MANUAL DE TRABAJO DE LA CALPROTECTINA

El procedimiento del análisis consta de tres partes:

1º- Extracción de la muestra de heces.

Para ello cogemos el tubo del kit de preparación de muestras fecales, removemos la
muestra y colocamos un poco en el centro de la tapa inferior (Sample chamber) con
ayuda de la paletina que trae el kit. Ponemos dicha tapa en la parte inferior del tubo y le
quitamos la aleta de agarre, puesto que ya no es necesaria.
Destapamos el tubo por la parte superior y añadimos 4 ml. de tampón de extracción, lo
volvemos a tapar y lo mezclamos en el vortex durante un minuto (que quede todo
homogéneo). Por último separamos en un tubo 1 ml. de esta mezcla, la tapamos y la
centrifugamos 5 minutos a 3000 rpm.

2º- Procesamiento de las muestras.

Realizar una dilución de los extractos de las muestras de heces a 1:16, utilizando el
tampón de extracción (por ej. 20 microL de muestra y 300 microL. de tampón de
extracción) y mezclarlos en el vortex. Según el manual del kit hay que volver a
centrifugar la dilución resultante durante 5 min. a 3000 rpm
NOTA: Se realizaron pruebas de las mismas muestras centrifugas una sola vez y
centrifugada dos veces como manda el manual y los resultados eran los mismos, por lo
que centrifugar por segunda vez quizás no sea necesario.

3º- Análisis de flujo lateral/lectura.

Encender la máquina presionando en la tecla enter (la del centro) durante unos
segundos, dejar que realice el calibrado y autotest. Entrar en la opción escanear (la
primera), seleccionar el tipo de test, (por lo general CAL 720), seleccionar el ID de
usuario y poner el que proceda (por defecto es user ID 01), seleccionar luego el sample
ID e identificar la muestra que vamos a trabajar, le damos a siguiente cuando hayamos
terminado estos pasos.
En la siguiente pantalla verificamos que es correcto el número de lote del kit y el ID del
producto que dese ser: LF-CAL. Una vez verificado le damos a la opción SI.
NOTA: Si el lote no fuese el correcto le damos a la opción NO y nos pedirá que
pongamos la tarjeta RFDI para que lea los datos y coja el número de lote correcto, se la
ponemos encima al lector de tarjetas y verificamos que carga los datos correctos.
Por último cogemos un cartucho de procaltectina, lo identificamos apuntando el número
de la muestra y lo introducimos en la lámina de aluminio lateral de la máquina dejando
pocillo de dispensación a la derecha. Le dispensamos 60 microL.de la muestra y le
damos a iniciar, en este momento la máquina empezará a contar hacia atrás los 720 Seg.
que dura la incubación y nos dará el resultado al final.
NOTA: Una vez le damos a iniciar la máquina empieza a contar y nos pide que
metamos el cartucho, debemos esperar 30 seg y luego lo metemos, esto es parar evitar la
contaminación del lector.

INFORMACION ADICIONAL:

Para realizar un trabajo más rápido, podemos dispensar todas las muestras a la vez en
sus cartuchos correspondientes y realizar la incubación externa, esperar los 12 min. de
dicha incubación y luego introducirlos en el lector uno a uno para que los lea y nos de
los resultados. Para ello cuando metamos los cartuchos en el lector sólo debemos elegir
en el tipo de test la opción CAL 0 e identificar cada muestra, así cuando le demos a
iniciar automáticamente leerá la muestra y nos dará el resultado.

A continuación tenemos esquematizado el proceso descrito anteriormente.

 ESQUEMA DE TRABAJO DE LA
CALPROTECTINA

EXTRACCION DE LA MUESTRA.

AÑADIR 4 ml DE TAMPON SEPARADOR Y PASAR

POR EL VORTEX DURANTE 1 MIN.

SEPARAR 1 ml DE LA MEZCLA Y CENTRIFUGAR

DURANTE 5 MIN. A 3000 RPM.

REALIZAR UNA DILUCION DE LOS EXTRACTOS

DE LA MUESTRA CENTRIFUGADA A 1:16 (20
MICROL. DE MUESTRA+ 300 MICROL. DE TAMPON
SEPARADOR).

PASAR POR EL VORTEX 30 SEG. Y CENTRIFUGAR

DURANTE 5 MIN. A 3000 RPM.

ENCENDER LA MAQUINA Y DEJAR QUE REALICE

EL AUTO TEST, ENTRAR EN ESCANEAR Y ELEGIR
LA OPCION CAL 720.

PONER LA ID DEL USUARIO, LA ID DE LA

MUESTRA Y VERIFICAR QUE EL LOTE ES
CORRECTO, SI NO ES ASI CARGARLO CON LA
TARJETA QUE VIENE EN EL KIT.
 VERIFICAR QUE LA ID DEL PRODUCTO ES LA
CORRECTA
(LF-CAL PARA LA CALPROTECTINA).

COLOCAR EL CARTUCHO EN LA MAQUINA CON

EL POCILLO DE DISPENSACION A LA DERECHA,
DISPENSAR 60 MICROL. DE LA MUESTRA, DARLE
A INICIAR Y PASADOS 30 SEG. METER EL
CARTUCHO.

CUANDO TERMINE HARA LA MEDICION Y NOS

DARA EL RESULTADO EN PANTALLA.