Manual de Bioseguridad en el Laboratorio de la OMS.

INTRODUCCIÓN.

En este manual se utilizará la clasificación de riesgos de la OMS para los microorganismos

infecciosos. Del mismo modo los laboratorios se designarán por las características técnicas
de su diseño, construcción medios de contención, equipos, prácticas y procedimientos a la
hora de tratar con los distintos patógenos de los diferentes grupos de riesgo.

Los países tendrán la responsabilidad de elaborar una clasificación con base en la

patogenicidad del microorganismo, el modo de transmisión y gama de huéspedes y la
disponibilidad de medios de prevención y tratamiento; sin embargo para la asignación de un
agente a un nivel de bioseguridad se deberá realizar una evaluación del riesgo específico.

DIRECTRICES EN MATERIA DE SEGURIDAD.

Evaluación del riesgo microbiológico: La evaluación del riesgo debe ser realizada por la
persona que mejor conozca el organismo, sin embargo es el director del laboratorio quien
debe velar porque se realicen oportunamente las evaluaciones de riesgo necesarias cada
vez que sea necesario. En el proceso de evaluación del riesgo se debe tener en cuenta: la
patogenicidad del agente y dosis infectiva, el resultado potencial de la exposición, las vías
de infección, la estabilidad del agente en el ambiente, la concentración y el volumen del
agente, la presencia de un huésped apropiado, la información procedente de previas
interacciones del agente con animales, la actividad prevista en el laboratorio, los efectos de
la manipulación genética a la que haya sido sometido el agente y la disponibilidad local de
intervenciones profilácticas o terapéuticas eficaces.

Si no es posible realizar una evaluación del riesgo apropiadamente, es necesario adoptar

precauciones normalizadas y emplear protecciones de barrera, adoptar el nivel de
bioseguridad 2 y a la hora de transportar muestras se deben seguir los lineamientos de la
nación o en su defecto internacionales. además se debe recolectar los datos médicos y
epidemiológicos del paciente como también el origen geográfico de la muestra.

LABORATORIOS BÁSICOS, NIVELES DE SEGURIDAD 1 Y 2.

En términos de seguridad el símbolo y signo internacional de peligro biológico deberá

colocarse en las puertas de los locales donde se manipulen microorganismos del grupo de
riesgo 2 o superior, sólo podrá entrar en las zonas de trabajo del laboratorio el personal
autorizado, las puertas del laboratorio se mantendrán cerradas, la entrada de animales
deberá pedirse con anticipación además de ser exclusiva para aquellos que sean objeto del
trabajo de laboratorio, por último, no se autorizará ni permitirá la entrada de niños en las
zonas de trabajo del laboratorio.

En cuanto a la protección personal, se usarán la protección requerida en el laboratorio para

las distintas actividades a realizar, guantes, gafas de seguridad batas, calzado con puntera
y demás; el personal deberá lavarse las manos después de manipular materiales y animales
infecciosos, así como antes de abandonar las zonas de trabajo del laboratorio; está
prohibido usar las prendas protectoras fuera del laboratorio; en las zonas de trabajo estará
prohibido comer, beber, fumar, aplicar cosméticos o manipular lentes de contacto; estará
prohibido almacenar alimentos o bebidas para consumo humano en las zonas de trabajo del
laboratorio; para finalizar la ropa protectora de laboratorio no se guardará en los mismos
armarios o taquillas que la ropa de calle.

No se colocará ningún material en la boca ni se pasará la lengua por las etiquetas, se

deberán reducir al mínimo la formación de aerosoles y gotículas, se limitará el uso de
jeringuillas y agujas hipodérmicas, todos los derrames, accidentes y exposiciones reales o
potenciales a materiales infecciosos se comunicarán al supervisor del laboratorio, se
mantendrá un registro escrito de esos accidentes e incidentes así como de su limpieza, los
líquidos contaminados deberán descontaminarse antes de eliminarlos por el colector de
saneamiento y los documentos escritos que hayan de salir del laboratorio se protegerán de
la contaminación mientras se encuentren en éste.

El laboratorio se mantendrá ordenado y limpio, todos los materiales, muestras y cultivos

contaminados deberán ser descontaminados antes de eliminarlos o de limpiarlos para
volverlos a utilizar y las ventanas que puedan abrirse estarán equipadas con rejillas que
impidan el paso de artrópodos. El director del laboratorio se encargará de la elaboración y
ejecución de un plan y manual de gestión de la bioseguridad, el supervisor del laboratorio
velará por que se proporcione capacitación y aprehensión periódica en materia de
seguridad en el laboratorio, en el laboratorio estará disponible una copia del manual de
seguridad o de trabajo, habrá un programa de lucha contra los artrópodos y los roedores, se
ofrecerá a todo el personal en caso de necesidad un servicio apropiado de evaluación,
vigilancia y tratamiento médico, se mantendrán los debidos registros médicos.

Al momento de diseñar los laboratorios se tendrán en cuenta las condiciones aquí

presentadas de seguridad además de disponer de un espacio suficiente para lo mobiliarios
y las labores a realizar incluidas las de limpieza; las paredes, los techos, superficies de
trabajo y los suelos serán lisos, fáciles de limpiar, impermeables, resistentes a los
desinfectantes, los suelos serán antideslizantes, la iluminación será adecuada para todas
las actividades; habrá espacio suficiente para guardar los artículos de uso inmediato, la
zona de comida, la ropa de calle y los objetos personales se almacenarán fuera de las
zonas de trabajo del laboratorio, en cada sala del laboratorio habrá lavabos, las puertas irán
provistas de mirillas y estarán debidamente protegidas contra el fuego; en el nivel de
bioseguridad 2 se dispondrá de un medio de descontaminación debidamente próximo al
laboratorio, al momento de una nueva instalación, habrá que prever un sistema mecánico
de ventilación que introduzca aire del exterior sin recirculación, es esencial un suministro
fiable de gas, electricidad y agua, las instalaciones deben ser objeto del debido
mantenimiento por último hay que prever sistemas de protección física.

