PROPIEDADES DE LAS ENZIMAS

I.- TERMINOS CLAVE

Explique el significado de los siguientes términos
- catalizador
- reacción enzimática
- sitio activo
- oxidorreductasa
- liasa
- sintasa
- tasa de la ecuación
- Reacción de orden cero
- Complejo enzima-sustrato
- Velocidad máxima, Vmax
- Ecuación de Michaelis-Menten
- Número de recambio
- Mecanismo cinético
- Inhibidor
- Constante de inhibición
- Inhibición nocompetitiva
- Nivel de afinidad
- Teoria concertada
- Teoria secuencial
- Estereoespecificidad
- Sustrato
- Producto
- Transferasa
- Isomerasa
- Sintetasa
- Reacción de primer orden
- Reacción de segundo orden
- Constante catalítica
- Velocidad inicial
- Tasa de aceleración
- Gráfica de Lineweaber-Burk
- Mecanismo aleatorio
- Reacción de ping-pong
- Inhibición competitiva
- Inhibición incompetitiva
- Sitio regulador
- Modulador alostérico
- Modificación covalente
- Enzima
- Especificidad de la reacción
- Deshidrogenasa
- Hidrolasa
- Ligasa
- Velocidad
 - Orden cinético
- Prueba enzimática
- Saturación
- Constante de michaelis, Km
- Constante de especificidad, kcat /km
- Reacción secuencial
- Mecanismo ordenado
- Inhibidor irreversible
- Inhibidor reversible
- Mutagénesis dirigida al sitio
- Enzima reguladora
- Enzima interconvertible
- Enzima convertidora

II.- EJERCICIOS
A) Falso o verdadero
_____1) Los únicos catalizadores biológicos son las proteínas llamadas
enzimas
_____2)Todas las enzimas requieren cofactores tales como el FAD y la
coenzima - A
_____3) Una enzima que cataliza la adición de un grupo fosforil a la glucosa
probablemente no cataliza la misma reacción para el glicerol
_____4) Cualquier forma de contacto entre una enzima y su sustrato causara la
reacción
_____5) La formación de un complejo enzima sustrato es una hipótesis no
comprobada
_____6) Una reacción multisustrato catalizada por enzimas en la cual un
producto es liberado antes de que todos los sustratos se hallan ligado a la
enzima es un ejemplo de mecanismo cinético secuencial
_____7) Valores KM y Vmax pueden determinarse gráficamente en forma
óptima a partir de graficar la velocidad inicial V0 contra la concentración del
sustrato (S) este tipo de grafica se conoce como la de Michaelis Menten
_____8) A mayor valor de KM, mayor afinidad de una enzima por su sustrato
_____9) Los valores KM de las enzimas por sus sustratos son usualmente
levemente mayores que las concentraciones intracelulares de sus sustratos
_____10) Una gráfica de datos cinéticos V0 (S) que produce una curva
sigmoide nos indica la ocurrencia de interacciones cooperativas entre las
subunidades de la enzima
_____11) Enzimas reguladoras son proteínas oligomericas que catalizan
reacciones en un dado paso en una ruta
_____12) Los inhibidores irreversibles de las enzimas forman ligaduras
covalentes con cadenas laterales de los sitios activos de los residuos de las
enzimas

