DAFTAR ISI

Halaman
HALAMAN SAMPUL ...……………………………………………… i
HALAMAN PENGESAHAN ...........…………………………………. ii
HALAMAN PERNYATAAN ………………………………………… iii
HALAMAN PERSEMBAHAN ……………………………………… iv
KATA PENGANTAR ………………………………………………… v
DAFTAR ISI ...………………………………………………………... vii
DAFTAR GAMBAR ………………………………………………….. x
DAFTAR TABEL ...…………………………………………………... xi
DAFTAR PERSAMAAN …………………………………………….. xii
DAFTAR LAMPIRAN ..……………………………………………… xiii
DAFTAR SINGKATAN ……………………………………………… xiv
INTISARI ……………………………………………………………... xv
ABSTRACT …………………………………………………………..... xvi

BAB I PENDAHULUAN…………………………………………….. 1
A. Latar Belakang Penelitian ...…………………………………… 1
1. Rumusan Masalah ……………………….………………… 4
2. Keaslian Penelitian ………………………………………... 5
3. Urgensi Penelitian …………………………………………. 6
B. Tujuan Penelitian ……………………………………………… 6

BAB II TINJAUAN PUSTAKA…………………………………….. 7

A. Tinjauan Pustaka………………………………………………. 7
1. Diabetes Mellitus ………………………………………… 7
2. Insulin …………………………………………………….. 11
3. Nanopartikel ……………………………………………… 14

vii
 4. Kitosan …………………………………………………… 23
5. Pektin ……………………………………………………... 27
6. Optimasi Formula ………………………………………… 29
B. Landasan Teori ...….…………………………………………... 33
C. Hipotesis ...…………………………………………………….. 36

BAB III METODE PENELITIAN……….………………………… 37

A. Bahan Penelitian …….………………….…..................………. 37
B. Alat Penelitian ……...…………………………………………. 37
C. Jalannya Penelitian ……..……………………………………... 38
1. Preparasi Formula Nanopartikel Insulin…………………… 38
a. Percobaan Pendahuluan ……………………………….. 38
b. Optimasi Formula Nanopartikel Insulin dengan 39
2
Rancangan Faktorial 2 ……………..………………….
c. Karakterisasi Efisiensi Enkapsulasi, Ukuran Partikel 41
dan Indeks Polidispersitas sebagai Respon Optimasi
Formula dengan Rancangan Faktorial 22.........................
1) Karakterisasi Efisiensi Enkapsulasi ……..………… 41
a) Pembuatan Kurva Baku Bovine Serum Albumin 41
(BSA) ………………………………………….
b) Verifikasi Metode Analisis …………………… 41
c) Pengukuran Efisiensi Enkapsulasi …...……….. 43
2) Karakterisasi Ukuran Partikel ……………………... 44
3) Karakterisasi Indeks Polidispersitas ………………. 44
d. Penentuan Formula Optimum Nanopartikel Insulin …... 45
e. Verifikasi Formula Optimum Nanopartikel Insulin …... 46
2. Liofilisasi Formula Optimum Nanopartikel Insulin ………. 46
3. Karakterisasi Formula Optimum Nanopartikel Insulin …… 46
a. Pengukuran Zeta Potensial Nanopartikel Insulin ..…….. 47
b. Pemeriksaan Morfologi Nanopartikel Insulin..………… 47
c. Karakterisasi Profil Spektra Fourier Transform Infrared 48

viii
 (FTIR) …………………………………………………..
d. Uji Pelepasan Insulin secara In Vitro …………….......... 48
D. Definisi Operasional Variabel ………………………………… 49
E. Analisis Hasil ………………………………………………….. 50
F. Skema Jalannya Penelitian ……………………………………. 52

