Professional Documents
Culture Documents
Proteine
3.1 Aminoacizi
Aminoacizii sunt compuşi polifuncţionali ce conţin în moleculã
grupãri amino şi grupãri carboxilice. O clasificare structuralã posibilã
vizeazã poziţia relativã a celor douã grupe funcţionale. Nomenclatura
precizeazã poziţia grupei amino pe catena acidului carboxilic.
δ γ β α δ γ β α
5 4 3 2 1 5 4 3 2 1
CH3 CH2 CH2 CH COOH CH3 CH2 CH CH2 COOH
NH2 NH2
Acid α−amino pentanoic Acid β−amino pentanoic
(acid 2-amino pentanoic) (acid 3-amino pentanoic)
δ γ β α
5 4 3 2 1
CH2 CH2 CH2 CH2 COOH
NH2
Acid δ−amino pentanoic
(acid 5-amino pentanoic)
3. 1. 1 Aminoacizi naturali
Precum s-a arãtat în structura aminoacizilor sunt incluse atât grupãri
amino cât şi carboxil. Cea mai mare parte a aminoacizilor naturali sunt α-
aminoacizi, structura lor putând fi corelatã cu cea a monozaharidelor din
seria L.
COOH
H2N
C COOH H2N C H
R 2 (α)
H R
CHO
HO
C CHO HO C H
R 2 (α)
H R
(S) 2,3- dihidroxipropanal (R=CH 2OH)
derivat din L -glicerinaldehida
66
H2N CH COOH
Valina
CH3 Leu L 2.4 9.6
CH2 CH CH3
H2N CH COOH
Leucina *
H3C CH CH2 CH3 Ile I 2.4 9.6
H2N CH COOH
Izoleucina *
CH2 C6H5 Phe F 1.8 9.1
H2N CH COOH
Fenil alaninã *
Acizi monoamino -
dicarboxilici
CH2 COOH Asp D 1.9 9.6
H2N CH COOH
Acid asparagic
CH2 CH2 COOH Glu E 2.2 9.7
H2N CH COOH
Acid glutamic
67
68
CH2
H2N CH COOH
Histidinã *
H Trip W 2.8 9.4
N
CH2
H2N CH COOH
Triptofan (Indolil alanina) *
* aminoacizi esenţiali
70
CH3 CH N
COORO
9
-
(3) C6H5 CH2 Cl + Na+ :C (COOR)2 C6H5 CH2 C (COOR)2 C6H5 CH2 CH COOH
10 11 NHCOCH 12 NHCOCH 13 NH2
3 3
O
- +
+ NK
COOR COOR O +
8 O H3O
(4) H C Br H C N H2N CH2 COOH
H2O
16
COOR COOR
O
14 15
+
NH3 + HCN CH H3O
(5) CH3 CHO CH3 CH NH 3 CH CN CH3 CH COOH
-H2O H2O
17 18 19 NH2 NH2 20
CH2 COOH
+ Ar CH C CO Ar CH2 CH CO Ar CH2 CH2 COO-
(6) Ar CHO NHCOC6H5
O O +
N C N C +H
+
NH3
21 22 C6H5 23 24
CH 6 5
O
COOH COOH
NH3 NaOCl
(7) O
CONH2 NH2
25 O 26 27
71
R R
H2N C COOH R' CONH C COOH
H H
(R,S) aminoacid (R,S) aminoacid N-amidat
31 32
+
+ (S) B /CH3OH,
- +
COO (S) B H +
(S) B H OOC
-
(S) (R)
R' CONH C H H C NHCO R'
33a R 33b
R
Separare Separare
-(S)B + NaOH, H O -(S)B + NaOH, H O
2 2
-
COO
- OOC
(R)
(S) H C NHCO R'
R' CONH C H
34a R 34b
R +
+ H3O /H2O
H3O /H2O
HOOC
COOH (R)
(S) H C NH2
H2N C H
R 35b
35a R
transaminaza transaminaza
O O
COOH -
+ R'' C COO
-
(S) + R'' C COO
H2N C H
36 R''
+
O
R C COO-
Fig. 3-2 Alternative de obţinere a enantiomerilor puri ai aminoacizilor
72
73
74
COOH N O
NH2
40
H
• Caracterul amfoter
75
76
R R
+ -
2 H2N CH COOH + 3CH3I - 3HI (CH3)3N CH COO
R
+ HNO2
HO CH COOH + N2 + H2O
+
H3O
R R
2 H2N CH + NaOCl Cl CH
COOH COOH + N2 + H2O
R
+ 2 HI
CH2 COOH + NH3 + I2
77
H2N
• desaminarea (aminoacid-oxidazã)
R CH COOH R C COOH
H2N O
Acizi grasi
Aminoacizi
• decarboxilarea (Bacterium coli, aminoacid-decarboxilaza,