El director del laboratorio vigilará porque el material de uso en el laboratorio de use y

suministre apropiadamente, para seleccionarlo deberá considerar que su diseño permita
limitar o evitar los contactos entre el trabajador y el material infeccioso, que esté construido
con materiales impermeables a los líquidos, resistentes a la corrosión y acordes con las
normas de resistencia estructural además que carezca de borde peligrosos y que su manejo
junto con su conservación sean simples. El material de bioseguridad indispensable será
constituido por dispositivos de pipeteo para evitar que se pipetee con la boca, CSB, asas de
siembra de plástico desechables, Frascos y tubos con tapón de rosca, medios apropiados
para esterilizar el material contaminado y pipetas de Pasteur de plástico desechables. Para
el nivel de bioseguridad 1 las normas de bioseguridad son bajas ya que es poco probable
un contagio de una enfermedad, aún así los empleados deben ser chequeados
periódicamente y sus antecedentes médicos deben ser revisados. Para el nivel de
bioseguridad 2 el reconocimiento médico previo al empleo o a la asignación de un puesto es
indispensable y Las mujeres en edad fecunda deberán ser informadas de los riesgos que
supone para el feto la exposición profesional a ciertos microorganismos.

La capacitación del personal debe comprender siempre la enseñanza de métodos seguros

contra riesgos de inhalación, riesgos de ingestión al manipular muestras, riesgos de
inoculación cutánea al emplear jeringuillas y agujas, riesgos de mordeduras y arañazos en
la manipulación de animales riesgos por manipulación de sangre y otros materiales
patológicos potencialmente peligrosos y por último riesgos poe descontaminación y
eliminación de material infeccioso.

Los desechos serán clasificados según las siguientes categorías: desechos no

contaminados que puedan reutilizarse o eliminarse como si fueran basura en general;
objetos cortantes y punzantes contaminados; material contaminado destinado al tratamiento
en autoclave reciclable; material contaminado destinado al tratamiento en autoclave y a la
eliminación y material contaminado destinado a la incineración directa.

EL LABORATORIO DE CONTENCIÓN: NIVEL DE SEGURIDAD 3.

Este tipo de laboratorios están concebidos para trabajar tanto con microorganismos de tipo
como con grandes cantidades de microorganismos del grupo de riesgo 2 por su mayor
riesgo de difusión en aerosoles. Las diferencias con los laboratorios de nivel de seguridad 1
y 2 son: el símbolo y signo internacional de advertencia de peligro biológico expuesto en las
puertas de acceso al laboratorio debe especificar el nivel de bioseguridad y el nombre del
supervisor del laboratorio que controla el acceso a éste, así como indicar cualquier
condición especial de entrada en la zona; en el laboratorio se debe llevar ropa protectora
apropiada; toda manipulación abierta de material potencialmente infeccioso debe realizarse
dentro de una CSB u otro dispositivo de contención primaria; puede ser necesario utilizar
equipo de protección respiratoria para ciertos procedimientos; el laboratorio debe estar
separado de las zonas del edificio por las que se puede circular sin restricciones; las dobles
puertas de acceso al laboratorio deben ser de cierre automático y disponer de un
mecanismo de interbloqueo; las aberturas existentes en paredes, techos y pisos deben
estar obturadas; la sala del laboratorio debe poderse precintar; las ventanas deben estar
cerradas herméticamente y llevar cristales resistentes a la rotura; en las inmediaciones de
todas las puertas de salida del laboratorio habrá un lavabo que no necesite ser accionado
con la mano; debe haber un sistema de ventilación que establezca un flujo direccional hacia
el laboratorio; todos los filtros HEPA deberán estar instalados de modo que permitan la
descontaminación con gases además de la realización de pruebas; las CSB deben estar
alejadas de las zonas de paso y de los lugares de cruce de corrientes procedentes de
puertas y sistemas de ventilación; dentro del laboratorio de contención debe haber una
autoclave para descontaminar el material de desecho infectado; el sistema de
abastecimiento de agua debe estar dotado de dispositivos contra el reflujo; el
reconocimiento médico de todo el personal que trabaja en el laboratorio de contención es
obligatorio y debe comprender una historia clínica detallada, y por último, una vez pasado el
reconocimiento médico con un informe favorable, se entregará a la persona examinada una
tarjeta de contacto médico en la que se declare que trabaja en un centro que tiene un
laboratorio de contención.

EL LABORATORIO DE CONTENCIÓN MÁXIMA: NIVEL DE BIOSEGURIDAD 4.

Deberán ser construidos de la mano de expertos en el uso de estos y con el asesoramiento

de las entidades competentes, esta es sólo una guía ilustrativa, si se desea construir uno se
deberá poner en contacto con la oficina de bioseguridad de la OMS.

