“DETERMINACIÓN EXPERIMENTAL DE LAS CONDICIONES DE OPERACIÓN

PARA EL PROCESO DE HIDRÓLISIS ENZIMÁTICA DE ALMIDÓN DE YUCA

NATIVA DE LA REGIÓN AMAZÓNICA EN LA CIUDAD DE LETICIA

Universidad Nacional de Colombia Facultad de Ingeniería Departamento de

Ingeniería Química Bogotá D.C. 2010”

Juan P. Escamilla, Paula T. Fernández, Karen B. Guerrero, Ana X. Salamanca

rasjuan_93@hotmail.com , paula.fernandez@estudiantes.uamerica.edu.co,
karen.guerrero@ estudiantes.uamerica.edu.co
ana.salamanca@estudiantes.uamerica.edu.co

INFORME DE ARTICULO CIENTIFICO

Departamento de Ingeniería Química, Universidad de América, Bogotá, Colombia

FUENTE: conformacionales de la enzima, pero

por otra parte se hace indispensable
MATRIZ:
el uso de un biocatalizador por
factores como la alta retención de
Matriz de Alginato de Calcio
actividad por defecto de la baja tasa
Para el sistema de inmovilización, se de transferencia y la perdida de
eligió el método de atrapamiento en enzima por efecto de la geométrica
resina polimérica mediante la matriz esférica que limita la presencia de
de alginato de calcio, porque ofrece sustrato en el núcleo por efecto del
que el procedimiento sea aún más espesor de la capa.
fácil, además ofrece una alta
El estudio que se realizado, lo que
estabilidad de la enzima inmovilizada
busco fue manipular la geometría y
y no altera las características
las características físicas de la matriz El método de inmovilización utilizado
de inmovilización. se preparó en dos etapas:

Como se muestra en la figura No.1 la

PRIMERA ETAPA SEGUNDA ETAPA
matriz de inmovilización tipo coraza
núcleo AZE, consta de una serie de Cubrimiento del núcleo
con una lámina de
biocatalizadores que se acoplan alginato de calcio,
Producción de un material zeolítico y
geométricamente a él. núcleo compuesto enzima (AZE). Para esta
por 3% (w/v) de lámina la solución utilizó
alginato de calcio una concentración de
(Merck para enzima y alginato de
En este se introdujo: inmovilización)geli calcio del 25% y del 3%
ficadas en 0,5 M (w/v) respectivamente,
por su parte tres (3)
CaCl durante 168
 Núcleo inerte de alginato de calcio horas utilizando la
concentraciones
zeolita fueron probadas
de
metodología para las enzimas GC626
(Merck para inmovilización) que es propuesta por (α 57amilasa) y G-
(Serrato B 2004). ZYMER 480
recubierto con una lámina de (glucoamilasa) que
fueron de 0%,1%,2% y
alginato de calcio-material zeolítico 3% (w/v) en 50 mL de
solución la cual fue
que contiene la enzima. llevada a volumen con
agua desionizada y
esterilizada.

Tabla No.1 Etapas del método de

inmovilización.

Figura No.1 Método de inmovilización

de tipo coraza núcleo AZE.

