PRÁCTICA N° 07

POBLACIONES: CRECIMIENTO DE LEVADURAS EN LABORATORIO

INTRODUCCIÓN

Las levaduras son organismo unicelulares importantes en el sector biotecnológico e industrial.

Son esenciales en la producción de algunos alimentos y bebidas, tales como pan, cerveza, vino
y sidra. También pueden estar involucradas en la degradación de algunos alimentos, por
procesos de fermentación o contaminación durante la poscosecha de frutas (Senses – Ergul,
2005).

Las levaduras son microorganismos que se encuentran clasificados dentro de los Ascomicetos
y Basidiomicetos, no obstante las levaduras no forman un grupo muy definido, ya que no son
una entidad taxonómica natural que guarda uniformidad morfológica (Kreger, 1984 citado por
sarmiento 2013).

La temperatura de crecimiento de la mayoría de las levaduras está comprendida entre 5 y

37°C. El valor óptimo se sitúa hasta los 28°C. Sin embargo estas temperaturas no son
rigurosamente las óptimas de crecimiento de las levaduras cuando se encuentran en sus
ambientes naturales (Bu´lock, 1991, citado por Villamil 1999). Las levaduras que habitan la
superficie de las hojas, están expuestas a temperaturas máximas que van de 40°C a 10°C durante
la noche (Hiriano, 2000).

Las levaduras se encuentran ampliamente distribuidas en la naturaleza jugando un papel muy

importante en la dinámica biológica y química de los suelos, plantas, animales y agua en donde
son activas competidoras de nutrientes, actúan como antagonistas y en asociaciones
simbióticas. Al parecer estas producen ácidos grasos que inhiben el crecimiento de bacterias
Gram negativas y otras veces actúan como cooperadores suministrando nutrientes o sustratos
degradados a otros microorganismos (Alexopoulos, 1996, citado por Sarmiento 2013).

Las levaduras se encuentran principalmente en hábitat donde hay azúcares, por ejemplo
frutas, flores y la corteza de los árboles. Algunas especies viven en simbiosis con animales como
insectos y otras son patógenas (Brock, 2004; Villamil, 1999).

En la siguiente práctica se aprenderá y observara una forma de reproducción celular realizada

en forma asexual, la cual es realizada por gemación, analizada a través del crecimiento de
levaduras.
OBJETIVOS

 Observar el crecimiento de levaduras en laboratorio mediante la fórmula de la cámara de

Neubauer.

 Comprender el tipo y la forma de reproducirse de algunos microorganismos.

 Conocer los factores que influyen en el crecimiento de las levaduras en el laboratorio.

MATERIAL Y MÉTODOS

Materiales

- Cámara de Neubauer - Vasos de precipitación

- Lamina cubreobjetos - Gradilla
- Tubos de ensayo - Microscopio
- Corcho - Gotero
- Levadura - Pipeta
- Azúcar - Agua

Método

Mezclar una cantidad de agua con azúcar en un pequeño vaso de precipitación, luego taparlo
con el corcho.

Con la pipeta sacar 3 ml de la solución de agua con azúcar y verterlo en un tubo de ensayo.
Repetir esta acción en dos tubos de ensayos más. Posteriormente aforarlos con agua.

Luego se extrae unas gotas de la mezcla de los tubos de ensayo, se vierte sobre la cámara de
Neubauer y se la cubre con la lámina cubreobjetos. Después se coloca en el microscopio para
contabilizar la cantidad de células existentes por cuadrantes, y mediante una formula
determinar el número total de células.

Se evaluó el número total de células aproximadamente durante una semana, analizando su

crecimiento en una curva sigmoidea.

RESULTADOS

Tabla N° 01

Crecimiento de células de levadura realizada en Práctica N°07 de estudiantes de Ing. Civil de

la UNC, semestre 2014 II

Días Cantidad de células (mm2)

Jueves(23 de octubre) 86900
Martes(28 de octubre) 107792
Jueves (30 de octubre) 179200

Fuente: Resultados de análisis en laboratorio de ecología.