El laboratorio y las prácticas usan el mismo que el del nivel de bioseguridad 3 con las
siguientes adiciones: ninguna persona debe trabajar sola en el interior del laboratorio, al
entrar y al salir del laboratorio es imprescindible un cambio completo de ropa y calzado, el
personal debe recibir capacitación en procedimientos de evacuación de emergencia en caso
de que un miembro del personal sufra lesiones o caiga enfermo, se debe establecer un
sistema de comunicación con el personal de emergencias diferenciado entre una situación
normal y una de riesgo. Deberá existir un sistema de contención primaria que comprenda al
menos uno de estos elementos: si es un laboratorio con CSB de clase III se exige el paso a
través de un mínimo de dos puertas antes de acceder a la sala que contiene la CSB de
clase III, o en su defecto, si el laboratorio está diseñado para trabajar con trajes especiales,
debe existir una ducha de descontaminación de trajes que será utilizada por el personal
antes de abandonar la zona de contención del laboratorio; el acceso a los laboratorios
deberá realizarse a través de cámaras de cierre hermético. En cuanto al sistema de
ventilación controlada, si el laboratorio está equipado con cámara biológica de clase III, el
aire suministrado a las CSB puede proceder del interior de la sala y atravesar un filtro HEPA
montado en la cámara o directamente del sistema de entrada de aire; si el laboratorio está
diseñado para trabajar con trajes especiales, se requieren sistemas exclusivos de
suministro y evacuación del aire de la sala. Los filtros HEPA deben ser aprobados y
certificados una vez al año. La zona del laboratorio debe contar con una autoclave de doble
puerta y disponerse de otros métodos de descontaminación para aquellos elementos del
equipo que no soporten la esterilización por vapor; en adición, los accesos con entrada de
cierre hermético para muestras, materiales y animales; deben existir líneas de suministro
eléctrico exclusivas y de emergencia, para finalizar, se instalarán sumideros de contención.

ANIMALARIOS.

Los animales utilizados en estos procesos deberán ser tratados de la manera más humana
posible para reducir al mínimo su sufrimiento durante las pruebas. El lugar de alojamientos
de los mismos deberá estar apartado del laboratorio y deberá ser posible aislarlo si es
necesario. Estos animalarios podrán ser clasificados según el nivel de bioseguridad de los
microorganismos tratados. Los factores a tener en cuenta de los patógenos a utilizar son: la
vía normal de transmisión, los volúmenes y las concentraciones que van a manejarse, la vía
de inoculación y por último la vía de excreción de los agentes. Los factores a tener en
cuenta para los animales utilizados son: el carácter de los animales, sus endoparásitos y
ectoparásitos naturales, las zoonosis a las que son susceptibles además de la posible
diseminación de alérgenos.
Para los animalarios de nivel de bioseguridad 1 es el apropiado para mantener a la mayoría
de los animales después de la cuarentena, y para los animales que son inoculados
deliberadamente con agentes del grupo de riesgo 1, se necesitan técnicas microbiológicas
apropiadas. El director del animalario debe determinar las políticas, procedimientos y
protocolos para todas las operaciones, así como para el acceso al animalario.

En los animalarios de nivel de bioseguridad 2 se cumplirán todos los requisitos de los

animalarios del nivel 1, se colocarán señales de advertencia del peligro biológico, el local
estará diseñado de modo que sea fácil de limpiar y mantener, las puertas deben abrirse
hacia dentro y cerrarse solas, la calefacción, la ventilación y la iluminación deben ser
apropiadas, el acceso se limitará a las personas autorizadas, no se admitirá ningún animal
distinto de los utilizados con fines experimentales, existirá un programa de lucha contra
artrópodos y roedores, si hay ventanas serán seguras, las superficies de trabajo habrán de
ser descontaminadas con desinfectantes eficaces, se dispondrá de CSB (clases I o II) o
jaulas aislantes con suministro especial de aire y evacuación de aire a través de filtros
HEPA para aquellas tareas que puedan entrañar la generación de aerosoles, todos los
materiales de desecho y de los lechos deben descontaminarse antes de ser eliminados, se
restringirá en lo posible el uso de instrumentos punzantes o cortantes, el material destinado
al tratamiento con autoclave o a la incineración debe transportarse sin riesgo en recipientes
cerrados, los cadáveres de los animales serán incinerados, en el local se utilizará ropa y
equipo de protección que se retirará a la salida, se instalarán lavabos y el personal se lavará
las manos antes de salir del animalario, todas las lesiones deberán ser tratadas de forma
apropiada, notificadas y registradas, estará prohibido comer, beber, fumar y aplicar
cosméticos dentro del animalario y para finalizar todo el personal deberá recibir capacitación
apropiada.

Con respecto a los animalarios de nivel de bioseguridad 3 se deberán seguir todo lo anterior
con la adición de: el acceso debe estar estrictamente controlado, el animalario estará
separado de otros locales del laboratorio y destinados a animales por dos puertas que
formen un vestíbulo o antesala, en el vestíbulo se instalarán lavabos y duchas, habrá que
disponer de ventilación mecánica que asegure un flujo continuo de aire en todos los locales,
se dispondrá de una autoclave situada en un lugar cómodo respecto del alojamiento de los
animales y donde el riesgo biológico esté contenido, se dispondrá de un incinerador de fácil
acceso en la instalación, los animales infectados con microorganismos del grupo de riesgo 3
estarán alojados en jaulas aisladas o en locales con salidas de ventilación situadas detrás
de las jaulas, toda la ropa protectora deberá ser descontaminada antes de enviarla a la
lavandería, se ofrecerá al personal la posibilidad de inmunizarse.

