INFORME

OBSERVACIÓN E IDENTIFICACIÓN DE BACTERIAS EN COLORACIÓN

SIMPLE Y DE GRAM

PRESENTADO POR:

KELLYS JOHANNA CARRASCAL GARCIA

MARÍA ALEJANDRA MERCADO TOVAR

LUIS ERNESTO SOLANO PATERNINA

ANGÉLICA DAYANA LOPÉZ ARANGO

DAYANA MARCELA FERIA MEJIA

DOCENTE:

CLAUDIA LORENA VARGAS MONTERO

ASIGNATURA:

MICROBIOLOGÍA

UNIVERSIDAD DE SUCRE

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

PROGRAMA: TECNOLOGIA DE REGENCIA EN FARMACIA

III SEMESTRE

SINCELEJO – 2018
 INTRODUCCIÓN.

La tinción es el proceso por el cual las moléculas de un colorante se adsorben a

una superficie. El uso de colorantes permite cambiar el color de las células de
los microorganismos y poder realizar la observación en microscopio óptico. Dado
que las bacterias son casi incoloras, no presentan contraste con el medio en el
cual se encuentran suspendidas y no pueden observarse claramente sin algún
tratamiento previo. De acuerdo a la reacción que ocurre, existen diferentes tipos
de tinción:

Tinción diferencial de Gram

Esta tinción se denominada así por el bacteriólogo danés Christian Gram, quien
la desarrolló en 1844. Sobre la base de su reacción a la tinción de Gram, las
bacterias pueden dividirse en dos grupos, Gram-positivas y Gram-negativas (en
este caso, los términos positivo y negativo no tiene nada que ver con carga
eléctrico, sino simplemente designan dos grupos morfológicos distintos de
bacterias).

Las bacterias Gram-positivas y Gram-negativas tiñen de forma distinta debido a

las diferencias constitutivas en la estructura de sus paredes celulares. La pared
de la célula bacteriana sirve para dar su tamaño y forma al organismo, así como
para prevenir la lisis osmótica. El material de la pared celular bacteriana que
confiere rigidez es el peptidoglicano. La pared de la célula Gram-positiva es
gruesa y consiste en varias capas interconectadas de peptidoglicano, así como
algo de ácido teicoico. Generalmente, 80% 90% de la pared de la célula Gram-
positiva es peptidoglicano.

La pared de la célula Gram-negativa, por otro lado, contiene una capa mucho
más delgada, únicamente de peptidoglicano y está rodeada por una membrana
exterior compuesta de fosfolípidos, lipopolisacáridos, y lipoproteínas.

Sólo 10% - 20% de la pared de la célula Gram-negativa es peptidoglicano.

RESULTADOS.

Falta esto

ANÁLISIS DE RESULTADOS.

Tinción simple. FALTA ESTO

Tinción de Gram. SEGÚN MI INFORME DE BIOLOGIA SAQUE UN 3.3 JAJAJA

Aquí se pudo observar que la muestra se encuentra en racimos, pares y cadenas

cortas con forma redonda (coco). Estas bacterias se observaron de color violeta ya
que en el proceso de tinción donde se le agrego los diferentes colorantes como el
cristal de violeta y fucsia, tomando este color característico que se le denomina gran
positivo.

Estas bacterias presentan este color ya que la envoltura de las bacterias gran positiva
cubre la membrana citoplasmática y una pared celular compuesta por una gruesa
capa de peptidoglicano, que rodea a la anterior.

En esta tinción es posible observar las bacterias en forma de bacilos (forma de barra
o vara) y de color rosado, lo que indica que son bacterias de gran negativa. Esta
coloración se debe a las características que posee las bacterias gran negativas en su
pared celular con una capa delgada de peptidoglicano (mureina) unidad a una
membrana externa formadas por proteínas, fosfolípidos y polisacáridos.

Esta tinción de gran permite conocer la morfología celular, el tamaño, la forma y su

clasificación taxonómica (gram positivo o gram negativo).

CONCLUCIÓN.

En esta práctica de laboratorio realizamos las diferentes tinciones que nos ayudan
a evidenciar ciertas características o estructuras de los microorganismos, de
acuerdo a la necesidad que se tenga es la tinción que deberá utilizarse, es de
suma importancia conocer cada una de ellas, así como su correcta preparación ya
que de esta manera se logrará el objetivo de la tinción que es observar la
estructura o característica de las bacterias. Es sustancial tener cuidado en los
puntos críticos que en el caso de las tinciones diferenciales es realizar una buena
o mala decoloración nos dará el éxito o el fracaso en la preparación de la muestra
que vamos a observar.
CUESTIONARIO.