 Curva sigmoidea

DISCUSIÓN

¿Por qué las levaduras crecen en condiciones anaerobias?

Porque las células viables de levaduras causan fermentación en condiciones anaerobias; durante
la cual el azúcar presente en el jugo es convertido principalmente en etanol y CO2.
Las levaduras son los agentes de la fermentación y se encuentran naturalmente en la superficie
de las plantas
De esta forma existen 2 tipos de fermentación: alcohólica y láctica
La fermentación alcohólica es un proceso biológico de fermentación en ausencia de oxígeno
(O2), originado por la actividad de algunos microorganismos como la levadura y bacterias, que
procesan los azúcares (carbohidratos) como: glucosa, sacarosa, fructosa, entre otros. Los
productos finales que se obtienen de este proceso son: etanol, dióxido de carbono, NAD+ y 2
ATP.
La fermentación láctica ocurre en algunos protozoos y en tejidos animales. Su principal uso se
da en la obtención de quesos, yogur, salsa de soya, y otros productos derivados de la leche. En
los tejidos en animales, se produce ácido láctico (o lactato) a partir del piruvato. En células
musculares, cuando el suministro, y las reservas de oxígeno (mioglobina) se agotan durante
ejercicio físico extenuante, el piruvato deja de ingresar a las mitocondrias (ingresan en presencia
de O2 para obtener energía) y comienza la fermentación láctica (anaerobia).
Nutrición y crecimiento de levaduras

Las levaduras son chemoorganotrophs, ya que utilizan compuestos orgánicos como fuente de
energía y no necesitan la luz solar para crecer. De carbono se obtiene principalmente a partir de
azúcares de hexosa, tales como glucosa y fructosa, o disacáridos tales como sacarosa y maltosa.
Las especies de levadura o bien requieren oxígeno para la respiración celular aeróbica o
anaeróbica son, sino también disponer de métodos de producción de energía aeróbica. Las
levaduras crecen mejor en un entorno de pH neutro o ligeramente ácido.

Las levaduras varían en qué rango de temperatura que crece mejor. Por ejemplo,
Leucosporidium frigidum crece entre -2 y 20 º C, Saccharomyces Telluris en 5 a 35 C, y Candida
slooffi 28 a 45 º C. Las células pueden sobrevivir a la congelación bajo ciertas condiciones, con
la disminución de la viabilidad con el tiempo.

En general, las levaduras se cultivan en el laboratorio en medios de crecimiento sólidos o en

caldos líquidos. Medios comunes utilizados para el cultivo de levaduras incluyen agar de
dextrosa de patata o caldo patata dextrosa, Wallerstein agar nutriente Laboratorios, levadura
peptona agar de dextrosa, agar de levadura y moho o caldo. El antibiótico cicloheximida a veces
se añade al medio de crecimiento de levadura para inhibir el crecimiento de las levaduras de
Saccharomyces y para seleccionar especies de levaduras silvestres/indígena. Esto cambiará el
proceso de la levadura.

La apariencia de un blanco, levadura filiforme, comúnmente conocido como levadura Kahm, a

menudo es un subproducto de la fermentación láctica de ciertas verduras, generalmente el
resultado de la exposición al aire. Aunque son inofensivos, puede dar verduras encurtidas un
mal sabor y debe ser removido periódicamente durante la fermentación.

Reproducción de levaduras

Las levaduras, como todos los hongos, pueden tener ciclos de reproducción asexual y sexual. El
modo más común de crecimiento vegetativo en la levadura es la reproducción asexual por
gemación. Aquí, un pequeño brote, o célula hija, se forma en la célula madre. El núcleo de la
célula madre se divide en un núcleo hijo y migra en la célula hija. El brote sigue creciendo hasta
que se separa de la célula madre, formando una nueva célula. La célula hija producido durante
el proceso de gemación es generalmente más pequeñas que la célula madre. Algunas levaduras,
como Schizosaccharomyces pombe, se reproducen por fisión en lugar de en ciernes, creando así
dos células hijas de tamaño idéntico.