En los animalarios de nivel de seguridad 4 se cumplirá con todo lo propuesto para el nivel
de seguridad 3 junto con lo siguiente: ninguna persona deberá trabajar sola, el personal
habrá recibido el máximo nivel posible de formación en microbiología además estará
familiarizado con los riesgos que entraña su trabajo y las precauciones necesarias, en las
zonas de alojamiento se cumplirá con los manuales de contención de los laboratorios de
nivel 4, se ingresará a la instalación por un vestíbulo de cierre hermético, el personal deberá
quitarse la ropa de calle al entrar y ponerse ropa protectora especial,a instalación estará
ventilada por un sistema de evacuación de aire con filtros HEPA que asegure una presión
negativa, para el intercambio de materiales se dispondrá de una autoclave de doble puerta
con el extremo limpio situado en una sala exterior a las salas de contención, para el
intercambio de materiales que no puedan ser tratados en la autoclave se dispondrá de una
caja de paso con cierre hermético cuyo extremo limpio estará situado fuera de salas de
contención todas las manipulaciones de animales infectados con agentes del grupo de
riesgo se realizarán en condiciones de contención máxima, todos los animales estarán
alojados en aisladores y se someterá al personal a vigilancia médica.

Los invertebrados tendrán instalaciones determinadas por el grupo de riesgo, sin embargo
con los voladores en especial es necesario tener otras precauciones como: se dispondrá de
locales distintos para los invertebrados infectados y no infectados, estos locales podrán
sellarse para ser fumigados, se dispondrá de instalaciones de enfriamiento para reducir la
actividad de los invertebrados, todos los conductos de salida de la ventilación y las ventanas
que puedan abrirse estarán equipados con mosquiteras, se controlará el número de larvas y
formas adultas de artrópodos voladores, reptadores y saltadores, los recipientes para
garrapatas y ácaros se depositarán en cubetas con aceite los insectos voladores infectados
o potencialmente infectados se albergarán en jaulas de doble malla los artrópodos
infectados o potencialmente infectados se manipularán en CSB o cámaras aislantes y por
último los artrópodos infectados o potencialmente infectados podrán manipularse en
bandejas de enfriamiento.

DIRECTRICES PARA LA CERTIFICACIÓN DE LABORATORIOS E INSTALACIONES.

La certificación de los laboratorios permite garantizar Se estén utilizando controles técnicos

apropiados que funcionan debidamente y con arreglo al diseño, que existan los debidos
controles administrativos respecto del lugar y de los protocolos, que el equipo de protección
personal sea el indicado para las tareas, que se realizan que la descontaminación de
desechos y materiales se haya estudiado y existan los debidos procedimientos de gestión
de desechos además que se observen las normas generales de seguridad en el laboratorio,
entre ellas las relativas a la seguridad física, eléctrica y química. La certificación da fe de
que las instalaciones tienen ciertas capacidades deseadas para cada nivel de riesgo, sin
embargo las actividades realizadas en el laboratorio son evaluados por una auditoría en la
cual se llena un formato específico para cada nivel de riesgo.

CONCEPTOS DE BIOPROTECCIÓN EN EL LABORATORIO.

Seguridad biológica es el término utilizado para referirse a los principios, técnicas y

prácticas aplicadas con el fin de evitar la exposición no intencional a patógenos y toxinas, o
su liberación accidental. Protección biológica se refiere a las medidas de protección de la
institución y del personal destinadas a reducir el riesgo de pérdida, robo, uso incorrecto,
desviaciones o liberación intencional de patógenos o toxinas.

CÁMARAS DE SEGURIDAD BIOLÓGICA (CSB).

Están diseñadas para proteger al trabajador, la atmósfera del laboratorio y los materiales de
trabajo de la exposición a las salpicaduras y los aerosoles infecciosos que pueden
generarse al manipular material que contiene agentes infecciosos, como cultivos primarios,
soluciones madre y muestras de diagnóstico. Cuando se utilizan debidamente, han
demostrado ser sumamente eficaces para reducir las infecciones adquiridas en el
laboratorio y la contaminación cruzada de cultivos por exposición a aerosoles. Existen tres
variaciones de cámaras CSB, primera es la que no tiene modificaciones, la segunda es
aquella con un filtro HEPA que retienen el 99,97% de las partículas de 0,3 mm de diámetro
y el 99,99% de las partículas de tamaño mayor o menor, por último una modificación que
consiste en dirigir hacia la superficie de trabajo aire que haya pasado por filtros HEPA, con
el fin de proteger de la contaminación los materiales de esa superficie, conocido como
protección del producto.

También existen clases de CSB pensadas para brindar distintos niveles de protección, la
clase 1 consiste en un sistema donde el aire procedente de la cámara se evacua a través
de un filtro HEPA al laboratorio y a continuación al exterior del edificio a través del sistema
de evacuación de aire del edificio al exterior a través del sistema de evacuación de aire del
edificio, o directamente al exterior. En cuanto a las CSB de clase 2 existen 4 tipos y difieren
de la clase 1 en que sólo permiten que entre en contacto con la superficie de trabajo aire
que ha pasado por un filtro HEPA. Los cuatro tipos de CSB clase 2 difieren en la velocidad
en la abertura frontal, el flujo de aire recirculado y evacuado además del sistema de
evacuación, lo cual genera una gama de posibilidades a escoger para las distintas
necesidades. Las CSB de clase 3 es el que proporciona mayor nivel de protección personal
y se utiliza para trabajar con agentes del grupo de Riesgo 4, por lo que es idónea para
niveles de bioseguridad 3 y 4.

Algunas recomendaciones sobre las CSB son: situar la CSB en un lugar alejado de la
circulación del personal y de corrientes de aire que puedan provocar perturbaciones; los
trabajadores deben tener cuidado de mantener la integridad del flujo de entrada de aire por
la abertura frontal al meter y sacar los brazos de la cámara; la superficie de los materiales
que haya que colocar en el interior de la cámara debe descontaminarse con alcohol al 70%;
todos los materiales deben colocarse lo más dentro posible de la cámara, hacia el borde
posterior de la superficie de trabajo, pero sin bloquear la rejilla posterior; los artículos
voluminosos, las bandejas de pipetas desechadas y los frascos de succión deben colocarse
a un lado del interior de la cámara; las bolsas de recogida de material biológico peligroso
para la autoclave y la bandeja de recogida de pipetas no deben colocarse fuera de la
cámara; la mayoría de las CSB están diseñadas para funcionar 24 horas al día; las CSB no
necesitan lámparas de luz ultravioleta si se utilizan deben ser limpiadas una vez a la
semana; deben evitarse las llamas desnudas en el entorno prácticamente libre de microorga
nismos creado dentro de la cámara; las CSB deben descontaminarse antes de los cambios
de filtro y antes de cambiarlas de sitio.