B) RESPUESTAS CORTAS

2
1.- La región de una molécula enzimática con la cual el sustrato debe
interactuar para que la catálisis ocurra se denomina
el_______________________________________
2.- Las especies formadas de corta vida cuando la enzima y el sustrato
inicialmente interactúan es
el________________________________________________________
3.- Las enzimas que catalizan la conversión de una molécula en su isomero
estructural pertenecen a la categoría IUMBM __________________________
4.- El número de eventos catalíticos catalizados por segundo por cada
molécula de enzima (o por sitio activo) es denominado
el_________________________________
5.- La proporción Kcat/KM es
denominado__________________________________
y es una medida
del_____________________________________________________
6.- Algunas enzimas están sujetas a un control de por la visión
y remoción de grupos fosfatos. Esta se denomina una regulación
por_____________________________________________________________
_____
7.- Debido a su estructura un inhibidor______________________ se liga en el
sitio activo de una enzima
8.- Un inhibidor que no altera el KM de una enzima es un
inhibidor______________
9.- Un inhibidor que altera tanto el KM y el Vmax de un sistema enzimático es
un
inhibidor________________________________________________________
_____
10.- La inhibición de una enzima reguladora por el producto de la ruta es una
inhibición _______________________________
11.- Los sitios donde los moduladores alostericos se ligan a las enzimas son
denominados__________________________________
12.- Una enzima accesoria que cataliza la sustitución covalente de una enzima
intercomvertible causando su cambio de una conformación a otra es
denominada un/una___________________________________

C) PROBLEMAS

1.- Haga un gráfico del sistema catalizado TASA (velocidad) VS  E

que contienen niveles saturados de sustrato. Explique otras condiciones
necesarias para tal determinación.
La figura siguiente ilustra la solución a éste problema; se forma más producto
por unidad de tiempo como respuesta a cantidades incrementadas de enzima.
El sistema deberá estar con buffer a 1 temperatura constante en un pH y
temperatura que produzcan una velocidad de reacción óptima.

3
 Figura 1.
⊕
2.- La enzima deshidrogenasa del alcohol y la interconversión de NAD y
NADH. Empiece con el acetaldehído, la coenzima y escriba la ecuación
para esta reacción usando las estructuras del sustrato, producto, y el
anillo de nicotinodina de la coenzima.

4
 Figura 2.

3.- ¿Si Usted quisiese seguir el curso de la reacción anterior pregunta

mediante técnicas espectofotométricas, como pudiese ser realizado?
¿Por qué sería esto más difícil que siguiendo la reacción opuesta?
⊕
Puesto que el NADH absorbe luz a los 340 nm, cambios en la concentración
de NADH estará presente en grandes cantidades cuando la reacción comienza.
Es más difícil detectar pequeños cambios en grandes cantidades de sustancia
que el detectar la aparición de una sustancia (NADH) cuando no hay sustancia
alguna presente, como sería el caso de la reacción inversa.

4.- Su texto nos indica que Km es la [S] que nos da una tasa de ½ Vmax.
Muestre como una concentración de sustrato de 2 Km no nos da una tasa
de Vmax. ¿Concentraciones de sustrato ya sea de 3 Km o 4 Km nos da una
tasa igual a Vmax?
Usando la ecuación de Michaelis-Menten:
Vmax [S]
V = KM + [S]
0

Sea [S] = 2 Km.

Vmax [2 Km]
V0 = KM + [2 Km ]

5
 Vmax [2 Km]
V0 = [3 Km

2 Vmax
V0 = 3

3 Vmax
Similarmente, para [S] = 3 Km, V0 = 4

Figura 3.

5.- ¿Por qué es Vmax de una reacción catalizada por enzimas la misma en
la presencia de un inhibidor competitivo como lo fue en su ausencia?

Se ha dicho que la inhibición competitiva es resultado de un exceso de

sustrato. Desde que un sustrato y el inhibidor competitivo compiten con cada
uno por el sito activo particular de la enzima. A la larga el exceso de sustrato
asegura que las moléculas del sustrato pueden acercarse al sitio activo de la
molécula activa del inhibidor. Por ejemplo en el radio de las moléculas del
inhibidor competitivo por las moléculas del sustrato es 1/9, esto es aun 10% de
oportunidad de inhibidor de moléculas del sitio activo. En un radio de 1/99, esto
es solo de 1% de oportunidad de inhibir el sitio activo. La mayoría del sustrato
presente, y la minoría es parecida a una capa del sitio inhibidor.

6.- ¿Cómo puede uno determinar las tasas iniciales de reacción

requeridas para hacer gráficas de Michaelis-Menten ?

