducir el cromatograma en la cámara de saturación el que a su vez contiene 2 ml del

sistema solvente. Cuando el solvente este por llegar al borde superior retirarla de la cámara,
marcar el frente de solvente, dejar secar.

● Exponer las placas cromatograficas bajo la luz UV. Las marcas que aparezcan se señalaran
con lápiz. Determinar el Rf de ambas sustancias
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RESULTADOS:

● Para el cálculo del Rf se usara la siguiente expresión:

En la práctica realizada los valores obtenidos arrojaron las siguientes medidas:

RF1=0.43

RF2=0.50

ANÁLISIS:

El Rf del acido acetil salicílico patrón (químicamente puro) y el Rf del acido acetil salicílico
problema tienden a ser muy próximos, esto significa que la extracción realizada en las prácticas
anteriores fue buena.

III. CUESTIONARIO:

Pregunta N°1:

En la adsorción la retención de moléculas se lleva a cabo únicamente en la superficie del

adsorbente y la sustancia retenida o adsorbida se le denomina fase adsorbida. En la absorción la
retención se sustancias, compuestos o elementos se lleva a cabo en la estructura misma de la
molécula de absorbente en la que se puede presentar un intercambio iónico entre los
componentes del absorbato y el absorbente (hay una reacción química mas o menos
permanente). El proceso de absorción se presenta cuando una sustancia es químicamente
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integrada en otra; por ejemplo: cuando usted bebe un vaso de agua, usted esta "absorbiendo" ya
que el agua pasa a formar parte de usted; mientras que en la adsorción, una sustancia esta siendo
mantenida dentro de otra por efectos de un enlace físico. Ejemplo: si usted derrama un vaso de
agua en su pantalón, el agua de ese derrame será adsorbida por las fibras de la tela, pero estará
ahí hasta que el agua se evapore.

La cromatografía es un método físico de separación basado en la distribución de los

componentes de una mezcla entre dos fases inmiscibles, una fija o estacionaria y otra móvil. En la
cromatografía líquida, la fase móvil es un líquido que fluye a través de una columna que contiene a
la fase fija. La cromatografía líquida “clásica” se lleva a cabo en una columna generalmente de
vidrio, la cual está rellena con la fase fija. Luego de sembrar la muestra en la parte superior, se
hace fluir la fase móvil a través de la columna por efecto de la gravedad. Con el objeto de
aumentar la eficiencia en las separaciones, el tamaño de las partículas de fase fija se fue
disminuyendo hasta el tamaño de los micrones, lo cual generó la necesidad de utilizar altas
presiones para lograr que fluya la fase móvil. De esta manera, nació la técnica de cromatografía
líquida de alta resolución (HPLC), que requiere de instrumental especial que permita trabajar
con las altas presiones requeridas.
Cromatografía por gases: esta es una técnica para la separación de compuestos orgánicos e
inorgánicos térmicamente estables y volátiles. La cromatografía gas-liquido lleva a cabo la
separación por medio del reparto de los componentes de una mezcla química, entre una fase
gaseosa que fluye (móvil) y una fase liquida estacionaria sujeta a un soporte solido. La
cromatografía gas-solido utiliza un absorbente solido como fase estacionaria. La disponibilidad de
detectores versálites y específicos, y la posibilidad de acoplar el cromatógrafo de gases a un
espectrómetro de masas o a un espectrofotómetro de infrarrojo, amplían aun más la utilidad de la
cromatografía de gases.

Pregunta N°2:

COMPARACIÓN ENTRE CROMATOGRAFÍA DE GASES Y HPLC:

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Como características de ambos métodos: Son eficientes, muy selectivos, ampliamente aplicables.
Sólo se requiere una muestra pequeña. Pueden utilizarse sin destruir la muestra. Se adapta
fácilmente al análisis cuantitativo.
Ventajas de la HPLC: Puede acomodar muestras no volátiles e inestables térmicamente. Es
aplicable a iones inorgánicos.
Ventajas de la CG: Se trata de un equipo sencillo y barato en comparación con HPLC. Es rápido.
Tiene resolución en paralelo (columnas capilares). Se conecta fácilmente con la espectroscopia de
masas, (MS). La CG, ofrece la ventaja de la velocidad y simplicidad del equipo, pero la HPLC es
aplicable a sustancias no volátiles y materiales térmicamente inestables.
Algunas diferencias instrumentales: En HPLC no existen detectores tan aplicables universalmente,
ni tan tampoco tan fiables como en CG. El detector en HPLC no es necesario que sea sensible en
un intervalo tan grande de temperaturas. El detector usado en HPLC debe tener un volumen
interno mínimo a fin de reducir el ensanchamiento de banda.