EQUIPO DE SEGURIDAD.

Todas las CSB protegen contra salpicaduras y aerosoles, sin embargo se diferencian en
que las de clase 1 no protegen el producto mientras las de clase 2 si lo hacen y las de clase
3 además proveen una protección máxima. Las Cámaras aislantes de material flexible y
presión negativa de igual manera ofrecen protección contra aerosoles y salpicaduras
ofreciendo una contención máxima. Los dispositivos de pipeteo protegen al personal de los
riesgos por realizar la actividad con la boca; los microincineradores de asas protegen contra
las salpicaduras de asas; las autoclaves protegen contra el material infeccioso y por último
la protección del circuito de vacío evita la contaminación del sistema de vacío por aerosoles
o rebosamientos. En muchas ocasiones las ropas hacen las veces de barrera contra los
patógenos por lo que es necesario utilizar los elementos pertinentes en cada situación como
guantes, botas, batas, respiradores entre otros.

TÉCNICAS DE LABORATORIO.

Para una manipulación segura de las muestras los recipientes deben ser en vidrio o
plástico, resistentes, que no permitan fugas y su exterior debe permanecer limpio, en el
transporte se deben usar segundos embalajes que permitan una posición vertical de los
primeros recipientes siempre vertical, el lugar donde se reciban las muestras debe estar
preparado para adoptar precauciones normalizadas.

En cuanto al uso de pipetas se deberán seguir las siguientes indicaciones: todas las pipetas
tendrán tapones de algodón, nunca se insuflará aire en un líquido que contenga agentes
infecciosos, no debe mezclarse el material infeccioso aspirando y soplando alternativamente
a través de una pipeta, no se expulsaran a la fuerza los líquidos de una pipeta, son
preferibles las pipetas aforadas con una muesca superior y otra inferior, las pipetas
contaminadas deben sumergirse completamente en un desinfectante adecuado contenido
en un recipiente irrompible y permanecer en él durante un tiempo suficiente antes de
tirarlas, debe colocarse un recipiente para las pipetas usadas dentro de la csb, no deben
utilizarse para pipetear jeringuillas provistas de aguja hipodérmica además, se recubrirá la
superficie de trabajo con material absorbente, que se desechará como residuo infeccioso
una vez utilizado.

Para evitar la dispersión de material infeccioso las asas microbiológicas deben tener un
diámetro de 2–3 mm y terminar en un anillo completamente cerrado, además los mangos no
deben tener más de 6 cm de longitud para reducir la vibración al mínimo, al flamear las asas
en el mechero de bunsen, se utilizará un microincinerador eléctrico cerrado para esterilizar
las asas, al secar muestras de esputo debe procederse con cuidado para evitar la creación
de aerosoles por último las muestras y los cultivos desechados destinados a la autoclave o
a la eliminación se colocarán en recipientes impermeables.

Durante el uso de las CSB habrá que explicar a todos los posibles usuarios el modo de
empleo y las limitaciones de estas cámaras, la cámara no debe utilizarse si no funciona
correctamente, la ventana de vidrio transparente no debe abrirse mientras se está utilizando
la cámara, los aparatos y materiales introducidos en la cámara deben reducirse al mínimo,
no deben utilizarse mecheros de bunsen en el interior de la cámara, todo el trabajo debe
hacerse en la zona media o posterior de la superficie de trabajo y ser visible a través de la
ventana, el paso de personas por detrás del trabajador debe reducirse al mínimo, el
trabajador no debe alterar el flujo de aire al sacar y volver a introducir repetidas veces los
brazos, las rejillas de aire no deben estar bloqueadas, el ventilador de la cámara se
encenderá al menos 5 minutos antes de empezar el trabajo y debe seguir funcionando al
menos durante 5 minutos después de concluido el trabajo y para finalizar nunca se
introducirán papeles en las CSB.

Con el fin de evitar la ingesta de material infeccioso o su contacto con los ojos los
trabajadores del laboratorio evitarán tocarse la boca, los ojos y el rostro, en el laboratorio no
se deben conservar ni consumir alimentos o bebidas, en el laboratorio no se colocarán
objetos en la boca, no se aplicarán cosméticos, en adición la cara, los ojos y la boca deben
estar protegidos. Para combatir el contagio por material infeccioso se recomienda reducir al
mínimo el uso de jeringuillas y agujas hipodérmicas, así como sustituir los utensilios de
vidrio por sus versiones en plástico y cubrir las agujas usadas al momento de desecharlas.
El suero sólo debe ser separado por personal capacitado que usará la protección adecuada
y una buena técnica, además de mantener una limpieza adecuada. A la hora de utilizar
centrifugadoras es necesario que estas cumplan con un requisito de seguridad
microbiológica y sean usadas según las indicaciones del fabricante, los tubos a usar deben
ser de vidrio con tapon y disponerse en un lugar visible para los trabajadores, los cestillos
deben ser manipulados en una CSB y ser balanceados correctamente para lo que se
utilizará agua destilada o alcohol, por último todo debe ser desinfectado apropiadamente
después de cada uso. En la manipulación de ampollas con material infeccioso se deberá
descontaminar la superficie exterior, hacer una marca con la lima en el tubo, sujetarse en un
algodón con alcohol, tratar la parte superior como material contaminado, nunca deben ser
sumergidas en nitrógeno líquido y reconstituir la suspensión añadiendo el líquido lentamente
para evitar la formación de espuma.

