Professional Documents
Culture Documents
Ingeniería en biotecnología
Ingeniería en Bioprocesos
6B
Presentado por:
1. METODOLOGIA UPSTREAM
Figura 1: Exopolisacáridos presentes como envoltura celular en Nostoc sp. LAUN015 (tinción
negativa, el polisacárido se observa como la estructura clara).
4.1.1 Fermentación
Para la fermentación a etanol se emplea la levadura Saccharomyces cerevisiae.
La levadura se mantiene en el cepario en medio sólido agar Wort. El inóculo se
cultiva en volumen de 100 mL en Erlenmeyer de 500 mL, medio YM compuesto
por extracto de levadura 3 g/L, extracto de malta 3 g/L, triptosa 5 g/L y glucosa
D(+) 10g/L, pH:5.0 esterilizado en un autoclave a 121°C, 17 psi, durante 25
minutos. La temperatura de cultivo fue 32°C, agitación de 100 rpm durante 24 h
hasta lograr una concentración de 8*106 cel/mL y viabilidad de 94% (determinada
por tinción con azul de metileno de concentración 2mg/mL).
Para el crecimiento de la levadura se inocula 10%v/v en 100mL de medio YM en
Erlenmeyer de 500 mL, pH: 5.0, y agitación de 100 rpm durante 10 h (final de la
fase exponencial de crecimiento) hasta una concentración celular de 1.28*108
cel/mL y viabilidad de 98%. La biomasa se recolectó de forma estéril y se
centrifuga a 1789g durante 10 minutos, el sobrenadante se descartó y la biomasa
recolectada es inoculada en 95mL en el medio conformado por el producto de la
hidrolisis y extracto de levadura 1 g/L, a pH 5.05 en botellas Schott-Duran
modificadas de 100mL.
La fermentación se llevó a cabo en las botellas selladas herméticamente, sin
adición de aire, y se tomaron alícuotas de 1mL para monitorear el crecimiento de
la levadura, y las concentraciones de glucosa y etanol. El crecimiento de la
levadura se determina por conteo celular en una cámara y la viabilidad se
determinó por tinción con azul de metileno. Los azúcares presentes en el sustrato
y el producto se determinaron por HPLC detector IR empleando una columna,
temperatura 70°C, flujo 0.5ml/min, fase móvil agua destilada y desionizada. Todos
los ensayos se realizan por triplicado.
4.1.2 Filtración
La recuperación de la biomasa se realiza mediante filtración al vacío. La filtración
se realiza con filtros cualitativos de papel, estos filtros son suficientes para la
retención de la microalga ya que su tamaño es superior a 100 µm y esto facilita la
filtración de estas, el filtrado obtenido de este procedimiento presenta una
absorbancia muy cercana a cero lo que indica que cerca del total de las
microalgas fueron retenidas en el filtro. Los filtros con la biomasa retenida son
luego ingresados a un horno a 65 °C para su secado.
3.2 DIAGRAMA UPSTREAM
Producción de
bioetanol.
5. PROCESO DOWNSTREAM BAJO EL ESQUEMA RIPP.
Se emplea el fotobioreactor con circuito interno de airlifting, con una entrada para
aire/CO2 en el centro del mismo justo inferior a la sección del Upriser, esta sección
es de ascenso de la fase gaseosa dentro del reactor y a la vez genera
sustentación a que ascienda la fase acuosa, es un cilindro hueco, concéntrico al
cilindro principal del reactor, el Downcomer es la sección externa al Riser y en este
volumen tanto la fase gaseosa como acuosa tienen un patrón de flujo
descendente. El ingreso de gas se realiza utilizando el compresor de aire y tanque
de dióxido de carbono de una Columna de Absorción de Gas así como los
flujómetros y válvulas de esta para controlar las cantidades de ingreso de aire.
Tanto los flujos del compresor de aire como los del tanque de CO2, pasan primero
por un flujometro independiente para definir el caudal de estos gases que luego se
mezclan para ingresar al fotobiorreactor, que permite el escape de aire y CO 2
residuales así como oxígeno producto de la fotosíntesis.