codecarboxilaza)
R CH COOH R CH2 NH2 + CO2
H2N
• desaminare şi decarboxilare (enzime din drojdia de bere)
+ H2O
R CH COOH R CH2 OH + CO2 + NH3
H2N
78
CH3 CH(CH3)2
CH COOH Serinil-alanil-valina
H2N CH CONH CH CONH
(Ser-Ala-Val)
CH2OH S-A-V
79
47b
+ N COOCH3
H3N
H O
H C6H5
H
Leu
CH3 H3C Val
Phe (R) H
CH Orn H Pro
CH3 H
H H H H2C H H H3C O
O H
H N N
N N
O H H
C6H5 H O H H H H
(H2C)2 N
O NH2 H NH2
H O
N (H2C)2 H
H H H H H C6H5
H O O
N N
N N H
H H O H H
O H3C CH3 H H2C H
H
Pro H Orn CH
H Phe (R)
Val H3C CH3
Gramicidina S Leu
49
80
3. 2. 2 Structura proteinelor
Complexitatea şi diversitatea peptidelor şi proteinelor se daotreazã
numãrului mare de alternative de legare chiar a unui numãr mic de α-
aminoacizi în vederea formãrii lor cât şi unor particularitãţi de conformaţie
şi configuraţie a moleculelor acestora. Ele sunt generate de alternanţa
elementelor rigid plane (legãtura poliamidicã conjugatã) din structurã cu
elemente de mobilitate (atomi de carbon hibridizaţi sp3) capabile sã
genereze chiralitate de axã (în final de spiralã-vezi stereochimia atomului de
carbon hibridizat sp3). În plus posibilitatea stabilirii unor legãturi (van der
Waals, de hidrogen, dipol-dipol, inducţie, dispersie inter şi intramoleculare)
conduc la stabilizarea unor conformaţii ca entitãţi bine individualizate.
Sub denumirea de structurã primarã este inclusã cunoaşterea
felului aminoacizilor componenţi ai unei peptide sau proteine şi a modului
lor de legare. Atomii de carbon sunt hibridizaţi sp3. Orientarea legãturilor în
spaţiu este sugeratã cu ajutorul formulelor conformaţionale Newman în
structura 50.
81
H H H H
O
1230
N
N N
1200
H
1170 H H 0 H
O 121
1100 H
50
Se constatã orientarea alternativã (de o parte şi de alta a planului
catenei principale) a hidrogenului şi eventualilor substituenţi grefaţi la
atomul chiral.
Determinarea structurii primare a proteinelor prezintã pe lângã un
interes ştiinţifc şi un interes medical direct. De exemplu absenţa unui singur
aminoacid (histidina) în hemoglobinã poate fi responsabilã de apariţia unei
anemii puternice. Cunoaşterea structurii primare a acestei hemoglobine
deficitare permite remedierea -vindecarea prin aport de histidinã. Stabilirea
structurii primare a unei proteine implicã parcurgerea etapelor prezentate în
figura 3-4.
• DIALIZA
• CROMATOGRAFIA GEL FILTRANTA
PURIFICAREA
POLIPEPTIDELOR • CROMATOGRAFIA CU SCHIMB DE IONI
• ELECTROFOREZA
CROMATOGRAFIA DE ACTIVITATE
IDENTIFICAREA
AMINOACIZILOR • HIDROLIZA (HCl 6N, 1100C)
PREZENTI • CROMATOGRAFIA PE COLOANA
(Analizor de aminoacizi)
• DETERMINAREA AMINOACIDULUI
STABILIREA ORDINII N-TERMINAL
DE LEGARE A • DETERMINAREA AMINOACIDULUI
AMINOACIZILOR C-TERMINAL
R1 R2
Rest proteina NHCO CH NHCO CH NH2 51
C6H5 N C S 52
R1 O R2 S
..