En general, en condiciones de estrés, como el hambre de nutrientes, las células haploides de

morir, en las mismas condiciones, sin embargo, las células diploides pueden sufrir esporulación,
entrando en la reproducción sexual y la producción de una variedad de esporas haploides, que
pueden ir a su compañero, de reforma del diploide.
Algunas levaduras pucciniomycete, en determinadas especies de Sporidiobolus y
Sporobolomyces producen aérea se dispersaron, ballistoconidia asexual.
Uso de las levaduras

Las propiedades fisiológicas útiles de levadura han llevado a su uso en el campo de la

biotecnología. La fermentación de los azúcares por la levadura es la aplicación más antigua y
más grande de esta tecnología. Muchos tipos de levaduras se utilizan para hacer muchos
alimentos: levadura de panadero en la producción de pan, levadura de cerveza en fermentación
de la cerveza, levadura en la fermentación del vino y para la producción de xilitol. El llamado
arroz de levadura roja es en realidad un molde, Monascus purpureus. Las levaduras son algunos
de los organismos modelos más utilizados para la genética y la biología celular.

CONCLUSIONES

- El crecimiento bacteriano puede considerarse como el crecimiento de poblaciones de

muchos millones de células cuyas características son esencialmente estadísticas, y el
comportamiento de la célula individual es tomado como una frecuencia.

- El crecimiento de las bacterias en cultivo puede determinarse midiendo

experimentalmente el incremento de la materia celular (protoplasma) o del incremento del
número de células.

- Las posibilidades fisiológicas de los microorganismos se relacionan inversamente con sus

necesidades nutricionales, ya que, la síntesis de componentes celulares a partir de materia
inorgánica o compuesto inorgánicos simples es obviamente un proceso más complejo de lo
que sería si los productos de partida fueran sustancias orgánicas complejas químicamente
más parecidas a los constituyentes finales de la célula.

- La reproducción de los microorganismos no solo dependen del tiempo; sino también de las
condiciones en que se encuentren, algunos microorganismos dependerán de las
concentraciones de pH, Glucosa, % de sal, la humedad, temperatura, etc., para obtener un
verdadero desarrollo.

- Las levaduras requieren pH altos, medios poco salados dependiendo poco de las
concentraciones de glucosa, para obtener un verdadero desarrollo.

- El tiempo de crecimiento influye mucho; a mayor tiempo de inoculación mayor es la

reproducción.
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

Hiriano S. UpperC. 2000. Bacterial in the leaf ecosystem with emphasis on Pseudomonas
syringae-a pathogen, ice nucleus, and epihyte. Microbiology and Molecular Biology
Reviews. Vo 64 N°. 3. 624-653.

Sarmiento A., Herrera J. 2003. Obtención y caracterización de un banco de levaduras con

potencial aplicación probiotica. Trabajo de grado (Microbiología Industrial). Pontificia
Universidad Javeriana. Bogotá. P103.

Senses-Ergul S., Agoston R., Belák A., Deak T. 2005. Characterization of some yeast
isolated from foods by tradicional and molecular test. International Journal Of Food
Microbiologu. Article in Press.

Consultado en:

http://centrodeartigo.com/articulos-de-todos-los-temas/article_22902.html

http://grupo-acipi04.blogspot.com/2010/09/practica-de-laboratorio-12-
reproduccion.html

http://www.javeriana.edu.co/biblos/tesis/ciencias/tesis276.pdf

http://www2.agronomia.uchile.cl/webcursos/cmd/11999/cesnamor/CONDICIONES%20
PARA%20EL%20DESARROLLO%20DE%20LEVADURAS%202.htm

http://www.lablinsan.cl/manual/MANUAL_PARTE_2.pdf

http://www.unsa.edu.ar/biblio/repositorio/malim2007/4%20levaduras.pdf