‫‪Practical food microbiology‬‬ ‫الدرس العملى الول‬

‫قواعد المان فى معامل الميكروبيولوجى‬

‫‪-1‬كل الملبس والحقائب والدوات غير التى سيتم إستخدامها أثناء العمل بالمعمل يجب وضعها على البنشات‬
‫الجانبية أو فى أماكن بعيدة عن أماكن الجراءات العملية‪.‬‬

‫‪-2‬يجب على كل طالب إرتداء بالطو أبيض أثناء العمل داخل معمل الميكروبيولوجى‪.‬‬

‫‪-3‬على كل طالب القيام بتنظيف البنش الذى يعمل عليه وذلك قبل وبعد العمل بواسطة أحد المحاليل المطهرة ‪.‬‬

‫‪-4‬أغسل يديك غسلً جيداً بعدالنتهاء من العمل أثناء الدروس العملية وذلك بواسطة الماء والصابون‪.‬‬

‫‪-5‬المخلفات الملوثة بالبكتيريا والتى تمثل خطراً حيوياً (‪ )BIOHAZARD‬يجب التخلص منها بطريقة مناسبة‬
‫وذلك بوضعها فى سلة المهملت المخصصة لذلك‪ .‬أما الطباق المحتوية على نموات ميكروبية و الدوات الملوثة‬
‫التى سيعاد إستخدامها مرة أخرى فإنها توضع فى المكان المخصص لها بالمعمل لكى تعقم قبل تنظيفها‪ ,‬أما‬
‫الزجاج المكسور والمخلفات العادية فإنها توضع فى سلة المهملت الخاصة بها والموجودة داخل المعمل‪.‬‬

‫‪-6‬يجب على كل طالب التخلص من وإزالة أى علمات أو بيانات أو أوراق لصقة تم وضعها على الطباق أو‬
‫الدوات وذلك قبل أن تعقم وتغسل‪.‬‬

‫‪-7‬غير مسموح بتناول الطعمة والشربة أو التدخين داخل معمل الميكروبيولوجى وذلك لحتمال تواجد ميكروبات‬
‫ممرضة ولذلك أيضاً يجب إستعمال ال ‪ aseptic technique‬فى كل وقت أثناء تواجدك داخل المعمل‪.‬‬

‫‪-8‬البطاقات اللصقة المستخدمة لكتابة البيانات على الدوات يجب أن تكون من النوع اللصق بذاته حتى تتجنب‬
‫ترطيبها باللسان إذا كانت من النوع الخر (غير اللصق بذاته) ‪.‬‬

‫‪-9‬البيئات والتخفيفات يجب أل تسحب بالفم‪ ,‬ولكن يتم إستخدام المضخه المطاطية خاصة عند سحب سوائل من‬
‫المحتمل أن تحتوى على سموم أو بكتريا ممرضة‪.‬‬

‫‪-10‬الماصات المستخدمة يجب أن توضع فى ‪ jar‬يحتوى على محلول مطهر‪.‬‬

‫‪-11‬إبر التلقيح المستقيمة وذات العقدة يجب أن تعقم قبل وبعد الستخدام بالتسخين على لهب بنزن لدرجة الحمرار‪.‬‬

‫‪-12‬أنابيب البيئات والتخفيفات يجب أن توضع فى حامل النابيب وغير مسموح بوضعها على البنشات بدون حامل‪.‬‬

‫‪-13‬أى خدوش أو جروح يجب أن تغطى وتربط جيداً بواسطة الشاش الطبى ويتم إستعمال القفازات إذا لزم المر‬
‫لذلك‪.‬‬

‫‪-14‬يجب على الطالبات اللواتى لهن شعور طويلة أن تغطيها أو تربطها خلف الرأس أثناء العمل داخل المعمل‪.‬‬

‫‪-15‬يجب على كل طالب التبليغ الفورى عن أى حوادث أو جروح أو كسر للدوات للمشرف على الدروس العملية‪.‬‬

‫‪-16‬يجب على كل طالب العناية الفائقة بالميكروسكوبات والجهزة المستخدمة بالمعمل وإستعماله بالطريقة التى تم‬
‫توضيحها من قبل المعيد المسؤول عن العملى‪.‬‬

