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J.

MALLOL
Especialista en Radiofarmacia Academia Iberoamericana de Farmacia

MANUAL DE RADIOFARMACIA

J. Mallol, 2008 Reservados todos los derechos. No est permitida la reproduccin total o parcial de este libro, ni su tratamiento informtico, ni la transmisin de ninguna forma o por cualquier medio, ya sea electrnico, mecnico, por fotocopia, por registro u otros mtodos, sin el permiso previo y por escrito de los titulares del Copyright.

Ediciones Daz de Santos E-mail: ediciones@diazdesantos.es Internet://http:www.diazdesantos.es ISBN: 978-84-7978-854-4 Depsito legal: M. 5.797-2008 Diseo de cubierta: ngel Calvete Fotocomposicin e impresin: Fernndez Ciudad Encuadernacin: Rstica - Hilo Impreso en Espaa

ndice

Prefacio .................................................................................... XVII Prlogo ..................................................................................... XXI 1. Generalidades .................................................................... 1.1. Productos radiofarmacuticos y radiofrmacos ......... 1.2. Utilizacin clnica de los radiofrmacos .................... 1.2.1. Exploraciones diagnsticas por la imagen ...... 1.2.2. Exploraciones diagnsticas sin imagen ........... 1.2.3. Radioterapia metablica .................................. 1.3. Caractersticas de los radiofrmacos ............................ 1.3.1. Inercia metablica ........................................... 1.3.2. Afinidad por el rgano diana ........................... 1.3.3. Vida media efectiva corta ................................ 1.3.4. Disponibilidad ................................................. 1.3.5. Emisin radiactiva adecuada ........................... 1.4. Mecanismos de accin de los radiofrmacos ............. 1.4.1. Fagocitosis y bloqueo capilar .......................... 1.4.2. Secuestro celular .............................................
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MANUAL DE RADIOFARMACIA

1.4.3. 1.4.4. 1.4.5. 1.4.6. 1.4.7.

Cambio inico ................................................. Simple difusin ............................................... Integracin bioqumica o farmacolgica ......... Analoga estructural ........................................ Proceso activo .................................................

9 9 10 10 10 11 12 13 13 13 14 15 15 16 17 18 18 19 19 20 20 24 24 25 26 29 31 33 33

1.5. Conservacin y degradacin de radiofrmacos .......... Bibliografa .......................................................................... 2. Produccin de radionclidos. Generadores .................... 2.1. Introduccin ............................................................... 2.2. Produccin de radionclidos en reactor nuclear ......... 2.2.1. Activacin neutrnica ..................................... 2.2.2. Reaccin de fisin ........................................... 2.3. Ciclotrn ..................................................................... 2.4. Dianas ......................................................................... 2.5. Fundamentos del generador de radionclidos ............ 2.6. Generadores de radionclidos .................................... 2.6.1. Generador de 113Sn/113mIn ................................. 2.6.2. Generador de 68Ge/68Ga ................................... 2.6.3. Generador de 87Y/87mSr .................................... 2.7. Generadores utilizados en radiofarmacia ................... 2.7.1. Generador de 99Mo/99mTc ................................. 2.7.2. Generador de 81Rb/81mKr .................................. 2.8. Control de calidad del generador de 99Mo/99mTc ........ 2.8.1. Control fsico-qumico .................................... 2.8.2. Aspectos radiolgicos ..................................... 2.8.3. Control biolgico ............................................. Bibliografa .......................................................................... 3. Sntesis de molculas marcadas ....................................... 3.1. Trazadores radiactivos de uso in vivo e in vitro .........

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3.2. Tcnicas de marcaje ................................................... 3.2.1. Sntesis in vitro ................................................ 3.2.2. Sntesis in vivo ................................................. 3.3. Degradacin y conservacin de trazadores ................ 3.4. Marcaje de molculas con radioyodo ........................... 3.4.1. Istopos de radioyodo utilizados ..................... 3.4.2. Reacciones de marcaje con radioyodo ............ 3.5. Mtodos de purificacin tras el marcaje ..................... 3.6. Degradacin y conservacin de trazadores radioyodados .............................................................................. 3.7. Marcaje de molculas con tecnecio. Propiedades generales del 99mTc ............................................................. 3.7.1. Caractersticas fsicas ...................................... 3.7.2. Disponibilidad ................................................. 3.7.3. Flexibilidad ...................................................... 3.8. Preparacin de radiofrmacos tecneciados ................. 3.8.1. Indicaciones generales para el marcaje con tecnecio [99mTc] .................................................... 3.8.2. Equipos reactivos ............................................ 3.8.3. Pertecneciato [99mTc] de sodio ......................... 3.8.4. Incubacin ....................................................... 3.8.5. Reaccin de marcaje ........................................ 3.8.6. Control de calidad ........................................... 3.8.7. Dispensacin ................................................... 3.9. Marcaje con indio [111In] ............................................ Bibliografa .......................................................................... 4. Control de calidad de radiofrmacos .............................. 4.1. Formas farmacuticas ................................................. 4.2. Controles fsico-qumicos .......................................... 4.2.1. Estado fsico del radiofrmaco ........................

34 34 35 35 37 37 38 40 41 41 42 42 42 43 44 45 47 48 48 49 51 51 52 53 53 54 54

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4.2.2. Tamao y nmero de partculas ...................... 4.2.3. pH .................................................................... 4.2.4. Tonicidad de las preparaciones inyectables .... 4.3. Controles radiolgicos ................................................ 4.3.1. Concentracin radiactiva ................................. 4.3.2. Pureza radionucledica .................................... 4.3.3. Pureza radioqumica ........................................ 4.3.4. Actividad especfica ........................................ 4.4. Controles biologicos ................................................... 4.4.1. Esterilidad ........................................................ 4.4.2. Apirogenicidad ................................................ 4.4.3. Toxicidad ......................................................... 4.4.4. Ensayo de biodistribucin ............................... 4.5. Controles industriales y hospitalarios ........................ 4.6. Pureza radioqumica de radiofrmacos tecneciados ... 4.7. Reacciones adversas a los radiofrmacos ................... 4.8. Interacciones de radiofrmacos con otros medicamentos ............................................................................... 4.9. Contraindicaciones y precauciones especiales en el uso de radiofrmacos .................................................. 4.10. Diseo de un nuevo radiofrmaco .............................. 4.10.1. Biodistribucin .............................................. 4.10.2. Mecanismo de accin .................................... 4.10.3. Vida media efectiva ....................................... 4.10.4. Toxicidad ....................................................... Bibliografa .......................................................................... 5. Monografas de algunos radiofrmacos ............................. 5.1. Radiofrmacos yodados ............................................. 5.1.1. Yoduro sdico [131I, 125I, 123I] ........................... 5.1.2. Albmina srica yodada (SARI) .....................