Con respecto a los fluidos, tejidos y excreciones se deberá siempre seguir las precauciones
normalizadas, así como usa guantes en todo momento, en las flebotomías, los sistemas
convencionales de aguja y jeringuilla se sustituirán por dispositivos de seguridad al vacío de
un solo uso que permitan recoger la sangre directamente en tubos de transporte o de cultivo
con tapón y que inutilicen la aguja después del uso por último el personal de recepción no
deberá abrir estas bolsas. Al abrirlas las muestras deben estar en una CSB y se debe
utilizar la protección debida, siempre que se pueda se sustituirá el vidrio por plástico y
nunca se usarán agujas hipodérmicas para pipetear.

Al trabajar con materiales que puedan contener priones se recomienda tener utensilios
exclusivos así como utilizar material reciclable y la indumentaria adecuada, además, no se
deben implementar procesadores de tejidos y toda manipulación se deberá realiza en una
CSB. Los tejidos fijados con formol se seguirán considerando infecciosos, en adición los
residuos de líquidos infecciosos contaminados con priones deben tratarse durante 1 h con
hipoclorito sódico con 20 g de cloro libre por litro. Para la limpieza se usará hipoclorito
sódico.

PLANES DE CONTINGENCIA Y PROCEDIMIENTOS DE EMERGENCIA.

Todo plan de contingencia deberá tener procedimientos para: catástrofes naturales,

evaluación del riesgo biológico, exposición accidental y descontaminación, evacuación de
emergencia, tratamiento médico de emergencia, vigilancia médica de las personas
expuestas, manejo clínico de las personas expuestas, investigación epidemiológica y la
continuación del funcionamiento tras el incidente. Es obligatoria la inclusión de métodos
para la identificación de microorganismos de alto riesgo, localización de zonas de alto
riesgo, identificación del personal y de las poblaciones en riesgo, tener una lista de los
servicios de tratamiento y aislamiento que pueden atender a las personas expuestas o
infectadas, transporte de las personas expuestas o infectadas, lista de fuentes de
suministros especiales además de la provisión de material de emergencia.

En caso de cortes o abrasiones la persona afectada deberá quitarse la ropa protectora,

lavarse las manos y la parte lesionada, aplicarse un desinfectante cutáneo apropiado y
buscar la atención médica que sea precisa. Se notificará la causa de la herida y los
microorganismos implicados; se mantendrán registros médicos apropiados y completos. Si
se presenta una ingestión se buscará atención médica y se notificará la identidad del
material ingerido. Si se generan aerosoles todas las personas deberán evacuar
inmediatamente la zona afectada, las personas expuestas serán enviadas de inmediato
para recibir atención médica y se informará inmediatamente al director del laboratorio y al
funcionario de bioseguridad, subsiguiente se colocarán señales de prohibición de la entrada.
Si se presenta la rotura de algún elemento con material infeccioso se cubrirá con paños o
papel absorbente para verter un desinfectante, si existen cristales rotos se recogerán con
pinzas y se limpiarán las superficies con desinfectantes para luego desechar los
remanentes en los contenedores apropiados. Si la rotura sucede en una CSB se esperará a
que se pose el material.

DESINFECCIÓN Y ESTERILIZACIÓN.

Los germicidas químicos más comunes son: hipoclorito de sodio, mayormente encontrado
como lejía es muy alcalino, se reduce su efectividad en presencia de proteínas, si se deja
destapado pierde su efectividad, su concentración dependerá de su uso, no se recomienda
como antiséptico y si se encuentra en estado gaseoso es sumamente tóxico;
dicloroisocianurato sódico puede ser almacenado de forma segura en polvo y comprimidos,
puede aplicarse sobre aquello que represente un riesgo biológico; las cloraminas requiere
concentraciones más alta que los hipocloritos y no son inactivadas por la materia orgánica
como los hipocloritos, es inodoro pero debe sumergirse completamente la muestra para que
sea efectivo; el dióxido de cloro es un germicida, desinfectante y oxidante de rápida acción
que tiene actividad a menores concentraciones que la lejía, además es soluble al agua y
estable en solución acuosa, en adición solo reacciona con los compuestos de azufre
reducido las aminas secundarias y terciarias y otros compuestos orgánicos muy reducidos y
reactivos; el formaldehído es un gas que mata todos los microorganismos y esporas a
temperaturas superiores a los 20°C pero no tiene actividad contra los priones; el
glutaraldehído tiene actividad contra formas vegetativas de bacterias, no es corrosivo y su
acción es más rápida que la del formaldehído aunque tarda varias horas en matar las
esporas bacterianas; los compuestos fenólicos tienen actividad contra las formas
vegetativas de las bacterias y contra los virus con envoltura lipídica, cuando están
debidamente formulados también son activos contra las micobacterias pero no tienen
actividad contra las esporas y su actividad contra los virus sin envoltura lipídica es variable;
compuesto de amonio cuaternario, tienen buena actividad contra algunas bacterias en fase
vegetativa y virus con envoltura lipídica, aunque su actividad se reduce con la materia
orgánica; los alcoholes son activos contra las formas vegetativas de las bacterias, los
hongos y los virus con envoltura lipídica, pero no contra las esporas, su acción sobre los
virus sin envoltura lipídica es variable; el yodo y los yodóforos tienen una acción similar a la
del cloro aunque es menos susceptible a la inhibición por materia orgánica y para terminar
el peróxido de hidrógeno y los perácidos son poderosos germicidas de amplio espectro
siendo también más inocuos que el cloro para el ser humano, aunque puede ser corrosivo.
El calor puede utilizarse como agente para la descontaminación, ya sea el calor seco o
húmedo.

