Produto & Produo, vol. 11, n. 1, p. 22 - 29, fev.

2010 Edio Metrologia

Aplicao da Calorimetria Exploratria Diferencial (DSC) para Determinao da Pureza de Frmacos

Gabriela F. Moreira, D. Sc gfmoreira@inmetro.gov.br Andrea Balbo, D. Sc Carlos A. Achete, Prof. caachete@inmetro.gov.br Instituto Nacional de Metrologia , Normalizao e Qualidade Industrial - INMETRO Diretoria de Metrologia Cientfica e Industrial Diviso de Metrologia de Materiais Juliano S. Barin, D. Sc Wagner Wollinger, M. Sc wwollinger@inmetro.gov.br Raquel Nogueira, D. Sc Celso F. Bittencourt, D. Sc Janana M. Rodrigues, D. Sc Instituto Nacional de Metrologia , Normalizao e Qualidade Industrial - INMETRO Diretoria de Metrologia Cientfica e Industrial Diviso de Metrologia Qumica

RESUMO

O trabalho aborda um estudo comparativo entre a tcnica de Cromatografia a Lquido de Alta Eficincia e a tcnica de Calorimetria Exploratria Diferencial, visando avaliar a aplicao desta para a determinao direta da pureza de frmacos candidatos a materiais de referncia certificados.

Palavras-chave: DSC, pureza, frmacos.

1 INTRODUO

A qualidade dos medicamentos constitui um fator fundamental para assegurar a sua eficcia e minimizar a ocorrncia de efeitos indesejados decorrentes da presena de impurezas e/ou produtos de degradao. Para tanto, diversos procedimentos so preconizados em compndios oficiais, tais como as Farmacopeias, para determinar a pureza das matrias-primas utilizadas na fabricao das diversas formas farmacuticas. Assim, pode-se afirmar que a determinao da pureza dos princpios ativos essencial e consiste em atividade laboratorial rotineira no controle de qualidade de medicamentos. Para este fim, vrias tcnicas analticas tm sido recomendadas nas Farmacopeias, envolvendo mtodos clssicos e mtodos instrumentais. Nos ltimos anos, percebeu-se um aumento considervel da utilizao dos mtodos instrumentais, especialmente da cromatografia a lquido de alta eficincia (CLAE) (SANDOR GROG, 2005). Entretanto, os mtodos farmacopeicos para a determinao da pureza de frmacos por CLAE demandam a utilizao de quantidades significativas dos materiais de referncia, tanto dos princpios ativos quanto de suas impurezas, o que torna o procedimento caro e demorado. Convm ainda lembrar que padres de impurezas nem sempre se encontram disponveis. Desta forma, a utilizao de uma tcnica que permita a determinao direta da pureza de frmacos evitando o uso demasiado de materiais de referncia consistiria em uma alternativa interessante para o controle de qualidade de medicamentos. Para tanto, dentre o arsenal analtico disponvel atualmente, a Calorimetria Exploratria Diferencial (DSC) apresenta-se bastante atraente. Alm de no envolver a utilizao de materiais de referncia para a determinao da pureza, apresenta outras vantagens, tais como menor tempo de anlise e de preparo da amostra (MATHKAR, 2009). A anlise da pureza por DSC uma tcnica bem consolidada, sendo que a metodologia empregada est descrita na Norma ASTM E 928-03 (Standard test method for purity by differential scanning calorimetry). O mtodo avalia a pureza do composto por meio de uma anlise do pico de fuso obtido, aplicando a lei da depreciao do ponto de fuso de Vant Hoff (que prev a depreciao do ponto de fuso do composto puro devido presena de impurezas) (A VAN DOOREN, 1984). A lei assume algumas consideraes, e dessa forma, esta somente vlida quando: o material fundido uma soluo ideal na qual as impurezas so solveis; o contedo das impurezas inferior a 2,5 % mol; o processo de fuso ocorre em condies de quase-equilbrio termodinmico; a capacidade trmica do slido igual do lquido; as impurezas so insolveis no estado slido; o composto no se decompe ou no reage com atmosfera e/ou com as impurezas; no existem transies prximas da temperatura de fuso; a entalpia de fuso independente da temperatura; o slido totalmente cristalino (A VAN DOOREN, 1984). Assim, dentro deste contexto, o presente trabalho busca avaliar a utilizao do mtodo acima descrito, que emprega o DSC, na determinao da pureza de trs substncias distintas candidatas a material de referncia certificado (MRC); entre eles captopril, diclofenaco sdico e diclofenaco potssico. Os resultados foram

comparados com aqueles obtidos por CLAE conjuntamente com o mtodo de Karl Fischer e titulao.

