Antioksidan dan inhibitor a-glukosidase dari daun Ipomoea batatas diidentifikasi oleh pendekatan yang

dipandu bioassay dan struktur-aktivitas hubungan

abstrak

Ubi jalar (Ipomoea batatas) daun (SPL) adalah sayuran komersial yang kurang dimanfaatkan dengan
bioactivities yang cukup besar. Melalui DPPH? kemampuan pembilasan dan isolasi berorientasi
penghambatan glukosidase, 9 dan 7 senyawa diisolasi dan diidentifikasi, masing-masing. Diantaranya,
trans-N- (p-coumaroyl) tyramine (1), trans-N-feruloyltyramine (2), cis-N-feruloyltyramine (3), asam 4,5-
feruloylcourmaoylquinic (8), caffeic acid ethyl ester (10), 7-hydroxy-5-methoxycoumarin (11), 7,3 -
dimethylquercetin (13) dan indole-3-carboxaldehyde (15), pertama kali diidentifikasi dari SPL, dan
empat dari mereka (1, 2, 3 dan 10) pertama kali diidentifikasi dari genus Ipomoea. Phenethyl cinnamides
dan 3,4,5-triCQA menunjukkan a-glucosidase terkuat penghambatan, sementara 3,4,5-triCQA dan diCQA
adalah antioksidan dominan. Hubungan struktur-aktivitas mengungkapkan bahwa caffeoylation tinggi
dari quinic acid dan methoxylation lebih rendah dari flavonol aktivitas antioksidan kuat, dan struktur
metilasi dan konfigurasi cis dari phenethyl cinnamides melemahkan penghambatan a-glukosidase. Hasil
yang disebutkan di atas dapat membantu menjelaskan aktivitas antioksidan dan anti-diabetes aktivitas
SPL, dan memberikan dasar teoritis untuk aplikasi lebih lanjut.

1. Perkenalan

Diabetes mellitus (DM) adalah gangguan metabolisme global yang dicirikan

oleh kadar glukosa darah tinggi. Pada 2013, 382 juta orang

di seluruh dunia hidup dengan DM, 90% dari mereka dipengaruhi oleh tipe

2 diabetes, dan jumlahnya diperkirakan akan meningkat menjadi 592 juta oleh

2035 dengan perkembangan urbanisasi, peningkatan kehidupan

standar dan perubahan kebiasaan diet manusia

1. Perkenalan

Diabetes mellitus (DM) adalah gangguan metabolisme global yang dicirikan oleh kadar glukosa darah
tinggi. Pada 2013, 382 juta orang di seluruh dunia hidup dengan DM, 90% dari mereka dipengaruhi oleh
tipe2 diabetes, dan jumlahnya diperkirakan akan meningkat menjadi 592 juta oleh 2035 dengan
perkembangan urbanisasi, peningkatan kehidupan standar dan perubahan kebiasaan diet manusia
memberikan efek merugikan yang serius pada kesehatan orang, ini dengan DM lebih rentan terhadap
risiko penyakit kardiovaskular, gagal ginjal, lemah, depresi, kematian dini, dan penurunan kognitif, et al.

Terlebih lagi, diabetes telah menjadi utama penyebab kematian pada orang yang lebih muda dari 60
tahun, kematian yang disebabkan oleh DM menyumbang hampir 9% dari total kematian global. Oleh
karena itu, sangat mendesak untuk mengeksplorasi terapi yang efektif metode untuk DM. Suatu
pendekatan yang menjanjikan untuk manajemen DM, khususnya di non-insulin-dependent DM, adalah
untuk mengurangi hiperglikemia postprandial dengan menggunakan inhibitor glukosidase untuk
menekan karbohidrat pencernaan. a-Glukosidase adalah karbohidrat yang terletak di membran
permukaan sikat-batas sel-sel usus, yang memfasilitasi penyerapan glukosa oleh usus kecil melalui
katalisasi hidrolisis oligosakarida menjadi monosakarida

inhibitor yang efektif dapat secara signifikan menunda usus penyerapan glukosa, mengurangi
hiperglikemia puasa dan postprandial, dan membantu mengelola diabetes dan mengurangi insiden
komplikasi diabetes akhir (Göke et al., 1994). a-Glucosidase inhibitor telah direkomendasikan sebagai
terapi lini pertama oleh American Association of Clinical Endocrinologists (AACE) dan Federasi Diabetes
Internasional (IDF) karena karakteristik keamanan, kemanjuran, kurangnya hipoglikemia, manfaat
tolerabilitas kardiovaskular dan diistilahkan 'berlian yang belum tersentuh' diabetologi Namun, Inhibitor
a-glukosidase sintetis memiliki banyak efek samping yang tidak diinginkan efek sebagai akibatnya, upaya
besar telah dilakukan untuk mencari untuk inhibitor a-glukosidase yang efektif, tidak beracun dan murah
dari sumber daya alam yang dapat mencegah risiko diabetes tipe 2 dan komplikasi terkait.