54 56 57 57 57 58 59 63 64 64 65 66 67 67 68 72 73 75 78 79 79 79 79 81 83 84 84 91

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5.1.3. Orto yodohipurato sdico [123I, 131I] ................ 93 5.1.4. Iobenguano o metayodo bencil guanidin (MIBG-123I, MIBG-131I) ................................... 96 5.1.5. Noryodocolesterol [131I] ................................... 99 5.1.6. Fibringeno [125I] ............................................. 101 5.2. Radiofrmacos tecneciados ........................................ 5.2.1. Pertecneciato (99mTcO4 ) ................................. 5.2.2. Albmina srica humana (HSA-99mTc) .......... 5.2.3. Radiofrmacos particulados de albmina: macroagregados y microesferas de albmina (MAA-99mTc y MEA-99mTc) .......................... 5.2.4. Succmero de tecnecio (DMSA-99mTc) ....... 5.2.5. Radiofrmacos particulados: coloides y microcoloides tecneciados ...................................... 5.2.6. Derivados del cido iminodiactico (IDA) ... 5.2.7. Pentetato de tecnecio (DTPA-99mTc) ............. 5.2.8. Polioles de tecnecio (Gluconato-99mTc, Gluceptato-99mTc) ................................................ 5.2.9. Derivados del cido fosfrico ....................... 5.2.10. Otros radiofrmacos tecneciados ................... 103 104 107

108 114 116 121 123 126 127 131

5.3. Radiofrmacos de selenio [75Se] ................................. 142 5.3.1. Selenio [75Se] norcolesterol ............................. 143 5.3.2. cido [75Se] tauroselclico (SeHCAT) ........... 145 5.4. Radiofrmacos de indio [111In] ................................... 5.4.1. Pentetato de indio [111In] ................................ 5.4.2. Penteteotrida de indio [111In] (Octreoscan) ... 5.4.3. Cloruro de indio [111In] .................................... 5.4.4. Oxinato de indio (111In-oxina) ......................... 5.5. Otros radiofrmacos de uso diagnstico .................... 5.5.1. Citrato de Galio [67Ga] .................................... 5.5.2. Cloruro de Talio [201Tl] ................................... 5.5.3. Cpsulas de cianocobalamina [58Co/57Co-jugo gstrico] ........................................................... 146 147 148 150 151 152 152 154 156

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5.5.4. 5.5.5. 5.5.6. 5.5.7. 5.5.8.

Radiofrmacos derivados de cromo [51Cr] ...... Gases radiactivos ............................................. Anticuerpos monoclonales .............................. Clulas sanguneas marcadas .......................... Radiofrmacos emisores de positrones ...........

157 159 161 161 165 169 169 170 173 175

5.6. Radiofrmacos de uso teraputico .............................. 5.6.1. Fosfato [32P] de sodio ...................................... 5.6.2. Radiofrmacos analgsicos ............................. 5.6.3. Radiofrmacos de tratamiento articular .......... 5.6.4. Radiofrmacos para inmunorradioterapia .......

Bibliografa .......................................................................... 176 6. Utilizacin clnica de los radiofrmacos .............................. 177 6.1. Exploraciones gammagrficas .................................... 6.1.1. Exploraciones gammagrficas: generalidades . 6.1.2. Instrumentacin en las exploraciones gammagrficas .......................................................... 6.1.3. Exploraciones de hgado y bazo .................... 6.1.4. Exploraciones del sistema urinario ............... 6.1.5. Exploraciones del sistema cardiovascular ..... 6.1.6. Exploraciones pulmonares ............................ 6.1.7. Exploraciones tiroideas ................................. 6.1.8. Exploraciones seas y de mdula sea .......... 6.1.9. Exploraciones de procesos inflamatorios y tumorales .......................................................... 6.1.10. Exploraciones del aparato digestivo .............. 6.1.11. Glndulas adrenales ....................................... 6.1.12. Exploraciones cerebrales ............................... 6.1.13. Otras exploraciones ....................................... 177 177 178 181 184 186 188 191 192 195 195 197 197 198

6.2. Exploraciones no gammagrficas con radiofrmacos 199 6.2.1. Introduccin .................................................... 199 6.2.2. Captacin y descarga tiroidea ......................... 200

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6.2.3. 6.2.4. 6.2.5. 6.2.6. 6.2.7. 6.2.8.

Absorcin de vitamina B12 (Test de Schilling) Rinorrea y otorrea ............................................ Renograma ...................................................... Hematologa nuclear ....................................... Ferrocintica .................................................... Absorcin intestinal de calcio .........................

201 202 203 203 206 206 207 207 209 211 211 212 213 214 214

6.3. Radioterapia metablica por radiofrmacos ............... 6.3.1. Generalidades .................................................. 6.3.2. Tratamiento de patologas tiroideas ................ 6.3.3. Tratamiento de policitemia vera y leucemia ... 6.3.4. Tratamiento intraarticular e intracavitario ....... 6.3.5. Tratamiento paliativo del dolor en metstasis seas ................................................................ 6.3.6. Tratamiento de tumores adrenrgicos ............. 6.3.7. Tratamiento del hepatocarcinoma ................... 6.3.8. Inmunorradioterapia ........................................

Bibliografa .......................................................................... 215 7. Tcnicas analticas radioinmunolgicas .............................. 217 7.1. Radioinmunoensayo (RIA): definicin y concepto ..... 217 7.2. Elementos del RIA ...................................................... 7.2.1. Antgeno fro ............................................... 7.2.2. Anticuerpo ....................................................... 7.2.3. Trazador radiactivo ......................................... 7.2.4. Mtodos de separacin .................................... 218 218 219 221 223

7.3. Anlisis inmunorradiomtrico (IRMA) ....................... 225 7.4. Realizacin del radioinmunoensayo ............................ 226 7.5. Contaje de la radiactividad .......................................... 230 7.6. Clculo y representacin del RIA ............................... 231 7.7. Pruebas de validacin del RIA .................................... 232 7.7.1. Paralelismo ...................................................... 232

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7.7.2. Recuperacin ................................................... 234 7.7.3. Correlacin ...................................................... 234 7.8. Parmetros de control de calidad en el RIA ................ 235 Bibliografa .......................................................................... 236 8. Aspectos legales de los radiofrmacos ............................... 237 8.1. Evolucin histrica de los radiofrmacos ................... 237 8.2. Los radiofrmacos como medicamentos ..................... 239 8.3. Registro de medicamentos radiofarmacuticos ........... 241 8.4. Aspectos legales de los medicamentos radiofarmacuticos ............................................................................ 8.4.1. Produccin industrial ....................................... 8.4.2. Ensayos clnicos .............................................. 8.4.3. Registro sanitario ............................................. 8.4.4. Distribucin ..................................................... 8.4.5. Farmacopea ..................................................... 8.4.6. Farmacovigilancia ........................................... 8.4.7. Radiofarmacia hospitalaria .............................. 8.4.8. Otros aspectos ................................................. 8.4.9. Disposiciones sobre sustancias radiactivas ..... 8.5. Normas de buena prctica radiofarmacutica (BPR) a nivel hospitalario ......................................................... 8.5.1. Personal ........................................................... 8.5.2. Locales y equipos ............................................ 8.5.3. Preparacin de radiofrmacos ......................... 8.5.4. Control de calidad ........................................... 8.5.5. Documentacin ................................................ 243 243 244 245 246 247 248 249 250 250 252 253 254 255 257 258