‫‪-17‬النوافذ والبواب يجب أن يتم غلقها طوال فترات الدروس العملية بالمعمل‪.‬‬

‫‪/‬‬
‫( ‪)413‬‬
‫)‬ ‫(‬

‫‪1‬‬
‫‪Practical food microbiology‬‬ ‫الدرس العملى الول‬

‫التقنية المعملية المعقمة‬

‫‪Laboratory Aseptic Technique‬‬

‫عندما يتم التعامل مع الكائنات الحية الدقيقة فإننا عاد ًة نتعامل مع مزارع نقية ‪ pure cultures‬والمزرعة النقية هى‬
‫المزرعة التى تتكون من نوع واحد فقط من الكائنات الحية الدقيقة‪ .‬وأحياناً يتم التعامل مع مزارع مختلطة‪mixed‬‬
‫‪ cultures‬والمزرعة المختلطة هى التى تتكون من نوعين أو أكثر من الميكروبات والتى عاد ًة يكون لها خواص متباينة‬
‫يسهل من خللها تمييزهم عن بعض وبالتالى فصلهم‪.‬وعندما يوجد ميكروب غير مرغوب فى المزرعة فإن الميكروب‬
‫فى هذه الحالة يسمى( ‪contaminant .(a‬‬

‫‪: Aseptic technique‬‬

‫هو مجموعة الجراءات التى من خللها يمكن تجنب وجود كائنات حية دقيقة غيرمرغوبة فى البيئة المحيطة بنا أثناء‬
‫العمل‪.‬‬

‫ومن المعروف أن الميكروبات توجد فى كل شىء فى البيئة المحيطة ‪,‬على السطح والرضيات وقد تتساقط من الهواء‬
‫والتربة وتوجد أيضاً سابحةً فى السوائل المختلفة‪ .‬فما هى الجراءات الساسية للتقنية المعملية المعقمةالتى يمكن أن‬
‫تجنبنا ذلك كله؟‬

‫الجراءات الساسية للتقنية الحيوية المعقمة‬

‫‪Aseptic technique‬‬

‫•البواب والنوافذ يجب أن تغلق لمنع وجود التيارات الهوائية التى قد تحمل الميكروبات إلى‬
‫المزارع أثناء العمل‪.‬‬
‫•إبر التلقيح يجب أن تعقم قبل وبعد الستخدام‪.‬‬
‫•أطباق الجار توضع بإسلوب يقلل قدر المكان من تعرض سطحها للبيئة المحيطة‪.‬‬
‫•عند نزع السدادات من النابيب يجب أن تظل فى اليدى ول توضع على البنش أثناء نقل المواد‬
‫من إنبوبة لخرى‪.‬‬
‫•يجب وضع لهب بنزن مشتعل بجوار منطقة العمل مباشر ًة لتعقيم الهواء فى هذه المنطقة‪.‬‬

‫‪.‬‬

‫‪2‬‬
 ‫‪Practical food microbiology‬‬ ‫الدرس العملى الول‬

‫طرق التعقيم‬
‫‪Sterilization methods‬‬

‫تعتبر عملية التعقيم إحدى العمليات الساسية فى معامل الميكروبيولوجى وهى تشمل تعقيم البيئات الغذائية والعبوات‬
‫والدوات الزجاجية المستخدمة فى إجراء الختبارات الميكروبيولوجية‬
‫وهى تعتبر إحدى الجراءات الخاصة بال ‪. Aseptic technique‬‬

‫طرق التعقيم‬

‫طرق ميكانيكية‬ ‫طرق فيزيائية‬

‫طرق كيميائية‬
‫‪Mechanical‬‬ ‫‪Physical‬‬
‫‪Chemical methods‬‬
‫‪methods‬‬ ‫‪methods‬‬

‫المرشحات‬ ‫المواد المطهرة‬ ‫إشعاعية‬ ‫حرارية‬

‫‪Sterilization filters‬‬ ‫‪Disinfectants‬‬ ‫‪Radiation‬‬ ‫‪Heat sterilization‬‬

‫حرارة جافة‬

‫حرارة رطبة‬

‫اللهب المباشر‬

‫التلهيب الكحولى‬

‫‪3‬‬
‫‪Practical food microbiology‬‬ ‫الدرس العملى الول‬

‫‪Physical methods‬‬
‫‪-‬‬

‫‪-1‬التعقيم بالحرارة الجافة‪-:‬‬

‫•فرن الهواء الساخن ‪Hot air oven‬‬

‫‪‬درجة حرارة التعقيم ‪ 180o-160‬م‬
‫‪‬زمن التعقيم ‪ 3-2‬ساعات‬
‫‪‬الستخدامات ( تعقيم الدوات الزجاجية‪ .‬ماصات ‪ ,‬أطباق بترى‪ ,‬أنابيب‪ ,‬وكل ما ل‬
‫يخشى عليه من الجفاف مثل زيت البرافين والزيوت المعدنية)‬
‫‪‬ميكانيكية قتل الميكروبات فيه (نتيجة التجفيف السريع الذى يطرأ على خلياها‬
‫وكذالك نتيجة أكسدة المحتويات الخلوية)‬