2 OBJETIVO

Avaliar a aplicao da tcnica de Calorimetria Exploratria Diferencial (DSC) na determinao da pureza de frmacos candidatos a materiais de referncia certificados.

3 MTODOS

Materiais as amostras de captopril, diclofenaco sdico e diclofenaco potssico foram obtidas diretamente de fornecedores de matria-prima para a indstria farmacutica. Calorimetria Exploratria Diferencial (DSC) as anlises de DSC foram conduzidas utilizando o equipamento DSC Q1000 da TA Instruments, com o acessrio de refrigerao RCS. Antes de iniciar os ensaios, O DSC Q1000 inicialmente foi calibrado utilizando padres de safira, fornecido pelo fabricante, para calibrao da linha base do equipamento, com correo automtica do atraso trmico associado ao fluxo de calor. Aps, para a calibrao da constante da clula do equipamento e da temperatura, foram utilizados padres de ndio e bismuto, materiais de referncia rasteveis certificados pelo NIST. As amostras foram analisadas em panelas de alumnio hermticas (TA Instruments) fechadas e para cada anlise foram utilizados 1 a 3 mg de material (determinados em uma balana analtica, marca Mettler, modelo UMX5). As anlises foram realizadas em triplicada aquecendo a amostra com uma taxa de aquecimento de 0,5 C/min, at atingir a temperatura de 10-15 C acima de sua temperatura de fuso, sob fluxo de He (50 mL/min). A metodologia utilizada para a anlise da pureza descrita pela Norma ASTM E 928-03. A determinao da pureza pela tcnica de DSC aplica a lei da depreciao do ponto de fuso, ocasionada pela presena de impurezas, de Vant Hoff, que est representada na Equao 1.

RT02 1 TS = T0 H F

(1)

Na qual: TS a temperatura observada da amostra; T0 a temperatura de fuso da amostra pura (100%); a frao molar das impurezas; H o calor de fuso da amostra pura, e F frao de material fundido, que determinada atravs da medida das reas parciais do pico de fuso experimental. A equao anterior pode ser considerada de primeiro grau assumindo a forma apresentada na Equao 2:

Y = aX + b

(2)

onde:

X=

RT 2 1 , Y = Ts , a = 0 H F

e b = T0

Normalmente, o grfico obtido de TS versus 1/F no linear. A linearizao realizada acrescentando uma rea arbitrria (c) rea total do pico, e a cada rea parcial, conforme mostra a Equao 3.

F=

Apart + c Atot + c

(3)

Na qual: Apart a rea parcial do pico que representa a frao da amostra fundida; Atot a rea total do pico de fuso e c a rea adicional. A norma apresenta dois mtodos para o clculo da pureza do composto a partir da equao de Van`t Hoff acima apresentada. Sendo que o mtodo empregado no trabalho foi o Mtodo A, que utiliza para o clculo o Software TA Universal Analysis 2000 desenvolvido pela TA Instruments. O software faz a anlise dos dados adquiridos, detecta a linha de base, a rea e a altura mxima do pico de fuso. Estes dados so utilizados para o clculo dos valores e nmeros de reas parciais, onde o software divide automaticamente a curva experimental. Sendo que para anlise do pico foram usadas 50 reas parciais, que tem uma frao mxima permitida de 50%, sendo o valor da altura de corte da primeira rea parcial de 0,01%. O valor de c determinado utilizando a tcnica no linear de mnimos quadrados. Assim, determinado c, feita a linearizao da curva TS versus 1/F. Aps, efetua-se o clculo do coeficiente linear e angular da reta aplicando uma regresso linear. A partir do coeficiente angular determina-se a frao molar das impurezas presentes em cada amostra. As anlises foram realizadas em triplicata. As incertezas expandidas foram calculadas com fator de abrangncia 2,0 correspondentes a 95% de nvel de confiana. Cromatografia a lquido de alta eficincia (CLAE) e Karl Fischer a pureza do composto captopril foi determinada pelo mtodo indireto de balano de massas, em que os resultados das impurezas so descontados da unidade. Foi utilizada CLAE para anlise das impurezas orgnicas e titulao pelo mtodo de Karl Fischer para anlise de gua. A CLAE foi realizada com detector de arranjo de fotodiodos (DAD) em sistema Shimadzu LC-20, programa LC Solution e colunas C18 (Supelcosil LC18 250 x 4,6 mm, 5 m) e nitrila (Supelcosil LC-CN 150 x 4,6 mm, 5 m). As amostras foram preparadas em triplicata por gravimetria, sendo injetadas 3 vezes cada amostra. Em cada caso, foram preparadas solues concentradas (500 g/g para captopril) e diludas (2 e 10 g/g, respectivamente). A concentrao de impurezas orgnicas foi determinada pela razo entre as reas dos picos de cada impureza na soluo concentrada e a rea do pico de captopril na soluo diluda, devidamente corrigida pelo fator de diluio (razo entre as concentraes das solues concentrada e diluda). As incertezas expandidas foram calculadas com fator de abrangncia em torno de 2, correspondente a 95 % de nvel de confiana. A determinao da gua das amostras foi feita pelo mtodo de Karl Fischer em equipamento Metrohm titulador coulomtrico. As impurezas inorgnicas do captopril foram determinadas por resduo de ignio segundo Farmacopeia

