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Los centros de atención médica producen desechos sólidos y líquidos los cuales, para
fines prácticos son clasificados en comunes, peligrosos y especiales.
Los desechos Especiales son mobiliario y equipo en desuso, objetos de gran tamaño,
fármacos y reactivos de laboratorio vencidos y otros que no deben ser depositados en
los recipientes normales de desechos.
NORMAS
1. Lavado de manos.
2. Cada grupo de prácticas se responsabilizará de su zona de trabajo y de su
material.
3. El uso de la bata es de carácter obligatorio, ya que evita posibles proyecciones
de sustancias químicas lleguen a la piel. Por supuesto además, evitarás posibles
deterioros en tus prendas de vestir.
4. Si tienes el pelo largo, es conveniente que lo lleves recogido.
5. En el laboratorio está terminantemente prohibido: fumar, tomar bebidas, comer
y jugar con sus compañeros.
6. Se debe de llevar zapatos cerrados.
7. Trabajar con guantes.
8. Presentarse a la hora indicada por el docente
9. No entrar bolsas, maletas o mochilas.
10. No abrir las vitrinas
11. Tapar los microscopios después de usarlos
12. Manejar los equipos y materiales cuidando su conservación y orden.
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1. Cuidado con los bordes y puntas cortantes de los tubos u objetos de vidrio.
2. El vidrio caliente no se diferencia a simple vista del vidrio frío. Para evitar
quemaduras, dejarlo enfriar antes de tocarlo.
3. Las manos se protegerán con guantes o trapos cuando se introduzca un tapón en
un tubo de vidrio.
4. Si tienes que calentar a la llama el contenido de un tubo de ensayo, observa
cuidadosamente estas dos normas:
a.Tener sumo cuidado y tener en cuenta que la boca del tubo de ensayo no
apunte a ningún compañero. Puede hervir el líquido y salir disparado, por lo
que podrías ocasionar un accidente.
UTILIZACIÓN DE LA BALANZA
No. 2 ESPECTROFOTOMETRIA
Objetivo
Definición de espectroscopia
La energía viaja en ondas y corresponden a una luz blanca que en el interior del
aparato se hace pasar a través de un prisma, el cual descompone la luz, separándolas en
sus colores constituyentes (según longitud de onda), formando un abanico de colores, en
los experimentos de física de luz.
Luz visible
La luz, que llega a nuestros ojos y nos permite ver, es un pequeño conjunto de
radiaciones electromagnéticas de longitudes de onda comprendidas entre los 400 nm y
los 750 nm.
Espectrofotómetro
Después de la rejilla esta el espacio donde se colocan los tubos de ensayo con las
sustancias que se están estudiando. No se usara luz blanca (policromática) que emite la
bombilla (monocromática).
El tubo de ensayo (cubeta óptica) recibe un rayo de luz monocromática que posee
una determinada cantidad de energía, en función de su color. El contenido de la cubeta
óptica (solvente y soluto) podrá absorber alguna parte de la energía de ese rayo
luminoso a su paso a través de la misma, y la luz que logre atravesar la solución seguirá
su curso hasta chocar contra un dispositivo (foto celda o tubo fotoeléctrico) sensible a la
cantidad de energía que logra pasar, convirtiéndola en electricidad y trasladándola, por
medio de un galvanómetro, a una pantalla donde el movimiento de una aguja demuestra
los cambios en la cantidad de energía que logró llegar a la foto celda.
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Ventajas de la espectrofotometría:
Usos de la espectrofotometría
Transmitancia:
1. Cuando la luz blanca choca con un objeto una parte de los colores que la
componen son absorbidos por la superficie y el resto son reflejados. Los
componentes reflejados son las que determinan el color que percibimos.
2. Si la refleja toda es blanco y si la absorbe todas es negro. Un objeto es rojo
porque refleja la luz roja y absorbe las demás componentes de la luz blanca. Si
iluminamos el mismo objeto con luz azul lo veremos negro porque el cuerpo
absorbe este componente y no refleja ninguna.
3. Las unidades de absorbancia van de 0 a 2.
4. La absorbancia se relaciona con la transmitancia como:
Ejemplo:
Una sustancia que absorbe el 30% de la energía del rayo mostraría en la pantalla
un 70% de transmitancia y un 30% de absorbancia. El concepto se aplica de la misma
forma y por esa razón una sustancia que logre absorber el 50% de la engría del rayo
luminoso nos dará una transmitancia del 50%.
Como norma general siempre se utiliza la Absorbancia, debido a que las cifras
obtenidas en logaritmos pueden graficarse en mejor forma cuando el procedimiento de
fonometría es utilizado en estudio de investigación médica.
