INSTITUTO TECNOLÓGICO SUPERIOR DE IRAPUATO

Reporte de Practica:
PRACTICA 4: Determinación de azúcares reductores

Carrera: Ing. Bioquímica

Materia: Cinética Química y Biológica

Docente: M.I María del Refugio González Ponce

Alumnos: Fortanel Vázquez Francisco Alonso

Mata Coria Emmanuel Armando
Palafox García Jesús
Rico Aguilar María Guadalupe
 Fecha: 9/abril/2019
DETERMINACIÓN DE AZÚCARES REDUCTORES
OBJETIVO
Que el alumno conozca la técnica para la determinación cuantitativa de azúcares
reductores por método espectrofotométrico y lo aplique para conocer la
concentración de cada una de ellas en una muestra.
MARCO TEÓRICO
Los azúcares reductores son aquellos azúcares que poseen su grupo
carbonilo (grupo funcional) intacto, y que a través del mismo pueden reaccionar
como reductores con otras moléculas que actuarán como oxidantes. Esta
propiedad permite determinar la concentración de una disolución de azúcar
midiendo la cantidad de agente oxidante que es reducido, como ocurre en la
determinación del contenido de glucosa en muestras de sangre u orina para
detectar la diabetes mellitus. (Nelson & Cox, 2009)
Una curva de calibración es una función de transferencia que relaciona la entrada
con la salida. El método se basa en la relación proporcional entre la concentración
y una determinada señal analítica (propiedad). (Harris, 2007)
INTRODUCCIÓN
Hoy en día la industria licorera y alimenticia utiliza varios tipos de métodos
analíticos para la determinación azúcar y alcohol en los licores y/o bebidas a
utilizar como medio de venta. Uno de los métodos más acordes y con mejor
resultados en la determinación de los azucares con carácter reductor, es el
método (DNS) Sumner y colaboradores desarrollaron este método utilizando el
ácido 3,5 dinitrosalicílico (DNS) para calcular la concentración de azúcares
reductores en distintos materiales. (Sumner J,2016)
Es necesario contar con métodos analíticos que permitan cuantificar componentes
de las células, o bien, productos propios de las actividades celulares. Entre las
determinaciones más usadas, se encuentran la cuantificación de proteínas y de
carbohidratos, dos de los componentes más abundantes en los organismos vivos.
El carbohidrato más común es la glucosa (C6H12O6), un monosacárido que se
comporta como azúcar reductor debido a que posee un grupo aldehído o puede
formar uno en solución. Este grupo funcional le permite al azúcar actuar como un
agente reductor, y es justamente esta propiedad, lo que permite cuantificar este
tipo de azúcares mediante el uso del ácido dinitrosalicílico (DNS), un compuesto
aromático que reacciona con los azúcares reductores formando el ácido 3-amino-
5-nitrosalicílico que absorbe luz a 575 nm. El procedimiento se basa en una
reacción redox que ocurre entre el DNS y los azúcares reductores presentes en la
muestra (1,2,3,4). Este método ha sufrido varias modificaciones a través de los
años para adecuarse al análisis de diferentes materiales y su principal ventaja
radica en su alta sensibilidad y productividad debido a que es un método
espectrofotométrico.
El presente informe desarrollará el procedimiento respectivo para la determinación
de azucares reductores a partir de una solución patrón de dextrosa de
concentración 1g/L, que permitirá realizar y ajustar una curva de calibración por el
método del ácido 3,5 dinitrosalicílico (DNS).
Materiales y Reactivos
1 Matraz aforado 100 ml 1 Celda de plástico
2 Matraz aforado 10 ml Guantes de látex
1 Espátula Aluminio
1 Charola 3 Vasos de precipitados 10 ml
Balanza analítica 1 Pipeta serológica 10 ml
1 Espectrofotómetro 1 Propipeta
1 Micropipeta azul 100-1000 μl 1 Vaso de precipitados 1L
Puntas azules Hielo
1 Piseta 10 Tubos de ensayo 15 ml con rosca
1 Gradilla 1 Parrilla de calentamiento

Agua destilada Dextrosa 1g/L

Reactivo DNS Hidróxido de sodio 1%
Sulfito de sodio anhidro Fenol

Procedimiento
I. Preparación de reactivos

Reactivo DNS

1. . Disolver 0.1 g de ácido 2,3-dinitrosalicílico

(DNS) en 900 ml de una solución de NaOH al
1 %. Mezclar hasta disolver.

2. Adicionar 0.01 g de sulfito de sodio anhidro

y 0.02 g de fenol. Mezclar hasta disolver.

3. Aforar a 10 ml con la misma solución de

NaOH.

4. Se tapo con aluminio la solucion para evitar

su oxxidacion
 I. Azúcares reductores

1. Preparar 100 mL de una solución patrón

de glucosa con una concentración de 1.0 g/L.

2. Con la solución anterior, preparar la

siguiente curva patrón (Tabla 1).

3. Agregar 1 mL del reactivo DNS (ver Anexo

I) a cada tubo y agitar. (Tubo con tapón
roscado)

4. Calentar en un baño de agua en ebullición

durante 5 minutos.

5. Enfriar en agua corriente o en un baño de

hielo.

6. Agregar 8 mL de agua destilada a cada

tubo y agitar.

