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Fundamentos em Biotecnologia
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ndice
Introduo .................................................................................................................2 A engenharia gentica...............................................................................................3 O cdigo gentico .....................................................................................................3 O quebra-cabeas DNA........................................................................................4 Traduzindo o cdigo gentico...................................................................................5 A tecnologia do DNA recombinante.........................................................................7 Vantagens em se produzir protenas em laboratrio.................................................9 Plantas e animais transgnicos..................................................................................9 Como funciona um transgene?..................................................................................9 Como introduzir um transgene em animais? ............................................................10 Clonagem e transferncia de embries .....................................................................10 Inserindo transgenes em plantas ...............................................................................10 Como poderemos utilizar a tecnologia dos transgnicos ..........................................11 Vantagens sobre as tecnologias tradicionais.............................................................11 Qual o perigo da tecnologia dos transgnicos?.........................................................12 Outras aplicaes biotecnolgicas ............................................................................12 Biotecnologia em So Carlos....................................................................................14 Evoluo da biotecnologia........................................................................................16 Glossrio de termos em Biotecnologia .....................................................................20 Bibliografia de importncia ......................................................................................31
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Introduo
Embora muitas vezes possa nos passar despercebido, os produtos biotecnolgicos esto cada vez mais presentes em nossas vidas. Podemos citar microrganismos produtores de corantes, flavorizantes e estabilizantes para alimentos. A cor amarela da margarina intensificada usando beta-caroteno extrado da microalga Dunaliella. O beta-caroteno tambm um antioxidante e uma boa fonte de vitamina A que atualmente exportado da Austrlia para o Japo, Europa e para os Estados Unidos. O aspartame, um adoante de baixas calorias, tambm produzido por fermentao bacteriana. O aspartame 200 vezes mais doce que a sacarose e utilizado em dietas de baixas calorias. Glutamato monossdico e L-Lisina so tambm aminocidos feitos por bactrias. O Glutamato Monossdico, muito utilizado na cozinha oriental, usado como flavorizante e a L-lisina usada como complemento alimentar para animais. O iogurte, cerveja, vinho, queijo, picles, po e vinagre so todos produtos biotecnolgicos. Para todos, na sua fabricao, foram utilizados mecanismos para aproveitar processos qumicos naturais de organismos vivos para nosso proveito prprio. A Biotecnologia simplesmente o uso racional de microorganismos, bem como plantas e animais, para produzir materiais tais com comida, medicamentos e outros produtos teis para o ser humano. Alguns destes produtos j so produzidos h muito tempo. Leveduras por exemplo, foram utilizadas por volta de 6.000 anos A.C. na confeco de vinhos. Seu uso na fabricao de pes bem como de bactrias na fabricao de queijos data de centenas de anos. Por vezes, e no poucas, as pessoas descobriram o uso dos organismos por acidente, no compreendendo o funcionamento dos processos biolgicos envolvidos, podendo porm, visualizar os resultados. Os resultados eram melhorados, na maioria das vezes, por tentativa e erro. Entretanto, alguns processos, como a produo de frmacos, no podem ser feitos desta forma. Um dos objetivos primrios da biotecnologia , portanto, estabelecer metodologias que possam gerar resultados previsveis e de forma controlada. A melhor maneira de se fazer isso utilizar metodologias que envolvam manipulaes gnicas. Conhecendo como os genes funcionam os cientistas podem introduzir nos organismos instrues que levaro as clulas a produzir novos compostos, desenvolver novos processos e adquirir caractersticas desejveis. O resultado disso foi a moderna engenharia gentica: a cincia da manipulao e transferncia de informaes genticas de uma clula para outra. Estas informaes, carregadas pelos genes, podem ser manipuladas de forma a produzirem novas protenas, com atividade diferenciada. So inmeros os processos biotecnlogicos utilizados para produo de compostos de interesse na sade humana. Dentre eles destacam-se a penicilina, a insulina, o hormnio de crescimento, o ativador de plasminognio tecido-especfico (TPA, utilizado para dissolver cogulos sangneos), etc... Alm destes produtos, a biotecnologia tem proporcionado o desenvolvimento de novos meios de prognstico e diagnstico de doenas, corroborando com suas profilaxias. Por outro lado, tambm contribui para a produo de vacinas, como por exemplo, a da Hepatite B. Embora menos desenvolvida que para microorganismos, a aplicao da biotecnologia no campo vegetal tem se mostrado altamente promissora. O desenvolvimento de plantas resistentes a doenas e herbicidas, resistentes ao frio e solos salinos, com melhores frutos, etc..., gera novas perspectivas para a produo da alimentos. No campo da ecologia, a biotecnologia tambm tem dado excelentes
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contribuies. Vrios processos biotecnolgicos so utilizados no monitoramento da presena de microorganismos, na conservao de espcies, no manejo de dejetos, etc... Enfim, so vrios os setores que utilizam processos biotecnolgicos, tornando a biotecnologia uma cincia em franco crescimento e cada vez mais indispensvel para a sociedade.
