ENZIMAS.

Son catalizadores celulares que favorecen las reacciones metabólicas dentro de las células. Las
características de la reacción química no varían en presencia o ausencia de enzimas.
Las enzimas disminuyen la energía de activación (energía necesaria para que A se transforme
en B). El estado final e inicial no varían.

Muchas reacciones químicas pueden ser reversibles. Cuando las reacciones químicas se unen
unas a otras forman rutas metabólicas.

Los enzimas son moléculas de naturaleza proteica, son más grandes que los sustratos por lo
que solo una parte del enzima entra en contacto con el sustrato. Son los aa que se encuentran
en el centro activo de la enzima. Los demás aa tienen otra función. El sitio donde actúa la
proteína viene determinado por estos aa así como la solubilidad, la defensa contra proteasas,
orientan al sustrato en una determinada posición...
El centroo activo normalmente es hidrofóbico a excepción de las enzimas hidrolasas en las que
es hidrofílico.

La unión entre enzima y sustrato se explica mediante el ajuste inducido. La enzima es en cierto
modo flexible y se puede ajustar al sustrato.

Las proteínas de las enzimas tienen unidas a ellas un cofactor, que puede ser un metal
(COSUSTRATO) u orgánico (COENZIMA. Unido covalente FAD, no covalente NAD).

A veces la proteína enzimática necesita la presencia de un coenzima para llevar a cabo la

acción enzimática. Muchos coenzimas son sintetizados por los organismos pero otros no y se
ingieren con los alimentos (vitaminas).
¿CÓMO OBTENER LA Km EN EL LABORATORIO?

Para una cantidad de enzima se ponen varias concentraciones de sustrato. En una batería de
tubos de ensayo ponemos la misma cantidad de enzima y añadimos después las distintas
concentraciones del sustrato en cada uno de ellos. Después llevamos a cabo la reacción, el
sustrato se transforma en producto y lo medimos. Para determinar Km por el método directo
es necesario que se haya alcanzado la velocidad máxima de la reacción. Es un parámetro que
no siempre se alcanza pues es necesario que haya una determinada [S] y todos los centros se
encuentren activos.
¿Cómo obtener Km si no alcanzamos Vmax? Con el método de Lineweaver-Burk

INHIBIDORES: Dentro de los que se unen por enlaces no covalentes existen dos tipos que son
los más importantes: Inhibición no competitiva (1) e inhibición competitiva (2).

1. Inhibición no competitiva.

Un inhibidor de naturaleza no competitiva: el inhibidor se une en un sitio distinto del centro

activo dificultando la entrada del sustrato en el centro activo y haciendo que la velocidad con
la que se forma el producto sea inferior a la que se obtiene cuando esto no ocurre.

La Km define la afinidad de un sustrato por un centro activo por lo tanto en presencia de un

inhibidor de naturaleza competitiva la Km no se manifiesta. La velocidad máxima en presencia
de un inhibidor de naturaleza no competitiva siempre será menor que la velocidad máxima
cuando no hay presencia de inhibidor.

2. Inhibición competitiva.

El sustrato y el inhibidor compiten por el centro activo de la enzima. La Km es mayor que en

ausencia de inhibidor por tanto la enzima tiene menor afinidad por el sustrato. Cuanta más
concentración de sustrato, más dificultad tiene el inhibidor para colocarse en el centro activo.
La velocidad máxima de la reacción con mayor concentración de sustrato será igual en
presencia que en ausencia del inhibidor.

+ Inhibición acompetitiva.

El inhibidor se fija en un sitio distinto al centro activo pero a diferencia del no competitivo, solo
se une al complejo enzima sustrato.
COMATOGRAFÍA DE AFINIDAD.

Cuando Ki es baja, sabemos que en el equilibrio la enzima se encontrará sobre todo en forma
de enzima inhibidor. Suponemos que tenemos cinco proteínas A, B, C, D y E. Queremos
purificar E, conocemos un inhibidor I y un sustrato [S]. Tenemos en la columna el inhibidor de
la proteína E por lo que al añadir a la columna todas las proteínas, la E quedará unida a la
columna de cromatografía. El resto de proteínas precipitarán. Para separar el complejo EI hay
dos maneras: aumentar la [S] o añadir otro inhibidor que tenga más afinidad por la proteína E
lo que hará que se suelte del complejo y se una al nuevo inhibidor.