Daun ubi jalar (SPL) adalah produk sampingan dari produk ubi jalar, dan telah dikonsumsi sebagai
sayuran berdaun di banyak bagian kata. Ini telah menarik perhatian para peneliti karena cukup besar
berfungsi dalam pencegahan banyak penyakit, seperti peradangan, tumor, kanker, kardiovaskular,
hipertensi, hiperglikemia dan diabetes

Dilaporkan bahwa SPL menunjukkan polifenol yang jauh lebih tinggi daripada banyak tanaman yang
dimakan umum lainnya. Manfaat kesehatan dari ekstrak SPL bisa karena sifat-sifat polifenol sebagai
pemulung radikal bebas, senyawa penyumbang hidrogen, dan / atau pemadam oksigen singlet.
mengungkapkan bahwa ekstrak SPL memberikan aktivitas antioksidan tertinggi sebagai dibandingkan
dengan 30 jenis sayuran lainnya di Vietnam. Namun, hingga saat ini, ada batasan informasi mengenai
senyawa yang tepat berkontribusi terhadap aktivitas antioksidan, terutama untuk efek anti diabetes,
yang memancing minat besar kita untuk melakukan penelitian ini.

Penelitian ini dilakukan untuk menemukan senyawa bioaktif di SPL bertanggung jawab untuk
penghambatan a-glukosidase dan aktivitas antioksidan menggunakan pendekatan yang dipandu
bioassay. Orangefleshed SPL dipilih menjadi bahan karena lebih tinggi aktivitas antioksidan dan
kandungan polifenol dari krim-daging SPL. penghambatan a-Glukosidase dan DPPH radikal (DPPH?)
mengais-ngais tes kemampuan digunakan sebagai model bioaktif. Ekstrak kasar dari SPL dipisahkan
secara berturut - turut dengan kloroform, etil asetat dan n-butanol untuk menghasilkan fraksi kloroform
(CFF), fraksi etil asetat (EAF) dan fraksi n-butanol (nBuF). Mengikuti, senyawa dengan kemampuan
pembilasan radikal yang tinggi atau penghambatan glukosidase selanjutnya diisolasi dan dimurnikan
dengan menggunakan XAD-16 Amberlite resin, Sephadex LH-20, kromatografi cair tekanan menengah
(MPLC) dan kromatografi cair kinerja tinggi semi-preparatif (Semi-HPLC). Selama pemisahan, hanya
fraksi / subfraksi menunjukkan penghambatan a-glukosidase terkuat atau DPPH?

Kemampuan memulung dipilih untuk pemisahan dan pemurnian lebih lanjut. Struktur senyawa
dimurnikan dijelaskan dengan menganalisis data spektroskopi termasuk magnetik nuklir resonansi
(NMR) dan spektrometri massa ionisasi electrospray (ESIMS)
2. Bahan dan metode

2.1. Umum

Semua resonansi magnetik nuklir 1D (1 H dan 13C NMR) dan 2D NMR [1 H – 1H korelasi spektroskopi
(COZY), heteronuklear koherensi kuantum tunggal (HSQC), ikatan ganda heteronuklear koherensi
(HMBC)] data diperoleh baik pada Bruker 300 MHz atau instrumen Varian 500 MHz menggunakan
tetramethylsilane (TMS) sebagai referensi pada suhu kamar. Metanol dikebiri (CD3OD) atau dimetil
sulfoksida (DMSO-d6) digunakan sebagai pelarut untuk semua eksperimen NMR. Data ESIMS diperoleh
pada Spektrometer massa Q-Star Elite (Terapan Biosystems MDS) di bawah mode ion positif dan negatif.
Kolom kromatografi dilakukan lebih dari XAD-16 Amberlite resin, Sephadex LH-20 dan MPLC dengan
kolom C18 yang dipackack. Kromatografi cair kinerja tinggi (HPLC) analisis dilakukan pada Hitachi Elite
Lachrom sistem (Pleasanton, CA, UAS) dilengkapi dengan l-2450 diode array detektor, autosampler L-
2200, Pompa L-2130, EZChrom Elite perangkat lunak dan Luna C18 (2) 100A (4,6 250 mm, 5 lm,
Phenomenex) kolom dengan laju alir 0,75 mL / menit. Semi-HPLC dilakukan pada SunFireTM Pra C18 (5
lm, 10 250 mm, Waters) kolom dengan laju aliran 2,8 mL / menit.