BAB IV HASIL PENELITIAN DAN PEMBAHASAN …………… 53

A. Preparasi Formula Nanopartikel Insulin ………………………. 53
1. Percobaan Pendahuluan …………………………………… 53
a. Pengamatan Visual …………………………………… 53
b. Pengukuran Turbiditas ……………………………...... 56
2. Optimasi Formula Nanopartikel Insulin dengan Rancangan 57
2
Faktorial 2 ………………………………………………...
a. Karakterisasi Efisiensi Enkapsulasi ……...…………… 57
1) Pembuatan Kurva Baku Bovine Serum Albumin 58
(BSA) ………………………………………………
2) Verifikasi Metode Analisis ………………………... 59
3) Hasil Pengukuran Efisiensi Enkapsulasi ………….. 61
b. Karakterisasi Ukuran Partikel ………………………… 63
c. Karakterisasi Indeks Polidispersitas ….………………. 66
3. Penentuan Formula Optimum Nanopartikel Insulin.............. 68
4. Verifikasi Formula Optimum Nanopartikel Insulin ………. 72
B. Liofilisasi Formula Optimum Nanopartikel Insulin……...……. 74
C. Karakterisasi Formula Optimum Nanopartikel Insulin …...…... 75
1. Zeta Potensial ……………………………………………… 75
2. Morfologi Nanopartikel Insulin …………………………… 77
3. Profil Spektra Fourier Transform Infra Red (FTIR) ……… 79
4. Uji Pelepasan Insulin secara In Vitro ……………………... 85

BAB V KESIMPULAN DAN SARAN ……………………………… 92

A. Kesimpulan ……………………………………………………. 92

ix
 B. Saran …………………………………………………………... 92

DAFTAR PUSTAKA ........................................................................... 93

LAMPIRAN ........................................................................................... 100
RINGKASAN …………………………………………….…………… 155
SUMMARY …………………………………………………..………… 156
NASKAH PUBLIKASI ……………………………………..………… 157

x
 DAFTAR GAMBAR

Halaman
Gambar 1. Struktur insulin ……………………………………….. 12
Gambar 2. Tipe biodegradabel nanopartikel …...……………….... 16
Gambar 3. Skema metode gelasi ionik …………………………… 22
Gambar 4. Struktur molekul kitosan ……………………………... 24
Gambar 5. Struktur molekul pektin ………………………………. 28
Gambar 6. Skema penelitian ……………………………………... 52
Gambar 7. Hasil pengamatan visual formula nanopartikel insulin . 54
Gambar 8. Grafik persentasi transmitan formula nanopartikel
56
insulin ...……………………………………………….
Gambar 9. Kurva baku BSA ……………………………………... 58
Gambar 10. Contour plot respon persentasi efisiensi enkapsulasi … 62
Gambar 11. Contour plot respon ukuran partikel .………………… 65
Gambar 12. Contour plot respon nilai indeks polidispersitas ...…… 67
Gambar 13. Superimposed formula optimum nanopartikel insulin .. 69
Gambar 14. Contour plot desirability formula optimum
70
nanopartikel insulin ……………………………….......
Gambar 15. Serbuk kasar nanopartikel insulin hasil freeze drying ... 74
Gambar 16. Mikrofotograf hasil TEM dan SEM nanopartikel
77
insulin …………………………………………………
Gambar 17. Ilustrasi pembentukan nanopartikel insulin …............... 80
Gambar 18. Overlay spektra IR kitosan, pektin, insulin dan
81
nanopartikel insulin …………………………...............
Gambar 19. Profil pelepasan insulin dalam buffer HCl pH 1,2 dan
85
PBS pH 6,8 ……………………....................................
Gambar 20. Kurva profil pelepasan insulin model Korsmeyer-
89
Peppas …………………………………………………

xi
 DAFTAR TABEL

Halaman
Tabel 1. Karakteristik klinis pasien DM tipe 1 dan tipe 2 …………. 11
Tabel 2. Contoh rancangan percobaan Factorial Design 22 …… 31
Tabel 3. Rancangan formula nanopartikel insulin …………….…… 39
Tabel 4. Rancangan percobaan optimasi formula nanopartikel
40
insulin dengan Rancangan Faktorial 22 …………………..
Tabel 5. Pemberian nilai dan bobot pada respon optimasi formula
46
nanopartikel insulin ……………………………………….
Tabel 6. Hasil pengamatan visual orientasi formula nanopartikel
53
insulin ……………………………………………………..
Tabel 7. Hasil uji karakterisasi efisiensi enkapsulasi, ukuran
57
partikel dan indeks polidispersitas ………………………..
Tabel 8. Nilai recovery, CV, LoD dan LoQ pengukuran BSA …… 62
Tabel 9. Data perbandingan hasil prediksi dan verifikasi formula
73
optimum nanopartikel insulin …………………………….
Tabel 10. Data zeta potensial formula optimum nanopartikel insulin. 75
Tabel 11. Data interpretasi spekra IR kitosan, pektin, insulin dan
82
nanopartikel insulin ……………………………………….
Tabel 12. Data kinetika pelepasan insulin pada buffer HCl pH 1,2
88
dan PBS pH 6,8 …………………………………………..

