LABORATORIO DE

MICROBIOLOGIA

“Universidad Nacional del

Callao”

TEMA:
IDENTIFICACION DE ESCHERICHIA COLI

DOCENTE:
Ing. Herrera Sánchez Sonia
ALUMNOS:
 Cruz Caro Alizon
 Perez Huaman Hans
 Romero Palomino Fiorella
 Vergara Honores Diego

[Escriba aquí]
21 de Mayo de 2019, Bellavista - Callao
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Facultad de ingeniería química

I. INTRODUCCIÓN

La familia Enterobacteriaceae está formada por más de 20 géneros bacterianos,

aproximadamente 120 especies y miles de serotipos (combinación del antígeno
somático y el flagelar). Las bacterias de esta familia, son anaerobias facultativas.
La mayor parte son de vida libre, algunas son comensales de animales
vertebrados e invertebrados. Sin embargo, también pueden ser patógenos
causantes de enfermedad.

Escherichia coli es la especie bacteriana más común de la microbiota intestinal;

se presenta como un comensal del intestino humano pocas horas después del
nacimiento. Es raro encontrar cepas comensales asociadas a enfermedad.
Empero, existen varios patotipos de E. coli implicados en un amplio espectro de
enfermedades agrupados en tres síndromes clínicos. (Iguchi et al., 2009).

Escherichia coli y otras bacterias son necesarias para el funcionamiento correcto

del proceso digestivo, además de ser responsables de producir vitaminas B y K.
El tamaño promedio de los bacilos es de 0.5 µ de ancho por 3 µ de largo, cuando
se utiliza la tinción de Gram se tiñen de rojo (gramnegativas). Algunas especies
son móviles (por flagelos perítricos), no esporuladas, fermenta la glucosa y la
lactosa son catalasa positivos, oxidasa negativos y reduce nitratos a nitritos. El
género Escherichiaincluye siete especies (E. adecarboxylata, E. alberti, E.
blattae, E. fergusonii, E. hermannii, E. vulneris y E. coli).

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II. OBJETIVOS

 Realizar adecuadamente mediante el método de cuenta en placa, el

número de Escherichia coli viables presentes en productos alimenticios
destinados al consumo humano.

 Evaluar la calidad microbiológica de un alimento, que sea factible de estar

contaminado con estos microorganismos

 Comprender el fundamento de todas las etapas del método de detección

y cuantificación de Escherichia coli en alimentos.

III. MARCO TEÓRICO

ESCHERICHIA COLI

La Escherichia coli (E. coli) es una bacteria común que se encuentra en los
intestinos de los animales y las personas. Existen muchas cepas de E. coli, y la
mayoría resultan inofensivas, sin embargo, existe una variedad peligrosa, la E.
coliO157:H7, que produce una poderosa toxina (Shiga) que puede originar
graves enfermedades, como el Síndrome Urémico Hemolítico, que puede
desencadenar un fallo renal.

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CLASIFICACIÓN CIENTÍFICA

 Reino: Bacteria
 Filo: Proteobacteria
 Clase: Gammaproteobacteria
 Orden: Enterobacteria
 Género: Escherichia
 Especie: E. Coli ( E. freundi)
 Nombre binomial : Escherichia Coli

CARACTERÍSTICAS MORFOLÓGICAS Y TINTORIALES

 Bacilo Gram negativo

 No forma esporas
 Móviles (flagelos perítricos)
 Miden 0.5 𝜇 de ancho y 3 𝜇 de largo.
 Catalasa positivos
 Oxidasa negativos

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 Reducen nitratos a nitritos

 Producen vitamina B y K.

CARACTERÍSTICAS MORFOLÓGICAS Y TINTORIALES

- No exigente
- Fermenta glucosa y lactosa con producción de gas.
- Es anaerobio facultativo.

ESTRUCTURA ANTIGÉNICA

- Atígeno capsular (Antígeno “K”)

- Antígeno somático ( Antígeno “O”)
- Antígeno flagelar (Antígno “H”)
- Antígenos menores como proteínas de membrana externa y fimbrias.