2.2. Bahan kimia dan material

Semua pelarut yang digunakan untuk analisis HPLC adalah kelas HPLC, yang lain adalah kelas analitis,
dan diperoleh dari Pharmco-AAPER melalui Wilkem Scientific (Rhode Island, USA). Sephadex LH-20,
Resin Amberlite XAD-16, p-nitrophenyl-a-D-glucopyranoside (pNPG), 2,2-difenil-1-pikrilhidrazil (DPPH)
dan FolinCiocalteau reagen dibeli dari Sigma-Aldrich (Missouri, AMERIKA SERIKAT). serbuk a-Glukosidase
berasal dari MP Biomedicals (Illkirch, Perancis).

SPL oranye segar (Jishu No. 16), dikumpulkan secara manual dari peternakan di Yichun (Oct., 2013,
Jiangxi, China), dan diidentifikasi oleh Guan-xian Liu di Akademi Pertanian Jiangxi Ilmu. Daunnya dicuci
dengan air ledeng, dikeringkan pada 45 C, ditumbuk menjadi bubuk dan disaring melalui 200 mash layar
mesh. Bubuk yang diperoleh kemudian disimpan dalam tempat tertutup polyethylene bag dan disimpan
dalam 4 C hingga digunakan.

2.3. Ekstraksi dan isolasi senyawa

Untuk fraksinasi yang dipandu aktivitas, serbuk SPL kering (1,0 kg) diekstraksi dengan mikrofluidisasi
tekanan tinggi dinamis yang dibantu ekstraksi mengikuti parameter yang sebelumnya dioptimalkan
(Huang et al., 2013). Suspensi kemudian disentrifugasi dan menguap hingga kering dengan rotary
evaporator dalam vakum pada suhu 40 ° C untuk mendapatkan 244.0 g ekstrak kasar (CE). Kemudian,
100,0 g CE ditangguhkan dalam 100 mL air dan berturut-turut dipartisi dengan kloroform (1,0 L 3), etil
asetat (1,0 L 3) dan n-butanol (1,0 L 3) untuk mendapatkan empat fraksi. Fraksi etil asetat (EAF, 21,5 g)
adalah diterapkan ke resin Amberlite XAD-16 dan dielusi berturut-turut dengan 40% 90% MeOH / H2O
(46%, v / v) pada kenaikan 10% (1,0 L untuk setiap gradien) untuk menghasilkan enam sub-fraksi (EA1 EA
6) berdasarkan pada spektrum HPLC. Mengikuti, fraksi EA-1 dan EA-4 secara terpisah dikromatografi
atas Sephadex LH-20 dengan MeOH sebagai eluen mengumpulkan dengan masing-masing tabung 8,0
mL. Menurut HPLC spektrum elusi, sub-fraksi EA-1a EA-1c diperoleh dari fraksi EA-1, sub-fraksi EA-4a EA-
4c dan senyawa 4 (103,2 mg) diperoleh dari fraksi EA-4. Fraksi EA-1a adalah masa depan dimurnikan
dengan menggunakan Semi-HPLC eluting dengan 34% MeOH / 0,1% TFA dalam air (v / v) untuk membeli
senyawa 9 (20,3 mg, tR = 14,21 menit). Fraksi EA-1b dimurnikan oleh Semi-HPLC eluting dengan 38%
MeOH / 0,1% TFA dalam air (v / v) untuk menghasilkan senyawa 5 (8,1 mg, tR = 18,61 menit), 6 (7,14 mg,
tR = 19,85 menit) dan 12 (7,3 mg, tR = 30,19 menit). Fraksi EA-1c dipisahkan dengan MPLC (20-60%
MeOH, v / v) diikuti oleh pemurnian dengan Semi-HPLC ke berikan senyawa 7 (2,9 mg, tR = 11,58 menit),
8 (6,0 mg, tR = 16,27 min), 13 (2,3 mg, tR = 19,13 menit), 14 (5,8 mg, tR = 22,08 menit) dan 4 (5,7 mg, tR
= 24,71 menit). Fraksi EA-4a dipisahkan oleh Semi-HPLC dan dielusi dengan 43% MeOH / 0,1% TFA dalam
air untuk menghasilkan senyawa 3 (1,8 mg, tR = 19,15 menit). Fraksi EA-4b lebih jauh dimurnikan oleh
Semi-HPLC dielusi dengan 48-50% MeOH / 0,1% TFA di air untuk memperoleh senyawa 1 (7,6 mg, tR =
17,85 menit), 2 (28,2 mg, tR = 19,04 menit), 10 (27,7 mg, tR = 26,87 menit), 11 (3,6 mg, tR = 12,71 menit)
dan 15 (2,8 mg, tR = 14,98 menit). Aliranm grafik diberikan pada Gambar. 1.

