MICOLOGÍA

PRACTICA DE LABORATORIO
OBTENCIÓN DE MUESTRAS CLINICAS, EXAMENES DIRECTROS
Y SIEMBRE EN MEDIOS DE CULTIVO
MICOSIS SUPERFICIAL

ALUMNAS:
RENGIFO INFANTE, RUTH
LAVERIANO SOLIS, KATHERINE

DOCENTE:
NEYRA VALDEZ LIDIO EDGAR

2019-I

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INTRODUCCIÓN

Los hongos son eucariotas que viven en diferentes medios de acuerdo a

las condiciones de cada clase. La mayoría de estos pertenece
taxonómicamente a los Ascomicetas, asimismo, los hongos de esta
categoría son en su mayoría patógenos. El diagnostico de las patologías
relacionadas a hongos depende en gran medida de las pruebas de
laboratorio ya que es ahí donde se detectará el agente patógeno, cuando
este se detecta, el médico podrá tomar medidas para su eliminación. Para
lograr esto, es necesario una correcta toma de muestra de los diferentes
lugares de colonización, un análisis directo y un cultivo posterior, se
debe tener en cuenta esto ya que de ello va a depender un resultado
verídico.
En la práctica de laboratorio, se desarrolló:
- Indicaciones de la correcta toma de muestra en micosis superficial.
- Examen directo de muestra de cabello y uña.
- Siembra en medio mycosel y medio sabouraud.
- Visualización de crecimiento en el medio.
En este informe se mostrará:
- Información teórica.
- Los procedimientos realizados.
- Los resultados obtenidos.

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Tabla de contenido

I. MARCO TEORICO ............................................................................................. 4

1.1. MUESTRA PARA EL DIAGNOSTICO DE MICOSIS ................................... 4
1.2. TRANSPORTE Y CONSERVACIÓN ............................................................. 4
1.3. EXAMENES EN FRESCO O EXÁMENES DIRECTOS ................................ 5
1.4. CULTIVOS ........................................................................................................ 5
II. PRÁCTICA DE LABORATORIO I (miércoles 13 de marzo) ............................ 6
III. PRÁCTICA DE LABORATORIO II (miércoles 20 de marzo) ........................... 9
IV. PRÁCTICA DE LABORATORIO III (miércoles 27 de marzo) ........................ 11
V. DISCUSIÓN Y CONCLUSIÓN ........................................................................ 13
VI. BILIOGRÁFIA ................................................................................................... 14

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I. MARCO TEORICO

1.1. MUESTRA PARA EL DIAGNOSTICO DE MICOSIS

Para solicitar o efectuar la toma de muestra biológica de cualquier parte del cuerpo, es
necesario brindarle antes al paciente las recomendaciones a seguir. Por ejemplo, si el
paciente está recibiendo medicación ya sea sistemática u óptica se le debe recomendar la
suspensión de esta por almenos 2 semanas. Asimismo, se debe de tener en cuenta si el
paciente es inmunosuprimido y tener en cuenta otros factores que puedan alterar la toma
de muestra u obtener falsos negativos. Como por ejemplo el uso de cosméticos, perfumes,
brillantinas, por otro lado, es necesario indicarle al paciente si debe de darse un correcto
aseo, evitar la manipulación en el área, etc.

1.2. TRANSPORTE Y CONSERVACIÓN

Se es recomendable la obtención de muestras para los exámenes de micosis en placas

petris. Asimismo, se recomienda procesar la muestra dentro de las 2 primeras horas
posteriores a la extracción de la muestra ya que a más tiempo los fúngicos disminuyen su
viabilidad y, por lo tanto, su desarrollo en los cultivos se ven limitados. Por otro lado, si
no es posible ello, es conveniente preservarlas a 4°C para asi evitar la proliferación de
bacterias. Asimismo, cabe mencionar que en ocasiones la conservación de la muestra
podría llevar a perder la viabilidad en algunos agentes como los de la mucomicosis,
malaseziosis e histoplasmosis.

MUESTRAS
En la micosis superficial, se debe de efectuar un
raspado con una hoja de bisturí, sobre los bordes de la
ESCAMA DE PIEL lesión (Tiña, candidiasis).
En micosis con placas de fina descamación (pitiriasis
versicolor), es recomendable tomar la muestra con una
cinta adhesiva.
Para la toma de muestra de las Onicomicosis, se es
necesario saber la clinica del paciente ya que
UÑAS dependerás si estamos frente a una onicomicosis
subungueal distal (OSD), onicomicosis subungueal
lateral (OSL), onicomicosis blanca superficial (OBS),
onicomicosis distrófica total (ODT). Debido a que los
hongos prefieren la Queratina, se es recomendable
tomar la muestra por la parte interna de la lámina
ungueal.
Tiña de la Cabeza: la extracción de la muestra se debe
CABELLO realizar con una pinza de depilar sobre el área
afectada, de preferencia desde el bulbo piloso.
En casos de Tiña inflamatoria o Querion de Celso, se
recomienda el uso de cinta adhesiva.