2, ¿Cuál es el fundamento de la técnica de Gram?

Los fundamentos de la técnica se basan en las diferencias entre las paredes
celulares de las bacterias Gram positivas y Gram negativas.
La pared celular de las bacterias Gram positivas posee una gruesa capa de
peptidoglucano, además de dos clases de ácidos teicoicos: Anclado en la cara
interna de la pared celular y unido a la membrana plasmática, se encuentra el
ácido lipoteicoico, y más en la superficie, el ácido teicoico que está anclado
solamente en el peptidoglucano (también conocido como mureína)Por el contrario,
la capa de peptidoglucano de las Gram negativas es delgada, y se encuentra
unida a una segunda membrana plasmática exterior (de composición distinta a la
interna) por medio de lipoproteínas. Tiene una capa delgada de peptidoglicano
unida a una membrana exterior por lipoproteínas. La membrana exterior está
hecha de proteína, fosfolípido y lipopolisacárido. Por lo tanto, ambos tipos de
bacterias se tiñen diferencialmente debido a estas diferencias constitutivas de su
pared. La clave es el peptidoglicano, ya que es el material que confiere su rigidez
a la pared celular bacteriana, y las Grampositivas lo poseen en mucha mayor
proporción que las Gram negativas. La diferencia que se observa en la resistencia
a la de coloración, se debe a que la membrana externa de las Gram negativas
es soluble en solventes orgánicos, como por ejemplo la mezcla de
alcohol/acetona. La capa de peptidoglicano que posee es demasiado delgada
como para poder retener el complejo de cristal violeta/yodo que se formó
previamente, y por lo tanto este complejo se escapa, perdiéndose la coloración
azul-violácea. Pero, por el contrario, las Grampositivas, al poseer una pared
celular más resistente y con mayor proporción de peptidoglicanos, no son
susceptibles a la acción del solvente orgánico, si no que este actúa deshidratando
los poros cerrándolos, lo que impide que pueda escaparse el complejo cristal
violeta/yodo, y manteniendo la coloración azul-violácea

2. ¿Qué tipo de microorganismo se pueden observar en la preparación en

fresco?

Las preparaciones en fresco se utilizan para observar microorganismos vivos. Por

ejemplo, para la búsqueda de Trichomonas vaginalis en secreciones vaginales.
Este protozoo de gran movilidad causa inflamación de la vagina y la uretra. Si en
la preparación se observan células en forma de huso que se mueven mediante
contracciones o sacudidas cruzando el campo, probablemente se tratará de T.
vaginalis, pudiéndose efectuar el diagnóstico.
Sin embargo, el inconveniente de la observación en fresco es que no permite
aumentar el contraste de la preparación. Por tanto, su uso, con un microscopio
óptico de campo claro, está bastante limitado. Normalmente, para observar
microorganismos vivos se utiliza alguno de los otros microscopios ópticos que
hemos mencionado anteriormente.

3. Investigue ¿Qué coloración se debe utilizar para observar las endoporas o

esporas bacterianas?

Las endosporas poseen unas cubiertas exclusivas que las hacen resistentes a los
factores ambientales adversos. Además, estas cubiertas hacen que las esporas
aparezcan en el microscopio óptico como estructuras refringentes y de difícil
tinción.
La tinción específica de esporas requiere dos colorantes:
1.Verde malaquita: capaz de teñir las esporas en caliente.
2.Safranina: colorante de contraste que tiñe las formas vegetativas.
Las endosporas, tras la primera tinción, no perderán el colorante en el lavado con
agua, y sí lo harán las formas vegetativas, que quedarán teñidas con el segundo
colorante.

BIBLIOGRAFÍA:

 Bernadette F. Rodak, (2005). Hematología: fundamentos y aplicaciones

clínicas. Segunda Edición. Página 38, Editorial Medica Panamericana.
 htt/p://www.danival.org/notasmicro/tinción/ madre tinción.html
 Elmer W. Koneman, Stephen Allen, (2008). Koneman, Diagnostico
Microbiológico. Sexta Edición, Buenos Aires, Editorial Médica Panamericana.
 Roger Y. Stanier, Julio R. Villanueva, (1996). Microbiología, Estructuras
superficiales de la célula procariótica, Editorial Reverte, Segunda Edición,
Página 155.