A engenharia gentica
Todos os processos realizados por uma clula so determinados por seu contedo gentico, mais precisamente, pelas instrues contidas em uma coleo de genes. Estes genes so passados de uma gerao para a prxima, de modo que uma prole herda uma srie de caractersticas de seus pais. Os cientistas entendem agora como funciona o sistema que controla a passagem destas instrues qumicas, que so baseadas em uma molcula chamada DNA (cido Desoxiribonuclico). Um gene na realidade um segmento de DNA com uma mensagem embutida em sua estrutura qumica. A engenharia gentica, ou manipulao gentica, envolve o transporte de genes de sua localizao normal em um organismo para outro ou retornando ao organismo original aps manipulao. Desta forma, os cientistas podem retirar genes importantes de plantas e animais e transferir para microrganismos tais como bactrias e leveduras que so fceis de serem cultivados em grandes quantidades. Assim, produtos que so avaliveis apenas em pequenas quantidades nos organismos de origem (plantas ou animais) podem ser obtidos em grandes quantidades a partir de microrganismos que se reproduzem rapidamente. Um exemplo so bactrias manipuladas geneticamente para produzir insulina humana para tratar a diabetes. Um segundo benefcio est relacionado com a transferncia de caractersticas de uma planta, animal ou microrganismo para uma outra espcie no relacionada. Desta forma, as caractersticas podero ser incorporadas sem a necessidade de mtodos convencionais, na sua grande parte demorados e nem sempre bem sucedidos.
O cdigo gentico
Antes que os cientistas pudessem realizar manipulaes genticas eles tiveram que revelar o segredo do cdigo gentico. Eles descobriram que o DNA uma molcula longa, dupla fita, disposta em uma estrutura espiral formando uma hlice (fig 1).
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Cada gene um segmento da fita de DNA que codifica para uma protena em particular. Protenas, como o DNA, tambm so molculas longas, formadas por monmeros ligados em cadeias. Elas so constitudas por 20 diferentes aminocidos ligados uns aos outros pelas denominadas ligaes peptdicas. Elas so molculas extremamente versteis que podem possuir dezenas ou centenas de aminocidos. Ao contrrio do DNA, que assume na maior parte das vezes a forma de uma hlice regular, as protenas assumem uma enorme variedade de formas tridimensionais. O corpo humano possui aproximadamente 30.000 tipos diferentes de protenas e cada uma desempenha um papel especfico. Este papel pode ser estrutural ou fisiolgico. A hemoglobina, por exemplo, transporta oxignio no sangue; O colgeno uma protena estrutural encontrada nos tendes e nos lbulos das orelhas; Actina e miosina interagem para promover a contrao muscular e a insulina, um hormnio protico controla o transporte de acar do sangue para o interior das clulas. O cdigo gentico traduzido em seqncias de aminocidos nas protenas, atravs de um intermedirio chamado RNA (cido Ribonuclico), mais precisamente o RNA mensageiro uma molcula simples fita similar a uma fita do DNA. Entretanto, para controlar o processo de produo de protenas, os cientistas precisaram entender em detalhes como funciona todo o processo.
O quebra-cabeas DNA
A molcula de DNA contm subunidades chamadas nucleotdeos. Cada nucleotdeo composto por um acar (deoxiribose), um grupamento fosfato e uma de quatro diferentes bases nitrogenadas as purinas [adenina (A) e guanina (G)] e as pirimidinas [citosina (C) e timina (T)] (fig 2 e 3).
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Figura 3. A interao entre as duas fitas feita atravs de pontes de hidrognio, sendo que as guaninas sempre pareiam-se com as citosinas atravs de 3 pontes de hidrognio enquanto as adeninas pareiam-se com as timinas atravs de duas. Os cientistas descobriram que o DNA formado de duas fitas de nucleotdeos, mantidas unidas por pontes de hidrognio entre as bases das fitas opostas. A estrutura como uma escada, na qual os corrimos so formados pelos grupamentos fosfatos e os acares e os degraus pelas bases. As bases so encaixadas em pares, como peas de um quebra-cabea. As duas fitas se enrolam ento formando uma hlice. Estas molculas de DNA contm a informao para todas as protenas produzidas na clula. Cada seqncia de 3 bases ao longo da fita de DNA um cdigo qumico para um dos 20 aminocidos que compem as protenas.
RNA Polimerase
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O mRNA move-se ento para fbricas da clula chamadas ribossomos, onde atuam como moldes para a fabricao das protenas. O cdigo para a protena lido ao longo da seqncia de base do mRNA sendo que os aminocidos apropriados, trazidos por pequenas molculas de um RNA chamado transportador (tRNA), so adicionados um a um protena (fig 5).
aa aa aa aa aa aa
aa aa aa aa aa aa
protena aa aa aa
mRNA Figura 5. Para sintetizar as protenas os aminocidos so trazidos por RNA transportadores para o RNA mensageiro, que utilizado como molde para a sntese. Com rarssimas excees, o cdigo gentico universal, sendo basicamente o mesmo para todos os animais, plantas e microrganismos. Portanto, um fragmento de DNA de um mamfero inserido no cromossomo de uma bactria faz perfeito sentido para ela. Atualmente os cientistas conhecem com detalhes as seqncias de muitas protenas e tambm entendem como as seqncias de bases no DNA so nelas representadas, desta forma, podem identificar os genes no cromossomo que codificam para uma protena em particular.
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Comparando ainda com os mtodos tradicionais, h tambm a vantagem de ser proporcionar economia de custos relacionados com suplementos alimentares e tratamentos qumicos para animais e plantas. Finalmente, plantas transgnicas podem proporcionar um uso mais racional de pesticidas e herbicidas, diminuindo o impacto em animais e no meio ambiente.