xii
 DAFTAR PERSAMAAN

Halaman
2
Persamaan 1. Contoh persamaan rancangan faktorial 2 …………... 31
Persamaan 2. Rumus perhitungan nilai interakssi antara faktor A
32
dan faktor B ………………………………………….
Persamaan 3. Rumus perhitungan recovery ………………………... 42
Persamaan 4. Rumus perhitungan CV ……………………………... 43
Persamaan 5. Rumus perhitungan LoD ……………………………. 43
Persamaan 6. Rumus perhitungan LoQ ……………………………. 44
Persamaan 7. Rumus perhitungan efisiensi enkapsulasi …………... 44
Persamaan 8. Rumus perhitungan persen pelepasan insulin ………. 49
Persamaan 9. Persamaan regresi linier kurva baku BSA ……….…. 59
Persamaan 10. Persamaan rancangan faktorial untuk respon efisiensi
61
enkapsulasi ……………………………………..……
Persamaan 11. Persamaan rancangan faktorial untuk respon ukuran
64
partikel ……………………………………………….
Persamaan 12. Persamaan rancangan faktorial untuk respon indeks
67
polidispersitas ………………………………….…….

xiii
 DAFTAR LAMPIRAN

Halaman
Lampiran 1. Sertifikat analisis (Certificate of Analysis (COA)) ….... 100
Lampiran 2. Pembuatan kurva baku dan verifikasi metode analisis... 103
Lampiran 3. Data hasil pengukuran transmitan, efisiensi
enkapsulasi, ukuran partikel dan indeks polidispersitas 105
formula nanopartikel insulin …………...……………...
Lampiran 4. Hasil analisis ANOVA dengan Rancangan Faktorial
120
perangkat lunak Design Expert® 7.1.5 …………….…..
Lampiran 5. Data hasil verifikasi pengukuran efisiensi enkpasulasi,
ukuran partikel, dan indeks polidispersitas formula 123
optimum nanopartikel insulin ………………………...
Lampiran 6. Data hasil analisis satistik One Sample Test dengan
127
perangkat lunak OpenStat …………………………….
Lampiran 7. Output data hasil pengukuran zeta potensial formula
128
optimum nanopartikel insulin …………………………
Lampiran 8. Spektra FTIR kitosan, pektin, insulin dan nanopartikel
131
insulin …………………………………………………
Lampiran 9. Data hasil uji pelepasan insulin in vitro ……………… 133
Lampiran 10. Jumlah insulin dalam serbuk nanopartikel insulin …… 135
Lampiran 10. Data hasil analisis model kinetika pelepasan insulin
135
dengan program DDSolver ….……................................

xiv
 DAFTAR SINGKATAN

µg : Mikrogram
AIC : Akaike Information Criterion
BM : Bobot Molekul
BSA : Bovine Serum Albumin
CV : Coefficient of Variation
DD : Derajat Deasetilasi
DE : Derajat Esterifikasi
DM : Diabetes Melitus
EE : Efisiensi Enkapsulasi
FTIR : Fourier Transform Infrared
IP : Indeks Polidispersitas
IU : International Unit
LoD : Limit of Detection
LoQ : Limit of Quantification
mV : Milivolt
N : Normal
nm : Nanometer
PSA : Particle Size Analyzer
rpm : Rotation per Minute
SEM : Scanning Electron Microscopy
TEM : Transmission Electron Microscopy
UV : Ultraviolet
Vis : Visible

xv
 INTISARI

Formulasi dan Karakterisasi Nanopartikel Insulin

Menggunakan Polimer Kitosan Bobot Molekul Rendah dan Pektin
dengan Metode Gelas Ionik