Midiendo la cantidad de producto formado en cierto periodo de tiempo, a

específicos intervalos de tiempo. La pendiente de la línea derecha en la porción

6
de la curva es igual al tiempo cero de la velocidad inicial, V0, como se puede
ver en la Figura 5.2.

7.- El Km para sustrato de una enzima dada es: 2.0X10-5 M. Si la V0 es de

0.16 µ m /min cuando es [S] es de0.15. ¿Cuál será la V0 cuando [S] es de
5.0X10-4 M?

8. ¿Es una sintasa igual a una sintetasa?

Una sintasa no es igual que una sintetasa. Una sintesa es una liasa que
cataliza una reaccion en adición. La enzima en el ciclo del ácido cítrico que
cataliza la adición de un grupo acetil de la coenzima acetil a el oxaloacetato y
forma la coenzima A y citrato es citrato sintasa. La sintetasa es una ligasa, la
cual requiere energía de ATP o un equivalente con alta energía molecular.
También en el ciclo del ácido cítrico es la enzima succinil Co A sintetasa. Esta
cataliza la formación de succinil CoA a succinato y coenzima A. El GTP es
requerido para la energía. En el ciclo, sin embargo, la reversa de esta reacción
ocurre.

9.- Especule sobre las ventajas de que la célula mantenga

concentraciones intracelulares del sustrato dentro del rango 0.1 Km a 1
Km.
Tal concentración permite a la enzima responder proporcionalmente a cambios
en las concentraciones de substratos en la célula y previene la acumulación de
substratos bajos cambios de condiciones metabólicas.

10.- Los siguientes datos cineticos fueron hayados para una reacción de
una enzima. Determine (a) Vmax (b) Km de este sistema.
Evento [S]M V0 µmol/min
-5
1 1.0 x 10 15.6
2 5.0 x 10-5 34.6
-4
3 1.0 x 10 41.0
4 5.0 x 10-4 47.0
-2
5 6.0 x 10 47.9
6 5.0 x 10-1 50.0
-1
7 8.0 x 10 50.0

(c) Cuando se añade un inhibidor competitivo [ I ] = 1.4 x 10-4. Cunado el

sistema tiene [ S ] = 1.0 x 10 -4 , una disminución de un 30 % de la V0 fue
observado. Encuentre [ S ] y el Ki de este inhibidor.

Nota: A sido determinado Km app = Km (1+ [ I ]/Ki ).

R.- (a) De la velocidad dada, la Vmax a parece ser 50.0 µmol/min. (b) Use este
valor, y el calcule la Km de cada dato determinado para alguna medición en
particular. Por ejemplo, use la medida número 3, para casa [ S ] 1.0 x 10 -4 y V0
=41.0 µmol/min. Los datos pueden ser usados en la parte (c).

7
 Vmax [ S ]
V0 = ------------------ ; solución para Km:
Km + [ S ]

Vmax [ S ]
Km = ---------------- - [ S ]; Use Vmax y los datos medido del numero 3:
V0

(50.0 µmol/min)(1.0 x 10-4 M)

Km = ------------------------------------------- - 1.0 x 10-4 M
41.0 µmol/min

Km = 2.2 x 10-5 M

(c) A 30.0 % decrece la velocidad (41.0 µmol/min) correspondiendo una

velocidad de 28.7 µmol/min para [ S ] = 1.0 x 10-4 M. esto da un Km aparente
(Km app) de:

(50.0 µmol/min)(1.0 x 10-4 M)

app
K m = ------------------------------------------- - 1.0 x 10-4 M
28.7 µmol/min

Km app = 7.42 x 10-5 M

Use la relación de Km app = Km (1+ [ I ]/Ki ):

Km [ I ]
Ki = ------------------ Sustituya los datos para cada medida del nuecero 3:
Kmapp – Km

(2.2 x 10-5 M)(1.4 x 10-4 M)

Ki = -----------------------------------------------
(7.42 x 10-5M) – (2.2 x 10-5 M)

Ki = 5.6 x 10-5 M