Rest proteina NHCO CH NHC CH NH C NH C6H5 53
+ S
R1 H3O
+ S
H3O
CH
O R1
83
SO2Cl R1 R1
59
58
Fig. 3-6 Stabilirea succesiunii aminoacizilor într-un rest de proteinã prin
marcarea aminoacidului N-terminal
84
H H O
O
N N
N N
O O H
H H
H
H O O
N N
N N
H O H
O
60
6.7Α
H
H O
H O N
N
N N E
N C O D O
A B H
O H
61
Fig. 3-7 Structura β-keratinei
85
86
87
Gly Pro
Gln Ala
CATALIZA RIBOZOMI
88
89
O
R1
A= C6H5 CH2 O C
H2N CH COOH + C6H5 CH2 O C Cl
(1)
62 Cbz
O O
R1
A= (CH3)3CO C
H2N CH COOH + (CH3)3CO C O C OC(CH3)3
(2)
O O
63 Boc
R1 R1 R2
64
A HN CH COOH + DCC (2)
A HN CH CONH CH COOB
67 + H2 ; Pd/C
(1) - C6H5CH3
R2 + CF3COOH
66
H2N CH COOB + CH2Cl2
R1 R2
HOOC HN CH CONH CH COOB
R2
68
H2N CH COOH - CO2
+ R1 R2
B Cl H2N CH CONH CH COOB
65
unde B este 69
R3 + HF anhidru
Polistiren CH2
+ A HN CH COOH
sau R1 R2
C6H5 CH2
H2N CH CONH CH COOH
R2 70
R3 R1
H2N CH CONH CH CONH CH COOB
71
Polipeptide
Fig. 3-10 Alternative de sintezã a peptidelor
90
3. 3 Metaloproteine
Hemina 73, complexul cu fier al porfirinei 72 substituite în toate
poziţiile pe inelele pirolice este materia coloratã a hemoglobinei din sângele
vertebratelor.
CH CH2 CH3
A H3 C A CH CH2
B B
NH N N N
+3 -
Fe Cl
N HN N N
D C H3C D C CH3
CH2CH2COOH CH2CH2COOH
72 73
91
N HN N N N N
D C H3C D C CH3 H3C D C CH3
H H
H H
C20 H39 OOC H O C20 H39 OOC
H
O
74 COOCH 3 COOCH 3
75 76
unde C20 H39 =
(rest fitol)
93
P A P A
84 A P
H2O A P
+ Cosintetaza
P A A
P P A
A P A P
A B A B A P
NH NH A B
NH NH NH NH
NH NH + ..
NH NH A NH
D C D C
A A A A
C
P D A
P P P NH +
P P
87 86
Fig. 3-11 Biogeneza porfirinelor
(A-acid acetic, P-acid propionic)
94
95
SC2H5
CH3 CH SC H
2 5
CH3 H C NHAc CH NH2
Pb(OAc)4 + H2/Ni Raney Ac2O
H C NHAc HO C H VII HO C H
apoi NH3 in
COOH IX H C OH CH3OH/H2O H C OH
- C2H5SH
H C OH H C OH
CH2OH VI
CH3 CH2OH
VIII
H C NH2
COOH X
L(+) alanina
Se cere:
a) sã se indice o metodã de separare a epimerilor acidului
glucozaminic III;
b) sã se scrie structurile IV, V, VII;
c) sã se justifice configuraţia S(L) a aminoacidului X;
d) sã se justifice alegerea agentului bazic la transformare
VII→VIII;
96
97
98
R O O
O R
- CO2 H
O H2N CH COOH N CH COOH N CH R
O O
O
I + H2O
- RCHO
- +
O NH4 O O O O
+ NH3 +I H
N N
(H2O) NH2
O O O O O
Se cere:
a) sã se justifice comportarea diferenţiatã a celor 3 grupãri carbonil
în raport cu aminoacidul, ţinând seama de mecanismul reacţiei(AN +E).
b) culoarea diverselor spoturi pe cromatograma pe hârtie depinde de
natura aminoacidului (comentariu) ?