8.6. Principales normas legales que regulan los medicamentos radiofarmacuticos y las sustancias radiactivas ............................................................................... 259 8.6.1. Directivas y reglamentos comunitarios ........... 260 8.6.2. Leyes generales ............................................... 262

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8.6.3. Reales decretos ................................................ 262 Bibliografa .......................................................................... 263 9. Apndices ............................................................................ 265 A.1. Definiciones y unidades radiolgicas ......................... 265 A.2. Conversin de unidades de actividad del sistema internacional (SI) al sistema clsico y viceversa ........... 267 A.3. Monografas de la real farmacopea espaola de preparaciones radiofarmacuticas (2002) ............................ 268 A.4. Caractersticas fsicas de los radionclidos empleados en radiofarmacia ........................................................... 270 A.5. Glosario de trminos farmacuticos y definiciones ... 271 ndice analtico ........................................................................ 275

Prefacio

Mucho ha avanzado la Radiofarmacia desde que en 1989 se public mi primer libro sobre esta disciplina. En aquel tiempo su situacin era muy dispar en Europa ya que haba pases en los que los productos radiofarmacuticos no tenan consideracin de medicamentos, y la formacin en Radiofarmacia como disciplina era igualmente dispar. Desde entonces la situacin ha cambiado. Una Directiva comunitaria, la Directiva 89/343/CEE, vino a extender el carcter de medicamento a los productos radiofarmacuticos en todos los pases, y en una reunin celebrada en Rotterdam en abril del mismo ao, organizada por el European Committee on Radiopharmaceuticals de la EANM y el Consejo de Europa, se establecieron los criterios mnimos para la formacin en Radiofarmacia. En Espaa la Ley 25/1990, del Medicamento, recogi a los radiofrmacos en su articulado reconocindolos como medicamentos, y quedaron desde entonces en el mbito de aplicacin de los Reales Decretos adoptados en el desarrollo de la citada Ley: laboratorios farmacuticos, distribucin, ensayos clnicos, etc. En consecuencia, las firmas dedicadas a la distribucin de productos radiofarmacuticos debieron transformarse en laboratorios farmaXVII

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cuticos, y los productos debieron solicitar su autorizacin como medicamentos para poder ser comercializados en Espaa, al igual que en los dems pases de la Unin Europea. Por otra parte, la formacin especializada en Radiofarmacia comenz en 1993 al ofertarse las primeras plazas para esta especializacin, que aunque estaba reconocida desde 1982, no haba tenido desarrollo oficial. Desde entonces Radiofarmacia se ha consolidado plenamente, pasando de ser una especializacin de formacin bsicamente no hospitalaria a ser de formacin bsicamente hospitalaria, al igual que Farmacia Hospitalaria, Anlisis Clnicos, Bioqumica Clnica, y Microbiologa y Parasitologa. La Radiofarmacia tambin ha penetrado en la docencia universitaria a nivel de Licenciatura, y actualmente son varias las Facultades de Farmacia que la incluyen especficamente como asignatura. Situacin similar se da en los pases iberoamericanos, en los que la Radiofarmacia se oferta en numerosas universidades y es una actividad plenamente consolidada. Actualmente, la reciente Ley 29/2006, de 26 de julio, de garantas y uso racional de los medicamentos y productos sanitarios, ha supuesto el espaldarazo de la Radiofarmacia al establecer que toda la preparacin extempornea de radiofrmacos, el fraccionamiento de los mismos en dosis unitarias, o la preparacin no industrial de radiofrmacos PET, solo puede realizarse en una Unidad de Radiofarmacia autorizada, y bajo la responsabilidad de un facultativo especialista en Radiofarmacia. Los cambios acaecidos desde 1989 en torno a los radiofrmacos y a la Radiofarmacia no siempre han sido fciles, y se han encontrado resistencias en numerosas ocasiones. Pero el devenir de la Historia es difcil de soslayar, y la situacin de los radiofrmacos y de la Radiofarmacia en Espaa tiende a normalizarse con la de los dems pases de nuestro entorno, como pretenda la Directiva 89/343/CEE antes mencionada. Este libro va dirigido fundamentalmente a los estudiantes y a los residentes de Radiofarmacia, e intenta aportar una visin

PREFACIO

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general de la disciplina y de su aplicacin prctica. Por ello no se incluye una bibliografa detallada, normalmente fuera del alcance de los estudiantes, sino que en cada captulo se incluye una relacin de lecturas complementarias, normalmente basadas en libros ms asequibles a travs de las bibliotecas de los centros universitarios y hospitalarios, que orientarn al que desee profundizar ms en un tema puntual. Aunque los datos que se citan en el libro, especialmente en los captulos dedicados a la descripcin monogrfica de los radiofrmacos y a su utilizacin clnica, se basan en las monografas de Farmacopea y en la Ficha Tcnica aprobada de cada uno de los productos radiofarmacuticos, esta obra solo tiene carcter docente. El empleo de radiofrmacos tiene que ceirse a los datos consignados en la monografa vigente de la Farmacopea, y en la Ficha Tcnica autorizada en cada momento. Quiz sorprenda que las actividades se siguen expresando en los dos sistemas de unidades, en bequerelios y en curios, al igual que en las monografas de la USP. Esto se debe a que las unidades tradicionales, el curio y sus submltiplos, se siguen utilizando profusamente, aunque las unidades oficiales en la actualidad son el bequerelio y sus mltiplos. Quiero agradecer a mi compaera Isabel Freile, mdico especialista en Medicina Nuclear, la ayuda prestada en la supervisin la parte clnica de esta obra para dar la informacin necesaria al pblico a quien va dirigida, los estudiantes y residentes de Radiofarmacia. Igualmente quiero agradecer a Rafael Quesada y a Adolfo Garca su colaboracin en la preparacin de las ilustraciones. Si el libro que aparece ahora contribuye de alguna forma a la expansin de la Radiofarmacia como disciplina sanitaria, y facilita la formacin de profesionales y especialistas, me podr dar por satisfecho.
Dr. J. MALLOL

Prlogo

Me parece importante, para resaltar la necesidad de esta publicacin, iniciar este prlogo con la cita de Brbara Tuchman: Sin libros, la historia calla, la literatura enmudece, la ciencia se paraliza,. Gracias a este libro seguro que se va a evitar que la ciencia de la Radiofarmacia se paralice en los pases de habla hispana. Sin ningn gnero de dudas, era necesario actualizar los conocimientos existentes sobre Radiofarmacia, debido no slo al extraordinario avance en esta ciencia, sino tambin por la necesidad de textos para la formacin de especialistas. Se ha escrito mucho sobre Radiofarmacia y su importancia, desde que se cre dicha especialidad en nuestro pas, pero hemos encontrado un dficit de textos en espaol sobre esta materia. En consecuencia, era necesario tener una obra de categora en nuestro idioma. Este libro constituye una actualizada recopilacin tanto de los radiofrmacos actualmente conocidos como de su aplicacin clnica. Me parece muy adecuada la sistematizacin de la obra. Se inicia con un primer captulo relativo a consideraciones geneXXI