2.4. Penentuan kadar fenolik total

Kandungan fenolik total dalam ekstrak kasar dan fraksi diukur dengan metode Folin-Ciocalteau menurut
Sulaiman, Sajak, Ooi, Supriatno, dan Seow (2011) dengan beberapa modifikasi. Semua sampel
diencerkan dengan metanol untuk konsentrasi yang tepat sebelum pengujian, kemudian 20 lL sampel
diencerkan diinkubasi dengan 0,1 mL Folin-Ciocalteau reagen selama 5 menit, berikut dengan
menambahkan 0,3 mL 20% Na2CO3 dan 1,0 mL air suling. Itu campuran dikocok secara menyeluruh dan
diinkubasi pada suhu kama selama 30 menit. Setelah 1 menit sentrifugasi pada 10.000 rpm, 200 lL
supernatan dipipet ke dalam piring 96-well, absorbansi pada 765 nm dibaca dengan pembaca pelat-
mikro (SpectraMax M2, Molecular Devices Corp., Sunnyvale, CA, USA). Fenolik total konten dihitung dari
kurva kalibrasi diplot dengan gallic asam sebagai standar, hasil dinyatakan sebagai konten persentase
(%) per gram ekstrak / fraksi kering

2.5. Identifikasi senyawa

Semua senyawa yang dimurnikan terkonsentrasi pada kekeringan di bawah mengurangi tekanan dan
lyophilized, berikut dengan pembubaran dengan deablated methanol (CD3OD) atau dimethyl sulfoxide
(DMSO-d6). Solusinya dipindahkan ke tabung NMR dan dikenakan Analisis NMR. 1 H NMR dan 13C NMR
spektrum senyawa diperoleh pada instrumen Bruker 300 MHz atau Varian 500 MHz menggunakan
tetramethylsilane (TMS) sebagai referensi pada suhu kamar, sementara 2D NMR diperoleh pada
instrumen Varian 500 MHz. Setelah analisis NMR, semua isolat diuapkan dengan rotary vacuum
evaporator untuk menghilangkan pelarut terdeuterasi, dan dilarutkan dengan metanol kadar HPLC dan
disentrifugasi pada 10.000 rpm selama dua menit. Spektrum massa diperoleh Spektrometer massa Q-
Star Elite (Terapan Biosystems MDS) digabungkan ke sumber Turbo Ion Spray di bawah ion positif dan
negative mode dengan infus langsung dari supernatan masing-masing murni senyawa.

2.6. Kemampuan antioksidannya

Aktivitas antioksidan dari fraksi dan senyawa yang dimurnikan dievaluasi menggunakan DPPH?
kemampuan pembilasan assay, yang mana dilakukan di piring 96-baik sesuai dengan metode yang
digunakan sebelumnya. Sampel dalam konsentrasi berbeda (100 lL) dan 0,15 mM solusi DPPH (100 lL,
dalam metanol) ditambahkan ke masing-masing dengan baik. Absorbansi pada 515 nm (AS) adalah baca
setelah 30 menit reaksi gelap dengan pembaca pelat-mikro. Kemampuan mengais (%) dihitung sebagai
berikut:

dimana AC adalah absorbansi kontrol (tanpa sampel), AS adalah absorbansi sampel, Ab adalah
absorbansi sampel kosong (tanpa Solusi DPPH). Asam askorbat digunakan sebagai referensi positif.
Semua tes dilakukan dalam rangkap tiga. Konsentrasi sampel yang dihasilkan dalam 50% penghambatan
pada DPPH? (Nilai IC50) dihitung menggunakan algoritma regresi nonlinear (Asal 8.0, OriginLab Co., AS),
dan dinyatakan sebagai lg / mL untuk fraksi dan lM untuk senyawa yang dimurnikan.