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defeito utilizando-se vetores especficos. A transferncia pode ser feita para clulas em cultura, posteriormente re-introduzidas no organismo (terapia ex-vivo), bem como diretamente para o portador (terapia in-vivo). Algumas dessas terapias j foram utilizadas com sucesso para algumas doenas, como a Sndrome da Imunodeficincia Congnita (SCID), a qual resultado de mutaes no gene que codifica a Adenosina Deaminase. Neste tratamento, o gene correto transferido para leuccitos em cultura do paciente. Estes leuccitos so ento re-introduzidos no paciente, restabelecendo a atividade normal da protena no organismo. Anlises de DNA tambm podem ser utilizadas de forma eficiente para controle de qualidade de alimentos. Contaminaes por microrganismos, tais como fungos e bactrias, podem ser detectadas facilmente analisando seqncias especficas destes microrganismos atravs de tcnicas de biologia molecular. A tecnologia do DNA recombinante pode tambm ser aplicada em estudos ecolgicos, de anlise de biodiversidade e estudos populacionais, alm de poder ser utilizada no controle de poluio, no apenas diagnosticando, mas tambm contribuindo para a produo de microrganismos que podem degradar compostos poluentes.
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Biotecnologia em So Carlos
Em So Carlos, vrios laboratrios realizam pesquisas biotecnolgicas. Alguns deles formaram um Centro, financiado pela FAPESP, para desenvolvimento de trabalhos em Biotecnologia. A seguir, apresentamos o Sumrio Executivo do CBME (Centro de Biotecnologia Molecular e Estrutural).
CENTRO DE BIOTECNOLOGIA MOLECULAR ESTRUTURAL Glaucius Oliva, diretor Rogrio Meneghini, vice-diretor Richard C. Garratt, coordenador de inovao Leila M. Beltramini, coordenadora de divulgao
Sumrio Executivo
O Centro de Biotecnologia Molecular Estrutural (CBME) uma iniciativa conjunta resultante da existente colaborao cientfica entre pesquisadores da Universidade de So Paulo (USP) no Campus de So Carlos, do Laboratrio Nacional de Luz Sncrotron (LNLS) em Campinas, e da Universidade Federal de So Carlos (UFSCar). O objetivo principal do CBME realizar pesquisas e desenvolvimentos tecnolgicos em todas as reas da biotecnologia que dependam do Planejamento Molecular Baseado em Estruturas, particularmente na descoberta de novos compostos bioativos (frmacos, vacinas, pesticidas, herbicidas) e na engenharia de protenas. Esta hoje a tecnologia mais eficiente e de melhor relao custo/benefcio para o desenvolvimento de novas drogas, podendo contribuir em todas as etapas do processo, desde a descoberta de compostos de partida, sua otimizao (afinidade, especificidade, eficcia, efeitos colaterais) e aprovao pelos organismos competentes. uma metodologia que se baseia na inibio ou estimulao da atividade biolgica de macromolculas, protenas ou cidos nuclicos (DNA e RNA), responsveis por doenas. A Cristalografia de Protenas, usando difrao de raios-X, e a Ressonncia Magntica Nuclear, so as tcnicas de preferncia, na medida em que podem elucidar a estrutura tridimensional molecular de protenas alvo associadas s doenas em foco. Esta informao estrutural permite a descoberta e sntese de compostos complementares que podem se tornar potentes drogas especificamente dirigidas s doenas alvo. Para atingir este objetivo o CBME promove uma abordagem multidisciplinar integrada entre as tcnicas de Biologia Molecular, Bioqumica, Biologia Estrutural (Cristalografia de Protenas e de Molculas Pequenas, Ressonncia Magntica Nuclear, Tcnicas Espectroscpicas, Modelagem Molecular de Frmacos e Vacinas, e Bioinformtica), Radiao Sncrotron, Qumica Medicinal de Sntese Orgnica e Inorgnica e de Produtos Naturais, Imunologia Molecular, Biologia Celular e Farmacologia Os projetos do CBME so selecionados pelo seu foco e buscam mxima integrao e parceria com os setores pblico e produtivo, particularmente indstrias
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farmacuticas nacionais e transnacionais, indstrias de biotecnologia, instituies de pesquisa em sade humana e setor agropecurio. Em especial, a grande maioria dos projetos de pesquisa em andamento tem sido centrada no estudo de doenas infecciosas endmicas no Brasil, como a doena de Chagas, leishmaniose, esquistossomose, malria, febre amarela, entre outras. Outro aspecto fundamental do CBME seu compromisso com a disseminao do conhecimento e da informao relacionadas Biologia Estrutural e Biotecnologia, para a sociedade em geral. Os progressos da Biologia Molecular, Engenharia Gentica e Biotecnologia nos ltimos anos tem sido extremamente rpidos e, por outro lado, a educao da opinio pblica sobre estes temas tem sido muito lenta. H uma marcante dicotomia entre os avanos da biotecnologia e o lento processo de compreenso geral dos conceitos modernos de que os genes so molculas de DNA que codificam por protenas, as quais, quando adequadamente enoveladas em estruturas tridimensionais, vo realizar sua funo biolgica especfica. Assim, a visualizao da estrutura tridimensional de protenas, atrativas e artsticas por natureza, tem um forte impacto na compreenso do paradigma estrutura-funo em biologia. Neste sentido o CBME promover diversas aes na disseminao do conhecimento em Biologia Molecular e Estrutural. Para maiores informaes consulte o site do CBME em http://dart.if.sc.usp.br/CBME