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Ley de Beer:
Ley de Lambert:
Long Io / I = e c I
Donde:
Ley de Lamber-Beer:
Supone que la luz incidente es paralela, monocromática y que las moléculas del
solvente y el soluto están orientadas al azar de manera uniforme.
El uso del espectrofotómetro se puede obtener los datos para elaborar una
gráfica del espectro de absorción de cualquier sustancia, en la cual podemos comparar
objetivamente las diferencias de cada sustancia en función de su coeficiente de
absorción molar y de la longitud de onda del rayo empleado.
Debe tenerse en cuenta que la ley de Beer, no toma en cuenta la luz dispersada o
reflejada y no se cumple por altas concentraciones del material absorbente.
1. Tubo blanco.
2. Tubo estándar.
3. Tubo muestra.
Tubo blanco
Tubo estándar:
Tubo muestra:
Contiene lo mismo que el tubo blanco, sólo que en este caso se agrega la
sustancia en estudio (muestra), cuya concentración no se conoce.
De la del X de la
Muestra Estándar Estándar
Absorbancia de la Muestra
A= 2-Log de %T
Para esta práctica se utilizará glucosa con estándar de valor conocido.
Se deberá enfocar en el uso del equipo y su funcionamiento.
Escriba el procedimiento para sus compañeros de laboratorio.
BIBLIOGRAFÍA
1.
2. CAMPBELL, N. A. Biology. The Benjamin Cumming Publishing Company
Menlo Park, California, 1987.
3. HAWK and OSER. Practical Physiological Chemistry. 4th Ed. McGraw-Hill, Co.
S. A. 1965.
4. LYNCH, M. J. Métodos de Laboratorio. 2ª edición Omega, S. A. Barcelona
19987
5. STROTHER, G. K. Fisica aplicada de las ciencias de Salud. MacGraw-Hill
Latinoamérica, S. A. Bogota, Colombia. 1980.
Debido a que se necesita muy bajas concentraciones de enzima para catalizar una
reacción dada, pocas enzimas pueden medirse directamente. Por consiguiente, la
presencia de una enzima se demuestra generalmente midiendo los cambios de
concentración, conforme ocurre la desaparición del sustrato o la aparición de producto
de su acción catalizadora.
Polisacáridos:
Los polisacáridos son compuestos de peso molecular elevado, formados por gran
número de unidades de monosacáridos, combinados para dar una molécula grande o
polímero.
Almidón:
Degradación enzimática
Las enzimas más importantes de la digestión son las amilasas, las cuales
degradan el almidón (y el glicógeno) a fragmentos de maltosa. El nombre de la amilasa
se utiliza como denominación de grupo:
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INVESTIGACIÓN
En la práctica deberá usar reactivo de Lugo y Benedict.
Buscar procedimiento en libros o internet y experimentar para que se realice el día
asignado para la práctica.
REACTIVOS
1. Lugol: solución de yodo metálico y yoduro de potasio, el cual en presencia de
almidón provoca el aparecimiento de un color azul oscuro al introducirse entre las
hélices alfa de la forma amilosa.
2. Reactivo de Benedict: Solución de Sulfato de Cobre, Carbonato de Sodio y citrato
trisódico, en presencia de compuestos reductores, como carbohidratos con grupo
aldehído o cetónico libre, se forma un precipitado que se observa de color rojo ladrillo
de oxido cuproso. El color de la solución puede variar dependiendo de la concentración
del azúcar reductor. Esta prueba se usa para detectar azúcares reductores.
PROCEDIMINETO
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BIBLIOGRAFÍA.
Las causas principales de hipoglucemia en una persona sana son muy obvias,
como por ejemplo ayunos prolongados, desnutrición, por vómitos y diarrea, ejercicio en
exceso, etc.
En el caso de una persona que se le suministre insulina tendrá que ser muy bien
controlada ya que al darse en gran cantidad, y sí no hay buenos niveles de glucosa en
sangre la insulina en exceso que entró se encarga de la poca glucosa que existe
poniendo en riesgo al paciente, causándole una hipoglucemia severa.
Otro gran problema es la cetosis por los cuerpos cetónicos que pueden llegar a
causar la muerte en especial a los de diabetes tipo I.
Métodos de medición:
MATERIALES
• Algodón.
• Hipoclorito de sodio al 4.72% (dilución 1:10).
• Jabón antiséptico.
• Descartador de puntas de pipeta.
• Gradillas.
• Liga.
• Guantes.