2.7. penghambatan a-Glukosidase

Penghambatan a-glukosidase fraksi dan dimurnikan Senyawa ditentukan seperti yang dilaporkan
sebelumnya Secara singkat, 50 lL sampel dilarutkan, 50 lL fosfat buffer (0,1 mM, pH 6,9) dan 100 lL ragi
a-glukosidase solusi (pH 6,9, 0,1 U / mL, dalam 0,1 M buffer fosfat,) adalah diinkubasi dalam piring 96-
baik pada 25 C selama 10 menit. Lalu, 50 lL 5 mM p-nitrophenyl-a-D-glucopyranoside (pNPG) solusi (pH
6,9, dalam 0,1 M dapar fosfat) ditambahkan ke masing-masing dengan baik, dan absorbansi pada 405
nm (AS) direkam dengan mikro-pelat pembaca setelah inkubasi pada 25 C selama 5 menit. Persentase
penghambatan dihitung sebagai berikut:

dimana AC adalah absorbansi kontrol (tanpa sampel), AS adalah absorbansi sampel, Ab adalah
absorbansi sampel kosong (tanpa solusi pNPG). Acarbose digunakan sebagai referensi positif. Semua tes
dilakukan dalam rangkap tiga. Konsentrasi sampel menghasilkan 50% inhibisi pada a-glucosidase (nilai
IC50) dihitung menggunakan algoritma regresi nonlinear (Origin 8.0, OriginLab Co., US), dan dinyatakan
sebagai lg / mL untuk fraksi dan lM untuk dimurnikan senyawa

3. Hasil dan Pembahasan

3.1. Isolasi dan pemurnian senyawa target

Aktivitas antioksidan dan penghambatan enzim EAF dan nBuF dievaluasi berdasarkan konten fenolik
total mereka yang jauh lebih tinggi daripada fraksi kloroform dan fraksi air Seperti ditunjukkan pada
Tabel 1, ekstrak kasar dan fraksi SPL muncul variasi yang signifikan dalam konten fenolik total, DPPH?
aktivitas scavenging dan inhibisi a-glukosidase. Total tertinggi konten fenolik (469,5%) terdeteksi di EAF,
yang hamper dua kali dari ekstrak mentah (24,93%) dan nBuF (24,45%). Di atas saat yang sama, EAF
dipamerkan yang paling ampuh dalam DPPH pemulungan? dan menghambat aktivitas a-glukosidase
dengan nilai IC50 165,43 dan 256,08 lg / mL, masing-masing. Sementara, DPPH terendah?

Aktivitas pembilasan diamati pada fraksi n-butanol (nilai IC50) 360,84 lg / mL), ekstrak kasar
memberikan a-glukosidase terlemah penghambatan (nilai IC50 774.11 lg / mL). Oleh karena itu, EAF
menjadi sasaran untuk resin XAD-16 untuk mengisolasi prinsip-prinsip bioaktif melalui metode isolasi
yang dipandu bioassay, yang menghasilkan enam subfraksi (EA-1 EA-6), mereka dievaluasi lebih lanjut
untuk radikal kemampuan mengais-ngais dan aktivitas penghambatan a-glukosidase.
Dapat dilihat pada Tabel 1 bahwa, EA-2 memiliki total fenolik tertinggi konten (84,84%) di antara sub-
fraksi EA-1 EA-6, berikut oleh EA-1 (58,98%) dan EA-4 (52,25%). Tapi EA-1 dihasilkan DPPH terkuat?
kemampuan memulung dan EA-4 menunjukkan yang terbaik penghambatan a-glukosidase, dengan nilai
IC50 48,91 dan 111,88 lg / mL, masing-masing. Ini mengungkapkan bahwa senyawa tersebut hadir dalam
EA-1 memiliki kemampuan memulung radikal yang lebih baik dari itu dalam EA-2, sementara senyawa
dalam EA-4 menunjukkan a-glukosidase yang lebih baik inhibisi. Oleh karena itu, EA-1 didromatografi
pada Sephadex LH-20 kolom untuk menghasilkan sub-fraksi EA-1a EA-1c.