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Evoluo da Biotecnologia
Antes de 1750 Plantas usadas na alimentao. Animais utilizados na alimentao e para realizar trabalho. Plantas domesticadas e incio de seleo de caractersticas desejveis. Microrganismos utilizados para confeco de bebidas, queijos e po. 1797 Edward Jenner Usou organismos vivos para proteger pessoas de doenas. 1750-1850 Incremento do cultivo de leguminosas e rotatividade de culturas. 1820 Mquinas movidas por animais Meados de1850 Aumento do nmero de ferramentas na agricultura. Alimentao animal processada industrialmente e utilizao de adubo inorgnico. 1859 Charles Darwin Animais mais resistentes so selecionados. 1864 Louis Pasteur Provou a existncia dos microrganismos e que todas as coisas vivas so produzidas por outras coisas vivas. 1865 Gregor Mendel Investigou como as caractersticas passam de gerao gerao. Chamou de fatores os responsveis. 1869 Johann Meischer Isolou DNA do ncleo de uma clula branca. 1890 Sntese de Amnia 1893 Koch, Pasteur, Lister Institutes Patente do processo de fermentao Isolada a antitoxina difteria. 1902 Walter Sutton Inventou o termo "gene" Props que os cromossomos contm os genes (os fatores de Mendel) 1904 Desenvolvida a seda artificial 1910 Thomas H. Morgan Provou que os genes esto nos cromossomos. O termo "Biotecnologia" foi criado. 1918 Alemes Usaram acetona produzida por plantas para fabricar bombas Crescimento de leveduras em larga escala para animais 1920 Exploso da indstria de Rayon 1927 Herman Mueller Aumento da taxa de mutaes em Drosfilas utilizando Raios-X.
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1928 Frederick Griffiths Verificou que um tipo rugoso de Pneumococcus poderia se tornar liso (e patognico) quando um princpio transformante do tipo liso estava presente. 1928 Alexander Fleming Descobriu antibiticos de certos fungos. 1920-1930 Hibridizao de plantas 1938 Protenas e DNA estudadas por difrao de raios-X. Criado o termo Biologia Molecular. 1941 George Beadle/ Edward Tatum Proposta a hiptese: Um gene, uma enzima. 1943-1953 Linus Pauling Descreveu a anemia falciforme, a chamando de uma doena molecular Produo de cortisona em larga escala DNA identificado como sendo o material gentico 1944 Oswald Avery Realizou experimentos de transformao utilizando as bactrias de Griffiths. Meados de 1940 Produo da penicilina Transio de trao animal para trao mecnica nas fazendas. 1950 Erwin Chargaff Determinou a relao 1:1 de Adeninas e Timinas e Citosinas e Guaninas, existente em todos os organismos. Primeira formao de uma planta inteira a partir de cultura in vitro. 1952 Alfred Hershey/ Margaret Chase Utilizaram de material radioativo e fagos para concluir que o DNA, e no protenas, que o responsvel pela transmisso da informao gentica. 1953.James Watson/ Francis Crick Determinaram a estrutura do DNA 1956 Sanger Sequenciou a insulina (protena) de porco. 1957 Francis Crick/ George Gamov Explicaram como a protena feita a partir do DNA 1958 Kornberg Isolamento da DNA polimerase I 1960 Isolamento do RNA mensageiro 1965 Classificao dos plasmdeos 1966 Marshall Nirenberg/ Severo Ochoa Determinaram que trincas de bases so responsveis pela codificao de aminocidos O cdigo gentico. 1970 Isolamento da transcriptase reversa. 1971 Descobrimento das enzimas de restrio 1972 Paul Berg Manipulao de DNA viral e transferncia para bactrias.
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1973 Stanley Cohen/ Herbert Boyer Produo do primeiro organismo recombinante Comeo efetivo da engenharia gentica. 1975 Moratria das tcnicas de DNA recombinante 1976 O Instituto Nacional de Sade Americano estabeleceu regras para a utilizao da tecnologia do DNA recombinante. 1977 Primeira aplicao prtica da tecnologia do DNA recombinante: O hormnio de crescimento humano produzido em bactrias. 1978 Genentech, Inc. Produo de Insulina humana em E. coli Em Stanford, primeira transferncia de genes de mamferos. Prmio Nobel para os descobridores das enzimas de restrio. 1979 Genentech, Inc. Produo de Hormnio de Crescimento humano e dois tipos de Interferon. Utilizao de DNA de clulas cancerosas para transformar clulas de camundongos em cultura Estudos de cncer facilitados 1980 Suprema corte Americana decidiu que microrganismos modificados poderiam ser patenteados. 1983 Genentech, Inc. Licenciou Eli Lilly para produzir Insulina. Primeira transferncia de genes em plantas (tabaco resistente a antibiticos) 1985 Plantas podem ser patenteadas. 1986 Primeiros testes de plantas resistentes a insetos, virus e bactrias. 1988 Primeiro mamfero vivo patenteado. 1993-1994 Tomates modificados comercializados. 1995-1996 Soja resistente ao herbicida Roundup (Monsanto) e milho resistente a broca do milho so aprovados para venda nos USA. 1997 Algodo resistente ao Roundup comercializado nos USA. 1998 Comercializao do milho resistente ao Roundup 1999 O Presidente Clinton premia quatro cientistas da Monsanto com Medalha da Tecnologia 2000
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Seqenciamento completo do genoma humano anunciado. Surgem novas perspectivas para a biotecnologia.