• Bata.
• Jeringas para punción venosa de 5cc.
• Micropipetas de volumen variable.
• Papel absorbente.
• Puntas de pipeta para micropipetas de volumen variable.
• Recipiente descartador para punzocortantes.
• Tubos vacutainer sin anticoagulante.
• Viales de almacenamiento
• Alcohol
• Espectrofotómetro
• Centrífuga
• Agua Destilada
• Reactivo de Glucosa
PROCEDIMIENTO
Para LCR la muestra debe ser 20 µL, ya que la concentración es bala. Luego el
resultado obtenido se le divide entre 2.
Estándar= 100 mg/dl
Valores de referencia
60 a 110 mg/dl
BIBLIOGRAFÍA
Las cetonas están usualmente presentes en la orina, pero por debajo del nivel de
detección de los métodos de análisis de rutina. Sin embargo, se observan cuerpos
cetónicos positivos en sujetos normales en ayunas y hasta en un 30% de las muestras de
orina de la mañana en las mujeres embarazadas.
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Niños o adultos:
Para tomar la muestra de orina, la persona recoge una cantidad limpia ("de la
mitad de la micción"). Para esto, los hombres y los niños deben tener limpia la cabeza
del pene, mientras las mujeres y las niñas deben lavar el área que hay entre los labios de
la vagina con agua y jabón y enjuagar muy bien. Cuando se inicie el proceso de
eliminación de la orina, se debe dejar que una pequeña cantidad de ésta caiga a la taza
del baño (así se limpia la uretra de sustancias contaminantes). Posteriormente, en un
recipiente limpio se recomienda recoger aproximadamente una o dos onzas (30 a 60 ml)
de orina y retirarlo. Finalmente, se debe entregar este recipiente.
Bebés:
Las cetonas urinarias se miden usualmente como una "prueba rápida" con una
tirilla (tira de orina) que contiene una zona sensible al color impregnada de químicos
específicos que reaccionan con los cuerpos cetónicos. Un cambio de color es un
indicador cualitativo de la presencia de cetonas.
Los tres cuerpos cetónicos se presentan casi siempre juntos en la orina y tienen
esencialmente la misma significancia. Las pruebas usuales para la cetonuria investigan
la acetona, el ácido acetilacético o ambos a la vez. La reacción de nitroprusiato
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BIBLIOGRAFÍA.
El colesterol por ser una grasa es poco soluble en agua, por lo que si se
transportara libre por la sangre sería en forma de gotas de colesterol y se vería en
nuestra sangre como gotas de grasa. Pero el caso, es que la naturaleza ha ideado una
manera de hacer soluble en agua al colesterol y transportarlo por la sangre y esto es por
medio de lipoproteínas.
Método de medición:
Valores de Referencia:
Mujeres > de 35 mg/dl
Hombrs > de 45 mg/dl
Las LDL, producto del metabolismo de las VLDL en plasma, son las encargadas
del transporte del colesterol exógeno (y en mucho menor proporción, endógeno) hacia
el interior de las células.
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Entre más bajo sea el valor de colesterol LDL, es mejor para el paciente, esto
significa que está transportando menos colesterol hacia los tejidos periféricos.
BIBLIOGRAFÍA.
Luego de comer, el organismo digiere las grasas de los alimentos y libera triglicéridos a
la sangre. Estos son transportados a todo el organismo para dar energía o para ser
almacenados como grasa. El hígado puede cambiar cualquier fuente de exceso de
calorías en triglicéridos.
La biosíntesis de triglicéridos
Algunas drogas como los anticonceptivos, esteroides, diuréticos causan aumento en los
niveles de los triglicéridos.
Algunas formas de altos niveles de triglicéridos ocurren entre miembros de una misma
familia.
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Observaciones
MATERIALES
• Jeringas
• Liga
• Alcohol
• Algodón
• Centrifuga
• Tubos de ensayo plásticos
• Micropipeta manual de 10 ml
• Micropipeta manual de 1000 ml
• Viales
• Puntas plásticas
• Espectrofotómetro
• Rejilla plástica
• Agua destilada
• Reactivo de triglicéridos
PROCEDIMIENTO
• Se extrae el suero y se coloca en un vial de almacenamiento.
• Con la Micropipeta de 1000 µl extraemos el reactivo de trigliceridos y lo
colocamos en un vial.
• Con la Micropipeta de 10 µl extraemos el suero y se agrega al reactivo de
triglicéridos. Agitar.
• Se incuba por 10 minutos a 37°C.
• Se lee en el espectrofotómetro
• Interpretación de resultado.