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rales sobre productos radiofarmacuticos y radiofrmacos; contina con su utilizacin clnica tanto en exploraciones diagnsticas por imagen, como en las exploraciones diagnsticas sin imagen y en radioterapia metablica. Se consideran las propiedades y caractersticas de los radiofrmacos, el mecanismo de accin de los mismos as como su conservacin y degradacin. Segn mi modesto entender uno de los captulos ms interesantes se corresponde con las monografas relativas a los principales radiofrmacos conocidos. Muy interesante tambin, la utilizacin clnica de los radiofrmacos, las tcnicas analticas y los aspectos legales, de enorme actualidad, pues en numerosas ocasiones se nos escapan estos datos, con la necesidad de que existan este tipo de manuales a los que podamos acudir. Parece oportuno la existencia de un captulo sobre tcnicas analticas radioinmunolgicas, aun cuando, segn mi entender, estas tcnicas han perdido importancia al existir metodologa igualmente especfica, pero de menor riesgo y a coste inferior. Finaliza con un complemento de apndices enormemente tiles. Para poder llegar a adquirir iniciativa cientfica es necesario poseer una adecuada formacin de base; aspectos y objetivos sobradamente conseguidos en este libro. Es importante resaltar la actualizacin existente sobre estas materias, valor aadido para este libro, y que no solo es til para el estudiante sino para el especialista en Radiofarmacia. En este sentido, sirve como manual que recoge la informacin existente hasta el momento. Es posible que hubiera sido mejor una aportacin de contenido en bibliografa ms especfica y extensa, por citar un ejemplo, en los ensayos de apirogenicidad, donde se recomienda la tcnica del LAL, remitindonos a la Farmacopea Europea. Esto no implica que estas referencias bibliogrficas deban de ser exhaustivas, pues sabemos la dificultad para lograrlo. Cuando un autor se embarca en la noble misin de escribir un libro, la primera pregunta que se le ocurre es conocer cual es la contribucin, qu se pretende conseguir con ese manual y su aportacin, en este caso dentro del campo sanitario, para a con-

PRLOGO

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tinuacin analizar si se consiguen los objetivos previstos. A mi entender, estos se consiguen plenamente; de cualquier forma existen especialistas en esta materia, quienes a la larga dictaminarn sobre el valor y utilidad de esta obra. Unas breves palabras para agradecer a nuestro acadmico Jess Mallol el enorme esfuerzo realizado por contribuir a que los que nos expresamos en espaol podamos disponer de tan magnfica publicacin, al tiempo que comentarle que debe sentirse feliz, pues el manual contribuye de forma precisa al conocimiento de la Radiofarmacia como disciplina sanitaria y estoy seguro de que va a contribuir de forma eficaz en la formacin de los futuros profesionales y especialistas de tan importante materia.
Profesor A. RAMOS CORMENZANA Presidente de la Academia Iberoamericana de Farmacia

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MANUAL DE RADIOFARMACIA

rgano Vejiga Riones Hgado Ovarios Testculos Dosis efectiva equivalente (mSv/MBq)

Dosis absorbidas (mGy/MBq) 0,065 0,0044 0,0013 0,0043 0,0028 0,0063

5.2.8. Polioles de tecnecio (Gluconato-99mTc, Gluceptato-99mTc) Son dos radiofrmacos muy similares que, tras el marcaje con 99mTc, pueden emplearse en exploraciones de morfologa y funcin renal. El gluconato de tecnecio est descrito en una monografa especfica de la Farmacopea Europea; el gluceptato de tecnecio tiene monografa en la USP 29. El gluconato se marca fcilmente con tecnecio. La pureza radioqumica se controla por cromatografa en capa fina de slicagel y metil-etil-cetona (ITLC-SG/MEK); el radiofrmaco permanece en el origen. El pH del medicamento est comprendido entre 4 y 8. Las actividades a administrar para la realizacin de exploraciones renales son de 74 a 370 MBq (2 a 10 mCi) por va endovenosa. Tambin, como indicacin secundaria, pueden emplearse estos radiofrmacos en exploraciones cerebrales (imagen cerebral, angiografa cerebral) en dosis de 370 a 740 MBq (10 a 20 mCi). Las dosis peditricas se ajustan por el peso o la superficie corporal.

MONOGRAFAS DE ALGUNOS RADIOFRMACOS

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Aunque de escasa frecuencia, hay descritos casos de reacciones adversas de tipo alrgico; las manifestaciones incluyen disnea, enrojecimiento, urticaria, taquicardia e hipotensin, etc. Tras la administracin endovenosa el 50% de la dosis inyectada se encuentra unida a protenas. La fraccin libre es eliminada por filtracin glomerular, mientras que la fraccin unida a protenas se elimina lentamente por secrecin tubular, de forma que se produce un acmulo de actividad en el tbulo distal proximal de las nefronas. No se conoce con certeza si la actividad inyectada se elimina como radiofrmaco inalterado o como metabolitos de este. Las dosis de radiacin absorbidas por el paciente tras la administracin de estos radiofrmacos (gluconato o gluceptato tecneciados) en un paciente adulto son las indicadas a continuacin:
rgano Vejiga Riones Hgado Ovarios Testculos Dosis efectiva equivalente (mSv/MBq) Dosis absorbidas (mGy/MBq) 0,056 0,049 0,0027 0,0045 0,0029 0,009

5.2.9. Derivados del cido fosfrico Los compuestos que contienen en su molcula grupos fosfato tienen capacidad para formar complejos con el 99mTc. Los radiofrmacos ms utilizados son el pirofosfato y los derivados del cido fosfnico.

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MANUAL DE RADIOFARMACIA

Figura 5.8. Estructuras moleculares del pirofosfato (superior) y difosfonato (inferior), ambas derivadas del cido fosfrico. Por sustitucin de R y R con distintos radicales en la estructura de difosfonato se obtienen los diversos compuestos utilizados como radiofrmacos tras su marcaje con 99mTc.

5.2.9.1. Derivados de difosfonato Los derivados difosfonatos son compuestos derivados del cido fosfrico que se marcan fcilmente con tecnecio y tienen una gran afinidad por el hueso, depositndose sobre los cristales de hidroxiapatita por un fenmeno de cambio inico. Los derivados de difosfonato ms utilizados como radiofrmacos tecneciados son: Medronato o metilen difosfonato (MDP). Oxidronato o hidroxidifosfonato (HDP). Propanodicarboxi difosfonato (DPD). El medronato de tecnecio est descrito en la Farmacopea Europea. El medicamento debe ser una solucin lmpida, con un pH comprendido entre 3,5 y 7,5, y puede contener aditivos (agentes antimicrobianos, antioxidantes, tampn, etc.).