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A
cidos nuclicos Grandes molculas, geralmente encontradas no ncleo das clulas e/ou citoplasma, formadas de unidades chamadas nucleotdeos. Os dois tipos de cidos nuclicos so o DNA e o RNA. Aerbico Que necessita de oxignio para o crescimento. Agrobactria Uma bactria que contm um plasmdeo que til na transferncia de material gentico para plantas. Alelo Qualquer uma de possveis formas alternativas de um gene. Amino cidos Unidades constituintes das protenas. H 20 aminocidos: alanina, arginina, asparagina, cido asprtico, cistena, cido glutmico, glutamina, glicina, histidina, isoleucina, leucina, lisina, metionina, fenilalanina, prolina, serina, treonina, triptofano, tirosina, e valina. Amplificao O processo de se conseguir vrias cpias de um gene ou segmento cromossmico. Anaerbico Que cresce na ausncia de oxignio. Antibitico Substncia qumica formada como um metablico de bactrias ou fungos, usado para tratar infeces bacterianas. Podem ser produzidos naturalmente, usando microrganismos ou sintetizado quimicamente. Anticorpo Proteina produzida por humanos e animais superiores em respota a presena de antgenos especficos. Anticorpo monoclonal Anticorpo purificado, altamente especfico, que derivado de somente um clone de clulas e reconhece apenas um antgeno. Antigeno Uma substncia que, ao ser introduza no corpo, induz a resposta imune por um anticorpo especfico. Antisoro Soro do sangue contendo anticorpos contra um antgeno. Antissoros so usados para conferir imunidade para muitas doenas. Atenuado Enfraquecido, com referncia a vacinas, feitas de organismos patognicos que foram tratados de modo a no ser habis para causar doenas. Autoimunidade Condio na qual o corpo desenvolve uma resposta imune contra seu prprio organismo ou tecidos.
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B
Bacterifago Vrus que infecta bactrias. Tambm chamado fago. Bactria Organismo microscpico unicelular sem membrana interna (no possui organelas). Alguns so utilizados em manufatura de comida, outros so parasitas de outros organismos e alguns decompositores. Base nitrogenada Uma das quatro unidades qumicas do DNA que, de acordo com sua ordem e pareamento, representam os diferentes aminocidos. As quatro bases so: Adenina (A), Citosina (C), Guanina (G) e Timina (T). No RNA, a uracila substitui a timina. Biblioteca (genmica ou cDNA) Conjunto de genes ou fragmentos de DNA isolados e mantidos em vetores especficos (plasmdeos, fagos, etc...) Bioensaio Determinao da efetividade de um composto em animais, tecidos ou organismos, comparando com uma preparao padro. Biocataltico Em bioprocessamento, uma enzima ou microrganismo que ativa ou acelera uma reao qumica. Biochip Equipamento eletrnico que usa molculas orgnicas para formar um semicondutor (atualmente tambm tem sido usado o termo para descrever conjuntos de fragmentos de DNA sintetizados em matriz slida). Biodegradvel Capaz de ser quebrado pela ao de microrganismos e enzimas. Biomassa A massa de material biolgico (ex. micrbios ou plantas), comumente usada para referir para estoques de agricultura. Em microbiologia refere-se a massa de clulas de micrbios em estudos de crescimento. Biosensor Aparelho no qual sistemas de reconhecimento biolgicos (enzimas, anticorpos), sao acoplados a microeletrnicos para tornar possvel a deteco de baixos nveis de substncias como acares e protenas em fludos corpreos, poluentes em gua e gases no ar. Biotecnologia Desenvolvimento de produtos usando um processo biolgico, o que pode ser realizado usando organismos intactos (leveduras, bactrias, etc...), manipulados geneticamente, ou pelo uso de substncias naturais de microrganismos (enzimas).
C
Calo Um conjunto de clulas no diferenciadas de uma planta que pode, em algumas espcies, ser induzido a formar uma planta inteira. Carcinognico Agente causador de cncer.
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Clula A menor unidade estrutural de um organismo vivo que hbil para crescer e reproduzir independentemente. Clula germinativa Clula reprodutiva (esperma ou vulo). Tambm chamada gameta ou clula sexual. Clulas somticas Clulas outras que no sexuais ou germinativas. CitoReferente clula. Citoplasma Material celular contido dentro de uma membrana celular e que circunda o ncleo. Clonagem de DNA Processo pelo qual fragmentos de DNA de alguma fonte podem ser isolados e amplificados muitas vezes pela insero em plasmdeos ou bacterifagos e crescimento de clulas os contendo. Clone Um grupo de genes ou organismos derivados de um nico ancestral. Cdigo gentico Mecanismo pelo qual a informao gentica estocada nos organismos vivos. O cdigo usa um conjunto de 3 bases (cdons) para cada aminocido que constitui as protenas. Cdon Uma seqncia de trs nucleotdeos que especificam um aminocido ou representam um sinal de terminao. Cromossomos Estruturas nas clulas que contm o DNA associado com protenas. Os genes esto contidos nos cromossomos. Cultura Como um nome, significa o crescimento de microrganismos em meio preparado. Como verbo, o crescimento. Cultura celular Crescimento de clulas sob condies laboratoriais.
