Microbiología de alimentos

Medios de
cultivo

Dra. María Jimenez Forero

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 Medios de cultivo
Introducción
Para estudiar adecuadamente a los microorganismos se hace necesario,
hacerlos crecer en condiciones de laboratorio.

Medios bacteriológicos
Son sustancias químicas preparadas para cultivar bacterias o microorganismos.
Hay medios de cultivo distintos, por los diferentes microorganismos que difieren
de unos a otros en sus requerimientos nutricionales.
Así tenemos:
 Muchos microorganismos heterótrofos se desarrollan bien en agar
nutritivo o caldo nutritivo, otros no creen bien y algunos no se desarrollan.
 Algunos heterótrofos que requieren de vitamina, sustancias de
crecimiento (heterótrofos exigentes).

Clasificación de los medios de cultivo

I. Según su proporción de agua y consistencia
1. Medios solidos
2. Medios líquidos
3. Medios semisólidos
II. Según su uso
1. Medios para aislamiento
2. Medios enriquecidos
3. Medios diferenciales
4. Medios selectivos
5. Medios inhibidores
III. Según su composición
1. medios naturales
2. medios semi sintéticos
IV. Según su presentación
1. Medios deshidratados
2. Medios preparados
I. Medios sólidos en placas Petri
II. Medios sólidos en tubo
III. Medios líquidos en tubo
V. Medios para mantenimiento de cepas
1. Medios de prueba

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I. Según su consistencia

1. Medios solidos
La proporción en agar esta por encima del 15%.
Al inicio se utilizó la gelatina para solidificar el medio, pero esta
presento el inconveniente que a 24°C se licuaba, además existen
bacterias gelatinosas que destruyen el medio.
Los medios solidos nos permiten:
 Visualizar el aspecto de la colonia.
 Cultivar en forma pura las bacterias.
 Mediante el aislamiento.

2. Medios líquidos o caldos

No permite visualizar el aspecto de la colonia.
Se pueden visualizar pruebas bioquímicas.
Los recuentos bacteriológicos se efectúan por turbidimetría
especialmente en las levaduras.

3. Medios semisólidos
Son medios intermedios entre los medios líquidos y sólidos.
La proporción en agar es inferior al 15% mayor al 5%.

II. Según su uso

1. Medios comunes
Poseen los componentes mínimos para el crecimiento de bacterias
que no necesitan requerimientos especiales.
Ejemplo: agar nutritivo o agar común, que resulta de la adición de
agar al caldo nutritivo.
Otros: agar tripticase de soja, agar Columbia, etc.

2. Medios de enriquecimiento
Sustancias nutritivas normales, que se les incorporan una serie de
factores indispensables para el crecimiento de microorganismos
exigentes.
Este enriquecimiento se hace con adición de sangre, suero, leche,
huevo, bilis, etc.
Ejemplo: agar chocolate, (agar Mc-Conkey)

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 3. Medios selectivos
Son aquellos medios que además de tener nutrientes, tienen
ciertas sustancias químicas que inhiben el desarrollo de cierto tipo
de M.O.S y permite el desarrollo de otro.
Ejemplo: caldo selenito, que se utiliza para favorecer el crecimiento
de salmonella y frenar el del resto de enterobacterias.

4. Medios inhibidores
Tienen sustancias antimicrobianas que impiden totalmente el
crecimiento de una población microbiana, (inhibidor).
Ejemplo: Mc-Conkey permite el crecimiento de gérmenes Gram (-)
e impide el crecimiento de los Gram (+).

5. Medios diferenciales
Diferenciar las características bioquimicas de los M.O.S
El agar Mc-Conkey permite distinguir los M.O.S que fermentan la
lactosa de aquellos que no lo hacen.
Agar sangre diferencia las bacterias hemolíticas de las no
hemolíticas (destruyen los glóbulos rojos).

III. Según su composicion

1. Medios naturales
Son aquello cuyos componentes naturales animales o vegetales tal
como se encuentran en la naturaleza como: papa, leche, huevos,
sangre, etc.

2. Medios sintéticos
Son aquellos que contienen en su composición exclusivamente
sustancias químicas conocidas y disueltas en agua destilada en
proporciones determinadas, resultando un medio de composición
perfectamente definida.

3. Medios semisintéticos
Parte de su composición corresponde a extractos naturales como:
sangre, malta, leche, etc, a los que se le añade componentes
sintéticos.

IV. Según su presentación

1. Medios deshidratados o liofilizados

Para su uso deben ser hidratados con agua destilada en
condiciones totalmente asépticas y esterilizadas en autoclave.
Su composición es muy variable.

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 2. Medios ya preparados
Son aquellos que han sido elaborados por las casas comerciales
para comercializarse, los mismos pueden ser.

I. Medios sólidos en placas Petri.

Vienen ya colocados en las placas para obtener cultivos
puros, partiendo de una colonia previamente aislada.

II. Medios sólidos en tubos.

Para siembra superficie.
Se realiza por estrías en agar inclinado.
Por picadura en agar recto.

III. Medios líquidos en tubos.

No permite visualizar las colonias, pero hacer las diferentes
pruebas bioquímicas.
Prueba indol, reducción de nitratos a nitritos, fermentación
de la glucosa, lactosa, etc.

V. Medios para mantenimiento de cepas

Suelen tener los nutrientes necesarios para mantener a las cepas
vivas durante periodos de tiempo relativamente largos.
Para preservar satisfactoriamente las características fisiológicas y la
vitalidad de un cultivo se requiere de un medio diferente de aquellos
que son óptimos para su crecimiento.

1. Medios de prueba
Sirven para ensayos de vacunas AA y antibióticos así mismo, para
probar desinfectantes.

Preparación de los medios de cultivo

1. Conocer el tipo de análisis bacteriológicos.
Ej. RT de M.O.S viables, agar nutritivo.

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2. Determinar la cantidad de agar según el numero de muestra.

3. Determinar cuánto se va a pesar, de acuerdo a lo indicado en el frasco.

4. Pesar analíticamente la cantidad determinada.

5. El medio se coloca en tubos, matraces, cuyas bocas se cierran con

tapones de algodón.

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6. Hidratar el agar de acuerdo con lo calculado.

7. Se determina el ph del medio y si es necesario se ajusta.

8. Los medios se esterilizan en autoclave a 121°C por 10-15 minutos.

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9. Se deja enfriar (mas o menos a 45°C) y se plaquea.

10. Sembrar.

11. En caso de que no siembre se guarda en refrigeración.

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Principales medios de cultivos utilizados en microbiología
 Medio agar nutritivo
Es un medio de uso corriente para el cultivo de gérmenes en general, así
como su recuento.
Composición: por litro
3 gramos de extracto de carne de buey
5 gramos de peptona tripsica de gelatina.
15 gramos de agar.
Pequeñas cantidades de cloruro de sodio.
Glucosa.

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 Medio baird paker:
Se utiliza para el aislamiento y recuento de Staphylococcus coagulasa
(+) en productos alimenticios.
Composición: por litro
10 gr de peptona tripsica de caseina.
5 gr de extracto de carne.
1 gr de extracto de levadura.
10 gr de piruvato de sodio.
12 gr de glicocola.
5 gr de cloruro de litio.

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