FUNDACIÓN UNIVERSITARIA AGRARIA DE COLOMBIA
DEPARTAMENTO DE CIENCIAS BÁSICAS
www.uniagraria.edu.co
AISLAMIENTO Y CUANTIFICACION DE
PROTEINAS
Rodríguez. Fabián,
{Rodriguez.Fabian1}@uniagraria.edu.co
Pardo, Luz b
Resumen—Para esta practica de laboratorio, por medio de una
leche fresca entera, se realizó el aislamiento y cuantificación de
proteínas, se van separando sus propiedades hasta que quede en
un estado de agua, después serán repartidos entre 10 tubos de
ensayo, y cada uno se le agregaran diferentes reactivos, entre los
más destacados se encuentran la solución de albumina y el reactivo
de Biuret, se recopilaran los resultados obtenidos para ser
graficados en 2 curvas de calibración teniendo en cuenta de los 5
tubos obtener los valores de transmitancia, absorbancia y
concentración, y así determinar las concentración adquiridas de
esa leche entera.
Palabras Clave—leche entera, solución de albumina, reactivo de
Biuret, transmitancia, absorbancia, concentración.
Abstract-- For this laboratory practice, by means of a whole
fresh milk, the isolation and quantification of proteins were
carried out, their properties are separating until it is in a state Of
water, then they will be distributed between 10 test tubes, and each
one will be added different reagents, among the most prominent
are the solution of albumin and the reagent of Biuret, will collect
the results obtained to be plotted in 2 curves of Calibration taking
into account the 5 tubes obtain the values of transmittance,
absorbance and concentration, and thus determine the
concentration acquired of that whole MILK.
Keywords— Whole milk, albumin solution, Biuret reagent,
transmittance, absorbance, Concentration.
I. INTRODUCCIÓN
La leche es una de las principales fuentes de calcio de la
naturaleza y la única en el bebé ayuda a que el calcio es
imprescindible, entre otras funciones, para la formación y el
mantenimiento de los huesos y dientes, pero además , nos aporta
elementos muy valiosos como vitaminas, proteínas de alto valor
biológico, y otros minerales que hacen de la leche un alimento
básico en todas las edades, su origen contienen glúcidos o
hidratos de carbono, proteínas y grasas además de vitaminas,
minerales y agua, coloración blanco opaco, sabor dulce y pH
ligeramente ácido próximo a la neutralidad, es el alimento ideal
en todos los mamíferos tras su nacimiento. (Ruiz, 2015)
a
Estudiantes de ___________.
b
Docente de ______, Departamento Ciencias Básicas.
La cantidad de cada uno de sus componentes varía según el
mamífero, ya que cada especie produce la leche adaptada a las
necesidades de sus crías. Dentro de la leche de cada especie la
composición también sufre pequeñas variaciones que dependen
de la raza, la alimentación, la época del año, etc. (Ruiz, 2015)
La leche forma parte de la alimentación humana en la inmensa
mayoría de las civilizaciones y desde hace miles de años, de
hecho, su consumo comenzó hace unos 11.000 años con la
domesticación del ganado. (Ruiz, 2015)
Para consumo humano se utilizan fundamentalmente la leche de
vaca, de oveja, de cabra y de búfala. También se consumen la de
burra y camella. En estas leches animales de consumo humano
suelen realizarse tratamientos térmicos caseros o industriales.
Estos procesos originan también pequeñas variaciones en la
composición de la leche. (Ruiz, 2015)
II. OBJETIVOS
OBJETIVO GENERAL (Max. 1)
por medio del producto la leche entera fresca, aplicar el proceso
de aislamiento y la cuantificación de sus proteínas, en extraer los
valores de % de transmitancia, absorbancia y su concentración,
además siguiendo las recomendaciones indicadas por el docente.
OBJETIVOS ESPECÍFICOS (Max. 3)
 Por medio de los datos recopilados como son el % de
transmitancia, absorbancia y su concentración, realizas
2 curvas de calibración en verificar su comportamiento
ante la leche.
 Añadir correctamente entre los 7 tubos, los valores
correspondientes explicadas en la guía de laboratorio,
de acuerdo con los siguientes reactivos, la albuminica
sérica, lactoalbúmina, entre otros.
 Para leer el % de transmitancia se deberá preparar y
calibrar el espectrofotómetro, y leer la medición dada
en cada uno de los 7 tubos marcados.
 III. ASPECTOS TEÓRICOS
La albumina sérica, es uno de los componentes del plasma
sanguíneo, es una proteína fabricada por el hígado que juega un
papel importante en el transporte de los líquidos en los vasos
sanguíneos y su reparto entre los tejidos y los vasos. Una tasa
de albúmina sérica demasiado baja provoca la aparición de
edemas. Una tasa demasiado elevada es signo de
deshidratación. La albúmina sérica se determina a través de un
análisis de sangre y se denomina albuminemia. La nutrición
juega un papel primordial en la producción de albúmina sérica.
(Pillou, 2015)
La caseína, se encuentra en la leche en forma de un complejo