Figura No.2 Metodología de

inmovilización, biocatalizador tipo coraza
núcleo AZE.
El proceso de recubrimiento con de la grupo de enzimas que degradan el
lámina AZE, se llevó al cabo almidón, los glicógenos y los
mediante la inmersión del núcleo en oligosacáridos de manera aleatoria
la solución AZE a cada concentración liberando grupos de sacáridos de
de zeolita y enzima (AIC0A, AIC1A, menor peso molecular.
AIC2A, AIC3A, AIC0G, AIC1G,
AIC2G, AIC3G), posteriormente el
núcleo esférico recubierto es
 α amilasas: La α amilasa es una
introducido en una solución de CaCl
de las más importantes y
al 0,5 M por un periodo de 15 minutos
populares amilasas de la
donde la lámina es finalmente
industria, esta se encuentra
gelificada. Con el fin de mantener el
distribuida a lo largo del reino
biocatalizador hidratado y en
animal, microbiano y de las
condiciones de máxima esterilidad, el
plantas. Comercialmente se
catalizador coraza-núcleo AZE es
produce extracelularmente por
introducido en una solución de buffer
medio de varios microorganismos
de acetato al 0.05 M que contiene
como Aspergillus niger, A. oryzae,
0.0006 M de CaCl2, debidamente
Bacillus amyloliquefaciens,
clasificadas y almacenados a 4 °C. [1]
Bacillus lichemiformis, Bacillus
stearothermophilus, los cuales
ENZIMA:
son fácil manipulables tanto en
Amilasa de la familia de las sus condiciones de cultivo como
hidrolasas: Catalizan las reacciones en sus características genéticas,
de hidrólisis del almidón son ofreciendo así una diversa serie
proteínas. Cumplen con una función de condiciones que le
específica dentro del metabolismo. proporcionan a las enzimas
Estas están compuestas por cadenas características funcionales
o ensambles de polipéptidos que específicas como los rangos de
poseen una actividad catalítica en pH y temperatura.
forma nativa. Las amilasas son el
 un ritmo menor, sin embargo la gran
ventaja que tiene frente a sus
 Glucoamilasas: Esta amilasa
homologas es la de tener la
producida por un hongo fue la
capacidad de transformar el almidón
tercera enzima amilolítica
completamente a glucosa.
descubierta después de la α y la
β amilasa. INMOVILIZACION
ENZIMA
ENZIMATICA
Durante el proceso de
inmovilización de
enzimas por adsorción
FUNCION:
no covalente sobre un
soporte, se presentan
La finalidad de la inmovilización cambios significativos del
enzimática es la producción de microambiente sobre el
cual la enzima actúa, lo
azúcares fermentables a partir de
que ocasiona una alta
almidón de yuca amazónica nativa en Inmovilización por solvatación que tienen
un proceso en el cual se confina o Adsorción lugar entre las moléculas
enzimáticas y el solvente
localiza a la enzima en una región
que las rodea. Estas
definida del espacio, para dar lugar a fuerzas nativas que
una forma insoluble que retiene su mantienen la solvatación
pueden llegar a ser
actividad catalítica permitiendo su
perturbadas provocando
reutilización varias veces. Existen un proceso de desorción
varios métodos de inmovilización. del soporte sobre la
enzima
cataliza la hidrólisis sucesiva de los
La inmovilización
enlaces α 1-4 de los glucanos finales covalente de la enzima
no reducidos, lo que produce la β-D- en un soporte puede
tener efectos físicos y/o
glucosa como un producto de la
Inmovilización por químicos que modifican
hidrólisis lo que indica que es una Enlaces covalentes la enzima y dependen de
enzima de tipo invertida que presenta la naturaleza física y/o
química del soporte
una exo-acción. Este tipo de enzima
usado. En general los
también hidroliza los enlaces α 1-6 a enlaces covalentes
 tienen como una membrana de (1-
característica general la 100 µm.)
irreversibilidad de los Estos métodos utilizan
enlaces enzima-soporte, precursores compatibles
con las moléculas
la rigidez conformacional enzimáticas formando la
de la enzima debido al membrana de
atrapamiento durante el
ataque multipunto y la Atrapamiento
proceso de
alteración de la entidad inmovilización lo que le
confiere a la enzima un
química producto de las estado de retención
modificación químicas física o de interacción de
enlaces covalente.
experimentadas por la
Tabla No.2 Clases de inmovilización.
reacción, estas
características alteran el
comportamiento 1. Inmovilización por Adsorción. El
enzimático en sectores
procedimiento se realiza al llevar
como la actividad, la
selectividad y la
una solución de enzima en
estabilidad del contacto con una superficie
biocatalizador. Por otro
adsorbente porosa, durante ese
lado las variables críticas
que podrían favoreces el
instante la enzima se une al
comportamiento de la soporte por presencia de diferentes
enzima inmovilizada son:
interacciones físicas y químicas
tiempo de reacción entre
la enzima y el soporte,
como: fuerzas iónicas, fuerza de
valores de pH, van der Waals y puentes de
temperatura, buffer
hidrogeno, (Doran 1998;
usado e inhibitorios
presentes en el medio
Katchalski-Katzir 1993) lo que
Consiste en la promueve la interacción entre
preparación de una enzima - interface sólida – sustrato
proporción de enzimas
durante la reacción.
que pueden estar en
Encapsulamiento estado disuelto o
de enzimas liofilizado y son
enclaustradas física o
químicamente con 2. Inmovilización por enlaces
esferas semipermeables
covalentes. fundamenta su trabajo
de polímero que poseen
en la formación de fuertes enlaces
 covalentes entre la enzima y el
soporte. En general los enlaces
4. Atrapamiento. consiste en el
covalentes son formados por la
confinamiento de las enzimas
reacción química entre un residuo
sobre una matriz en la cual los
de amino acido (AAR) localizado
componentes del catalizador han
en la superficie de la enzima y una
sido dispersados (enzimas
función activa que es unida a la
solubles o insolubles) en un medio
superficie del soporte.
fluido (solución polimérica
generalmente) generando una
mezcla soluble que por acción de
3. Encapsulamiento de enzimas.
un precursor como la irradiación, la
Consiste en la en la formación de
foto activación o la iniciación
un tipo de membrana física en
química, formando una membrana
forma de barrera alrededor de una
permeable que captura las
preparación enzimática y se
enzimas de manera química o
distingue del método de
física.
atrapamiento por el tipo de
encapsulamiento realizado y el
numero simultaneo de enzimas
retenidas.
VENTAJAS Y DESVENTAJAS:

VENTAJAS DESVENTAJAS
 Fácil extracción de la enzima  Problemas de transferencia de
del producto final. masa debido al diámetro de
 Posible utilización en sistemas poro o al tamaño de la
continuos. partícula.
 Reutilización del biocatalizador.  Disminución en la actividad
 Mayor concentración de enzima catalítica.
por unidad de volumen.  Posible alteración de la
 Mayor resistencia a las conformación de la enzima
condiciones de operación (pH, respecto a su estado natural.
temperatura, concentración de  La gran heterogeneidad del
sustrato, concentración de sistema enzima -soporte donde
producto). puede existir distintas
 Mayor control del proceso. fracciones de proteína
 Aumento de la estabilidad del inmovilizadas con un diferente
biocatalizador. número de uniones al soporte.

 Disminución de los costos de  La preparación del

proceso. biocatalizador es más costosa

 Posibilidad de utilizar distintas que con la enzima libre.

configuraciones y modos de  Diferentes gradientes de
producción (por lotes, continuo, concentración del sustrato en la
etc.) partícula inmovilizada.
  VENTAJAS Y DESVENTAJAS DE INMOVILIZACION POR ADSORCION:

TIPO DE FACTORES QUE

MATERIAL AFECTAN LA VENTAJAS DESVENTAJAS
UTILIZADO INMOVILIZACION
 Soportes  pH del medio  Fácil  La estabilización
inorgánicos (control de la preparación. de los
 Minerales carga de la  Económico. parámetros que
 Resinas de superficie).  No hay controlan la
intercambio  Fuerza iónica. cambios en la adsorción.
iónico  Diámetro de especificidad  Los derivados
 Polímeros poro. enzimática. obtenidos son
neutrales  Presencia de  Los derivados poco estables
 Caolinita iones. son estables desde el punto de

 Bentonita  Solventes en en medios de vista mecánico.

 Gel de el medio. trabajo con  La unión al

fosfato de bajo contenido soporte es débil.

calcio de agua.  Altas

 Vidrio poroso concentraciones

 Alúmina de sal o sustrato

 Carbón pueden generar

 Sílica / Sílica desorción de la

gel proteína.
 Cambios
conformacionales
de la estructura
de las proteínas.
  VENTAJAS Y DESVENTAJAS DE INMOVILIZACION POR
ATRAPAMIENTO:

FACTORES QUE
TIPO DE MATERIAL
AFECTAN LA VENTAJAS DESVENTAJAS
UTILIZADO
INMOVILIZACION
 Pre polímeros  Control de las  Mayor resistencia  Sustrato con
fotoentrecruzab condiciones de de la enzima a las moléculas de bajo
les. polimerización. diferencias de peso molecular.
 Poliacrilamida.  Concentración calor.  Problemas por
 Colágeno. del polímero en  Mayor resistencia resistencia a la
 Alginato. la solución. de la enzima a las difusión a través
 Carraginato O  Control de pH. gradientes de de la matriz que
resina de  Control de concentración. repercute en
poliuretano. temperatura.  Mayor volumen de diferencias
 Concentración enzimas por cinéticas.
de los volumen de  Reacción del
solventes matriz. soporte con el
utilizados.  Reutilización del medio utilizado.
 Conocimiento biocatalizador.  Disminución de la
del grupo  Aumento de vida actividad
activo con el fin media de la enzimática por
de no afectar la enzima. unidad.
proteína.  La enzima no  Precipitación de la
sufre ninguna proteína por efecto
alteración en su del solvente.
estructura.
[1] Tesis DETERMINACIÓN EXPERIMENTAL DE LAS CONDICIONES DE
OPERACIÓN PARA EL PROCESO DE HIDRÓLISIS ENZIMÁTICA DE ALMIDÓN
DE YUCA NATIVA DE LA REGIÓN AMAZÓNICA EN LA CIUDAD DE LETICIA,
WILHER ANDRÉS VILLADA PINILLA Ingeniero Químico Universidad Nacional de
Colombia Bogotá D.C. 2010;
http://www.bdigital.unal.edu.co/3882/1/293752.2010.pdf