En el uso de las autoclaves es necesario seguir el siguiente ciclo para la mayoría de

propósitos, 3 minutos a 134 °C, 10 minutos a 126 °C, 15 minutos a 121 °C y 25 minutos a
115 °C. El material y los objetos que se vayan a esterilizar deben agruparse sin apretarlos
en la cámara, para reducir al mínimo los riesgos en el uso de las autoclaves siempre debe
ser utilizado por personal adiestrado, se realizarán inspecciones de mantenimiento
periódicas, el vapor de agua estará saturado y exento de sustancias químicas, todo el
material debe colocarse en recipientes que permitan una fácil evacuación del aire y una
buena penetración del calor, si no posee un sistema de seguridad sólo se abrirá cuando
esté por debajo de los 80 °C, la evacuación de líquidos debe ser lenta y por último no debe
haber nada bloqueando ninguna parte de la autoclave. La incineración sólo sustituye a la
autoclave cuando esta está en mantenimiento y debe poderse controlar la temperatura,
además todo material a ser incinerado debe ser trasladado en bolsas.

INTRODUCCIÓN AL TRANSPORTE DE SUSTANCIAS INFECCIOSAS.

El fin de este apartado es reducir el escape de material infeccioso por embalajes dañados y
con esto el número de exposiciones a estos, además de aumentar la eficiencia de los
envíos. Para el transporte de estos materiales existen una reglamentación modelo para el
transporte de mercancías peligrosas, en la que interviene la OACI y la IATA en relación al
transporte aéreo y la OMS hace las veces de asesora; el sistema de embalaje a seguir es el
triple. En caso de derrame los pasos a seguir serán los mismos que han sido descritos
anteriormente.

BIOSEGURIDAD Y TECNOLOGÍA DEL ADN RECOMBINANTE.

La tecnología de ADN recombinante une información genética de distintas fuentes para

crear nuevos organismos genéticamente modificados (OGM), dada la novedad del campo y
los posibles riesgos en 1975 se celebró una conferencia para discutir estos temas, aunque
la historia ha demostrado que los riesgos pueden ser controlados con las medidas
pertinentes.

Es necesario trabajar con niveles de bioseguridad mayor al 1 con los vectores de expresión
si la expresión de secuencias de ADN derivadas de organismos patógenos pueda aumentar
la virulencia del OGM, si las secuencias de ADN insertadas no están bien caracterizadas, o
si los productos génicos puedan tener actividad farmacológica o sean tóxicos. Los vectores
que sean objeto de transferencia a través de vectores víricos como los de adenovirus serán
tratados con el mismo nivel de bioseguridad que estos.

Al momento de evaluar los riesgos que representan los OGM se deben tener en cuenta las
características del agente donante y del receptor. En cuanto al donante se deben vigilar las
característica tales como toxinas, citoquinas, hormonas, reguladores de la expresión génica,
factores de virulencia o potenciadores de la virulencia, secuencias oncogénicas, resistencia
a antibióticos y para finalizar los alérgenos. Los riesgos asociados al receptor son
susceptibilidad del huésped, patogenicidad de la cepa huésped, modificación de la gama de
huéspedes, estado inmunitario del receptor y las consecuencias de la exposición. Al
analizar los riesgos emergentes por la creación de OGM se debe identificar si hubo un
aumento de la infectividad o patogenicidad, si es posible superar las mutaciones incipientes,
si el ADN donador incluye un alguna patogenicidad, si existe un tratamiento y por último si
podría erradicarse el OGM.
SUSTANCIAS QUÍMICAS PELIGROSAS.

Las vías por las que el personal se ve expuesto son: la inhalación, el contacto, la ingestión,
las jeringuillas y las heridas en la piel. Las cantidades de sustancias químicas en el
laboratorio deben estar destinadas para el día y nunca deberán ser almacenadas en orden
alfabético. Las sustancias químicas deben ser almacenadas de tal forma que no entren en
contacto con aquellas otras con las que puedan producir accidentes como incendios o
explosiones.

Se deberá disponer de estuches especiales de material para derrames químicos, ropa

protectora, escobas y palas para el polvo, pinzas, bayetas, trapos y toallas de papel, cubos,
carbonato sódico o bicarbonato sódico para neutralizar, ácidos y sustancias químicas
corrosivas, arena así como detergente no inflamable. En caso de un accidente químico se
tendrá que notificar el incidente al funcionario de seguridad que corresponda, evacuar del
local al personal no indispensable, atender a las personas que puedan haberse
contaminado, extinguir todas las llamas desnudas, cortar el gas del local afectado y de los
locales adyacentes, abrir las ventanas y cortar la electricidad de los aparatos que puedan
producir chispas, evitar la respiración de vapores del material derramado, establecer una
ventilación de salida si es posible hacerlo con seguridad además de obtener el material
necesario para limpiar el material derramado.

OTROS PELIGROS EN EL LABORATORIO.