Aplikasi insulin secara oral sebagai alternatif pemberian injeksi insulin,

menghadapi kendala degradasi oleh enzim protease dan permeabilitas insulin yang
buruk pada saluran gastrointestinal. Salah satu solusi yang ditawarkan adalah
formulasi insulin menjadi bentuk nanopartikel. Pada penelitian ini, nanopartikel
insulin akan diformulasi menggunakan kombinasi biopolimer kitosan bobot
molekul rendah dan pektin. Studi ini bertujuan untuk memperoleh formula
optimum nanopartikel insulin yang dapat digunakan sebagai alternatif terapi bagi
para penderita diabetes mellitus.
Pembuatan nanopartikel insulin dilakukan dengan metode Ionic Gelation
memanfaatkan interaksi polielektrolit antara (-NH3+) kitosan dan (-COO-) pektin
membentuk nanopartikel yang kompak dan muatan yang stabil. Optimasi formula
dilakukan menggunakan Rancangan Faktorial 22 dengan perangkat lunak Design
Expert® 7.15. Konsentrasi dan pH pektin dijadikan sebagai faktor, sedangkan
efisiensi enkapsulasi, ukuran partikel dan indeks polidispersitas digunakan
sebagai respon. Pada formula optimum yang diperoleh dilakukan evaluasi lanjutan
berupa penentuan zeta potensial, morfologi partikel, profil spektra FT-IR dan uji
pelepasan insulin secara in vitro.
Komposisi formula optimum dengan konsentrasi kitosan 0,05% dan pektin
0,4% (pH 5,0) memiliki rata-rata efisiensi enkapsulasi 63,59% ± 2,17, ukuran
partikel 228,3 nm ± 26,3, indeks polidispersitas 0,354 ± 0,042, zeta potensial
49,40 mV ± 11,59, partikel berbentuk bulat dan berwarna gelap, gelasi ionik antar
polimer yang telah dikonfirmasi dengan spektrofotometer FT-IR dan profil
pelepasan mengikuti model kinetika Korsmeyer-Peppas dengan mekanisme
pelepasan difusi Fickian pada media buffer HCl pH 1,2 (n = 0,363) dan (n =
0,318) pada buffer PBS pH 6,8 yang dianalisis dengan program DDSolver.

Kata kunci : nanopartikel, insulin, kitosan, pektin, gelasi ionik

xvi
 ABSTRACT

Formulation and Characterization of Insulin Nanoparticle Using

Low Molecular Weight Chitosan and Pectin Polymers
with Ionic Gelation Method

Applications insulin orally as an alternative to insulin injections, encounter

obstacles such as degradation by protease enzymes and insulin poor permeability
in the gastrointestinal tract. One solution offered is insulin formulation into the
nanoparticles form. In this study, nanoparticle formulation of insulin used
polymers combination of low molecular weight chitosan and pectin. The aim of
this study was to obtain the optimum formula of insulin nanoparticles that can be
used as an alternative therapy for patient with diabetes mellitus.
Preparation of insulin nanoparticles was carried out by ionic gelation
method utilizing polyelectrolyte interaction between (-NH3+) of chitosan and
(-COO-) of pectin to form nanoparticles that are compact and stable charge.
Formula optimization was performed using Factorial Design 22 with Design
Expert® 7.1.5 software. Concentration and pH of the pectin were used as factors,
while the entrapment efficiency, particle size and polydispersity index were used
as responses. The optimum formula was further evaluated like zeta potential,
particle morphology, profile spectra of FT-IR and in vitro release study.
The obtained optimum formula consist of chitosan of 0.05% and 0.4%
pectin (pH 5.0) with the mean entrapment efficiency of 63,59% ± 2,17, particle
size of 228,3 nm ± 26,3, polydispersity index of 0,354 ± 0,042, zeta potential
49,40 mV ± 11,59, particle round and dark, ionic gelation was confirmed by FT-
IR spectrophotometer and the release profile following the kinetics Korsmeyer-
Peppas models with Fickian diffusion release mechanism on media HCl buffer pH
1,2 (n = 0,363) and (n = 0,318) on PBS buffer pH 6,8 were analyzed by DDSolver
program.

Key Words : nanoparticle, insulin, chitosan, pectin, ionic gelation

xvii