MONOGRAFAS DE ALGUNOS RADIOFRMACOS

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El marcaje del medronato, y de los dems derivados difosfonatos, no ofrece dificultades especiales. Tras la reaccin de marcaje hay que controlar la pureza radioqumica, que debe ser superior al 95%. Este control puede realizarse por cromatografa en capa fina de slicagel y metil-etil-cetona como fase mvil, como indica la Farmacopea. En este sistema el radiofrmaco tiene un Rf = 0. El medronato de tecnecio, al igual que los dems derivados de difosfonato, se emplea en exploraciones seas, para delimitar reas de osteognesis alterada. La dosis tpica para un paciente adulto es de 500 MBq (13,5 mCi) por va intravenosa, pudiendo oscilar entre 300 y 700 MBq (8 a 19 mCi); la administracin de otras actividades debe estar justificada. La dosis peditrica puede ajustarse en funcin del peso del paciente o de su superficie corporal. Numerosos medicamentos pueden alterar la biodistribucin de estos radiofrmacos. As se han detectado acumulaciones extraseas en casos de administracin simultnea de compuestos de hierro, difosfonatos, agentes citostticos e inmunosupresores, anticidos derivados de aluminio, contrastes radiogrficos, antibiticos, antiinflamatorios, gluconato clcico inyectable, heparina, y cido -amino caproico. Aunque la toxicidad del medronato y medicamentos afines es reducida, se han descrito casos de reacciones adversas debidas a hipersensibilidad; tambin se conocen casos de hipotensin, nuseas, vmitos, vasodilatacin perifrica, etc. Tras la administracin, el medicamento se distribuye y es captado por el hueso, que llega a captar hasta el 50% de la dosis inyectada una hora despus de la administracin, y permanece casi constante hasta las 72 horas. La fraccin circulante del radiofrmaco se elimina principalmente por la orina, eliminndose ms del 40% de la dosis en las dos horas siguientes a la administracin. Una va secundaria de eliminacin, que oca-

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sionalmente puede resultar considerable y afectar a la calidad de la exploracin gammagrfica, es el sudor. Las dosis de radiacin resultantes de la exploracin con difosfonatos dependen de la edad del paciente, de la funcin renal, de la captacin sea, etc. La dosimetra estimada en la exploracin con medronato, en un paciente adulto con funcin renal normal, es la siguiente:
rgano Hueso Vejiga Riones Ovarios Testculos Mdula sea Dosis efectiva equivalente (mSv/MBq) Dosis absorbidas (mGy/MBq) 0,063 0,050 0,007 0,0035 0,0024 0,0096 0,008

Las dosis absorbidas tras la administracin de los dems derivados de difosfonato son semejantes a las debidas a la administracin de medronato-99mTc. 5.2.9.2. Pirofosfato (PYP) El pirofosfato se marca bien con pertecneciato [99mTc], con Sn como agente reductor, con un rendimiento de marcaje superior al 95%. Tras la administracin endovenosa se localiza en el tejido seo, acumulndose en funcin de la actividad metablica del hueso, aunque esta utilizacin ha sido totalmente desplazada por los difosfonatos; tambin se deposita sobre el
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miocardio en zonas infartadas, por lo que en ocasiones el pirofosfato de tecnecio se ha empleado en la deteccin y valoracin del infarto de miocardio. El pirofosfato se elimina por la orina. Actualmente el pirofosfato solo se emplea en el marcaje de eritrocitos, tiles en la realizacin de estudios angiogammagrficos para la evaluacin de la fraccin de eyeccin, funcin ventricular, perfusin de diversos rganos, etc. Los eritrocitos marcados tambin pueden emplearse en la determinacin del volumen sanguneo, o desnaturalizarse para realizar estudios esplnicos. El marcaje de los eritrocitos puede realizarse por mtodos in vivo, in vitro, o mixto, segn se indica ms adelante, al describir los radiofrmacos basados en muestras autlogas. Inyectando una dosis de 10 a 15 mg de PYP/Sn2 seguida de una dosis endovenosa de pertecneciato se pueden marcar los hemates in vivo. Este marcaje de los hemates permite utilizarlos como agentes para la exploracin cardiovascular. Las dosis a inyectar, biodistribucin, propiedades farmacocinticas, y dosimetra interna, dependern de la indicacin clnica concreta y de la forma de administracin.

5.2.10. Otros radiofrmacos tecneciados Se agrupan aqu algunos radiofrmacos tecneciados que se preparan a partir de equipos reactivos no incluidos en los apartados anteriores. Se trata de productos incorporados recientemente, entre los que destacan sestamibi (Cardiolite), tiatida (MAG-3), exametazima (Ceretec), y bicisato (Neurolite). 5.2.10.1. Sestamibi (Cardiolite) Aunque se han empleado diversos derivados de la estructura del isonitrilo, actualmente el que se emplea y est autori-

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zado es el tetrakis (2-metoxi isobutil isonitrilo) cobre (I) tetrafluoroborato, o sestamibi (Cardiolite), no descrito en la Farmacopea Europea pero que tiene una monografa especfica en la USP 29. El marcaje necesita una incubacin del equipo reactivo en agua hirviendo durante 10 minutos tras la adicin de la actividad necesaria de eluido del generador, dejndose enfriar luego hasta temperatura ambiente. Durante la incubacin en el bao hirviente es importante tener en cuenta la posible sobrepresin en el vial, que se evita extrayendo un volumen de aire del vial tras la adicin del pertecneciato con la misma jeringa, nunca mediante una aguja de ventilacin. Tras el marcaje con 99mTc se forma un complejo, el 99mTc(MIBI)6 o 99mTc-sestamibi, complejo catinico sextavalente que se acumula en el miocardio. Por su biodistribucin puede ser empleado en exploraciones de diagnstico y localizacin de infarto de miocardio, y en la evaluacin de la funcin ventricular global en primer paso, para determinar la fraccin de eyeccin; para el diagnstico de cardiopata isqumica puede combinarse con la prueba de esfuerzo. Tambin se emplea en el diagnstico de cncer de mama, y en el diagnstico de casos de hiperparatiroidismo. Tras el marcaje es necesario verificar la pureza radioqumica del radiofrmaco. Este control se puede realizar por cromatografa en capa fina de xido de aluminio y etanol absoluto, como indica el fabricante. Un mtodo alternativo es la cromatografa en capa fina de slicagel y tampn citrato 0,1 M de pH 5,0; en este sistema el radiofrmaco queda en el origen. La pureza radioqumica debe ser superior al 90%. Las dosis de 99mTc-sestamibi recomendadas para un paciente de 70 kg dependen de la exploracin a realizar. As, para el diagnstico de infarto de miocardio y cardiopata isqumica, las dosis son de 185 a 740 MBq (5 a 20 mCi); para la evaluacin de la funcin ventricular global son 740 a 925 MBq (20 a

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25 mCi) inyectados en bolo. Para diferenciar la isquemia del infarto se requieren dos inyecciones, una en esfuerzo y otra en reposo, administradas entre s con seis horas de diferencia como mnimo; para el diagnstico de infarto basta una inyeccin en reposo. Las dosis a administrar para la exploracin de mama son de 740-925 MBq (20-25 mCi) inyectados en bolo; para la exploracin de paratiroides se administran de 185-740 MBq (5-20 mCi), tambin en bolo. Conviene que el paciente est en ligero ayuno antes de la exploracin, y que realice una comida tras la administracin del medicamento para facilitar la eliminacin fecal. Tras la administracin endovenosa el 99mTc-sestamibi se acumula en el miocardio en forma anloga al 201Tl, en funcin proporcional a la irrigacin regional. El corazn fija hacia el 1,5% de la dosis inyectada en esfuerzo y 1,2% en reposo. La captacin no se bloquea al inhibir la bomba de sodio, pero se modifica por la hipoxia. No se conocen interacciones con otros medicamentos. La eliminacin se realiza mayoritariamente por va hepatobiliar, aunque tambin son importantes la eliminacin urinaria (hacia el 27% de la dosis inyectada en 24 horas), y la fecal (33% en 48 horas). Las dosis absorbidas por el paciente durante la exploracin dependen del estado de esfuerzo o reposo. Las dosis estimadas para un paciente adulto de 70 kg, en funcin de la actividad administrada y del rgimen esfuerzo/reposo, son las indicadas a continuacin:

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rgano Vescula biliar Intestino delgado Intestino grueso superior Intestino grueso inferior Pared corazn Riones Ovarios Testculos Vejiga Cuerpo entero Dosis efectiva equivalente (mSv/MBq)

Dosis absorbidas (mGy/MBq) Reposo 0,018 0,027 0,050 0,036 0,004 0,018 0,014 0,003 0,018 0,004 0,014 Esfuerzo 0,026 0,022 0,040 0,029 0,005 0,015 0,011 0,003 0,014 0,003 0,012

5.2.10.2. Tiatida (MAG-3) El radiofrmaco se obtiene por marcaje con 99mTc del benzoil mercapto acetil triglicina (MAG-3), y se denomina tiatida o mertiatida, descrito en la Farmacopea Europea. El marcaje debe realizarse con una solucin de pertecneciato de alta concentracin radiactiva y alta actividad especfica. La reaccin se realiza mediante incubacin en agua hirviendo durante 10 minutos, tras la cual se enfra el vial en agua fra. La posible sobrepresin se evita extrayendo un volumen de aire del vial tras la adicin del pertecneciato, nunca mediante una aguja de ventilacin. Antes de la administracin se realiza el control de la pureza radioqumica, que debe ser superior al 90%. Se controla con un cartucho Sep-Pak, y no debe haber ms del 10% de impurezas lipoflicas e hidroflicas.

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Tras la administracin la tiatida es rpidamente aclarada de la sangre por va renal, por lo que se emplea como agente diagnstico en la evaluacin del flujo sanguneo renal, trnsito tubular y funcin renal de uno o ambos riones. Su comportamiento es similar al del cido o-yodohiprico. No est indicada en el estudio del flujo plasmtico renal efectivo en casos de alteracin severa de la funcin renal. No hay una eliminacin extrarrenal apreciable, aunque algunas impurezas radioqumicas pueden ser eliminadas por va biliar, pudiendo interferir en el estudio de la funcin renal. La dosis de tiatida a administrar en adultos puede variar de 37 a 185 MBq (1 a 5 mCi) por va endovenosa en funcin de la exploracin que se pretenda realizar: flujo sanguneo renal y transporte a travs de los urteres, transporte intrarrenal, renografa. En nios no est an establecida la posologa. En cualquier caso, el paciente debe estar bien hidratado al comenzar la exploracin, y tras ella conviene orinar frecuentemente para disminuir la exposicin a la radiacin. Las dosis de radiacin absorbidas en la exploracin diagnstica con tiatida dependen del estado de hidratacin del paciente y de la funcin renal. Las dosis indicadas a continuacin son las estimadas cuando se produce un vaciamiento de la vejiga en las dos horas tras la administracin del radiofrmaco.

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rgano Vejiga Vescula biliar Riones Hgado Ovarios Testculos Cuerpo entero Dosis efectiva equivalente (mSv/MBq)

Dosis absorbidas (mGy/MBq) 0,057 0,043 0,017 0,005 0,003 0,002 0,001 0,011

5.2.10.3. Exametazima (Ceretec) El radiofrmaco es una solucin inyectable de exametiln-pamino oxima (HM-PAO), o exametazima, marcada con 99mTc. El radiofrmaco, que tiene monografa en la USP 29, se prepara por el marcaje extemporneo de un vial de Ceretec. La preparacin del radiofrmaco no presenta problemas especiales, excepto que el pertecneciato que se emplee, adems de cumplir las especificaciones de la Farmacopea Europea, debe ser de alta concentracin radiactiva, procedente de un generador eluido en las 24 horas anteriores, para tener la suficiente actividad especfica, y tener menos de dos horas desde la elucin. Con el marcaje se forma un complejo muy liposoluble (complejo primario), responsable del comportamiento de este medicamento, pero inestable, ya que va modificando su estructura de forma espontnea para originar otro complejo no liposoluble (complejo secundario); el radiofrmaco solo tiene un periodo de validez de 30 minutos tras la preparacin. Para aumentar el periodo de validez del medicamento se ha desarrollado una modificacin de este, estabilizada con sales de co-

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Con estos agentes citados la separacin final se logra por centrifugacin, con lo que se precipita una de las fracciones, generalmente la unida al anticuerpo, quedando en solucin en el lquido sobrenadante la fraccin libre. Esta se puede eliminar por decantacin, o mejor an por aspiracin. La decantacin es ms rpida pero aumenta el error del mtodo por aumentar la variabilidad de la radiactividad retenida por el tubo de ensayo y por poder sufrir prdidas del precipitado, adems de aumentar el peligro de contaminacin del contador por las posibles gotitas que pueden salpicar al tubo por fuera. La aspiracin del sobrenadante con una pipeta Pasteur conectada a una bomba o una trompa de vaco reduce notablemente estos peligros, aunque esta operacin debe ser muy cuidadosa para aspirar todo el sobrenadante sin arrastrar el precipitado. Un nuevo mtodo desarrollado comercialmente para algunos mtodos de RIA emplea el anticuerpo adsorbido sobre partculas muy pequeas con ncleo frrico, que tras la incubacin con el antgeno y el trazador se pueden separar aplicando a la gradilla un campo magntico con un imn apropiado. As precipitarn por fuerza magntica las partculas de hierro arrastrando a los complejos antgeno-anticuerpo formados. Intentando simplificar las tcnicas de RIA para hacerlas ms asequibles a las determinaciones rutinarias, ahorrando pasos de pipeteo, incubaciones, centrifugacin, etc., se desarrollaron las tcnicas del anticuerpo en fase slida. Para ello se unen las molculas de anticuerpo a un soporte slido e inerte, como una esferita de vidrio o la misma pared del tubo de ensayo en que se va a incubar la mezcla del RIA. Una vez alcanzado el equilibrio tras la incubacin se aspira la fase lquida con los elementos que no han reaccionado, quedando en la pared del tubo la fraccin de radiactividad ligada por el anticuerpo.