Los niveles de triglicéridos varían con la edad, y también dependen de qué tan reciente
ingirió alimentos antes del examen.
BIBLIOGRAFÍA
Cuando hay una elevación de bilirrubina directa en sangre, entonces se puede filtrar por
el riñón y aparece en orina, con lo que ésta puede coger un color anaranjado. La
presencia en orina de bilirrubina y urobilinógeno se puede detectar de forma fácil
cualitativamente empleando tiras reactivas.
3. Ictericia hepática. Es un estado intermedio entre las dos anteriores. Puede ser
debido a toxinas o infecciones como, por ejemplo, la hepatitis vírica o bloque de
la excreción de la bilis. Pero el defecto se encuentra en le hígado en sí y puede
ser heredado o adquirido. Habrá un aumento de bilirrubina directa e indirecta en
sangre. En orina habrá una elevación de bilirrubina y el urobilinógeno estará
poco aumentado o incluso puede estar disminuido
Método de medición:
Valores de Referencia
• Bilirrubina Total hasta 1 mg/dl
• Bilirrubina directa hasta 0.25 mg/dl
• Bilirrubina indirecta hasta 0.85 mg/dl
Observaciones
BIBLIOGRAFÍA.
. Materiales y Métodos
• sangre
• Aguja
• Algodón
• Alcohol
• Liga
• Tubos de ensayo sin coagulante
• Centrífuga
• Pipetas Automáticas de 5 a 50µ, 10 a 100µ y 100 - 1000µ.
• Tips
• Espectrofotómetro
• Agua destilada
• Viales
Reactivos
• Ácido Pícrico
• Reactivo de Creatinina o Buffer.
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Procedimiento
Observaciones
Los adultos con mucha masa muscular pueden tener más creatinina en la sangre que la
población normal. Las personas ancianas, por otro lado, pueden tener menos creatinina
en la sangre de lo normal.
BIBLIOGRAFIA.
1. Murray, Robert et al. Bioquímica de Harper, 17ª. Edición. El Manual
Moderno, México DF. 2007.
2. Inserto de reactivo.
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• Nutrición: constituyen una porción del fondo común de los aminoácios del
cuerpo.
• Transporte: enlazando iones metálicos, hormonas y lípidos.
• Mantenimiento de presión osmótica coloidal: sirve para mantener un volumen
normal de sangre y un contenido normal de agua en el líquido intersticial y los
tejidos.
• Mantenimiento del balance ácido-base.
• Coagulación de la sangre y cicatrización de las heridas.
• Herencia.
Importancia clínica:
En los estados patológicos el total de proteínas puede variar, por ejemplo:
El médico puede solicitar un valor de proteínas totales o bien requerir los valores
de las fracciones de albúmina o globulina y la proporción de ellos A/G.
Métodos de Medición:
Valores de Referencia:
6.3-8.3 g/dl.
Observaciones:
Las pruebas para la determinación de proteína no deben realizarse con sueros
hemolisados, lipémicos ni ictéricos.
BIBLIOGRAFÍA.
Gota:
La gota es una enfermedad metabólica persistente, que produce un aumento del ácido
úrico circulante, este se deposita en las articulaciones produciendo:
Depósitos de ácido úrico que se convierten en cristales afilados en las articulaciones o
coyunturas, y frecuentemente se acumulan en el dedo gordo del pie.
Depósitos de ácido úrico (llamados tofo gotoso) que aparece como un chichón debajo
de la piel. Piedras (cálculos) renales debido a los cristales de ácido úrico en los riñones.
En las personas con gota, el ácido úrico se acumula y forma cristales puntudos que se
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pueden acumular alrededor de las articulaciones. Esto causa dolor e hinchazón en las
articulaciones afectadas.
Este problema se suele asociar también a la diabetes, obesidad y enfermedades renales.
La gota tiene cuatro etapas: la asintomática (sin síntomas), la aguda, la intercrítica y la
crónica.
Reactivos
Reactivo de ácido úrico: 1000µl
Muestra de suero sanguíneo: 20µl
Materiales
• Liga
• Jeringa de 3cc
• Algodón
• Alcohol
• Espectrofotómetro
• Centrífuga
• 1 pipeta automática de 100-1000 µl
• 1 pipeta automática de 10 – 100 µl
• Tips
• Viales
• Tubos de ensayo
Procedimiento
• Colocar 1000 µl de reactivo de ácido úrico en un vial.
• Colocar 20 µl de suero en el vial que contiene reactivo.
• Mezclar ligeramente
• Se deja reposar por 5 minutos.
