Practica de ciclo lisogénico y litíco de fagos atemperados

Los fagos pueden clasificarse de acuerdo a su desarrollo en dos grupos: los fagos virulentos y los
fagos temperados. El desarrollo de los fagos virulentos se inicia infectando a la bacteria,
posteriormente sus genes son transcritos y traducidos para producir sus propias proteínas, las
cuales son necesarias para la replicación de su genoma, para la formación de su cápside y tallo, para
el empaquetamiento del nuevo material genético sintetizado y para la lisis bacteriana, y teniendo
como objetivo final la producción de las partículas o viriones maduros. Los fagos temperados
pueden seguir al igual que los fagos virulentos la vía lítica, pero a diferencia de éstos, pueden
convivir como profagos dentro de la bacteria. A la bacteria que posee un fago integrado se le
denomina bacteria lisógena, y al fago integrado se le denomina profago. En la vía lisogénica, como
en el caso del bacteriófago λ (lambda) que infecta a su huésped Escherichia coli, su ADN inyectado
en forma lineal es primeramente circularizado para ser posteriormente integrado al cromosoma
bacteriano. El ADN de λ integrado estará formando parte del cromosoma bacteriano. La replicación
del ADN se lleva en forma pasiva, quiere decir que, solo se replicará si se replica la del cromosoma
del huésped. Las funciones para que se desarrolle la vía lítica estarán reprimidas y por consiguiente
permanecerá en un estado de latencia. Este estado puede continuar a través de un número
indefinido de generaciones, hasta que algún disturbio ambiental induzca la señal para que el ADN
se escinda. Las funciones líticas se verán reactivadas y se producirán nuevos viriones.

El bacteriófago λ se caracteriza por estar constituido por aproximadamente la mitad de proteína y

la otra mitad de ADN. Su cromosoma la forma una molécula de ADN de doble cadena y consta de
48,502 pb, conteniendo aproximadamente 50 genes, que codifican para 5 proteínas relacionadas
con la regulación, 7 con la recombinación, 21 con la morfogénesis de la cápside y tallo, 2 con la
replicación y 2 con la lisis bacteriana. El genoma del fago λ está organizado de tal forma que presenta
grupos de genes en unidades funcionales. A la derecha del sitio attP (sitio de integración del fago),
se localizan los genes relacionados con la recombinación, posteriormente los genes relacionados a
la regulación, le siguen los de replicación, los de lisis y finalmente los genes relacionados para la
formación de la cápside y del tallo (Fig. 1). La cápside tiene una estructura icosaédrica, con un
diámetro aproximado de 0.05 μ, y unido a ésta, una proyección tubular de 0.15 μ de longitud.
Fig. 1 Estructura de fago Lambda

El bacteriófago Lambda y Phi80 son fagos temperados, es decir tienen la capacidad de multiplicarse
de dos maneras diferentes en sus células huésped. Por un lado, pueden lisarla y liberar su progenie
y por otro lado, después de la infección, el genoma del fago se puede integrar en el genoma del
huésped y la multiplicación de la célula huésped significa la multiplicación del ADN del fago en el
interior. Bajo ciertas condiciones, el ADN del fago puede cortarse y dar lugar a la multiplicación lítica
de los fagos. Las células hospedadoras que llevan el ADN del fago en el genoma se llaman
lisogénicas.

La elección de la forma de multiplicación en Lambda está regulada a nivel transcripcional. Un

sistema de 2 promotores, 3 regiones de operador y 2 proteínas represoras está involucradas, si uno
mira a un nivel simple. La proteína represora que es responsable de la lisogenia se llama represora
Lambda y es producto del gen CI de lambda. Para iniciar la lisogenia, esta proteína debe unirse a
una de las 3 regiones operadoras. Si el gen CI es un defectuoso o la región de unión para la proteína
represora (operador) es defectuosa, el fago no puede integrarse en el genoma del huésped y esta
forma de multiplicación ya no es posible. Para una integración estable del ADN del fago en el
genoma del huésped, el gen CI del ADN del fago se transcribe todo el tiempo y muchas copias de la
proteína represora están presentes en la célula lisogénica Fig. 2.
Fig 2. Esquema de integración lisogénica del fago lambda

En el siguiente experimento, se prueba la multiplicación de tres fagos diferentes en tres cepas

hospedadoras diferentes. Esto se hace colocando las cepas del hospedador en el top agar sobre
placas de agar y luego colocando las suspensiones de fagos como pequeñas gotas en la superficie
del mismo.

Los patrones de propagación del virus dependerán del fago mutante y del tipo de célula huésped.

Ustedes tendran las sigueintes celas de E. coli (con el código X,Y,Z):

JM 101, + :  sensible, no lysogen, 80 sensitiv

Hfr 726, () :  lisogénico ( immune), 80 sensitivo

JM 101, - :  resistente, 80 sensitivo

Ustedes tendran los sigueintes fagos (Con el código 1,2,3)

 cI : Mutación en el represor de 

vir (virulent) : Mutación en el operador de  = sitio de unión para el represor

80 : -similar fago con otro tipo de inmunidad y otro rango de hospedero
 • El fago mutante en el represor de lambda (lambda Cl) solo puede multiplicarse en E. coli wt
(JM 101, + E. coli sensible).
• En E. coli Hfr (E. coli lisogena), la propagación lisógena de lamdda vir se ve obstaculizada por
la proteína represora producida por el profago. El fago mutante Lambda vir es incapaz de
unir la proteína represora a su ADN. Como consecuencia, este fago es capaz de multiplicarse
en el huésped lisogénico.
• Ambos fagos lambda no pueden infectar y multiplicarse en la cepa E. coli resistente a
Lambda.
• Sólo el fago phi80 puede crecer en las tres cepas.

En el experimento, todas las cepas reciben nombres codificados y deben identificarse por sus
propiedades.

Procedimiento:

• Tomar 300 uL de la bacteria a ensayar y mezclar con 4 mL de top agar LB fundido en baño
de agua a 50°C.
• Homogenizar usando vortex y vertir rapidamente sobre una caja de agar LB procurando
que se expanda homogeneamente sobre todo el agar.
• Una vez solidificado se debe dividir la caja de Petri en 3 partes iguales y en cada una de
ellas se debe poner una gota (10 uL) de cada fago.
• Esperar a que las gotitas se sequen sobre el agar y llevar a incubar a 37°C por 24 horas.