TCNICAS ANALTICAS RADIOINMUNOLGICAS

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7.3. ANLISIS INMUNORRADIOMTRICO (IRMA) Basndose en los anticuerpos en fase slida unidos al tubo de ensayo se ha desarrollado una tcnica analtica como alternativa al radioinmunoensayo, el anlisis inmunorradiomtrico (IRMA). El IRMA es una tcnica analtica basada en el empleo de un trazador radiactivo, pero es no competitiva. La muestra, o la solucin calibrada, se incuba en un tubo de ensayo que posee el anticuerpo unido a la pared del tubo, y a continuacin se aade un segundo anticuerpo marcado con un radionclido, normalmente 125I. As se forma un sandwich en el que la cantidad de trazador retenida aumenta con la presencia de antgeno. Por ello la tcnica es no competitiva.
40 TSH IRMA

30

% B/TC

20

10

0,15

0,5 1,5

15

50 150 U/ml

Figura 7.1. Representacin de la curva patrn de tres mtodos inmunorradiomtricos (IRMA) para la determinacin de la hormona tirotropa (TSH). Al ser el IRMA un ensayo no competitivo la fraccin de trazador radiactivo aumenta al aumentar la cantidad de antgeno.

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En el IRMA los reactivos que se aaden a la muestra estn en exceso, de forma que la cantidad de radiactividad empleada en cada tubo es notablemente mayor que en el RIA. Por ello tras la incubacin es necesario lavar varias veces el tubo para eliminar el exceso de radiactividad que no ha reaccionado, ya que al tener esa radiactividad por tubo, una cantidad pequea retenida puede representar un error significativo. Al ser una tcnica no competitiva la curva de calibracin del IRMA es inversa a la del RIA, ya que la fraccin de radiactividad ligada aumenta con la cantidad de antgeno presente en la muestra. En el orden prctico el IRMA no ha significado una mejora sustancial respecto a los logros del RIA.

7.4. REALIZACIN DEL RADIOINMUNOENSAYO La realizacin del radioinmunoensayo (RIA) incluye la preparacin de la curva de calibracin, proceso de las muestras problema, y clculo de los resultados. En los tubos de ensayo en los que se va a realizar el RIA se pipetearn los diferentes componentes del ensayo: alcuota de la muestra problema o de la solucin patrn, volumen constante de la solucin del trazador y del anticuerpo, tampn del ensayo si fuese necesario, etc. Tras el pipeteo de las distintas sustancias se asegura la mezcla completa de los diferentes componentes por agitacin de los tubos. Despus de la incubacin necesaria se aade el medio de separacin y se procede a la separacin efectiva de la fraccin de la actividad ligada por el anticuerpo. Adems de los tubos de las soluciones patrones y de las muestras problema hay que aadir tubos para determinar tres parmetros del RIA que son el cero, la precipitacin inespecfica y la actividad total.

TCNICAS ANALTICAS RADIOINMUNOLGICAS

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30 C 60

% B/T

50 22 C 40

90

105 120

135

150 min

Figura 7.2. Representacin de la fraccin de trazador radiactivo unido al anticuerpo a diferentes tiempos de incubacin y a dos temperaturas distintas. Se aprecia la importancia de tratar a todos los tubos igual para que puedan ser comparados entre s, ya que diferencias en las condiciones de incubacin (tiempo, temperatura), al igual que en los volmenes de reactivos pipeteados, introducirn errores significativos.

El cero (maximal binding o MB) se prepara pipeteando un par de tubos con un volumen de solvente igual a la de las soluciones patrn, sea suero o plasma, sangre total, orina, tampn, etc., pero libre de la presencia del antgeno. Ser uno de los parmetros de control del RIA. Cuando se aade el medio de separacin en el RIA y se produce la precipitacin y la separacin final, no toda la radiactividad que queda retenida en el tubo corresponde a la ligada por el anticuerpo, sino que una fraccin se debe a actividad contaminante del tubo de ensayo y a trazador precipitado de forma inespecfica por fenmenos de adsorcin, de unin a otros compuestos diferentes del anticuerpo, etc. Para determinar la cantidad de precipitacin inespecfica (NSB) se disponen unos tubos en la curva de RIA en los que se pipetean todos los componentes del ensayo salvo el anticuerpo, que se sustituye por un volumen equivalente del solvente en el que est disuelto

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el anticuerpo o de un medio similar carente de anticuerpo. La radiactividad que precipite en la separacin en estos tubos no ser debida a accin del anticuerpo. La fraccin de NSB se determina normalmente en la solucin cero, aunque puede determinarse en cualquiera de los puntos de la curva, y en ocasiones hay que determinarla para cada una de las muestras analizadas. La importancia que el NSB puede representar en el resultado del RIA si no se calcula y se resta de la actividad precipitada depende del valor de esa fraccin NSB y de la concentracin de antgeno en la muestra analizada. As, en una muestra con poco antgeno en la que la actividad ligada es alta, el NSB influye relativamente poco, pero si la fraccin de radiactividad no es muy alta el NSB adquiere una importancia proporcionalmente mayor. De la radiactividad que se aade a los tubos de ensayo para realizar el RIA solo quedar una fraccin tras la separacin final. Para conocer la radiactividad inicial que se incub en los tubos se preparan unos tubos de ensayo en los que solo se pipetea la alcuota de trazador, sin aadir anticuerpo ni antgeno y sin separarlos finalmente. Su misin solo es servir de referencia de la actividad pipeteada a cada tubo. Cada parmetro, punto de la curva y muestra problema debe pipetearse al menos por duplicado, aumentando en algunos casos concretos a la realizacin por triplicado o cuadruplicado. Esto se debe a la necesidad de escoger finalmente un punto medio representativo para disminuir los errores de pipeteo y del mtodo, desechando los duplicados muy diferentes entre s como indicativos de error superior al aceptable. A efectos prcticos se maneja la media aritmtica del resultado de los diferentes duplicados o triplicados si son coincidentes. Los diferentes pasos en la realizacin del RIA deben realizarse sucesivamente y sin interrupciones, por la misma persona, y se debe emplear el mismo material para disminuir el error todo lo posible.

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Tabla 7.1. Esquema de un radioinmunoensayo. Protocolo tpico de un radioinmunoensayo en el que la curva patrn incluye tubos de actividad total y se determina la precipitacin inespecfica. Todas las soluciones patrn y las muestras problema estn por duplicado. Tubos (pares) 1, 2 3, 4 5, 6 7, 817, 18 19, 20 Funcin referencia (TC) cero (MB) NSB patrones muestras Patrn o Tampn Trazador Anticuerpo muestra 25 l 25 l 25 l 25 l 100 l 100 l 100 l 100 l 100 l 100 l 100 l 100 l 100 l

Aunque el orden de adicin de los diferentes reactivos en principio puede ser cualquiera, normalmente es preferible pipetear en primer lugar el antgeno fro (solucin patrn o muestra problema) y el trazador, y a continuacin el anticuerpo, para que la formacin de complejos antgeno-anticuerpo se inicie simultneamente con el antgeno y con el trazador y se alcance antes el equilibrio. El tiempo y las condiciones de incubacin sern las que necesite el anticuerpo para reaccionar y alcanzar el equilibrio. Dado que los volmenes de las alcuotas que normalmente se pipetean en el RIA son muy pequeos, de microlitros, se requiere la utilizacin de material muy preciso y convenientemente calibrado. El requisito esencial en la correcta realizacin del RIA es que las condiciones de reaccin sean idnticas en todos los tubos para que los tubos de las muestras a analizar sean realmente comparables con la curva patrn, para lo que se necesita que las soluciones de los diferentes reactivos que se van a pipetear tengan exactamente la misma composicin en todos los