Pecahan EA-1a dan EA-1b memiliki kandungan fenolik total yang lebih tinggi daripada EA-1, Sementara
itu, EA-1a menunjukkan aktivitas antioksidan terkuat di antara semua fraksi yang diperoleh diikuti oleh
EA-1b, dengan nilai IC50 masing-masing 22.19 dan 34.59 lg / mL. Terlebih lagi, IC50 nilai dari ketiga fraksi
ini semuanya jauh lebih rendah daripada referensi positif Vc (112,43 lg / mL), yang mengindikasikan
bahwa senyawa dalam SPL dengan aktivitas antioksidan yang sangat baik berhasil diperkaya dalam dua
fraksi ini. Dengan demikian, mereka lebih lanjut dikenakan ke MPLC dan Semi-HPLC untuk memberikan
senyawa 4, 5, 6, 7, 8, 9, 12, 13 dan 14. Spektrum HPLC fraksi EA-1 pada 256 nm ditunjukkan dalam
Mendukung material Gambar. 1S.

3.2. Identifikasi senyawa

Struktur senyawa terisolasi diidentifikasi dengan menjelaskan data 1D NMR, 2D NMR dan ESIMS, dan
dengan membandingkan data ini dengan referensi saat tersedia. Benar-benar, 15 Senyawa diidentifikasi
dari EAF ekstrak SPL, mereka trans-N- (p-coumaroyl) tyramine (1), trans-Nferuloyltyramine (2), cis-N-
feruloyltyramine (3) , 3,4,5-tricaffeoylquinic acid (3,4,5-triCQA) (4), 3,4-dicaffeoylquinic acid (3,4-diCQA)
(5), asam 3,5-dicaffeoylquinic (3,5-diCQA) (6), asam 4,5-dicaffeoylquinic (4,5-diCQA) (7), 4,5-
feruloylcourmaoylquinic acid (8) (Pauli, Poetsch, & Nahrstedt, 1998), caffeic acid (9) (, etil ester asam
kafeat (10), 7-hydroxy-5-methoxycoumarin (11), quercetin-3-O-a-D-glucopyranoside (12), 7,30 -
dimethylquercetin (13), rhamnetin (14) dan indole-3carboxaldehyde (15).

Tujuh Senyawa (senyawa 1, 2, 3, 4, 10, 11 dan 15) dimurnikan dan diidentifikasi dari fraksi EA-4 sebagai
berorientasi oleh inhibisi a-glukosidase, sementara sembilan senyawa (senyawa 4, 5, 6, 7, 8, 9, 12, 13
dan 14) diisolasi dan diidentifikasi dari fraksi EA-1 sebagai panduan oleh DPPH? kemampuan mengais-
ngais. 3,4,5-TriCQA (4) keduanya terisolasi dari EA-1 dan EA-4 konten tinggi, yang menunjukkan bahwa
3,4,5- triCQA adalah antioksidan utama dan inhibitor a-glukosidase SPL, yang dikonfirmasi oleh aktivitas
bio yang diukur ditunjukkan pada Tabel 2.

Di antara isolat di atas, 8 senyawa (1, 2, 3, 8, 10, 11, 13, dan 15) diidentifikasi dalam SPL untuk pertama
kalinya, sementara N-trans- (pcoumaroyl) tyramine (1), N-trans-feruloyltyramine (2), N-cisferuloyl-
tyramine (3) dan etil ester asam kafeat (10) adalah yang pertama ditemukan di genus Ipomoea. trans-N-
(p-Coumaroyl) tyramine (1), trans-N-feruloyltyramine (2) dan cis-N-feruloyltyramine (3) adalah
umumnya hidup berdampingan di pabrik, mereka secara bersamaan diidentifikasi di batang Dendrobium
nobile Lindl, di akarnya dari Solanum melongena. Namun, hingga saat ini, phenethyl cinnamides ini
hanya dilaporkan dalam dua Convolvulaceae tanaman, Pharbitis purpurea dan Pharbitis nil Choisy
Struktur kimia dari semua senyawa yang teridentifikasi ditunjukkan pada Gambar. 2. The 1 Data H NMR
dari semua isolat, dan data 13C NMR Senyawa 1–3 dan 15 disajikan dalam Bahan pendukung 2.