soluble de calcio y fósforo contiene un 80% de la proteína
presente en la leche de bovinos, mientras que dicho porcentaje
es sensiblemente menor (50%) en la leche de cerda, es obtenida
por un proceso de precipitación a partir de la leche previamente
desnatada, mediante el uso de fermentos (quimosina en
queserías) o de ácidos fuertes (H2SO4 ó HCl). A un pH de 4,6
la precipitación por ácidos es casi completa, ya que éste es el
punto isoeléctrico de la caseína. El producto final es el
caseínato sódico o cálcico, después de neutralizar la caseína con
hidróxido sódico o cálcico. Los caseinatos encuentran su
principal aplicación en la elaboración de productos cárnicos
para consumo humano por sus excelentes propiedades
emulsionantes. (FEDNA, 2014)
Fig. 1 formación de la caseína (FEDNA, 2014)
En la Lacto albúmina es una proteína que se encuentra presente
en la leche, es soluble pero también se puede encontrar en fase
dispersa; Es el segundo tipo de proteínas más abundante en la
leche además de esto Es una albumina de fácil digestión. Por lo
que la lacto albúmina es la albumina de la leche. Si encontramos
la lactoalbúmina temperaturas superiores a 60◦C se
desnaturaliza y se aglomera en la superficie, dando una especie
de capa o como la más conocida “nata”, es rica en aminoácidos
azufrados como el triptófano que induce el sueño; este se
convierte en el cuerpo, el neurotransmisor serotonina, puede
impulsar cambios de humor y bajar los niveles de estrés.
También encontramos en la lacto albúmina gran cantidad de
cisteína que ayuda a reforzar el sistema inmunitario. (anonimo,
2011)
Fig. 2 formación de la Lacto albúmina. (anónimo, 2011)
En el reactivo de Biuret, una molécula formada a partir de dos
de urea (H2N-CO-NH-CO-NH2), que es la más sencilla que da
positiva esta reacción la presencia de proteínas, este reactivo
contiene CuSO4 en solución acuosa alcalina (de NaOH o
KOH). La reacción se basa en la formación de un compuesto de
color violeta o azul, debido a la formación de un complejo de
coordinación entre los iones Cu2+ y los pares de electrones no
compartidos del nitrógeno que forma parte de los enlaces
peptídicos presentando un máximo de absorción a 540 nm.
(Llerena, 2014)
IV. ASPECTOS EXPERIMENTALES
En esta práctica de laboratorio, se utilizaron los siguientes
materiales; 10 tubos de ensayo, 2 vasos precipitados de 250ml,
el mortero, el espectrómetro, pipetas de 10ml y 5ml, embudo,
tubos del espectrofotómetro, papel filtro, indicadores de ph, y
gasa, los reactivos que fueron necesarios son, leche fresca, HCI
10%, NaOH, al 10% y 0.001m, albumina, reactivo de Biuret y
la caseína. (fuente propia)
Para iniciar el procedimiento se coloca en un vaso precipitado
50ml leche y 70ml agua destilada, después de a gotas agregar
HCI al 10%, en generar un precipitado, y controlar su pH, se
decanta y se comienza a filtrar en gasa, luego con el filtrado
adicionar 5ml de NaOH 10% en completar el Ph, a 7, en formar
Lactoalbúmina, y en el precipitado revolver NaOH0.001M,
formando Caseína. (fuente propia)
Para la generación de la curva de calibración, se preparan 8
tubos de ensayo serán nombrados del 1al 7 y otro tubo con la
letra B, la distribución de reactivos repartiendo de la siguiente
forma:
Tab.1 orden y clasificación de las disoluciones de los 7 tubos (fuente
propia)
De estar preparados se dejan reposar por tiempo de 20 minutos,  Curvas De Calibración: para finalizar este análisis de
después por medio del espectrómetro realizar la lectura, a cada resultados se evidencia por medio de 2 graficas el
tubo de ensayo debe estar calibrado a 540nm, se obtendrá el % comportamiento que tuvo la leche al realizarse el
de transmitancia de cada tubo de ensayo, en el tubo B se debe aislamiento y cuantificación de proteínas, con los
ajustar a 0 y los tubos 6 y 7 se cuantifican las proteínas y resultados obtenidos con cada uno de los 7 tubos, a
continuación, fueron los siguientes:
finalmente para recopilar los resultados obtenidos en cuestión
de absorbancia concentración y en base de ellos mismos 11.652x
graficar 2 curvas de calibración en el sentido de la Absorbancia VS Concentracion y = 0.1331e
R² = 0.8035
concentración de albumina. (fuente propia). 1.4
1.2
V. ANÁLISIS 1 1
0.8 0.8
Para este laboratorio, se recopilaron varios resultados en cuanto a
los 7 tubos de ensayo enumerados fueron de varios aspectos a 0.6
continuación fueron los siguientes: 0.4 0.4
 Concentración: para obtener esta variante en su 0.2 0.2
0.1
totalidad, se calculará cada tubo de ensayo del 1 al 5, eso 0
sí teniendo en cuenta la concentración de albumina sérica 0 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25
de cada tubo y su peso de concentración (fue de 5 mg /
ml) con la siguiente fórmula: Graf.1 Absorbancia VS Concentración en los7 tubos (fuente propia)