D
Demanda Biolgica de Oxignio (BOD) A amostra de oxignio usada para crescer microrganismos em gua que contm matria orgnica. Comumente utilizada como indicadora de nveis de poluio. Diagnstico Processo usado para detectar uma doena ou uma condio mdica. Sondas de DNA e anticorpos so utilizados em diagnsticos. Diferenciao O processo de mudanas bioqumicas e estruturais pelas quais as clulas tornamse especializadas em forma e funo. Diplide Clulas contendo dois conjuntos de cromossomos idnticos. DNA (cido desoxiribonuclico) A molcula que carrega a informao gentica da maioria dos organismos. O DNA consiste de quatro bases (adenina, citosina, guanina e timina) e um
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arcabouo formado por acar e fosfatos, arranjados em duas fitas que formam uma dupla hlice. DNA complementar (cDNA) DNA sintetizado utilizando como molde o RNA mensageiro. Este tipo de DNA usado para clonagem ou como sondas para localizar genes especficos em estudos de hibridizao. Dupla hlice Termo usado para descrever a configurao da molcula de DNA. A hlice consiste de duas fitas de nucleotdeos, espiralizadas, ligadas uma a outra por pontes de hidrognio entre as bases.
E
Endonuclease Uma enzima capaz de clivar o DNA em pontos especficos, internamente, produzindo assim fragmentos de DNA. Engenharia gentica A tecnologia usada para alterar o material gentico das clulas vivas para tornlas capazes de produzir novas substncias or realizar determinadas funes. Enzima Uma protena com atividade cataltica que acelera a velocidade de reaes qumicas. So necessrias para o crescimento celular e reproduo. Enzima de Restrio Uma enzima que cliva o DNA em seqncias especficas.
F
Fatores estimulantes de colnia
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Grupo de linfocinas as quais induzem a maturao e proliferao de clulas brancas a partir de clulas primitivas presentes na medula. Fentipo Caractersticas observveis, resultantes da interao entre o gentipo e o ambiente. Fermentao Processo de crescimento de microrganismos para a produo de vrios compostos qumicos ou farmacuticos. Micrbios so normalmente incubados sob condies especficas na presena de nutrientes em grandes tanques chamados fermentadores. Fotossntese Estratgia utilizada pelas plantas para converter energia luminosa em energia qumica, a qual ento usada para dar suporte aos processos biolgicos das plantas. Fungo Um organismo eucarioto que possui parede celular. No podem realizar fotossntese e se alimentam de matria orgnica Fuso Unio da membrana de duas clulas, criando uma clula filha que contm o material nuclear das clulas parentais. Usada para fazer hibridomas.
G
Gene Um segmento do cromossomo responsvel pela codificao de uma protena ou de RNA com funo dentro da clula (ex. RNA transportador, ribossmico, etc...). Gene estrutural Um gene que codifica para uma protena, tal qual uma enzima. Gene regulatrio Um gene que atua no controle atividade de outros genes. Gentica Molecular Estudo de como os genes funcionam e controlam o funcionamento celular. Genoma O material hereditrio total de uma clula, compreendendo todo o conjunto de cromossomos encontrado no ncleo de uma espcie. Gentipo Caractersticas genticas de um indviduo. Germoplasma A variabilidade gentica total, representada por clulas germinativas ou sementes, avalivel para uma populao de organismos em particular.
H
Haplide Uma clula que possui a metade do nmero usual de cromossomos ou apenas um conjunto de cromossomos. Hereditariedade Transferncia da informao gentica de pais para a sua prognie. Hibridizao
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Produo de uma prole de hbridos a partir de parentais no similares. O processo pode ser usado para produzir plantas hbridas (pelo cruzamento de duas variedades diferentes) ou hibridomas (clulas hbridas formadas pela fuso de duas clulas diferentes, usadas para produzir anticorpos). O termo tambm usado para se referir ligao de fitas complementares de DNA ou RNA.. Hibridoma Clula produzida pela fuso de duas clulas de diferentes origens. Na tecnologia de anticorpos monoclonais, hibridomas so formados pela fuso de uma clula imortal (que se divide continuamente) e uma clula que produz um anticorpo. Homlogo Correspondente em estrutura, posio ou origem (principalmente esta ltima). Hormnio Um composto, podendo ser um peptdeo, que atua como um mensageiro, liberando instrues para que se comece ou pare certas atividades fisiolgicas. Hormnios so sintetizados em um tipo de clula e ento liberados para atuar em outros tipos celulares. Hormnio de Crescimento (Somatotropina) Uma protena produzida na glndula pituitria (hipfise) e que envolvida em crescimento celular. Hormnio de crescimento humano usado para tratar nanismo. Vrios hormnios de crescimento animais so utilizados para incrementar a produo de leite bem como para produzir um tipo de carne com menor teor de gordura. Hospedeiro Uma clula ou organismo usado para crescimento de um vrus, plasmdeo, ou outra forma de DNA exgeno, ou para produo de substncias clonadas.