El ingreso de aire/CO2 al fotobiorreactor se dispersa con un material poroso para
formar las burbujas de menor tamaño en la sección central del fotobiorreactor,
llamada upriser, que es la zona de flujo ascendente de las fases acuosa y
gaseosa.
El fotobiorreactor es inoculado en dos lotes distintos con cada cepa a producirse,
se agregó 0.5L de inóculo concentrado a 7 L de medio de cultivo propio para cada
cepa. La operación se realizó con un ingreso permanente de aire de 10 generado
por el compresor, más un ingreso de 2 horas por día de 2 de CO2 La iluminación
se realiza con una lámpara fluorescente de 40 W. Se realizan aproximadamente
tres mediciones por duplicado, diarias de absorbancia para determinar la
concentración, las muestras se tomaron con una jeringuilla en volúmenes de 5
mL.
4.1.2 Sensores para el control.
sensor de presión.
La presión se mide a través de un sensor de presión diferencial, instalado en la
base del reactor, conectado a una electrovál-vula ON/OFF ubicada en la tapa del
reactor. El conjunto de estos instrumentos permite controlar la presión que genera
la acumulación de gases dentro del equipo.
sensor de temperatura.
El conjunto de este sistema se compone de dos sensores de temperatura “ML35”
y un termostato. Para su funcionamiento se decide mantener por medio de la
programación de un sistema de control cerrado un rango de trabajo entre 0 a
35°C.
El uso de centrifugas aumenta en auto grado las fuerzas que actúan sobre las
partículas. Por tanto, las partículas que no se precipitan o lo hacen con mucha
lentitud en precipitadores por gravedad, casi siempre se pueden separar de los
fluidos por medio de fuerzas centrífugas. Estas fuerzas de precipitación de gran
magnitud permiten obtener velocidades prácticas con partículas mucho más
pequeñas que los precipitadores por gravedad. Las elevadas fuerzas centrifugas
no modifican las velocidades relativas de precipitación de partículas pequeñas,
pero si contrarrestan los efectos perturbadores del movimiento browniano y de las
corrientes de convección libre.
Algunas veces, la separación por gravedad es demasiada lenta debida a la
similitud de densidades de la partícula de fluido, o las fuerzas de asociación que
mantiene unidos a los componentes, como en el caso de las emulsiones.
Las centrifugas también se usan en filtración empleando una fuerza centrífuga en
lugar de una diferencia de presión para ser que fluya la suspensión a través de un
filtro, y se acumule una torta de solidos sobre una pantalla. La torta se solidos
granulares de la suspensión se deposita en un medio de filtración sostenida en
una canastilla rotatoria, se lava y luego se “seca” haciéndolo girar. La centrifugas y
los filtros ordinarios son competitivos para la mayoría de los problemas de
separación de sólidos y líquidos.
Tacómetro.
Mide la velocidad de rotación de un motor..
CAUDALIMETRO
Mide la velocidad de rotación de un motor.
6. CONCLUSIÓN
La presente investigación cubrió los procesos básicos para la producción y
recuperación de biomasa microalgal. Dividiéndose la primera parte en operaciones
de producción de biomasa (upstream). Y la siguiente en procesos de recuperación
(downstream).
El rendimiento de producción de etanol obtenido empleando como sustrato los
polisacáridos presentes en la microalga Nostoc sp. LAUN015 fue buena. La cepa
Nostoc sp. LAUN015 al ser cultivada en las condiciones evaluadas durante este
estudio, expresa durante el crecimiento una capa mucilaginosa como polisacárido
extracelular que recubre el filamento celular y permanece íntimamente adherida a
él durante todo el cultivo.
La productividad estimada de etanol empleando el alga Nostoc sp. LAUN015 si se
tiene como base el rendimiento obtenido en este estudio, es cercana a 9700 L
etanol al año y corresponde a 2 y 5 veces la productividad obtenida para cultivos
como caña de azúcar y maíz, respectivamente. Lo anterior podría tomarse como
un indicador de gran potencial para la generación de etanol, que se vería
incrementado positivamente en el escenario en el que se logrará una fermentación
exitosa de todos los azúcares presentes en el alga.