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IV. MATERIALES Y REACTIVOS

Placa Petri Agua destilada

Probeta Mechero

Cuenta colonias Termómetro

Incubadora Balanza analítica

Muestra(brócoli ) y solución salina Medio de

cultivo (Agar
Endo)

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V. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

1. PREPARACIÓN DE LA SOLUCIÓN SALINA

Preparar en un recipiente usando sal común o de mesa la solución al 0.8% en

porcentaje en peso.

2. PREPARACIÓN DEL AGAR

Para la preparación del medio, utilizaremos el agar sabouraud glucosado. A asta

solución se calienta en baño maría hasta que alcance una temperatura adecuada
entre 45°C a 60°C

3. PREPARACIÓN DE LA MUESTRA

1-Recogemos 10 ml o 10 gr de muestra problema, en nuestro caso utilizamos

brócoli cortado.

2-De la solución salina antes preparada recogemos con una pipeta 90ml de esta
solución, puesto que la relación de concentración de la muestra debe ser de 0.1
y/o de 0.01

3-Ahora tendremos que mezclar los 90 ml de la solución con los 10gr de la

muestra problema. Una vez realizado disolver hasta donde más se pueda; en
caso de quedar partículas sólidas solo trabajar con la solución.

4-Separamos el medio en un matraz aproximadamente 20ml del agar y lo

mantenemos entre la temperatura de 40ºC como mínimo para producir grumos
de esta y 60ºC como máximo para no quemar los microorganismo que estén
ahí presente

5-Sacamos 1 ml de toda esta muestra y la colocamos en la placa de vidrio ya

esterilizada con 15 o 20 ml de solución del medio, hasta homogeneizar

6-Dejar cerca de un mechero y tapar la placa, antes de guárdalo en la incubadora

volver a cambiar de tapa y darle vuelta

7-Ponemos la placa en la incubadora y esperar 72 horas.

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I. INFORME DE ENSAYO

 ÁNALISIS : microbiologico
 LUGAR : Mercado Santa Rosa / Puesto de verduras B456
 FECHA DE MUESTREO: 6/05/2019
 FECHA DE EJECUCIÓN: 7/05/2019

ANTES DESPUÉS

RESULTADOS DE MICROBIOLÓGICOS

Ensayo UFC g/ml Limite Permisible Forma de la

(según RM591) colonia
E.Coli 32*102 102 globular

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VI. CONCLUSIONES

 Dado el resultado de nuestro análisis microbiológico se encontró que el

brócoli presentaba para bacterias del tipo Escherichia Coli una cantidad
𝑈𝐹𝐶
de 32*102 , el cual de acuerdo con la norma 591-2008 MINSA, no
𝑔𝑟

cumple con el limite permisible ya que supera el límite máximo permitido.

Por lo tanto concluimos que el brócoli evaluado no es apto para el
consumo por no cumplir en la norma mencionada, requiriendo otros
medios de desinfección.

VII. RECOMENDACIONES

 Al trabajar con el agar este debe estar totalmente disuelto ya que al

poseer grumos puede afectar los resultados.

 Al momento del sembrado tener presente que el agar debe estar a una
temperatura de 40 a 55 °C porque de lo contrario se afectaría al
microorganismo que se está tratando de identificar.

 Mantenga solo el material requerido sobre la mesa de trabajo, los

frascos de reactivos deben permanecer en el estante de madera.

 Se debe trabajar en completo orden, para así evitar accidentes en el

laboratorio.

 Tomar en cuenta las recomendaciones del profesor, las medidas que

se deben de usar de los reactivos o tomar en cuenta lo que está en la
guía de laboratorio.

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VIII. REFERENCIAS

 Frazier W. & Westhoff D. (1994) Microbiología de los Alimentos. 4ª ed. Acribia,

España.

 Pierson M. & Smoot L. (2001) Indicator Microorganisms and Microbiological

Criteria. In: Food Microbiology. Fundamentals and Frontiers. 2nd ed. Doyle M.
Beuchat L. & Montville T. (Eds.) ASM Press. USA.

 http://www.uv.mx/personal/sbonilla/files/2011/06/escherichia-coli-i.pdf

 http://www.bvsops.org.uy/pdf/coli.pdf

 http://www.facmed.unam.mx/deptos/microbiologia/bacteriologia/escherichia-
coli.html

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