3.3. Perbandingan DPPH? aktivitas pemulungan

DPPH? aktivitas pemulungan dari isolat ditampilkan dalam Tabel 2, semua senyawa muncul variasi yang
signifikan dalam mereka DPPH? aktivitas pemulungan. Turunan CQA, etil ester asam kafeat
menunjukkan DPPH yang jauh lebih tinggi? kemampuan mengais-ngais daripada kontrol positif Vc, dan
aktivitas asam caffeic, quercetin-3-O-glucosidase dan Vc menunjukkan perbedaan yang tidak sebanding
(P> 0,05), menunjukkan mereka menjadi antioksidan mendominasi di SPL. 3,4,5-triCQA memberi
aktivitas antioksidan terbaik dengan nilai IC50 9.69 lM, yang adalah 10.8 kali lipat dari kontrol positif Vc
(IC50 dari 104.50 lM). Itu senyawa lain mengikuti urutan menurun 4,5-diCQA> 3,5-diCQA> 3,4-diCQA>
etil ester asam kafeat> asam caffeic = quercetin-3-O-glucosidase = Vc. Meskipun 7,30 -
dimethylquercetin, senyawa yang diperoleh oleh DPPH? kemampuan memulung isolasi semua
menunjukkan aktivitas antioksidan yang sangat baik, sehingga isolasi yang berorientasi bioaktif dapat
menjadi metode yang efisien untuk mengisolasi dan memurnikan antioksidan dalam aktivitas tinggi dari
SPL. Sebelumnya penelitian menunjukkan bahwa ekstrak SPL memiliki aktivitas antioksidan,
antimutagenisitas dan antikarsinogenitas, dan 3,4,5-triCQA menunjukkan aktivitas tertinggi di antara
derivatif CQA yang terdeteksi dalam SPL diikuti oleh diCQAs dan CQA, ini bisa terjadi berutang pada
kemampuan pemulungan radikal bebas yang sangat baik ini senyawa.

Banyak penelitian mengungkapkan bahwa monoCQA adalah fenolat utama SPL tetapi dalam penelitian
ini, tidak satupun dari mereka diisolasi dengan menggunakan pendekatan berorientasi pemulungan
radikal, menunjukkan aktivitas antioksidan monoCQA yang lebih lemah daripada triCQA dan diCQA.
Dengan demikian, semakin banyak kelompok caffeoyl terikat pada asam quinic, aktivitas antioksidan
yang lebih tinggi senyawa akan memiliki, yang merupakan kesepakatan dengan laporan dari Aktivitas
antioksidan menurun dari quercetin-3-O-glucosidase, rhametin dan 7,30 -dimethylquercetin
menunjukkan bahwa, metilasi dari 3-OH dan 40 -OH memiliki efek negatif pada aktivitas antioksidan
flavonol, dan kemampuan itu menurun dengan meningkatnya tingkat metilasi. Beberapa referensi juga
menyimpulkan bahwa flavonoid dengan 3, 20 dan 40 -OH menunjukkan aktivitas antioksidan yang lebih
baik dibandingkan dengan kelompok hidroksil ini yang termetoksilasi.

3.4. Perbandingan penghambatan a-glukosidase

Seperti ditunjukkan pada Tabel 2, semua senyawa dimurnikan menunjukkan perbedaan penting dalam
penghambatan a-glukosidase mereka. trans-N- (pCoumaroyl) tyramine (Nilai IC50 4,46 lM) dan 3,4,5-
triCQA (IC50 4,61 lM) memiliki penghambatan tertinggi, dan tidak signifikan perbedaan diamati (P>
0,05), diikuti oleh trans-Nferuloyltyramine (IC50 9,04 lM) dan cis-N-feruloyltyramine (IC50 14,35 lM),
dan nilai IC50 mereka adalah 37,9, 36,6, 18,7 dan11,8 kali lipat dari acarbose (IC50 dari 168,95 lM),
masing-masing.

Secara bertahap turun penghambatan trans-N- (p-coumaroyl) tyramine, trans-N-feruloyltyramine dan

cis-N-feruloyltyramine menyarankan bahwa metilasi gugus hidroksil dalam fenetil cinnamides akan
memperlemah penghambatan glukosidase, dan struktur cis memberikan penghambatan lebih rendah
daripada struktur trans, ini serupa dengan hasil yang didapat. Ketiga phenethyl cinnamides ini
sebelumnya dilaporkan menghambat a-glukosidase dengan cara non-kompetitif. Selain itu, penelitian
farmasi membuktikan bahwa phenylethyl cinnamides menunjukkan banyak manfaat kesehatan, seperti
itu sebagai aktivitas hipotensi dan hiperglikemik, antiinflamasi, dan anti-diabetes. Oleh karena itu, fraksi
pengayaan (EA-4) fenetil cinnamides dan 3,4,5-triCQA dapat menjadi alternatif yang menjanjikan terapi
untuk mencegah diabetes dan komplikasinya.