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 Las muestras obtenidas en estas son la biopsia en su
PIEL mayoría, las cuales son obtenidas por técnicas de
punch o mediante el uso de bisturí. Se recomienda
dividir a muestra en dos una para un estudio
histopatológico y el otro para un examen en fresco.
Para este último, muestra se debe de conservar en
solución salina isotónica.
Se debe selecciona el área de la mucosa afectada:
faringe, lengua, cavidad oral, genitales, etc. Para ello
se recomienda el uso, con mucho cuidado, de curetas
o cuchillas estériles. Estas muestras deben ser
MUCOSA dividirlas para un examen directo y otro para el cultivo
en diferentes medios. Asimismo, solo es recomendado
el uso de hisopos si se va a realizar una siembra de
estos. Y no en los exámenes directos y que las fibras
del algodón nos pueden hacer pensar en un falso
positivo.
Se puede obtener mediante un esputo natural o
ESPUTO mediante expectoración inducida con nebulizador de
solución salina hipertónica.

1.3. EXAMENES EN FRESCO O EXÁMENES DIRECTOS

SOLUCION ACUOSA DE KOH AL 10%

Las muestras de tejidos queratinizados, se deben de procesar mediante la adición de una
o dos gotas de KOH al 10% (concentración más utilizada), esta permite la digestión de
material proteico y la visualización de estructuras fúngicas.

1.4. CULTIVOS

MEDIO DEXTROSA SABOURAUND

Este medio es útil para reactivar cepas de hongos en medios ligeramente deshidratados o
bien para primeros cultivos de levaduras.

MYCOSEL GEL
Medio altamente selectivo para el aislamiento de hongos patógenos a partir de materiales
con flora mixta de otros hongos y bacterias, asimismo, este compuesto por antibióticos
como la cicloheximida y cloranfenicol.

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II. PRÁCTICA DE LABORATORIO I (miércoles 13 de marzo)

Los objetivos de la práctica fueron:

 Aprender acerca de la obtención de las diferentes muestras.

 Realizar una prueba directa de muestra de cabello y uña.
 Diferenciar las estructuras fúngicas vistas microscópicamente.
 Cultivar las muestras en medio Sabouraud y medio Mycosel en ambas muestras.
 Manipular correctamente los materiales para siembra conservando la bioseguridad
requerida.

2.1. MATERIALES Y MÉTODOS

Los materiales utilizados fueron:

- Muestra de cabello y raspado de uña en placa preti

- KOH 10%
- Agar Sabouraud y Mycosel
- Asa de siembra
- Mechero
- Laminas y laminillas
- Microscopio

2.2. PROCEDIMIENTOS

Se trabajo con dos muestras: cabello (#4) y uña (#3). Ambas muestras se observaron por
grupo en un examen directo, lo visto se reporto como: positivo o negativo. Seguido a
ello, se procedió a cultivar la muestra en dos agares por muestra, un agar de Sabouraud
y el otro de Mycosel. La practica cultivo en el cultivo. Se espera ver resultado la siguiente
clase.

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Los pasos realizados fueron:

1 Examen directo 2 Cultivo

Aplicar 1 gt de KOH 10% en

lamina Esterilización de asa de siembra

Humedecer el asa de siembra en

el AGAR (Sabouraud/Mycosel)

Esterilización de asa de siembra

Humedecer el asa de siembra en

el KOH puesta en lamina
Extracción de la muestra
(cabello/uña)

Extracción de la muestra
(cabello/uña)

Colocar muestra en lamina y

encima una lamina cubre objeto Cultivar en Agar Sabouraud
y en Agar Mycosel
Incubar 37ºC

Se cultivó las muestras que se

Vista al microscopio observó elementos micóticos
(hifas, pseudohifas, levaduras) en
examen directo.

RESULTADOS 7
2.3. RESULTADOS

EXAMEN DIRECTO
Muestra de uña #3 Muestra de cabello #4
Presencia de abundantes hifas Presencia de artrosporas endotrix

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III. PRÁCTICA DE LABORATORIO II (miércoles 20 de marzo)

Los objetivos de la práctica fueron:

 Observar macroscópicamente el crecimiento de hongos en los cultivos

Sabouraud y Mycosel.
 Observar microscópicamente el crecimiento para diferenciar el tipo de hongo y
descartar la contaminación de este.