99
100
II
CH2C6H5 O
H2N
H2NCH2COOH N O
COCH3 H1
N COOH N CONH CH3ONa, NiCl2
SOCl2 Ni H2
COCH3 O
CH2 C6H5 CH2 C6H5 N N
I
III CH3
+V
VII
H2N CH COOH + III + HCl R X VI
VIII
- NiCl2
R L-aminoacid
+ NaOH + NaOH
b)
O CH SC2H5
C SC2H5
CH OH CH NHAc
H C NH2 H C NH2
AcO C H
HO C H O HO C H O H C OAc
H C OH H C OH
H C OAc
H C H C CH2OAc
CH2OH CH2OH VII
IV V
CH2OH H H
H O HOCH2 O
H H (OH)
OH H O 4 2
HO
HO HO NH2
3
H NH2
H
H OH
(H)
c)
102
3-2
a)
+ Mg + H2 O
I II R X RMgX RH
- HOMgX
+ NaHS
I III R Cl R SH
- NaCl
+ HCl gazos R CH2Cl
IV I R CH2OH
- H2O
+ 2NH3 R NH2
I V R Cl
- NH4Cl
VI V R CONH2 + NaBrO R NH2
- CO2, - NaBr
+
CONH2 + H2O, H3O
VI VII R R COOH
- NH3
103
3
COOH COOH
I H2N C H ClCH2 C NH2 S
2 4
CH2Cl H
1
3
COOH COOH
V H2 N C H H2NCH2 C NH2 S
2 4
CH2NH2 H
1
3-3
a)
0 + H2O
CH4 800 CH CH +
CH2 CH OH H3C CHO oxid. H3C COOH
Hg + Cl2
I2 /- HCl
H2C + 2NH3
COOH H2C COOH
- NH4Cl
NH2 Cl
b)
+ H2 H C CH HCl H C CH + HCN
H3C CHO 3 2 OH 3 2 Cl H3C CH2 CN
- H2O +
+ 2 H2O/ H3O
104
0 - H2
CH4 800 CH CH + C2H5Cl
AlCl3
+ Br2
peroxizi
H2N CN
CH CH2 CHO CH2 CH2 OH CH2 CH2 Br
+ NH3 oxid.
- NH4CN
H2N COOH
CH
NO2 Ac2O
CH3 CH3 CH3 1. oxidare
H3C H3C 2. red.
separare ....
+ + CH3
(distilare)
NHAc
+ O2/V2O5 CH3
O COOH
COOH
+ NH3 NaBrO NH2 +
O H2O - CO2, -NaBr
+ H2O/H3O
CONH2
O
3-4
a)
105
O COOH O COOH
+ NaOH
H2N CH2 CH2 CH2 CH NH2
Ornitina COOH
b)
+ Cl2 (S.R.) + HBr
CH2 CH CH3 CH2 CH CH2 Cl Br CH2 CH2 CH2 Cl
4000 peroxizi
c)
Br CH2 CH2 CH2 CH2 Cl Lisina
3-5
106
3-6
Br
+ ROH
+ HOBr HO CH2 CH COOR
CH2 CH COOH CH2 CH COOR
O
- +
NK
O
CH2OH O CH2OH
CH COOH NaOH
H2N N CH COOH
O
3-7
NHAc
+
NaC (COOR)2 KMnO4/H3O
CH2 CH CHO CH2 CH2 CHO CH2 CH2 COOH
C COOR C COOR
AcNH COOR AcNH COOR
CH2 CH2 CN
+ H2O/H3O
+ H2N CH CH2 CH2 COOH
CH2 CH CN
C COOR - CO2, -AcOH. - ROH COOH
AcNH COOR
107
3-10
a)
+
HOOC COOH + H3O+ HOOC + COOH HOOC + H - H3O
C C C C H C C H
H H (A) H H H COOH
(B)
- H3O
+ HOOC H + 2CH3OH CH3OOC H + NH3 (AN)
C C C C
H COOH - 2H2O H COOCH3
(C)
+
H2O/H3O
HOOC CH2 CH COOH CH3OOC CH2 CH COOCH3
(D)
NH2 NH2
108
3-11
a) În fenil-alaninã, datoritã efectului -I al restului fenilic (deşi relativ
slab datoritã distanţei), δ- la oxigen este mai micã decât în alaninã, ceea ce
face ca protonul sã fie mai puţin atras, iar compusul sã fie mai acid.
O
H CH2 CH COOH C6H5 CH2 CH C δ− δ+
O H
NH2 NH2
pKa = 2.3 pKa = 1.8
b) Efectul -I exercitat de restul amidic asupra celui aminic este mai
redus în glutaminã decât în asparaginã datoritã creşterii distanţei. Deci
glutamina este bazã mai slabã decât asparagina.
Asparagina Glutamina
3-12
a) A + B ⇒ dipeptide A - B ŞI B - A (douã).
b) A + B + C ⇒ dipeptide: A - B, B - A, A - C, C - A, B - C, C - B
(şase).