Brasileira. Componentes volteis foram avaliados pelo teste de perda por dessecao segundo Farmacopeia Brasileira. Titulao o teor de pureza do diclofenaco sdico e do diclofenaco potssico foi determinado atravs de estudo interlaboratorial, de acordo com as recomendaes da OMS, utilizando-se volumetria de oxi-reduo em meio no aquoso com ponto final potenciomtrico. O material foi ainda caracterizado de acordo com Farmacopeia Brasileira. 4 RESULTADOS E DISCUSSO A Figura 1 ilustra o grfico de DSC adquirido para o composto captopril e os valores encontrados a partir do clculo descrito na metodologia e empregado na quantificao do teor de pureza do material. Como pode ser observado na Figura 1, foi verificado durante o clico de aquecimento do captopril um pico endotrmico bem definido e simtrico, caracterstico de transio de fase da fuso e que denota uma transio a temperatura constante, indicando que o processo ocorre no quase-equilbrio termodinmico. A linha base foi mantida, sugerindo tambm que a capacidade trmica do material no se modifica durante o processo. Ademais, no ocorre nenhuma outra transio de fase durante a varredura da temperatura. Sendo assim, o material apresentou condies ideais para efetuar-se o clculo de sua pureza por meio de seu pico de fuso obtido atravs da tcnica de DSC. As Figuras 2 e 3 apresentam as curvas de DSC obtidos para as amostras de diclofenaco sdico e potssico, respectivamente. Como pode ser observado na Figura 2, o formato do pico de fuso do composto (pico endotrmico) sugere que o mesmo instvel prximo ao seu ponto de fuso, pois ocorrem dois eventos (banda dupla), seguidos de uma alta oxidao do material, o que por sua vez indicado pelo intenso pico exotrmico logo aps a fuso do composto. J para o diclofenaco potssico (Figura 3), foi observada uma alta liberao de volteis, indicada pelos vrios picos endotrmicos e exotrmicos, o que sugere sua degradao durante a anlise trmica. Dessa forma, para evitar a oxidao do material devido presena de oxignio da atmosfera nas panelas utilizadas nas anlises de DSC, as amostras, tanto de diclofenaco sdico e diclofenaco potssico, foram preparadas e hermeticamente fechadas em uma cmara de luvas com atmosfera inerte (N2) controlada, aps foram secas em uma estufa 120 C. Novos testes foram realizados, porm os mesmos resultados foram observados, confirmando que os eventos verificados durante a anlise trmica das amostras correspondem decomposio destas conjuntamente com a transio de fuso, visto que a temperatura de fuso destes compostos extremamente elevada, entre 260-280 C. Contudo, para estes casos, a anlise de DSC no apropriada para a determinao da pureza, visto que no possvel observar um pico de fuso bem definido, partir do qual efetuado clculo para estes compostos.