Pregunta N°3:

El método por capa fina es el método idóneo que se aplica para carreras aplicadas, como
ingeniería industrial. La cromatografía en capa fina presenta una serie de ventajas frente a
otros métodos cromatográficos (en columna, en papel, en fase gaseosa, etc) ya que el
utillaje que precisa es más simple.
El tiempo que se necesita para conseguir
las separaciones es mucho menor y la
separación es generalmente mejor.
Pueden usarse reveladores corrosivos,
que sobre papel destruirían el
cromatograma. El método es simple y los
resultados son fácilmente reproducibles, lo
que hace que sea un método adecuado
para fines analíticos.
Factores que influyen en una
separación por cromatografía decapa fina.
a) Temperatura: a menor temperatura las sustancias se adsorben más en la fase
estacionaria.
b) La cromatografía debe llevarse a cabo en un área sin corrientes de aire.
c) Limpieza de las placas. Muchas placas están contaminadas con grasa o agentes
plastificantes o adhesivos. Para el trabajo a pequeña escala, éstas deben
limpiarse corriendo primero una mezcla de cloroformo y metanol y después dejar
secar completamente antes de aplicar la muestra.
d) Pureza de los disolventes.
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Pregunta N°4:

La electroforesis es una técnica para la separación de moléculas la base de su tamaño

molecular y carga eléctrica. Los ácidos nucleicos ya disponen de una carga eléctrica
negativa, que los dirigirá al polo positivo, mientras que las proteínas se cargan con
sustancias como el SDS (detergente) que incorpora cargas negativas de una manera
dependiente del peso molecular. Para la separación se usa un gel de agarosa o
poliacrilamida (fibras cruzadas, como una malla). Al poner la mezcla de moléculas y
aplicar un campo eléctrico, éstas se moverán y deberán ir pasando por la malla, por la
que las pequeñas se moverán mejor, más rápidamente. Así, las más pequeñas avanzarán
más y las más grandes quedarán cerca del lugar de partida.
Se fundamenta en la velocidad molecular y en la movilidad.

IV. CONCLUSIONES:
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● Se vio como el ácido acetil salicílico obtenido en prácticas anteriores fue un

compuesto pura ya que el Rf con respecto a la muestra patrón era numéricamente

cercana.

● Se observo en esta práctica que por medio de la cromatografía es posible

identificar de que sustancias está compuesta una mezcla y la pureza.

● Como la polaridad del solventes utilizados para la cromatografía determinan la el

resultado mostrándonos sus diferentes compuestos.

● Se observo como las diferentes características de la mezcla “A” se veían en la

placa promedio de sus diferentes manchas.

● Como ciertos factores pueden modificar el restado en esta práctica.

BIBLIOGRAFÍA
PRACTICA N 6 CROMATOGRAFIA DE COMPUESTOS ORGANICOS

✓ http://depa.pquim.unam.mx/~fercor/dqo/manuales/1311/p7.pdf

✓ http://es.wikipedia.org/wiki/Electroforesis

✓ Remington Farmacia. Segunda Edición. Editorial Médica Panamericana.

✓ Principio y aplicaciones de la cromatografía. Miriam Barquero Quiroz. Serie

Química.

✓ Química orgánica. Morrison y Boyd. Quinta Edición 1998. Impreso en México.

✓ Química orgánica: Fundamentos teórico-prácticos para laboratorio. Lydia Raquel.

Impreso en España.

✓ Química orgánica. Aliger Cava de Jongh Jonhson. Segunda Edición. Impreso en

España.

✓ Química orgánica: conceptos y aplicaciones. Philip S. Bailey, Christina A. Bailey –

1998
✓ ABBOT D. y Andrews R.S. Introducción a la Cromatografía. 3a. Ed. Alhambra,
Madrid, 1970.
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