Ct (tubo)AL X 5 mg / ml = C2 En la gráfica, se evidencia una constante línea de crecimiento

5ml interceptados, entre los puntos 0.2con 0,1, en este caso la línea
de tendencia genera una curva debido a su posición logarítmica
 Transmitancia: para este aspecto, los 7 tubos se en base de los resultados obtenidos, está conectada
medirán en el espectrofotómetro, debe estar especialmente con los puntos 0.4, y muy cerca al 1.
calibrado 4 540nm, cada tubo medido tendrá un
valor se dará en porcentaje y será recopilado en su En la segunda de calibración, ahora de cada tubo se debe obtener
respectivo análisis. el log de la concentración junto con él % de transmitancia, a
continuación, los resultados obtenidos:
 Absorbancia: para este aspecto, se tiene en cuenta
los valores obtenidos en el porcentaje de Formulas:
transmitancia, de cada uno de los 7 tubos de ensayo Log x (Ct) =
y serán evaluados con esta fórmula:
Tabla de cálculos:
Abs = (2 – log %T)
A continuación, estos fueron los resultados obtenidos de esta Tubo %Transmitancia Log C
practica de laboratorio, teniendo en cuenta los cálculos 1 94 -1
matemáticos anteriormente mencionados:
2 98 -0,69
Tubo Concentración(ml) %Transmitancia Absorbancia
3 81 -0,39
1 94 0,026 -0,09
0,1 4 77
2 98 0,00877 5 64 0
0,2
Tab.3 resultaos obtenidos de los cálculos en los7 tubos (fuente propia)
3 81 0,091
0,4
Grafica:
4 77 0,113
0,8
5 64 0,193
1
6 N/A 55 0,259
7 N/A N/A N/A
Tab.2 resultaos obtenidos de los cálculos en los7 tubos (fuente propia)

En la tabla podemos evidenciar en el porcentaje de

transmitancia, captado por el espectrofotómetro, desde el
tubo 2 es el mayor del 98%, le sigue el tubo 1con el 94%, de
ahí el resto de los tubos se disminuye hasta llegar al tubo 6
que tuvo el menor porcentaje del 55%, el tubo 7 no se pudo
leer debido que tenia una concentración demasiado alta.
 Transmitancia VS Log (C) y = -0.0274x + 1.8349
R² = 0.8074
0.2
0 0
-0.09
-0.2 0 20 40 60 80 100 120
-0.4 -0.39
-0.6
-0.69
-0.8
-1 -1
-1.2

Graf.2 Transmitancia VS Log(C) de los 5 tubos (fuente propia)

En esta grafica se evidencia el decrecimiento que se evidencia

desde el punto 0, hasta llegar al -1, debido a lo registrado con los
logaritmos de cada una de las 5 concentraciones, en la línea de
tendencia, se ve muy cercana con la gráfica y en especial entre
los puntos 0, -0.09, el-0,39 y entre los puntos -0,69 y 1.
VI. CONCLUSIONES
En esta práctica si cumplió con expectativas y resultados
esperados en la cuestión del aislamiento de proteínas de la leche
fresca, evidenciando resultados normales en el aspecto de un
análisis general además se tomaron las medidas
correspondientes en la medición con cada tubo de ensayo, los
cálculos dieron con los valores correspondientes esperados.

VII. REFERENCIAS
1. anonimo. (24 de Mayo de 2011). Bioquímica
Agroindustrial. Obtenido de Lactoalbumina:
http://bioagroin.blogspot.com/2011/05/lactoalbumina
.html
2. FEDNA. (5 de febrero de 2014). Fundación Española
para el Desarrollo de la Nutrición Animal. Obtenido
de Caseina:
http://www.fundacionfedna.org/ingredientes_para_pi
ensos/caseina
3. Llerena, M. (18 de septiembre de 2014).
BIOQUÍMICA. Obtenido de REACCIÓN DE
BIURET: http://bioquimicamarzo-
julio.blogspot.com/2014/07/reaccion-de-biuret.html
4. Pillou, J.-F. (2 de Marzo de 2015).
https://salud.ccm.net/. Obtenido de Albúmina sérica -
Definición: https://salud.ccm.net/faq/22680-
albumina-serica-definicion
5. Ruiz, D. A. (18 de Marzo de 2015).
https://www.lechepuleva.es. Obtenido de El valor
nutritivo de la leche: mucho más que calcio:
https://www.lechepuleva.es/leche/valor-nutritivo-
leche