Turunan asam caffeic yang teridentifikasi juga menunjukkan banyak hal penghambatan a-glukosidase,
dan penghambatan diikuti a kecenderungan variasi yang sama dengan aktivitas antioksidan: 3,4,5-
triCQA> 4,5-diCQA> 3,4-diCQA = 3,5-diCQA> asam caffeic etil ester> asam caffeic. Ini menunjukkan
bahwa caffeoylation of hydroxyl kelompok dalam asam quinic dan esterifikasi kelompok karboksil dalam
kafein asam penting untuk aktivitas penghambatan, yang pertama dipercepat aktivitas penghambatan a-
glukosidase, sementara yang terakhir melemah saya t. Aktivitas struktur serupa, yang membandingkan
penghambatan a-glukosidase, penghambatan maltase dan anti diabetes dari derivatif CQA, masing-
masing, dan penghambatan in vitro a-glukosidase yang lebih baik dan in vivo anti-diabetes diperoleh di
triCQA diikuti oleh diCQA.

Quercetin-3-O-glucosidase (IC50 22,38 lM) dan 7-hydroxy-5- methoxycoumarin (IC50 dari 64,14 lM) juga
menunjukkan hasil yang sangat baik penghambatan a-glukosidase, nilai IC50 jauh lebih rendah daripada
kontrol positif (168,95 lM). Jadi, mereka juga kontributor utama untuk penghambatan a-glukosidase SPL,
dengan kata lain, senyawa bioaktif utama untuk mencegah diabetes dan diabetes sindroma. Karena itu,
kecuali untuk indole-3-carboxaldehyde (IC50> 3 mM), semua senyawa yang diisolasi oleh inhibisi a-
glukosidase metode dipandu menunjukkan aktivitas yang lebih tinggi daripada kontrol positif acarbose,
oleh karena itu, pendekatan bioaktif berorientasi yang digunakan dapat berhasil mengisolasi dan
memurnikan a-glukosidase yang dominan inhibitor dalam SPL.

4. Kesimpulan

DPPH? kemampuan pembilasan dan penghambatan glukosidase berorientasi pendekatan adalah

metode efektif untuk mengisolasi yang dominan antioksidan dan inhibitor a-glukosidase dari ubi jalar
Daun-daun. Sembilan dan tujuh senyawa diisolasi dan diidentifikasi disutradarai oleh aktivitas
antioksidan dan penghambatan enzim, masing-masing, dan delapan (senyawa 1, 2, 3, 8, 10, 11, 13 dan
15) dari mereka pertama kali diidentifikasi dalam SPL. trans-N- (p-Coumaroyl) tyramine (1), trans-N-
feruloyltyramine (2), cis-N-feruloyltyramine (3) dan caffeic acid ethyl ester (10) diidentifikasi dalam
genus Ipomoea untuk yang pertama waktu. cinnamides phenethyl (1 3) dan 3,4,5-triCQA (4) adalah
terkuat inhibitor a-glukosidase berikut dengan quercetin-3-Oglucosidase (12) dan 7-hidroksi-5-
methoxycoumarin (11), sedangkan (4) 3,4,5-triCQA dan diCQAs (5 8) adalah antioksidan yang dominan.
Terlebih lagi, metilasi struktur hidroksi dan cis akan mengurangi inhibisi a-glukosidase dari phenethyl
cinnamides. Semakin banyak kelompok caffeoyl dalam asam quinic dan yang lebih rendah tingkat
methoxylation dalam flavonoid, antioksidan lemah kegiatan senyawa yang sesuai. Studi ini bisa
menjelaskan aktivitas antioksidan yang menjanjikan dan anti-diabetes SPL, dan memberikan informasi
dasar untuk aplikasi lebih lanjut dari daun SPL, terutama untuk fraksi Ea-1 dan Ea-4, sebagai makanan
fungsional atau suplemen obat untuk pengobatan dan pencegahan penyakit terkait dengan stres
oksidasi dan hiperglikemia.