Un laboratorio es especialmente vulnerable a los incendios por los químicos allí utilizados y
deben ser tomadas todas las medidas de precaución para evitarlos, en esencia por los
agentes con los que aquí se trabaja, los planes contra los incendios deben ser delineados
de la mano de las autoridades competentes para saber cuándo es mejor apagar un incendio
o cuando dejarlo consumirse. Los circuitos eléctricos del laboratorio deben contar con
interruptores de circuito y por fallo, así como todo aparato debe tener toma a tierra y
adaptarse a las normas de seguridad de la nación. El ruido puede afectar con el tiempo al
personal, por lo tal se deberá reducir en cuanto sea posible. Las radiaciones ionizantes
tienen efectos somáticos y hereditarios, por lo que se deberá reducir al mínimo la exposición
a estos, aumentar al máximo la distancia a la fuente de radiación, proteger la fuente y
sustituir el uso de radionúclidos por técnicas no radiométricas. Se suministrará al personal
una dosis contra la radiación que se medirá multiplicando el tiempo y la intensidad de la
exposición, mientras que la intensidad de la dosis se obtendrá multiplicando la constante y
la distancia.

En la zona de radiación sólo se deben utilizar sustancias radiactivas en zonas

exclusivamente destinadas a ello, el personal admitido sólo será el indispensable, el equipo
de protección personal es obligatorio y se vigilarán las exposiciones de cada trabajador. En
las zonas de mesas de trabajo se deberá utilizar bandejas para derrames cubiertas con
material absorbente desechable, limitar las cantidades de radionúclidos, blindar las fuentes
de radiación, marcar los recipientes de materiales radiactivos con el símbolo apropiado,
utilizar medidores de la radiación para vigilar las zonas de trabajo y por último utilizar para el
transporte recipientes debidamente blindados. La zona de desechos será limpiada
frecuentemente,
EL FUNCIONARIO DE BIOSEGURIDAD Y EL COMITÉ DE BIOSEGURIDAD.

El funcionario de bioseguridad vigilará que se cumplan los planes y programas de

bioseguridad, funciones que desempeñará en nombre del director del laboratorio, la persona
que se designe con este cargo deberá tener formación bioquímica y microbiología como
también de ciencias físicas y biológicas básicas además de conocimiento de los principios
de construcción técnica del laboratorio. Sus actividades serán: atender consultas sobre
protección biológica, bioseguridad y cumplimiento de las condiciones técnicas, realizar
auditorías internas periódicas en materia de bioseguridad, examinar las infracciones de los
protocolos o los procedimientos de bioseguridad, verificar que todo el personal ha recibido
la capacitación apropiada en materia de bioseguridad, impartir formación continua en
materia de bioseguridad, investigar incidentes que entrañen la posible fuga de material
potencialmente infeccioso o tóxico y comunicar los resultados al director del laboratorio y al
comité de bioseguridad, coordinar con el personal médico la atención a posibles infecciones
adquiridas en el laboratorio, asegurar una descontaminación apropiada tras los derrames u
otros incidentes con materiales infecciosos, garantizar la correcta manipulación y
eliminación de los desechos, velar por una descontaminación apropiada, conocer las
actitudes de la comunidad en relación con consideraciones sanitarias y ambientales,
establecer procedimientos apropiados para la importación y exportación de material
patógeno por el laboratorio, de acuerdo con la reglamentación nacional y para finalizar
revisar los aspectos de bioseguridad de todos los planes, protocolos y procedimientos de
operación para el trabajo de investigación con agentes infecciosos antes de la puesta en
práctica de esas actividades. El comité de bioseguridad incluirá funcionarios de
bioseguridad, personal médico y científico, veterinarios, representantes del personal técnico
y de la dirección del laboratorio.

REGLAS DE SEGURIDAD PARA EL PERSONAL DE APOYO.

El personal de mantenimiento en todo caso, bien sea que trabaje para el laboratorio o no,
debe estar familiarizado con el trabajo allí realizado, así como de las normas y
procedimientos de seguridad. Tanto el personal de mantenimiento como el de limpieza sólo
pueden entrar a los laboratorios de nivel de bioseguridad 3 y 4 con la aprobación y
supervisión del funcionario de bioseguridad o supervisor del laboratorio.

PROGRAMAS DE CAPACITACIÓN.

Un programa eficaz de capacitación tanto de bioseguridad como cualquier otro constará de

evaluación de necesidades, establecimiento de los objetivos de la capacitación,
especificación del contenido y los medios para la capacitación, consideración de las
diferencias individuales de aprendizaje, condiciones particulares del aprendizaje, evaluación
de la capacitación y una revisión de la capacitación.

LISTA DE COMPROBACIÓN DE LA SEGURIDAD.

Con el objetivo de facilitar las evaluaciones de seguridad microbiológica y del laboratorio se

dispone una serie de preguntas en lo concerniente a locales de laboratorio, locales de
almacenamiento, instalaciones de saneamiento y dedicadas al personal, calefacción y
ventilación, alumbrado, servicios, bioprotección del laboratorio, prevención de incendios,
almacenamiento de líquidos inflamables, gases comprimidos y licuados, peligros eléctricos,
protección personal, salud y seguridad del personal, material del laboratorio, material
infeccioso y por último sustancias químicas y radioactivas; entre las cuales se encuentran
algunas como: ¿Cumplen las instalaciones los requisitos nacionales y locales en materia de
construcción, incluidos si es necesario los relativos a precauciones en caso de desastres
naturales?, ¿Pueden cerrarse con llave los frigoríficos y las zonas de almacenamiento?,
¿Se dispone de agua potable?, ¿Hay una temperatura de trabajo agradable?, ¿Se cierra de
forma segura todo el edificio cuando no está ocupado?, ¿Funcionan debidamente las
puertas cortafuegos?, ¿Existen medios para el lavado de los ojos?, ¿Se inspeccionan con
regularidad las autoclaves y otros recipientes presurizados?, ¿Se reciben todas las
muestras en condiciones de seguridad? y ¿Se vigilan las exposiciones personales a la
radiación?.