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tubos del RIA. Para ello, si hay que utilizar un reactivo de diferentes viales o lotes se puede conseguir su homogeneidad mezclndolos previamente, con lo que el reactivo tendr la misma composicin y concentracin en todos los tubos. 7.5. CONTAJE DE LA RADIACTIVIDAD Para proceder al clculo del RIA para determinar la concentracin de antgeno en las muestras problema se cuenta la radiactividad retenida en cada tubo. El contaje de la radiactividad se realiza en contadores apropiados segn el tipo de emisin del radionclido, o . Los contadores de radiactividad ms comunes son los de centelleo, que constan fundamentalmente de un detector de la radiacin de que se trate acoplado a un preamplificador, amplificador, un discriminador de impulsos, un sistema de registro, etc. El detector de centelleo, parte fundamental del contador, est compuesto por una sustancia fluorescente y un tubo fotomultiplicador asociado. La sustancia fluorescente o centelleador es una sustancia apropiada con la que interacciona la radiacin emitiendo un destello luminoso, es decir, transforma la radiacin absorbida en impulsos luminosos. El fotomultiplicador asociado posee un fotoctodo que libera electrones por la accin de la luz emitida por el centelleador, y un sistema de dnodos que ampla la respuesta electrnica hasta un rango adecuado. Como centelleadores se emplean cristales de NaI activado con Tl en la deteccin de radiacin (centelleo slido), y para la radiacin se emplean lquidos orgnicos fluorescentes como terfenilo, antraceno o xileno, en los que se disuelve la muestra a contar (centelleo lquido). Para aumentar el rendimiento de contaje del contador de centelleo slido, su eficiencia, el detector generalmente no es

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plano, sino que posee un orificio en el que se introduce el tubo a contar y as poder detectar la radiactividad emitida en casi todas las direcciones del espacio; este sera el contador de pozo. El detector va incluido en un sistema electrnico complejo, normalmente acoplado a un sistema informtico que permite contar las muestras y realizar clculos con el resultado del contaje. Existen tambin contadores especficos para la lectura de muestras de RIA, que disponen de una serie de detectores independientes capaces de leer muchos tubos simultneamente dispuestos en gradillas de plstico especiales. El contador, previamente programado, reconoce la funcin de cada tubo por la posicin que ocupa para establecer la curva patrn y dar el resultado de las muestras directamente. 7.6. CLCULO Y REPRESENTACIN DEL RIA Como se ha indicado anteriormente, la cuantificacin del RIA se realiza normalmente en base a la fraccin de trazador que queda retenida por el anticuerpo en forma de complejo an-

A
%B %B

B
logit B

Ag

log Ag

log Ag

Figura 7.3. Diversas formas de representar la curva patrn del radioinmunoensayo (RIA): representacin decimal (A), semilogartmica (B) y transformacin logit (C). Al ser un mtodo competitivo, la fraccin de trazador radiactivo unido al anticuerpo disminuye al aumentar la cantidad de antgeno presente en el tubo.

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tgeno-anticuerpo radiactivo. La cantidad de antgeno presente en las muestras problema se determinar por comparacin con la fraccin de radiactividad ligada por el anticuerpo en las soluciones patrn. La comparacin de las muestras desconocidas con la curva patrn debe hacerse siempre por interpolacin entre concentraciones calibradas conocidas, nunca por extrapolacin, ya que no se puede predecir el comportamiento de la reaccin fuera de los puntos conocidos. La representacin y cuantificacin del RIA necesita relacionar la fraccin de radiactividad ligada al anticuerpo con la concentracin de antgeno. Esta relacin se puede establecer de varias formas: relacin lineal, escala logartmica o semilogartmica, transformacin logit, etc. 7.7. PRUEBAS DE VALIDACIN DEL RIA Al desarrollar, adaptar o modificar un mtodo de RIA es necesario realizar una serie de pruebas de validacin para comprobar que los resultados obtenidos con ese mtodo son correctos. Estas pruebas son, al menos, las de paralelismo, recuperacin, y correlacin con otros mtodos. 7.7.1. Paralelismo La reaccin del anticuerpo con el antgeno y el trazador debe producirse en las mismas condiciones y con idnticas caractersticas en las soluciones patrn y en las muestras problema para que sean comparables. Esto quiere decir que con diluciones crecientes en un medio inerte a partir de una muestra problema con una alta concentracin del antgeno que se va a determinar, se obtendrn una serie de fracciones de radiactividad ligada, que al ser representados formarn una curva similar a la obtenida con las soluciones patrn, es decir, habr paralelismo.

TCNICAS ANALTICAS RADIOINMUNOLGICAS

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1.250 30 ng CyA/ml 20 B/T % 1.000 750 500 250 50 l RIA CyA 30 C/90 min 100 l

10

50

120

300

800

2.000 ng CyA/ml

Figura 7.4. Prueba de paralelismo en la validacin de un mtodo de radioinmunoensayo de ciclosporina A (CyA). Se observa que la representacin del desplazamiento de las muestras analizadas a diferentes diluciones es paralelo a la curva patrn, por lo que la cantidad de CyA es directamente proporcional al volumen de la alcuota analizada.

En la prctica lo que se hace es analizar una serie de muestras a dos o tres diluciones, y al representar la fraccin de actividad ligada por cada una de las diluciones debe obtenerse una curva similar a la curva patrn, paralela al tramo al que se enfrente. El paralelismo indica que la reaccin antgeno-anticuerpo se desarrolla con la misma cintica en la curva patrn y en las muestras problema, sin que se detecten interferencias analticas. En este caso la cantidad de antgeno detectado en una muestra ser proporcional al volumen de la alcuota analizada, y la concentracin que se determine ser independiente del volumen de la alcuota que se analice, mientras que en caso de no

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haber paralelismo la cantidad de antgeno que se determine depender del volumen de la alcuota analizada, y la concentracin que se determine estar tambin influenciada por la cantidad de muestra que se analice. La falta de paralelismo es causa suficiente para invalidar un mtodo analtico. 7.7.2. Recuperacin La prueba de recuperacin consiste en enriquecer algunas muestras con el antgeno que se est determinando, aadido en cantidades conocidas. Analizando simultneamente las muestras originales y las mismas muestras tras enriquecerlas en el antgeno se comprobar si el incremento en la concentracin de antgeno detectada coincide con el valor esperado, determinndose la fraccin del antgeno detectado respecto al aadido. Las fracciones recuperadas deben tener un valor prximo al 100%. Desviaciones altas respecto a este valor, tanto por exceso como por defecto, indican interferencias analticas significativas. En algunos mtodos analticos con interferencias analticas se han encontrado recuperaciones superiores al 300%. 7.7.3. Correlacin Consiste en valorar en una serie de muestras el antgeno que se quiere determinar por dos mtodos diferentes simultneamente, el mtodo que se quiere validar y otro mtodo analtico fiable que se toma como referencia. Con los valores obtenidos por los mtodos empleados se obtendr una recta de regresin. Una correlacin alta indicar coincidencia entre los valores obtenidos por ambos mtodos; una mala correlacin revelar

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