I
Imunidade No susceptibilidade a doenas ou efeitos txicos de um material antignico. Imunidade ativa Um tipo de imunidade adquirida para uma doena ou por ter portado a doena ou ter recebido uma vacina contra ela. Imunoensaio Tcnica para identificar substncias atravs de anticorpos. Imunodiagnstico O uso de anticorpos especficos para dosar uma substncia. Esta ferramenta til para diagnstico de doenas infecciosas e a presena de substncias estrangeiras em uma variedade de fludos animais (sangue, urina, etc...). Esta sendo investigado o uso para localizar clulas tumorais no corpo. Imunognico Qualquer substncia que pode estimular uma resposta imune. Imunoglobulina Nome geral para protenas que funcionam como anticorpos. Imunologia Estudo de todo fenmeno relacionado com a resposta do corpo a um antgeno apresentado (ex. imunidade, sensibilidade e alergia). Imunotoxina
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Anticorpos monoclonais que tem uma molcula txica agregada. A molcula direcionada contra uma clula tumoral e a toxina responsvel pela morte da clula. Interferon Uma classe de protenas importantes na resposta imune. Interferons inibem infeces virais e podem ter propriedades anti-cncer. Intron Em eucariotos, uma seqncia de DNA que contida no gene mas no codifica para protena. retirado do RNA recm sintetizado pelo mecanismo de Splicing. In vitro Literalmente, in vidro. Realizado em um tubo de teste ou outro recipiente de laboratrio. In vivo No organismo vivo.
L
Leuccito Clula branca do sangue, linfa e tecidos que um componente importante na resposta imune. Ligase Uma enzima que liga segmentos de DNA ou RNA, sendo chamadas DNA ligases e RNA ligases respectivamente. Ligao (Linkage) A tendncia de certos genes de ser herdados juntos devido a uma proximidade fsica no cromossomo. Linfcitos B (B-cells) Uma classe de linfcitos liberados da medula, a qual produz anticorpos. Linhagem celular Clulas que crescem e replicam continuamente for a do organismo vivo. Linfocina Uma classe de protenas solveis, produzidas por clulas brancas do sangue, que desempenham um papel na resposta imune. Lise Quebra de clulas em partes.
M
Mapeamento Gnico Determinao da posio relativa de um gene no cromossomo. Meio de cultura Qualquer sistema de nutrientes para o cultivo de bactrias ou outras clulas; usualmente uma mistura complexa de materiais orgnicos e inorgnicos. Meiose Processo de diviso da clula no qual a clula filha possui metade do nmero de cromossomos da parental. Clulas sexuais so formadas por este processo. mRNA (RNA mensageiro) cido, nuclico, fita simples, que carrega a instruo para o ribossomo sintetizar uma protena em particular.
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Metabolismo Todas as atividades bioqumicas realizadas por um organismo para mant-lo vivo. Micrbios herbicidas/pesticidas Microrganismos que so txicos para plantas/insetos especficos. Devido a sua especificidade e toxicidade limitada, estes organismos podem ser preferidos aos qumicos para controle de pestes. Microbiologia Study of living organisms that can be seen only under a microscope. Microorganism Any organism that can be seen only with the aid of a microscope. Also called microbe. Mieloma Um tipo de clula tumoral que usada na tecnologia de anticorpos monoclonais para formar hibridomas. Mitose Processo de reproduo da clula pelo qual as clulas filhas so idnticas em nmero cromossmico s parentais. Mutagnico Substncia que induz mutaes. Mutante Uma clula que manifesta novas caractersticas devido a modificaes no DNA. Mutao Uma troca repentina no material gentico de uma clula.
N
Nuclease Uma enzima que, pela clivagem de ligaes qumicas, quebra o DNA em seus nucleotdeos constituintes. Nucleotdeos Os blocos constituintes dos cidos nuclicos. Cada nucleotdeo composto de acar, fosfato e uma das quatro bases nitrogenadas. A seqncia de bases dentro de um cido nuclico determina qual protena ser sintetizada. Ncleo A estrutura dentro das clulas eucariticas, circundada por uma membrana, que contm os cromossomos de um organismo. Nmero de cpias Geralmente refere-se ao nmero de molculas de um plasmdeo em comparao com o cromossomo.
O
Oligonucleotdeo Um polmero consistindo de um pequeno nmero de nucleotdeos. Oncogene Gene capaz de causar cncer. Operador Uma regio do cromossomo, adjacente ao operon, onde uma protena repressora liga para prevenir a transcrio do operon. Operon
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Seqncia de genes responsveis pela sntese de enzimas necessrias para a biossntese ou utilizao de determinadas molculas. Um operon controlado por uma seqncia operadora e um gene repressor.
P
Par de bases Duas bases em diferentes fitas do DNA que se pareiam entre si. Adenina sempre pareia com tima e uracila e guanina com citosina. Patgeno Organismo causador de doena. Peptdeo Dois ou mais aminocidos ligados por uma ligao peptdica. Plasma A frao fludica do sangue (no celular). Plasmdeo Uma forma de DNA circular que carrega certos genes e capaz de replicar autonomamente em uma clula hospedeira. Policlonal Derivado de vrios tipos de clulas. Polmero Uma molcula longa de unidades repetidas. Polimerase Termo geral para descrever enzimas que realizam a sntese de cidos nuclicos. Polipeptdeo Cadeia longa de aminocidos ligados por ligaes peptdicas. Procarioto Um organismo (bactria, algas azuis) no qual o DNA no est incluso dentro de uma membrana nuclear. Processamento Downstream Os estgios de processamento realizados aps a fermentao ou bioconverso. Inclui separao, purificao e empacotamento do produto. Promotor Uma seqncia de DNA que localizada antes do incio de um gene e que controla a sua expresso. Promotores so requeridos para a ligao da RNA polimerase e conseqente incio da transcrio. Protena Uma molcula composta de aminocidos. Existem muitos tipos de protenas, todas desenvolvem um nmero diferente de funes essenciais para o crescimento da clula. Protoplasto Uma clula (fungo ou planta) que teve sua parede celular removida, geralmente por tratamentos enzimticos.