‫‪ -2‬التعقيم بالحرارة الرطبة (البخار)‪-:‬‬

‫•الوتوكلف ‪Autoclave‬‬
‫‪2‬‬ ‫‪o‬‬
‫‪‬درجة حرارة التعقيم ‪ 121‬م (تحت ضغط ‪ 15‬رطل‪/‬بوصة )‬
‫‪‬زمن التعقيم ‪ 20-15‬ق‬
‫‪‬الستخدامات ( تعقيم البيئات الغذائية والمحاليل وسوائل التخفيف والملبس‬
‫والقفازات وكل ما يخشى عليه من الجفاف وكذلك المزارع القديمة قبل التخلص‬
‫منها )‬
‫‪‬ميكانيكية قتل الميكروبات فيه ( مثل الحرارة الجافة إل أنها أكثر كفاءة من الحرارة‬
‫الجافة وذلك لن الحرارة الرطبة أكثر قدرة على التغلل داخل الخليا الميكروبية كما‬
‫أنها ذات قدرة على عمل تجمع و تخثر للبروتين الخلوى بسرعة أكبر من الحرارة‬
‫الجافة)‬

‫‪ -3‬التعقيم باللهب المباشر حتى درجة الحمرار‪-:‬‬

‫•مصباح بنزن ‪Bunsen burner flame‬‬

‫‪‬التسخين على اللهب مباشرة حتى الوصول لدرجة الحمرار‬
‫‪‬الستخدامات (تعقيم إبر التلقيح المستقيمة ‪ needles‬وذات العقدة ‪ loops‬والتى‬
‫عادة ما تصنع من أسلك رفيعة من البلتين أو خليط من النيكل كروم وهذه المعادن‬
‫عادة ما تسخن بسرعة وتفقد حرارتها بسرعة أيضاً)‬
‫‪‬ميكانيكية قتل الميكروبات (الحتراق الكامل لكل الميكروبات العالقة بها بعد‬
‫الستخدام)‬

‫‪ -4‬التلهيب الكحولى ‪-: Alcoholic flaming‬‬

‫‪‬الستخدامات ( بعض الدوات المعدنية كالمشرط والملقاط و المقص والسباتيول‬

‫وذلك بغمر الجسم المراد تعقيمه فى كحول إيثايل ثم تعريضه للهب وعادةً ما تكرر‬
‫هذه العملية أكثر من مرة لزيادة كفاءتها)‬
‫‪‬ميكانيكية قتل الميكروبات (الحتراق الكامل لكل الميكروبات العالقة بالدوات )‬

‫‪Radiation‬‬ ‫‪-‬‬

‫•بإستخدام الشعة فوق البنفسجية ‪ UV‬والشعة السينية ‪ X-ray‬وآشعة جاما ‪γ-ray‬‬

‫‪4‬‬
‫‪Practical food microbiology‬‬ ‫الدرس العملى الول‬

‫‪‬الستخدامات ( فى تعقيم الدوات البلستيكية التى تتأثر بالحرارة ويحدث لها تغير‬
‫فى الشكل )‬
‫‪‬ميكانيكية قتل الميكروبات (هذه الشعة تؤثر على ال ‪ DNA‬وتغير الخواص‬
‫الطبيعية له وتؤثر على النظم النزيمية داخل الخلية الميكروبية)‬

‫‪Chemical sterilization methods‬‬

‫وفيها يتم إستخدام المواد الكيماوية المطهرة (‪ ) disinfectants‬والتى يكون لها القدرة على قتل الكائنات الحية الدقيقة ومن أمثلة‬
‫تلك المواد ما يلى‪-:‬‬