• tripeptide (şase)
A - B ⇒ C - A - B, A - B - C
B - A ⇒ C - B - A, B - A - C
A - C ⇒ B - A - C, A - C - B
C - A ⇒ B - C - A, C - A - B
B - C ⇒ A - B - C, B - C - A
C - B ⇒ A - C - B, C - B - A
c) A + B + C + D ⇒ dipeptide :A - B, B - A, A - C, C - A, A - D,
D - A, B - C, C - B, B - D, D - B, D - C, C - D
109
3-13
a)
110
CH2 SH
b)
O
H N CH2 COOH + DCC
Pst CH2Cl + 2 Pst CH2 O C CH2 NH2
CH2SH
+ Boc NH CH COOH
CH2SH O CH2SH
HOOC CH2 NH CO CH NH2 Pst CH2 O C CH2 NH CO CH NH Boc
Gly Cys
111
creste aciditatea
creste Kb pentru bazele conjugate
+-
creste caracterul ionic al legaturii R-NH3 O3S-polimer
creste viteza de elutie
3-19
a) Atacul nucleofil al secvenţei aminice din aminoacid va avea loc la
cel mai pozitiv centru din molecula ninhidrinei. Acesta este plasat la atomul
de carbon al legãturii carbonil centrale datoritã efectelor -I, -E ale celor douã
grupe carbonil adiacente.
O
+ −
δ
Oδ
O
Ninhidrina
b) Nu, colorantul rezultat este totdeauna acelaşi. Identificarea se
realizeazã pe bazã de Rf şi nu de culoare. Dintr-un spectru de reflexie al
cromatogramei se poate estima doar catitatea de aminoacid.
112
3-21
H3C CH3
CH
H2N CH2 CONH CH CONH CH COOH
CH3
Gly Ala Val
H3C CH3 H3C CH3
CH O CH
CH NH Boc
Pst CH2Cl +HOOC Pst CH2 O C CH NH Boc
DCC
H3C CH3
O CH CH3
Pst CH2 O C NHCO CH NH2 HOOC CH2 NH Boc
CH
DCC
H3C CH3
O CH CH3
Pst CH2 O C CH NHCO CH NHCO CH2 NH Boc
H3C CH3
CH CH3
HOOC CH NHCO CH NHCO CH2 NH2
Gly-Ala-Val
3-22 a)
113
Initial Echilibru
a moli acid a-x moli acid
10a moli alcool 10a - x moli alcool
x moli ester
x moli apa
V - volumul probei (l);
[ ] - concentraţia (moli/l).
ester apa
Ke =
acid alcool
x• x
Ke = a − x 10V•a − x = 4.5
V
•
V V
0.7x - 9.9 ax + 9a2 = 0
2
3-23 a)
114
3-24 a)
Cl CH2 COCl+ H2N CH COO CH2 R' Cl CH2 CONH CH COO CH2 R'
- HCl
R R + 2NH3
- NH4Cl
H2N CH2 CONH CH COOH deblocare H2N CH2 CONH CH COO CH2 R'
R R
+ Cl2 + PCl5
CH3 COOH Cl CH2 COOH Cl CH2 COCl
P - POCl3, -HCl
3-25 a)
COOH
+ CH2 COOH COOH + NH3
C6H5 CHO C6H5 CH CH COOH
COOH C6H5 CH CH
COOH
NH2
t0
- CO2
115
H3C CH3
CH
O CH3 CH3
HOOC CH NH Boc
Pst CH2 O C CH NHCO CH NH2
H3C CH3
O CH3 CH3 CH
Pst CH2 O C CH NHCO CH NHCO CH NH Boc
H3C CH3
O CH3 CH3 CH CH3
Pst CH2 O C CH NHCO CH NHCO CH NHCO CH NH2
H3C CH3
CH3 CH3 CH CH3
HOOC CH NHCO CH NHCO CH NHCO CH
NHCO CH2 NHCO CH2 NH2
116
- COOH Br COOR
HO Br hidroliza COOR
COOH - HBr O
N NH2 N N O
(+)
H H H
scindarea racemicului prin
metoda diastereoizomerilor
Cl CH2 C6H5
N COOH N COOH
S S CH
H 2 C6H5
NO2 NO2
CrO3/Ac2O/AcOH
NH2 NO2
Na2S
b)
O
N C Cl
CH2 C6H5
c)
117
CH3
CH3
VIII
f)
CH3
CH CH2 CH COOH
CH3
NH2
L-leucina
118