• Al transcurrir los 5 minutos se coloca en el espectrofotómetro para realizar la
prueba.
• Se leen los resultados y se interpreta la prueba.
Valores de referencia
Hombres: 3.4-7.0 mg/dl
Mujeres: 2.4- 5.7 mg/dl
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Los mecanismos de ajuste pueden ser lentos, requiriendo de 3 a 4 días para instalarse,
por depender de la cantidad de enzimas presentes, o rápidos, bajo control hormonal,
instalados en minutos, en este caso en relación con mayor acopio de sustratos, sobre
todo de acetilglutamato, el modulador alostérico positivo de la carbamilfosfato sintetasa
que forma carbamilfosfato, alimentador del ciclo.
Se conocen algunos cuadros clínicos por bloqueos parciales del ciclo de la urea. Se
caracterizan por hiperamonemia, retraso mental, vómitos y aversión a comidas ricas en
proteínas. Se mejoran si disminuyen las proteínas en la dieta y se suministran
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En caso de que la sangre portal no pase por el hígado, el amoníaco en sangre sistémica
puede elevarse a niveles tóxicos. Esto puede ser consecuencia de una disminución
pronunciada en la función hepática, o al desarrollo de comunicaciones colaterales entre
venas porta y sistémicas, como sucede en la cirrosis.
Los síntomas de intoxicación por amoníaco incluyen temblor, lenguaje poco entendible,
visión borrosa y en casos graves, coma y muerte. Estos síntomas se asemejan a los del
coma hepático, que se presenta cuando los niveles de amoníaco en sangre y en cerebro
se elevan en forma significativa.
Al disminuir el α -cetoglutarato, baja el ritmo de actividad del ciclo de Krebs, así como
el de las oxidaciones de sustratos en las células, lo que acarrea una grave inhibición de
la respiración en el cerebro y un aumento en la producción de cuerpos cetónicos por el
hígado.
El cuerpo produce en promedio 25 a 30 gramos de urea al día algo más en personas que
comen dieta rica en proteínas, menos en personas con dieta pobre en proteínas.
Los dos factores principales que establecen el ritmo de excreción de urea son:
Una elección muy importante, que debe aprenderse de estas relaciones, es que en
pacientes con insuficiencia renal es importante considerar la intensidad de filtrado
glomerular en valores altos. Cuando la intensidad de filtración glomerular disminuye
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Las enfermedades renales muchas veces dificultan el filtrado correcto de la urea. Esto
causa niveles altos de urea en sangre.
El análisis también se realiza a pacientes que están sometidos a diálisis renal para ver si
se está realizando bien esta función.
Ciertos medicamentos alteran las funciones de ciertos órganos como el riñón y este
estudio ayuda a monitorear si los medicamentos y la dosis son correctos.
Este análisis se debe pedir cuando se sospecha de problemas renales, o cuando se quiere
saber sobre la dieta del paciente, muchas veces alta en proteínas, aunque también es
indicador de malnutrición en concentraciones bajas de urea.
Método de medición:
En presencia de tiosecarbazida:
La urea forma un color rojo en solución de ácido diacetilmonoxima, lo que se mide
espectrofotométricamente.
Ureasa: Utiliza la enzima ureasa que pasa la urea a amoníaco y dióxido de carbono. El
amoníaco en presencia de nitroprusiato forma un compuesto coloreado verde, cuya
absorbancia es medida; o bien los iones amonio formados reaccionan con fenol e
hipoclorito de sodio (reacción de Berthelot), formando un compuesto de color azul,
medido también espectrofotométricamente.
Valores de Referencia:
BIBLIOGRAFÍA.
1. LAGUNA, J, et al. Bioquímica. 4ta edición. JGH RDITORES. Pp. 117 a 121.
2. MURRIA. RK, et al. Bioquímica de Harper. 15ª ed. Pastrana VM, trad.
México: El manual moderno, 2007. pp. 365 373.
3. GUYTON: A,C. Fisiología Médica. 5ta edición. EDITORIAL
INTERNACIONAL. Pp.460.
4. Murray, Robert et al. Bioquímica de Harper, 17ª. Edición. El Manual
Moderno, México DF. 2007.
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Método de medición:
Existen varios métodos, los cuales pueden ser biológicos; estos no se realizan
actualmente debido a que tienen variantes al utilizar animales de laboratorio.
BIBLIOGRAFÍA.
1. Manual de Inmunoserología, LABOCLIP. Guatemala: Antigua Facultad de Ciencias
Químicas y Farmacia (USAC). 2005. pp 12 y 13.