R
Radioimunoensaio Um teste diagnstico que usa anticorpos para detectar traos de uma substncia. Estes testes so teis em pesquisa bioqumica para o estudo de drogas interagindo com seus receptores. Recombinante, DNA (rDNA)
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O DNA formado pela combinao de segmentos de DNA de diferentes tipos de organismos.. Replicao Reproduo ou duplicao de uma cpia exata de uma fita de DNA. Repressor Uma protena que liga a um operador adjacente a um gene estrutural, inibindo a transcrio deste gene. Retrovirus Vrus de RNA que contm a enzima transcriptase reversa. Esta enzima converte o RNA viral em DNA, o qual combina-se com o DNA da clula e promove a sntese de mais partculas virais e RNA para os novos vrus. Ribossomo Um componente celular, contendo protena e RNA, envolvido (e essencial) na sntese de protenas. Ribozima Uma enzima feita de RNA ao invs de protena. Ribozimas desenhadas podem cortar as molculas de RNA em pontos especficos so conhecidas como tesouras gnicas. RNA (cido ribonuclico) Uma molcula similar ao DNA, porm simples fita, que funciona primariamente para decodificar instrues para a sntese de protenas contidas nos genes.
S
Seqncia de DNA A ordem de bases na molcula de DNA. Seqenciamento de DNA Determinao da seqncia de bases do DNA. Sistema vetor-hospedeiro Combinao de uma clula que recebe o DNA (hospedeira) e uma substncia transportadora de DNA (vetor) usada para introduzir DNA exgeno em uma clula. Sistema imune A agregao de clulas, substncias biolgicas (anticorpos), e atividades celulares que juntos do resistncia a um organismo. Sonda de DNA DNA marcado com istopo radioativo, corante ou enzima, e que utilizado para localizar uma seqncia particular de nucleotdeos ou um gene na molcula de DNA. Splicing Remoo dos introns e ligao de xons para formar uma seqncia contgua no RNA. Substrato Molcula ou material que sofre ao de uma enzima. Supressor (gene) Um gene que pode reverter o efeito de uma mutao em outros genes.
T
Terapia gnica
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A substituio de um gene defeituoso em um organismo que sofre de uma doena gentica. Tcnicas de DNA recombinante so utilizadas para isolar o gene e inseri-lo em humanos. Template Uma molcula que serve como molde para sntese de outra. Teraputicos Compostos que so usados para tratar doenas especficas. T-cells (linfcitos T) Glbulos brancos que so produzidos na medula mas maturados no timo. Eles so importantes nas defesas do corpo contra certas bactrias e fungos; ajudam os linfcitos B a fazer anticorpos e ajudam no reconhecimento e rejeio de tecidos estranhos. Linfcitos T podem ser importantes na defesa contra o cncer. Toxina Uma substncia txica produzida por certos microrganismos. Transcrio Sntese do RNA mensageiro (ou qualquer outro) utilizando como molde o DNA. tRNA (RNA transportador) Molcula de RNA que carrega aminocidos para stios nos ribossomos para sntese das protenas. Transformao Alterao na estrutura gentica de um organismo pela incorporao de um DNA exgeno. Transgnico (organismo) Um organismo formado pela insero de um material gentico na linhagem germinativa de organismos. Tcnicas de DNA recombinante so comumente utilizadas para produzir organismos transgnicos. Traduo Processo pelo qual a informao contida no RNA mensageiro usada para dirigir a sntese de uma protena.
V
Vacina Uma preparao que contm um antgeno consistindo no organismo inteiro (morto ou atenuado) ou partes deste organismo, usado para causar imunidade contra uma doena que este organismo causa. Vacinas podem ser naturais, sintticas ou derivadas da tecnologia do DNA recombinante. Vetor O agente (plasmdeo ou virus) usado para transferir DNA para uma clula. Virion Uma partcula viral elementar consistindo de material gentico e uma capa protica. Virulncia Habilidade de infectar e causar doena. Vrus Um organismo sub-microscpico que contm informao gentica mas no consegue se reproduzir autonomamente. Para replicar, ele deve invadir uma clula e usar parte da sua maquinaria reprodutiva.
W
Centro de Biotecnologia Molecular e Estrutural CBME (CEPID-FAPESP)
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Wild type (tipo selvagem) A forma de um organismo que ocorre mais frequentemente na natureza.
Y
Levedura Termo geral que descreve fungos unicelulares que se reproduzem por brotamento. Algumas leveduras podem fermentar carboidratos (amido e acar), sendo muito importantes na fabricao de pes e outros alimentos.
Bibliografia de Importncia
1. Micklos, D.A. & Freyer, G. A., DNA Science: A First Course in Recombinant DNA Technology. Cold Spring Harbor Laboratory & Carolina Biological Supply Company. 477 pp. Available from: Cabisco Biotechnology, 2700 York R., Burlington, NC 27215; 800-334-5551 or 800-632-1231 (NC only). 2. NABT Sourcebook of Biotechnology. 3. Bud, Robert, "Janus-faced Biotechnology - An Historical Perspective", Trends in Biotechnology v. 7, 1989, p. 230-33. 4. Torrey, John G., "The Development of Plant Biotechnology", American Scientist, 1985, 73:354-363. 5. Goodman, David C., From Farming to Biotechnology: A Theory of Agroindustrial Development Oxford: Blackwell, 1987. 6. Seabrook, John, "Tremors in the Hothouse", The New Yorker July 19, 1993 p. 32-41.