‫‪Ethyl alcohol‬‬ ‫‪-1‬‬

‫‪‬التركيز (‪)%70-50‬‬
‫‪‬الستخدامات (تعقيم اليدى أو المناطق المختلفة من الجسم )‬
‫‪‬الفعل القاتل (يرجع لحدوث تجفيف للخليا بسحب الماء منها علوةً على القدرة‬
‫علىتجميع وتخثير البروتين الخلوى وهذا يؤدى لموت الخليا)‬
‫‪‬لماذا ‪ %70-50‬؟‪ .........‬لو زاد التركيز عن ذلك يحدث زيادة فى الفعل التجفيفى‬
‫بدرجة تعوق دخول الكحول إلى الخلية والقيام بالفعل المخثر للبروتين الخلوى‬
‫وبذلك تصبح التركيزات المرتفعة موقفة للنمو فقط وليست مميتة‪ ....‬أما التركيزات‬
‫المنخفضة عن ذلك تكون غير كافية لعمل سواء تجفيف للخليا أو تخثر لبروتوبلزم‬
‫الخليا‪.‬‬

‫‪Phenol‬‬ ‫‪-2‬‬
‫‪‬التركيز (‪)%5-2‬‬
‫‪‬الستخدامات (تعقيم أسطح البنشات والرضيات )‬
‫‪‬الفعل القاتل (يرجع لحدوث تجميع وتخثير البروتين الخلوى وهذا يؤدى لموت‬
‫الخليا)‬

‫)‬ ‫(‬ ‫‪-3‬‬

‫‪‬التركيز (‪)%0.1‬‬
‫‪‬الستخدامات (تعقيم أسطح البنشات والرضيات أيضاً )‬
‫‪‬الفعل القاتل (يرجع لرتباط أيونات الزئبقيك بمجاميع السلفاهيدريل الموجودة فى‬
‫الحماض المينية الكبريتية الداخلة فى تركيب البروتين الخلوىوالبروتينات‬
‫النزيمية)‬

‫‪-: Mechanical methods‬‬

‫‪‬الستخدامات (تعقيم المستحضرات النزيمية والمضادات الحيوية والتى يخشى‬

‫عليها من الحرارة المرتفعة )‬
‫‪‬أمثلة ( مرشح الزجاج المسامى – مرشح زايتس – المرشحات السليلوزية)‬
‫‪‬التعقيم يتم عن طريق حجز الخليا الميكروبية على أحد جانبى المرشح وذلك لنها‬
‫لها مسام ديقة جداً تحول دون مرور هذه الخليا‬

‫‪5‬‬
‫‪Practical food microbiology‬‬ ‫الدرس العملى الول‬

‫السدادات القطنية‬

‫‪-:‬‬
‫‪-1‬لمنع مرور الكائنات الحية الدقيقة من وإلى المزارع أو البيئة المحيطة بمنطقة العمل‪ ,‬وذلك تجنب ًا لحدوث التلوث‪.‬‬
‫‪-2‬السماح بتبادل الغازات من وإلى المزارع الميكروبية‪.‬‬
‫(فإنه من المعروف أن هناك ضرورة لدخول الهواء الجوى إلى المزارع الميكروبية (الهوائية) وكذلك يجب أن تكون هناك فرصة لخروج‬
‫الغازات الناتجة من النموات الميكروبية داخل النابيب المحتوية على المزارع الميكروبية)‪.‬‬

‫‪-:‬‬

‫‪-1‬رغم أن المسافات البينية بين اللياف القطنية كافية لمرور الكائنات الحية الدقيقةإل أن وجود شحنات موجبة على سطح‬
‫اللياف القطنية يجعلها تجذب إليها الكائنات الحية الدقيقة والتى تحمل على سطحها شحنات سالبة‪.‬‬

‫‪-:‬‬

‫‪-1‬تكون جافة غير مبللة (لنها تفقد خاصية ال ‪ filtration‬إذا تم تبليلها)‬

‫‪-2‬تكون مصنعة بطريقة جيدة و تكون محكمة جيداً بحيث ل تقع داخل النبوبة ول يتغير شكلها بنزعها وإدخالها أكثر من‬
‫مرة‪.‬‬

‫‪-:‬‬

‫‪-1‬قم بتصنيع عدد من السدادات القطنية بالطريقة التى سيتم شرحها بواسطة مشرف‬
‫الدروس العملية‪.‬‬

‫‪-2‬قم بالتعرف على الدوات والجهزة الموجودة بمعمل الميكروبيولوجى وذلك من خلل‬
‫الجولة التى سيرافقك فيها المعيد المشرف على الدروس العملية‪ ,‬مع ملحظة كيفية‬
‫إستخدام تلك الجهزة والدوات‪.‬‬

‫‪6‬‬