7. Leer la densidad óptica (DO) en cada tubo

a 575 nm, con el espectrofotómetro
previamente calibrado con el blanco (tubo 1)
Cálculos
Cálculos para la preparación de soluciones usando los gramos correspondientes
de cada compuesto a utiliza.
● Dextrosa
1000ml � 1g 100ml (1g/1000ml)= 0.1g dextrosa
● DNS
10ml (10g/1000ml)= 0.1g DNS
● NaOH
10ml (900ml/1000ml)= 9ml NaOH, posteriormente aforar a 10 ml
10ml (1g/100ml)= 0.1g NaOH
● Na2SO3
10ml (1g/1000ml)= 0.01g Na2SO3
● Fenol
10ml (2g/1000ml)= 0.02g Fenol
Tabla 1
Tubo. Concentración de Dextrosa en cada Resultado.
tubo.
1 C2=(0.1g/L)(0ml)/(10ml)= 0 g/L
2 C2=(0.1g/L)(0.1ml)/(10ml)= 0.001 g/L
3 C2=(0.1g/L)(0.2ml)/(10ml)= 0.002 g/L
4 C2=(0.1g/L)(0.3ml)/(10ml)= 0.003 g/L
5 C2=(0.1g/L)(0.4ml)/(10ml)= 0.004 g/L
6 C2=(0.1g/L)(0.5ml)/(10ml)= 0.005 g/L
7 C2=(0.1g/L)(0.6ml)/(10ml)= 0.006 g/L
8 C2=(0.1g/L)(0.7ml)/(10ml)= 0.007 g/L
9 C2=(0.1g/L)(0.8ml)/(10ml)= 0.008 g/L
10 C2=(0.1g/L)(0.9ml)/(10ml)= 0.009 g/L
Tabla 1Calculo de las concentraciones de Dextrosa en las muestras
Resultados
Tabla 2: Densidad Óptica y Concentración de Dextrosa por tubo
[Glucosa]
Muestra DO g/L
1 0 0
2 0.048 0.1
3 0.059 0.2
4 0.227 0.3
5 0.22 0.4
6 0.264 0.5
7 0.36 0.6
8 0.394 0.7
9 0.454 0.8
10 0.509 0.9

(En la Tabla 2 se muestra la densidad óptica medida en abs y las concentraciones

del azúcar [Dextrosa] en g/L de las muestras numeradas del 1 al 10 donde la
muestra número 1 es el blanco)

Gráfico 1

Curva Patrón y = 1.6868x + 0.0224

R² = 0.9754
1
0.9
0.8
0.7
0.6
DO

0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0
0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6
[DEXTROSA] g/L

(Grafico1 muestra la gráfica de DO vs [dextrosa] en g/L arrojando el valor de R2)

DISCUSIÓN
Con los datos obtenidos en la Tabla 2 se realizó una curva a la cual se le agrego
una línea de tendencia que se ajusta a los datos, el R2 (Grafica 1) obtenido para la
ecuación de la recta es de 0.9754. Teniendo en cuenta que el R 2 es mayor a 0.95
los datos no tienen mucha dispersión y por lo tanto son aceptables.
Considerando además que esto se debe a errores personales en la operación del
espectrofotómetro donde en la muestra No 4(Tabla 2) el valor leído de
absorbancia fue más alto debido al derrame de solución y una posible obstrucción
de las celdas espectrofotométricas causando una posible lectura errónea de la
absorbancia medida lo cual indica que el punto se sale de la línea de tendencia
dando como resultado un R2 menor al esperado.
Por lo anterior mencionado se logró una buena relación entre los datos
experimentales y la línea de tendencia obtenida.

CONCLUSIÓN
En la presente practica se utilizó la técnica del ácido 3,5 Dinitrosalicílico (DNS)
para determinación cuantitativa de azucares (dextrosa) reductores en la cual se
determinaron las distintas absorbancias en las muestras descritas en la tabla (2),
mediante un análisis espectrofotométrico. La técnica de espectrofotometría,
determino la cantidad de luz absorbida por la muestra según la ley de Beer-
Lambert-Bougue( Skoog, 2001).
Donde los resultados obtenidos del análisis espectrofotométrico descritos en la
tabla (2) muestran una aumento de absorbancia como se esperaría teóricamente
al aumentar la concentración de las mismas muestras por lo cual se concluye que
el análisis fue realizado de forma correcta donde se puede comprar la eficiencia de
la técnica con el valor de R2 visto en el grafica (2).

REFERENCIAS
1. Nelson, D. L., & Cox, M. M. (2009). LEHNINGER PRINCIPIOS DE
BIOQUÍMICA (5ª ed.). Barcelona, España: Ediciones Omega.
2. Harris, D. C. (2007). ANÁLISIS QUÍMICO CUANTITATIVO (3ª ed.).
Barcelona, España: Reverté.
3. Sumner J. B., J. Biol. Chem. 47, 5, 1921.
4. Sumner J. B., J. Biol. Chem. 62, 287, 1924.
5. Sumner J. B., J. Biol. Chem. 65, 393, 1925.
6. Sumner J. B. y Sisler E. B., Arch. Biochem 333, 1944.
7. . Skoog, D. A., Holler, J. H., Nieman, T. A. “Principios de Análisis
Instrumental”, 5a Edición. McGraw Hill. Madrid, España. 2001.