0.5

106.8

102.51C

109.12C

0.0

106.6

Fluxo de Calor (W/g)

-0.5

106.4

-1.0

-1.5

Pureza: 99.67mol % Ponto de fuso: 106.77C (determinado) Depresso: 0.15C Delta H: 26.41kJ/mol (corrigido) Correo: 9.703% Massa molecular: 217.3g/mol Constante de clula: 1.119 Inclinao "Onset": -109.6mW/C Desvio RMS: 0.01C rea Total/rea Parcial Total Area / Partial Area

106.2

106.0

-2.0
Exo Up

-2 102

0 104

4 106

8 108

10 110

105.8

Temperatura (C)

Universal V4.2E TA Instruments

Figura 1 - Curva DSC obtida para a amostra de captopril na faixa de 100-115 C (taxa de aquecimento de 0,5 C/min, atm He).
0.15

0.10

Fluxo de Calor (W/g)

0.05

0.00

-0.05 160
Exo Up

180

200

220

240

260

280

300
Universal V4.2E TA

Temperatura (C)

Figura 2 Curva DSC obtida para a amostra de diclofenaco sdico na faixa de 180-290 C (taxa de aquecimento de 0,5 C/min, atm He).

Temperature (C)

0.50

0.45

0.40

Flyuxo de Calor (W/g)

0.35

0.30

0.25

0.20

0.15

0.10 230
Exo Up

235

240

245

250

255

260

265

270

275

280

285

290

295

300

Temperatura (C)

Universal V4.2E TA

Figura 3 - Curva DSC obtida para a amostra de diclofenaco potssico na faixa de 235-300 C (taxa de aquecimento de 0,5 C/min, atm He).

A Tabela 1 apresenta os valores de pureza encontrados para o composto captopril a partir das tcnicas de DSC e CLAE. Os valores obtidos por DSC e por CLAE mostraram-se equivalentes, considerando a incerteza de cada medida. Alm disso, a tcnica de DSC apresentou uma elevada reprodutibilidade e preciso, conforme ilustrado pelos valores de incerteza obtidos (Tabela 1). Estes resultados, assim, evidenciam o potencial da tcnica de DSC para a determinao de pureza de materiais.
Tabela 1 - Resultados obtidos para a determinao da pureza do captopril para tcnicas de DSC e CLAE.

DSC (mol %) Mdia Captopril Diclofenaco sdico Diclofenaco potssico 99,650 Incerteza* 0,023

CLAE (% m/m) Mdia 99,66 Incerteza* 0,33

CLAE (mol %) Mdia 99,83

No foi possvel realizar anlise devido degradao trmica da amostra durante a anlise trmica

*Nvel de confiana de 95 %, fator de abrangncia em torno de 2,0

5 CONCLUSO A tcnica de determinao de pureza por DSC uma tcnica direta, rpida e bastante precisa. Os resultados apresentados para a anlise de captopril por DSC e CLAE demonstraram que, para princpios ativos cujo perfil de impurezas conhecido, a pureza determinada por DSC mostra-se equivalente quela determinada por CLAE, e, assim, o DSC mostra-se bastante atrativo. Porm, da mesma forma que acontece com as demais tcnicas analticas, a DSC tambm apresenta limitaes, no podendo ser empregada para princpios ativos que se decompem ao fundir (ex.: diclofenacos). Alm disso, para princpios ativos cujo perfil de impurezas desconhecido, os resultados da DSC podem diferir daqueles obtidos por CLAE. ABSTRACT This work presents a comparative study between the High Performance Liquid Chromatography and Differential Scanning Calorimetry techniques as absolute methods of purity determination of materials regarding its application with pharmaceutical certificate reference materials. Keywords: DSC, purity, pharmaceuticals. Agradecimentos Os autores agradecem ao apoio financeiro da FAPERJ e da FINEP. REFERNCIAS ASTM E 928-03. Standard Test Method for Purity by Differential Scanning Calorimetry, West Conshohocken, USA, 2003. A VAN DOOREN, A et al. Purity determinations of drugs with differential scanning calorimetry (DSC) a critical review. International Journal of Pharmaceutics v. 20, p. 217233, 1984. Farmacopeia Brasileira. 4. ed. So Paulo: Editora Atheneu. So Paulo, 1988. MATHKAR, S et al. The use of differential scanning calorimetry for the purity verification of pharmaceutical reference standards. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis v. 49, n. 3, p. 627631, 2009. SANDOR GROG. The sacred cow: the questionable role of assay methods in characterizing the quality of bulk pharmaceuticals. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis,v. 36, n. 5, p. 931937, 2005.