3.1. MATERIALES Y MÉTODOS

Los materiales utilizados fueron:

- Cultivos
- KOH 10%
- Asa de siembra
- Mechero
- Laminas y laminillas
- Microscopio

3.2. PROCEDIMIENTOS

1. Se observo el crecimiento de manera macroscópica.

2. Se selecciono colonias aisladas para detección e identificación del hongo.

3.3. RESULTADOS

Lo reportado a los siete días de cultivo:

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MUESTRA MEDIO MASCROSCOPIA MICROSCOPIA
Se observa
crecimiento de
pequeñas
Medio colonias
Sabouraud bacterianas y
micóticas.

Presencia de hifas pequeñas, células

UÑA epiteliales y bacterias.
No se observa
crecimiento de
hongo, solo de
Medio bacterias.
Mycosel Medio
contaminado.

Presencia de hifas pequeñas, células

epiteliales y abundantes bacterias.

No hubo
crecimiento de
hongos, siendo
el examen
directo positivo. NO HUBO CRECIMIENTO
Medio
Sabouraud

Pelo No hubo
crecimiento de
Medio hongos, siendo
Mycosel el examen
directo positivo.
NO HUBO CRECIMIENTO

*Los medios en que no hubo crecimiento se les dejo un plazo de siete días más.
*La muestra de uña se volvió a cultivar en otro medio sabouraud y mycosel.

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IV. PRÁCTICA DE LABORATORIO III (miércoles 27 de marzo)

Los objetivos de la práctica fueron:

 Observar macroscópicamente el crecimiento de hongos en los cultivos

Sabouraud y Mycosel.
 Observar microscópicamente el crecimiento para diferenciar hongos de
bacterias.

4.1. MATERIALES Y MÉTODOS

Los materiales utilizados fueron:

- Cultivos
- KOH 10%
- Asa de siembra
- Mechero
- Laminas y laminillas
- Microscopio

4.2. PROCEDIMIENTOS

1. Se observo el crecimiento de manera macroscópica.

2. Se selecciono colonias aisladas para detección e identificación del hongo.

4.3. RESULTADOS

Lo reportado a los quince días de cultivo:

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MUESTRA MEDIO MASCROSCOPIA MICROSCOPIA

Medio
Sabouraud

UÑA Pocas hifas, algunas células epiteliales.

Medio
Mycosel

Presencia de abundante hifas.

No hubo crecimiento

Medio
Sabouraud
NO HUBO CRECIMIENTO

No hubo crecimiento
Pelo
Medio
Mycosel
NO HUBO CRECIMIENTO

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V. DISCUSIÓN Y CONCLUSIÓN

 Es necesario tener en cuenta la correcta toma de muestra y la posterior preparación

de este para evitar tener falsos negativos/positivos.
 El cultivo de cabello debe ser con el bulbo piloso, ya que la tinea capitis se da en
el cuero cabelludo. Así mismo, la uña debe haber sido cortada del lecho ungueal.

 A la semana de cultivo los medios estaban contaminados con abundantes

bacterias, causa desconocida, pero estos se debieron cultivar en una campana de
flujo laminar.
 En los cultivos de uña se observó hifas pero no hubo un buen crecimiento de los
hongos en ninguno de los medios, posiblemente por poca cantidad de muestra,
medio en mal estado o mal cultivo.

 A los quince días de cultivo proliferación de abundantes bacterias y algunas hifas

en muestra de uña. En la muestra de cabello no hubo crecimiento.

 Posible muestra de uña (#3) mal tomada, otro grupo que cultivo misma muestra
no creció.

 La muestra de cabello (#4) no hubo crecimiento en absoluto, otro grupo lo cultivo

y creció:

Muestra de cabello (#4)

Presencia de clamidiosporas

 El punto de discusión de mayor relevancia en esta práctica fue la contaminación

bacteriana de los medios y el no crecimiento de los hongos.
Basados en un informe “ANÀLISIS DE LAS FUENTES DE CONTAMINACIÒN
EN UN LABORATORIO”, los posibles contaminantes de los cultivos fueron:
- La muestra contenía bacterias, por la constante manipulación de esta.
- La ropa, piel o guantes del operario.
- El aire del laboratorio.
- Mala esterilización del asa de siembra.
- Los medios estaban vencidos.

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VI. BILIOGRÁFIA
 Bonifaz.Micologia medica Basica.Quinta Edición. Capítulo 4. Procedimientos y
técnicas de diagnóstico.Pág.47-60
 Francisco Aguilar. Analisis de las fuentes de contaminación en un laboratorio de
cultivo de tejidos. Instituto tecnológico de costa rica. 2000
 Mycosel Agar. Procedimientos de control de Calidad.enero 2007.Disponible en:
https://www.bd.com/europe/regulatory/Assets/IFU/US/L007479(08)(0107)_ES.
pdf

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